研究杜仲叶酸性多糖的提取分离工艺及其含量测定的简便方法。结果表明,以提取过药用有效成分后的杜仲叶为原料提取酸性多糖的较佳工艺条件是1.0%的碱水在100℃下提取2次,每次2h;提取液经大孔吸附树脂处理,多次醇沉等步骤分离的酸性多糖含量可达到41.46%。采用DNS法测定杜仲叶酸性多糖含量时水解时间控制在15~20min,显色反应为10min,检测波长为492nm;在试验条件下,葡萄糖浓度在0.20~0.60mg·mL-1范围内显色灵敏、稳定,线性关系良好;用该法测定杜仲叶渣酸性多糖含量时加样回收率为98.30%,RSD为1.76%;显色溶液在2h内吸光度值比较稳定,能够完全满足测定工作要求,可以作为实验室测定多糖含量的简便、快捷、有效的方法。
The extraction techniques and a simple measurement method for the acidic polysaccharides from Eucommia ulmoides leaves were studied. The results were as follows:The residue of E.ulmoides leaves after extracting bioactive constituents could be used to extract acidic polysaccharides,which was the multilevel exploitation and reuse of E.ulmoides. The optimum extraction condition was 1.0% ammonia solvent,at the temperature of 100 ℃,2 times and 2 h per time. The acidic polysaccharides could be purified with resin. To measure the contents of acidic polysaccharides with DNS method,the hydrolyzed time should be within 15~20 min,the optimum coloration time was 10 min,the maximum absorption wavelength was 492 nm,and the recovery was 98.30%,RSD,1.76%.
全 文 :第 wu卷 第 ts期
u s s y年 ts 月
林 业 科 学
≥≤∞× ≥∂ ∞ ≥≤∞
∂²¯1wu o²1ts
¦·qou s s y
杜仲叶酸性多糖提取分离及含量测定
董娟娥t 梁宗锁t 靳爱仙u 余震宇t 成密红t
kt1 西北农林科技大学 杨凌 ztutss ~ u1 国家林业局调查规划设计院 北京 tssztwl
摘 要 } 研究杜仲叶酸性多糖的提取分离工艺及其含量测定的简便方法 ∀结果表明 o以提取过药用有效成分后
的杜仲叶为原料提取酸性多糖的较佳工艺条件是 }t1s h的碱水在 tss ε 下提取 u次 o每次 u «~提取液经大孔吸附
树脂处理 o多次醇沉等步骤分离的酸性多糖含量可达到 wt1wy h ∀采用 ⁄≥法测定杜仲叶酸性多糖含量时水解时
间控制在 tx ∗ us °¬±o显色反应为 ts °¬±o检测波长为 w|u ±° ~在试验条件下 o葡萄糖浓度在 s1us ∗ s1ys °ª#°pt范
