全 文 ：第 ww卷 第 {期
u s s {年 { 月
林 业 科 学
≥≤Œ∞‘׌„ ≥Œ∂ „∞ ≥Œ‘Œ≤„∞
∂²¯1ww o‘²1{
㸻qou s s {
不同林区蛹虫草活性成分含量的比较
温 鲁 翁 梁 朱明伟 刘森琴
k淮阴师范学院资源微生物研究所 淮安 uuvvssl
关键词 } 林区 ~蛹虫草 ~虫草素 ~腺苷 ~虫草酸 ~虫草多糖
中图分类号 }≥zt{1{ 文献标识码 }„ 文章编号 }tsst p zw{{kuss{ls{ p stw| p sv
收稿日期 }ussz p sy p uu ∀
基金项目 }江苏省高校自然科学基金ksxŽ…t{sstsl ~淮阴师范学院教授基金ksy‹≥≥suzl ∀
Χοντεντ Χοµ παρισον οφ Αχτιϖε Χονστιτυεντ ιν Χορδψχεπσ µιλιταρισ
φροµ ∆ιφφερεντ Φορεστ Ρεγιονσ
• ±¨ ∏ • ±¨ª¬¤±ª «∏ ¬±ªº¨ ¬ ¬∏≥¨ ±´ ¬±
kΙνστιτυτε οφ Ρεσουρχε Μιχροοργανισµ oΗυαιψιν Τεαχηερσ Χολλεγε Ηυαιπαν uuvvssl
Αβστραχτ} ײ ¦²°³¤µ¨ ·«¨ ¦²±·¨±·²© °¤¬± ¤¦·¬√¨ ¦²±¶·¬·∏¨±·¬± ¦²µ§¼¦¨³¶©µ²° §¬©©¨µ¨±·©²µ¨¶·µ¨ª¬²± ¬± ≤«¬±¤q ׫¨ ¤¦·¬√¨
¦²±¶·¬·∏¨±·¬±·«¨ ¦²µ§¼¦¨³¶º¤¶º¬·«§µ¤º¨ §¥¼ °¬¦µ²º¤√¨ °¨ ·«²§o·«¨ ¦²µ§¼¦¨³¬± ¤±§¤§¨±²¶¬±¨ ¦²±·¨±·º¨ µ¨ °¨ ¤¶∏µ¨§¥¼
‹°≤ o·«¨ ¦²µ§¼¦¨³¶¤¦¬§ º¤¶ °¨ ¤¶∏µ¨§¥¼ ³¨µ¬²§¬¦¤¦¬§¶²§¬∏° ¦²¯²µ¬°¨ ·µ¼ °¨ ·«²§o·«¨ ³²¯¼¶¤¦¦«¤µ¬§¨¶º¤¶ °¨ ¤¶∏µ¨§¥¼
³«¨ ±²¯2¶∏¯³«∏µ¬¦¤¦¬§°¨ ·«²§q Χορδψχεπσ µιλιταρισ. ¶¦²µ§¼¦¨³¬±¦²±·¨±·º¤¶«¬ª«¨µ·«¤±us °ª#ªpt ¬±¦²µ§¼¦¨³¶©µ²°·º²©²µ¨¶·
µ¨ª¬²±¶¬±¬¤±ª¶∏°µ²√¬±¦¨ o¦²µ§¼¦¨³¶¤¦¬§¦²±·¨±·º¤¶·«¨ «¬ª«¨¶·o¤±§ º¤¶w|1v{ °ª#ªpt ¬± Χq µιλιταρισ©µ²° ²∏±·¤¬±
ƒ∏±¬∏©²µ¨¶·µ¨ª¬²±¬± ‹ ±¨¤± °µ²√¬±¦¨ ~·«¨ ·²·¤¯ ∏´¤±·¬·¼²©©²∏µ®¬±§¶²©¤¦·¬√¨ ¦²±¶·¬·∏¨±·¬± Χq µιλιταρισ©µ²°·º²¬¤±ª¶∏©²µ¨¶·
µ¨ª¬²±¶º¨ µ¨ ·«¨ «¬ª«¨¶·o¶∏µ³¤¶¶¨§tss °ª#ªpt q׫¨ µ¨¶∏¯·¶¶«²º¨ §·«¤··«¨ °¤¬± ¤¦·¬√¨ ¦²±¶·¬·∏¨±·¦²±·¨±·¬± Χq µιλιταρισ
©µ²° §¬©©¨µ¨±·©²µ¨¶·µ¨ª¬²± º¤¶¯ ¤µª¨ ¼¯ §¬©©¨µ¨±·o·«¨ ¤¦·¬√¨ ¦²±¶·¬·∏¨±·¦²±·¨±·¬± Χq µιλιταρισ©µ²°·º²¬¤±ª¶∏©²µ¨¶·µ¨ª¬²±¶º¤¶
µ¨ ¤¯·¬√¨ «¬ª«¨µ·«¤± ²·«¨µ¶q