围内显色灵敏 !稳定 o线性关系良好 ~用该法测定杜仲叶渣酸性多糖含量时加样回收率为 |{1vs h oΡΣ∆为 t1zy h ~
显色溶液在 u «内吸光度值比较稳定 o能够完全满足测定工作要求 o可以作为实验室测定多糖含量的简便 !快捷 !有
效的方法 ∀
关键词 } 杜仲叶 ~酸性多糖 ~提取分离 ~含量测定
中图分类号 } |uz1u 文献标识码 } 文章编号 }tsst p zw{{kussylts p ssx| p sy
收稿日期 }ussy p sv p u| ∀
基金项目 }中国科学院/西部之光0人才培养计划项目和陕西省科技研究重大项目 |zsw p u部分内容 ∀
Τηε Εξτραχτιον ανδ Χοντεντ Μεασυρεµεντ οφ Αχιδιχ Πολψσαχχηαριδεσ
φροµ Ευχοµ µια υλµοιδεσ Λεαϖεσ
⁄²±ª∏¤±π¨ t ¬¤±ª²±ª¶∏²t ¬± ¬¬¬¤±u ≠∏«¨ ±¼∏t ≤«¨ ±ª ¬«²±ªt
kt1 Νορτηωεστ ΣχιpΤεχη Υνιϖερσιτψοφ Αγριχυτυρε ανδ Φορεστρψ Ψανγλινγ ztutss ~
u1 Αχαδεµψοφ Φορεστ Ινϖεντορψ ανδ Πλαννινγ oΣτατε Φορεστρψ Αδµινιστρατιον Βειϕινγ tssztwl
Αβστραχτ } ׫¨ ¬¨·µ¤¦·¬²±·¨¦«±¬´∏¨¶¤±§¤¶¬°³¯¨ °¨ ¤¶∏µ¨°¨ ±·°¨ ·«²§©²µ·«¨ ¤¦¬§¬¦³²¯¼¶¤¦¦«¤µ¬§¨¶©µ²° Ευχοµ µια υλµοιδεσ
¯¨ ¤√¨ ¶º¨ µ¨ ¶·∏§¬¨§q׫¨ µ¨¶∏¯·¶º¨ µ¨ ¤¶©²¯ ²¯º¶}׫¨ µ¨¶¬§∏¨ ²© Ε qυλµοιδεσ¯¨ ¤√¨ ¶¤©·¨µ¨ ¬·µ¤¦·¬±ª¥¬²¤¦·¬√¨ ¦²±¶·¬·∏¨±·¶¦²∏¯§¥¨
∏¶¨§·² ¬¨·µ¤¦·¤¦¬§¬¦³²¯¼¶¤¦¦«¤µ¬§¨¶oº«¬¦«º¤¶·«¨ °∏¯·¬¯¨ √¨ ¯ ¬¨³¯²¬·¤·¬²± ¤±§µ¨∏¶¨ ²© Ε qυλµοιδεσq׫¨ ²³·¬°∏° ¬¨·µ¤¦·¬²±
¦²±§¬·¬²± º¤¶t1s h ¤°°²±¬¤¶²¯√¨ ±·o¤··«¨ ·¨°³¨µ¤·∏µ¨ ²©tss ε ou·¬°¨ ¶¤±§u «³¨µ·¬°¨ q׫¨ ¤¦¬§¬¦³²¯¼¶¤¦¦«¤µ¬§¨¶¦²∏¯§
¥¨ ³∏µ¬©¬¨§º¬·«µ¨¶¬±qײ °¨ ¤¶∏µ¨·«¨ ¦²±·¨±·¶²©¤¦¬§¬¦³²¯¼¶¤¦¦«¤µ¬§¨¶º¬·«⁄≥ °¨ ·«²§o·«¨ «¼§µ²¯¼½¨ §·¬°¨ ¶«²∏¯§¥¨ º¬·«¬±
tx ∗ us °¬±o·«¨ ²³·¬°∏° ¦²¯²µ¤·¬²±·¬°¨ º¤¶ts °¬±o·«¨ °¤¬¬°∏° ¤¥¶²µ³·¬²± º¤√¨ ¯¨ ±ª·«º¤¶w|u ±°o¤±§·«¨ µ¨¦²√¨ µ¼ º¤¶
|{1vs h o ΡΣ∆ ot1zy h q
Κεψ ωορδσ} Ευχοµ µια υλµοιδεσ ¯¨ ¤√¨ ~¤¦¬§¬¦³²¯¼¶¤¦¦«¤µ¬§¨¶~ ¬¨·µ¤¦·¬²± ¤±§³∏µ¬©¬¦¤·¬²±~¦²±·¨±·°¨ ¤¶∏µ¨°¨ ±·
近年来研究表明 o多糖具有多种生理活性和营养价值 o如南瓜多糖是预防糖尿病的活性成分k范文秀等 o
ussxl ~茶多糖具有降血糖 !降血脂 !增加冠状动脉血流量 !增强机体免疫力 !抗癌等多种功效k倪德江等 o
ussv ~陈海霞等 oussul ~螺旋藻多糖具有抗氧化 !抗疲劳的作用k殷钢等 ot|||l ~酸性多糖具有较强的免疫促
进作用 o如紫松果菊酸性多糖 !刺五加酸性多糖和黑木耳酸性多糖等k张俐娜等 ot||wl ∀
杜仲k Ευχοµ µια υλµοιδεσl是杜仲科杜仲属植物 ∀杜仲皮是名贵的滋补药材 o被列为中药上品 o富含多种
生物活性物质 !微量元素及营养物质 o具有延缓衰老 !增强免疫 !防癌抗癌等功效k尉芹等 ot||x o张康健等 o
t||yl o是一种很好的药食同源植物 ∀近年来 o人们对杜仲次生代谢物及杜仲叶中药用有效成分的提取分离
做了大量研究k张康健等 ot|||¤~t||y ~usst ~ussu ~高锦明等 ot||{ ~董娟娥等 oussu ~ussv ~马柏林等 oussu ~马希
汉等 oussv ~usswl o结果表明以叶代皮完全可行 ∀早在 us世纪 |s年代初 o日本学者 ²±§¤等kt||sl和 ײ°²§¤
等kt||sl从杜仲树皮中分得 u种酸性多糖k∞∏¦²°°¬¤ 和 ∞∏¦²°°¬¤
l o并认为这 u种多糖可增强机体非特
异性免疫功能 ∀此后 o日本学者又从杜仲树叶中提取分离出酸性多糖 o认为杜仲酸性多糖是抗感染症剂和脑
代谢促进剂 o可抑制后天性免疫缺陷性病毒细胞的吸附和增殖 o预防和治疗艾滋病毒的感染 o长期服用也无
副作用k朱晓薇等 ot|zzl ∀我国有杜仲林 vy万 «°u o每年秋季大量落叶 o造成资源浪费 ∀若能以杜仲叶或提
取过杜仲有效成分的叶渣为原料提取杜仲酸性多糖 o并开发成为药品或保健品 o就会大大提高杜仲的经济效
益 o保护自然资源 o也可使主要分布在西部贫困山区的杜仲林得以保护 o并对农民脱贫致富做出贡献 ∀目前 o
有关杜仲叶多糖研究少见报道k赵晓明等 ot|||l o而有关杜仲叶酸性多糖的提取分离和含量测定未见有关系
统报道 ∀本文以提取过药用有效成分后的杜仲叶渣为原料 o研究杜仲叶酸性多糖的提取分离和含量测定方
法 o以期为杜仲叶酸性多糖的工业化生产提供工艺参数 o为杜仲叶资源的综合开发利用提供科学依据 ∀
t 材料与方法
111 材料来源
原材料采自西北农林科技大学杜仲优树汇集圃 o杀青后荫干 ~用体积分数为 {s h的乙醇水溶液提取药
用成分k供分离药用成分用l o收集叶渣 o荫干备用 ∀
112 主要仪器与试剂
∂usss型紫外 p可见分光光度计k上海尤尼柯公司l o⁄w p u型离心机k北京医用离心机厂l o层析柱
kts ¦° ≅ tss ¦°lk天津高科l ∀
v ox p二硝基水杨酸k⁄≥l试剂的配制 }精密称取 t{u ª酒石酸钾钠 o加热下溶于 xss °蒸馏水 o精密称
取 y1v ª⁄≥加入到上述 xss °酒石酸钾钠的热溶液中 o标记为 ∀配制 uyu °u °²¯#pt ¤溶液 ∀然
后于 中依次加入配制好的 ¤溶液 !x ª重蒸酚和 x ª亚硫酸氢钠 o搅拌使其充分溶解 o冷却后以蒸馏水
定容到 t sss °o贮于棕色瓶中备用 ∀以上所有试剂均为分析纯 ∀
113 研究方法
t1v1t 大孔树脂k西安电力树脂厂l的预处理 树脂用体积分数为 |x h的乙醇k或丙酮l浸泡 uw «使其充分
溶胀 o洗至无大分子杂质 o用蒸馏水除去乙醇k或丙酮l ~再用 v倍体积k
∂l的 v h 的 ≤¯ 溶液以 x
∂#«pt的
流速冲洗树脂 o用蒸馏水洗至中性 ~最后用 v
∂ 的 v h的 ¤溶液以 x
∂#«pt的流速冲洗树脂 o蒸馏水洗
至中性后备用 ∀