Κεψ ωορδσ} ©²µ¨¶·µ¨ª¬²±¶~ Χορδψχεπσ µιλιταρισ~¦²µ§¼¦¨³¬±~¤§¨±²¶¬±¨ ~¦²µ§¼¦¨³¶¤¦¬§~³²¯¼¶¤¦¦«¤µ¬§¨
蛹虫草k Χορδψχεπσ µιλιταρισl o别名蛹草 !北虫草 !北冬虫夏草 o是著名药材冬虫夏草k Χορδψχεπσσινενσισl的近
缘种 o也是虫草属真菌的模式种 o具有和冬虫夏草类似的活性成分和医疗保健功效k梁宗琦 ousszl ∀冬虫夏
草生境特殊 o需生长在青海 !四川 !西藏等海拔 v sss ∗ x sss °的高寒地区 o蛹虫草则不需要严格的生态环
境 o我国湖北 !河北 !吉林 !陕西 !安徽 !江苏 !江西 !河南 !云南 !广西 !贵州 !四川 !台湾等省区均有发现 ∀蛹虫
草常发生在次生林地带的阔叶林及混杂林下 o要求林间郁闭度在 s1y左右 o土质疏松 o含水量 zs h ∗ {s h o一
般以鳞翅目昆虫的蛹或幼虫为寄主 o其次为鞘翅目和双翅目昆虫的幼虫与蛹 oy ) |月从地面长出子座 o对林
区害虫的自然控制起着重要作用k梁宗琦 oussz ~蒲蛰龙等 ot||yl ∀蛹虫草寄主面较广 !寄生性较强 o如深入
研究 o有望制成防治森林害虫的新型生物制剂 ∀
到目前为止 o对蛹虫草进行的研究 o主要还是其活性成分和医疗保健功效 o这也是目前开发利用的重点 ∀
冬虫夏草由于生境特殊 !寄主单一 o难以进行人工培育 o加之滥采滥挖 o导致资源破坏 o产量锐减 o使市场价格
暴涨 ~蛹虫草则具有不苛求生境和寄主 !已可人工培育及活性成分含量不亚于冬虫夏草等优点 o使之成为冬
虫夏草代用品的首选 ∀蛹虫草的活性成分主要有虫草酸 !虫草多糖 !腺苷和虫草素等 o特别是虫草素的含量
远高于冬虫夏草k韦会平等 ousswl ∀但不同林区的蛹虫草在活性成分含量上有无不同 o还未见研究比较 ∀笔
者对来自河南伏牛山 !江西井冈山 !苏南紫金山和苏北老子山林区的 w株蛹虫草进行检测比较 o现将研究情
况报告如下 ∀
1 材料与方法
t1t 材料 tl样品 „来自河南伏牛山 o由河南大学生物工程研究所刘德育研究员提供 ~…来自江西井冈
山 o由江西农科院农业应用微生物研究所张诚副研究员提供 ~≤来自江苏南京紫金山 o由江苏省农科院食用
菌研究开发中心蒋宁助理研究员提供 ~⁄来自江苏盱眙老子山 o由淮阴师范学院资源微生物研究所自行采
集 ∀以上菌株经转接活化 o用相同培养基在同一条件下进行固体培养 o取培养物于 ys ε 烘干粉碎 o然后进行
各项检测 ∀
ul试剂 虫草素和腺苷标准品由上海化学试剂公司进口分装 o磷酸二氢钾 !磷酸氢二钾 !四氢呋喃 !氯化
钠 o⁄p甘露醇 !鼠李糖 !高碘酸钠 !乙酸铵 !冰醋酸 !乙酰丙酮 !盐酸 o葡萄糖 !无水乙醇 !苯酚 !浓硫酸等 o均为
国产分析纯试剂 o试验用水为二次蒸馏水 ∀
vl设备 培养设备 }高压灭菌器 o洁净工作台 o恒温培养箱等 ~样品处理设备 }电热恒温鼓风干燥箱 o多
功能食品加工机 o电子天平 o微波炉 o台式离心机 o水浴锅等 ~检测设备 }• ¤·¨µ¶yss∞高效液相色谱系统 o
• ¤·¨µ¶uw{z紫外检测器 o∞°³²º¨ µ色谱数据管理系统 ozut≥分光光度计等 ∀其余玻璃器材为实验室常规
仪器 ∀
t1u 方法 tl活性成分提取 采用微波提取法k夏敏等 oussyl ∀用 tss °试剂瓶 o加入精确称量的样品和
准确量度的提取液 o每 y瓶 t组 o不够 y瓶时用盛有同量自来水的试剂瓶补充 o在家用微波炉中排成一圈 o用