t1v1u 含量测定工作原理 多糖是非还原糖 ∀多糖在酸作用下水解成单糖后迅速脱水成糖醛衍生物 o此糖
醛衍生物和 ⁄≥试剂缩合生成棕红色的氨基有色化合物kv p氨基 p x p硝基水杨酸l ∀在一定的浓度范围
内 o氨基有色化合物的浓度与反应液的颜色呈比例关系 o用比色法可测定样品中的含糖量 ∀
t1v1v 多糖的水解 取一定量的待测样品 o加入 y °²¯#pt的 ≤¯ x °o在沸水浴中加热 tx ∗ us °¬±o冷却后
用 y °²¯#pt的 ¤溶液调 ³至中性 ∀
t1v1w 显色反应程序 取一定量水解后的溶液 o加入 u °⁄≥试剂 o充分混匀后于 |s ε 水浴中显色 o以
⁄≥试剂加蒸馏水为对照 ∀冷却 o用蒸馏水定容为 ts °∀
u 结果与讨论
211 杜仲叶酸性多糖提取工艺
影响杜仲叶酸性多糖提取率的主要因素有碱液浓度 !提取时间 !提取温度 !提取次数 !液料比和原料的粉
碎度等 o本试验主要考察碱液的浓度 !提取时间和提取温度等对提取率的影响 o最终确定杜仲叶酸性多糖提
取的较佳工艺参数 ∀所有试验均设定提取 u次 !料液比为 tΒ{和原料不粉碎 ∀
u1t1t 碱液浓度对杜仲叶酸性多糖提取率的影响 精确称取 ts ª干燥的材料 w份 o分别用 {倍量的体积分
数 s1x h !t1s h !t1x h和 u1s h的氨水溶液提取 ∀提取液反复过滤 !定溶 o测定酸性多糖含量 o结果见图 tk ν
vl ∀在碱液浓度为 s1x h时 o酸性多糖的提取率较低 ot1s h的提取率较高 o继续增加碱液的浓度并没有提
高酸性多糖的提取率 ∀工业化生产时 o如果碱的浓度过大 o在高温加热条件下会对生产设备造成腐蚀 ∀因
此 o在文中所设定的浓度范围内 o提取时最佳的碱浓度应为体积比 t1s h ∀
u1t1u 提取时间对提取率的影响 精确称取 ts ªz份干燥的原材料 o分别提取 t1s !t1x !u1s !u1x !v1s !v1x和
w1s «o测定提取液中酸性多糖的含量 o结果见图 uk ν vl ∀随着提取时间的延长 o酸性多糖的提取率呈增加
趋势 o但超过 u «后 o提取率无显著增加 ∀在工业化生产中 o为了节约成本 o提取时间应为 u «∀
u1t1v 提取温度对提取率的影响 精确称取 ts ªy份干燥的原材料 o用 t1s h的碱溶液分别在 xs !ys !zs !
{s !|s和 tss ε 下提取 o测定提取液中酸性多糖的含量 o结果见图 vk ν vl ∀杜仲叶酸性多糖的提取率在 xs
sy 林 业 科 学 wu卷
图 t 碱液浓度对多糖提取率的影响
ƒ¬ªqt ׫¨ ©¨©¨¦·¶²©§¬©©¨µ¨±·¤°°²±¬¤¦²±¦¨±·µ¤·¬²±¶
²±·«¨ ¬¨·µ¤¦·¬²±¶²©³²¯¼¶¤¦¦«¤µ¬§¨
ε 时最低kv1xzy h l ∀随着温度的升高 o溶剂分子运动速度加快 o向植
物组织中渗透和扩散的能力相应增加 o酸性多糖的提取率增高 ∀由图
v可以看出 o酸性多糖的提取率在 tss ε 时达最大ky1wyu h l o但与 |s
ε 时无显著差异 ∀故提取杜仲酸性多糖的温度可为 |s ∗ tss ε ∀
u1t1w 提取条件的优化组合 从上述单因素试验可以直观看出 o碱
液浓度在 t1s h ∗ u1s h时提取率差异不大 o但与 s1x h的差异较大 ~提
取 u «与 w «提取率的差异不大 o但与 t1x «时有明显差异 ∀分别以 |s
ε 和 tss ε 进行提取 o提取时间设为 u «!碱液浓度为 t1s h o结果分别
为 y1xst h k|s ε l和 y1yvw h ktss ε l otss ε 下的提取率较大 ∀因此 o
确定杜仲叶酸性多糖的提取工艺参数为 }用 t1s h的碱液 !在 tss ε 的
温度下提取 u次 o每次 u «∀
图 u 提取时间对多糖提取率的影响
ƒ¬ªqu ׫¨ ©¨©¨¦·¶²©§¬©©¨µ¨±··¬°¨
²±·«¨ ¬¨·µ¤¦·¬²± ²©³²¯¼¶¤¦¦«¤µ¬§¨
212 杜仲叶酸性多糖含量测定方法
测定多糖含量的方法主要有 °≤ 法 !苯酚 p硫酸法和硫酸 p蒽
酮法等 o但因 °≤法需要有较昂贵的仪器 o苯酚 p硫酸法和硫酸 p蒽
酮法中硫酸具有严重的腐蚀性 o苯酚也极易氧化 o给试验操作带来不
便 ∀因此 o本试验对 ⁄≥法测定杜仲叶多糖的含量进行考察 ∀
u1u1t 检测波长的确定 文献报道用 ⁄≥测定还原糖时 o在 wzx ∗
w{u ±°和 xus ±°处有 u个最大吸收波长k尹银嘉等 oussvl ∀为了考察
杜仲叶酸性多糖显色反应后的最大吸收波长 o本试验从 w{s ∗ xsu ±°
之间每隔 u ±°测定显色溶液吸光度 o测定结果见图 w ∀吸光度在 w|u
±°波长时最大 o故确定杜仲叶酸性多糖含量测定波长为 w|u ±°∀
u1u1u 显色反应时间的确定 显色反应过程中 o如果时间过短 o则反
图 v 提取温度对多糖提取率的影响
ƒ¬ªqv ׫¨ ©¨©¨¦·¶²©§¬©©¨µ¨±·¨ ¬¤¦·¬±ª·¨°³¨µ¤·∏µ¨¶
²± ¬¨·µ¤¦·¬²± ²©³²¯¼¶¤¦¦«¤µ¬§¨
图 w 酸性多糖的吸收波长
ƒ¬ªqw ׫¨ ¤¥¶²µ³·¬²± º¤√¨ ¯¨ ±ª·«²©¤¦¬§³²¯¼¶¤¦¦«¤µ¬§¨
应不完全 ∀但在显色反应完成后 o长时间高温加热又会引起部分物质
的分解变化 ∀因此 o有必要确定适宜的显色时间 ∀
取 |支试管 o各加入 s1u °ª#°pt的葡萄糖标准溶液 u °o⁄≥试
剂 u ° o充分混匀k以蒸馏水加 ⁄≥试剂为对照l ∀于 |s ε 水浴中分
别加热显色 u !w !y !{ !ts !tu !tw !ty和 t{ °¬±后取出 o冷却 o用蒸馏水定
容至 ts °o测定吸光度 o结果见图 x ∀显色时间为 ts °¬±时溶液的吸
光度达到最大值 ∀
u1u1v 显色稳定性考察 将显色后的待测液在室温下放置不同时间
后测定吸光度 o考察显色溶液的稳定性 ∀结果见表 t ∀
表 1 酸性多糖测定显色稳定性的试验结果
Ταβ . 1 Εξπεριµενταλ ρεσυλτσ οφ τεστινγ αχιδ
πολψσαχχηαριδε χολορατιον σταβιλιτψ( ν = 5)
显色时间 ׬° Π¨« s t u v
吸光度 ¥¶²µ³·¬²± s1yvy s1yvy s1yvv s1yu|
表 t显示 o显色溶液的吸光度在 u «内无显著变化 o显色稳定 o
到 v «时略有下降 o故测定工作须在 u «内完成 ∀
u1u1w 水解时间的确定 在样品测试液的制备过程中 o酸水解的
时间既不能太短k多糖水解不完全l o也不能太长 ∀水解时间太长 o
单糖会进一步水解成 x p羟甲基糠醛 o不能与 v ox p二硝基水杨酸
缩合成有色物质k尹银嘉等 oussvl o影响测定结果的准确性 ∀通过
试验认为 otx ∗ us °¬±是杜仲叶酸性多糖水解的较佳时间k图 yl ∀
u1u1x 工作标准曲线的制作 精密称取 tss1s °ª葡萄糖对照品 o
配制成 t1s °ª# °pt的对照品溶液 ∀分别吸取对照品溶液 u1s !
u1x !v1s !v1x !w1s !w1x !x1s !x1x和 y1s °o以蒸馏水定容为 ts °o
ty 第 ts期 董娟娥等 }杜仲叶酸性多糖提取分离及含量测定
图 x 不同显色时间的吸光度
ƒ¬ªqx ׫¨ ¤¥¶²µ³·¬²± ²©·«¨ §¬©©¨µ¨±·¦²¯²µ¬±ª·¬°¨
得一系列不同浓度的标准液 ∀取各浓度的标准液 u °于 |支试管
中 o各加入 u °⁄≥试剂 o充分混匀 o|s ε 水浴中显色 o冷却 o用蒸
馏水定容至 ts °o在 w|u ±°测吸光度k对照同上l ∀以葡萄糖对照
品浓度为横坐标 o相应的吸光度为纵坐标绘制标准曲线 o如图 z所
示 ∀经计算得回归方程 }
Ψ s1s|t zΑ p s1sy| t Ρ s1||| u
式中 }Ψ为标准液浓度k°ª#°ptl ~Α为吸光度 ∀
u1u1y 加样回收率 取已知含量的一定量样品的水解总糖溶液置
x支试管中 o各加入 s1t °ª#°pt的葡萄糖标准溶液 t °o按上述方
法显色 !测定加样回收率 o并计算相对标准偏差k ΡΣ∆l ∀相对标准
偏差的计算公式为 }
ΡΣ∆ ΣΞ ≅ tss h ~其中 Σ
Ε
ν
ι t
k Ξ p hΞlu
ν p t
式中 }Σ为标准差 ~hΞ为平均值 ~ν为重复次数 ∀
加样回收率测定结果见表 uk ν xl ∀
图 y 不同水解时间的吸光度
ƒ¬ªqy ׫¨ ¤¥¶²µ³·¬²± ·¨¶·¨§¤©·¨µ§¬©©¨µ¨±·«¼§µ²¯¼½¨ §·¬°¨
图 z 标准曲线
ƒ¬ªqz ׫¨ ¶·¤±§¤µ§¦∏µ√¨²©ª¯∏¦²¶¨
表 2 酸性多糖测定加样回收率测定结果
Ταβ . 2 Τηε δετερµινατιον ρεσυλτσ οφ τεστινγ σαµ πλινγ ρεχοϖερψ οφ αχιδ πολψσαχχηαριδε
²q
样品中多糖含量
≥¤°³¯¨¦²±¦¨±·µ¤·¬²±Π
k°ª#ªptl
加入样品量
§§¨§Π°ª
理论值
׫¨ ²µ¨·¬¦√¤¯∏¨Π
k°ª#ªptl
测定值
¤¨¶∏µ¨§√¤¯∏¨Π
k°ª#ªp tl
回收率
¦¨²√ µ¨¼Πh
平均值
√¨ µ¤ª¨Πh ΡΣ∆Πh
t tyx1| tss1z|
u txy1| |x1vu
v yw1y s1ts tyw1y tx|1x |y1|s |{1vs t1zy
w tys1t |z1uz
x tyy1y tst1uu
表 u显示 o用 ⁄≥法测定杜仲叶酸性多糖含量的平均回收率为 |{1vs h o标准差为 t1zy h k小于 u1s h l o
符合测定精度要求 ∀
⁄≥法测定多糖含量克服了苯酚 p硫酸和硫酸 p蒽酮法的缺点 o具有测定过程简便 !操作安全和测定结
果可靠等优点 ∀但应注意 o在该法的显色反应中 o酒石酸钾钠的作用是提高反应的灵敏度和使显色稳定 o但
它同时也会降低亚硫酸钠对还原糖的保护作用 o造成一部分葡萄糖被破坏而不显色 ∀
u1u1z 杜仲叶渣中酸性多糖含量的测定与计算 取 ts1s ª的待测样品 o按照上述选定的提取条件提取 !过
滤 !定容后得待测液 ∀取待测液 u °于刻度试管中 o加入 u °⁄≥试剂 o在 |s ε 水浴中显色 o测定提取液
中还原性单糖量 α~取同样量的待测液 o按/多糖的水解0程序水解 o测定提取液中总糖量 β ~样品中多糖的含
uy 林 业 科 学 wu卷
量计算公式为 }
多糖含量k h l β p α样品总量 ≅ tss h
按照此法测定杜仲叶渣中杜仲酸性多糖的含量为 y1wv h ∀
213 酸性多糖的分离纯化及含量测定
u1v1t 分离纯化工艺 采用上述选定的提取条件对原料进行提取得到粗提液 o然后以多糖的含量和得率为
考察指标 o对粗提液进行大孔树脂层析和醇沉等分离纯化处理 o最后确定了杜仲叶渣中酸性多糖的分离纯化
工艺如下 }
称取干燥的原材料k提取过药用有效成分后的杜仲叶渣lzxs ªo用 t1s h的碱水在 tss ε 下提取 u次 o每
次 u «o真空抽滤 o合并滤液 o浓缩到约 wss °k按原料计约为 u ª#°ptl o用大孔吸附树脂吸附 { «o蒸馏水洗
脱 ∀洗脱液在 ys ε 水浴锅中真空浓缩至 vss °o在不断搅拌下向浓缩液中缓慢加入 w 倍体积k
∂l的无水
乙醇 o室温放置 vs °¬±ow sssµ#°¬±pt离心 ts °¬±o滤出上清液 ~将上清液浓缩至约 vss °o在不断搅拌下缓慢
加入 u
∂ 的 {x h乙醇 ow sss µ#°¬±pt离心 ts °¬±o滤出上清液 ~再次将上清液浓缩至约 uss °o在不断搅拌
下缓慢加入 u倍体积的无水乙醇 ow sss µ#°¬±pt离心 tx °¬±后 o弃去上清液 ∀沉淀在 ys ε 真空烘箱中烘干 o
得到灰白色粉末状杜仲酸性多糖 x1| ª∀此得率按投料量计算为 s1z{z h o按总的多糖量计算为 tu1u| h k杜
仲叶渣中含量按 y1w h计算 ozxs ª原料中共有多糖 w{ ªl ∀
u1v1u 含量测定 精确称量烘至恒重的杜仲叶酸性多糖粉末 s1xxz ªo加热下溶解于蒸馏水中 o冷却后定容
为 tss °o得待测液 ∀然后按照 / u1u1z0项下方法操作 o测得分离纯化后杜仲叶渣酸性多糖的含量为
wt1wy h ∀
v 结论
提取杜仲叶酸性多糖的工艺条件是 }用 t1s h的碱水在 tss ε 时提取 u次 o每次 u «∀
杜仲叶渣中酸性多糖的含量为 y1wv h ∀
以杜仲叶渣为原料 o经提取 !树脂吸附 !洗脱和醇沉等步骤可进一步分离纯化杜仲叶酸性多糖 ∀杜仲叶
酸性多糖为灰白色粉末 ~在本试验条件下 o按投料量计算 o多糖得率为 s1z{z h o纯度为 wt1wy h ∀有关杜仲
叶酸性多糖的进一步分离纯化 !理化鉴定和生理活性等还有待于做深入研究 ∀
用 ⁄≥法测定杜仲叶酸性多糖含量时 o多糖的水解时间控制在 tx ∗ us °¬±~显色反应时间为 ts °¬±~测
定波长为 w|u ±° ~在试验条件下 o糖含量在 s1us ∗ s1ys °ª#°pt范围显色灵敏 !稳定 o线性关系良好 ~加样回
收率为 |{1vs h oΡΣ∆为 t1zy h ~显色溶液在 u «内吸光度值稳定 o能满足测定工作要求 ∀该法可以作为一种
实验室测定多糖含量的简便 !快捷 !有效的方法 ∀
杜仲是我国特有的药用植物 o全国种植面积达 vy万 «°u ∀杜仲叶资源非常丰富 o每年秋季大量枯落 o造
成资源浪费 ∀杜仲叶中含有大量的药用有效成分和营养成分 o杜仲叶药用有效成分的提取大多以乙醇或乙
醇 p水溶液为溶剂 o而多糖一般在乙醇中不溶解 ∀因此 o提取过药用有效成分的叶渣可以用来提取酸性多
糖 o实现杜仲的多级开发 !资源重复利用途径 ∀利用杜仲叶渣提取纯化的杜仲叶酸性多糖又可作为保健食
品 !饮品的添加剂 o充分发挥其药理活性和营养功能 ∀
参 考 文 献
陈海霞 o谢笔均 qussu q茶多糖对小鼠实验性糖尿病的防治作用 q营养学报 ouwktl }{x p {y
董娟娥 o马柏林 o刘 丽 o等 qussv q超声波提取杜仲叶中有效成分工艺研究 q西北林学院学报 ot{kvl }yy p y{
董娟娥 o马柏林 o仝小林 o等 qussu q提高杜仲叶中主要活性物质提取率的研究 q西北林学院学报 otzktl }yw p yz
范文秀 o李新峥 qussx q南瓜生长过程中多糖含量的测定 q光谱实验室 ouukwl }{vw p {vy
高锦明 o刘 丽 o张鞍灵 o等 qt||{ q杜仲叶生物活性成分的提纯研究 q西北林学院学报 otvktl }{v p {y
马柏林 o董娟娥 o刘 丽 o等 qussu q杜仲素与杜仲总黄酮连续提取分离研究 q西北林学院学报 otzktl }zs p zv
马希汉 o王冬梅 o苏印泉 qussw q大孔吸附树脂对杜仲叶中绿原酸 !总黄酮的分离研究 q林产化学与工业 ouwkvl }wz p xt
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