适当火力的微波进行提取 ∀不同活性成分的提取火力和时间 o需用试验确定 o以获得最佳提取效果 ∀提取后
用离心机离心 o取上清液进行后续步骤的操作 ∀
ul虫草素和腺苷测定 采用高效液相色谱法k夏敏等 ousszl ∀色谱柱为 • ¤·¨µ¶‘’∂ „ p °„Ž≤t{反相柱 o
v1| °° ≅ vss °° ow Λ° ~流动相为 Ž‹u°’w p Žu ‹°’w 缓冲液k³‹ € y1{y os1st °²¯#ptl n t h 四氢呋喃 o流速
t1s °#°¬±pt ~检测波长 uys ±°∀虫草素标准曲线的回归方程为 Ψ€ v1ts ≅ tsy Ξ p t1vw ≅ tsw oΡu € s1||| | ~
腺苷标准曲线的回归方程为 Ψ€ v1xx ≅ tsy Ξ p x1zu ≅ tsv oΡu € s1||| | ∀式中 Ψ为色谱峰面积 oΞ为虫草素
或腺苷的进样量kΛªl ∀
样品提取时 o向 tss °试剂瓶中加入 s1uxs s ª样品 o再加 ux1ss °生理盐水提取液 o用中火k°xsl处理
u1s °¬±o将提取液离心 o上清液用 s1u Λ°水系针头滤器压滤 o压滤液进行高效液相色谱检测 ∀
vl虫草酸测定 采用高碘酸钠比色法k温鲁等 ousswl ∀虫草酸的化学成分为 ⁄p甘露醇 o准确称取甘露
醇标准品 s1xss s ªo配成 x °ª#°pt的甘露醇标准溶液 o再稀释成不同质量浓度的系列标准溶液 ~用微量取
样器分别取不同质量浓度的标准溶液 vss ˏo加 zss ˏ蒸馏水 o然后加 t1ss °高碘酸钠试液 o混匀 o室温放
置 ts °¬±o加 u °s1t h鼠李糖 o再加 w °新配制的 ‘¤¶«试剂k用冰醋酸和乙酰丙酮等配制l oxv ε 水浴 tx
°¬±o用分光光度计在 wus ±°处测吸光度 o得甘露醇含量 Χ与吸光度 Α的回归方程 }Χ€ s1v|y uΑp s1ssw { o
Ρu € s1||| | ∀
样品提取时 o称取 s1tss s ª样品放入试剂瓶 o加入 ux1ss °蒸馏水 o以中火k° xsl处理 t °¬±o离心后取
上清液 vss ˏo其余操作与标准溶液测定步骤相同 ∀测得吸光度后 o按回归方程计算提取液的虫草酸含量 o
则样品中的虫草酸含量k°ª#ªptl € Χ≅ uxΠµ o式中 Χ为样品溶液中虫草酸含量k°ª#°ptl oux是样品提取
液体积k°l o µ 为称取样品的质量kªl ∀
wl虫草多糖测定 采用苯酚 p硫酸法k来永斌等 ousstl ∀多糖在酸性条件下水解成葡萄糖等单糖 o以葡
萄糖为标样配制系列标准溶液 o分别取各质量浓度标准溶液 t1ss °o加入 x h 苯酚溶液 t1x °o浓 ‹u≥’w
z1x °o常温显色 vs °¬±o于 w|s ±°处测定吸光度 o得葡萄糖含量 Χ与吸光度 Α的回归方程 }Χ€ s1txv t Αp
s1ssu w oΡu € s1||| t ∀
样品提取时 o称取 s1xss s ª样品放入试剂瓶 o加入 us1ss °蒸馏水 o以中火k° xsl处理 v1x °¬±o离心后
取上清液 x1ss °o加 us °无水乙醇 o待多糖沉降 o离心去上清液 o将沉淀晾干 o加热水溶解 o定容至 ts °o
从中取 s1ts °o用水补足 t1ss °o其余操作与标准溶液测定步骤相同 ∀样品中多糖含量k°ª#ªptl € Χ≅
tss ≅ wΠµ o式中 Χ为 s1ts °测试液中多糖含量k°ªl otss是多糖测试液总体积 ts °与 s1ts °取出液的
体积比 ow为微波提取液总体积 us °与醇沉时取出液 x °的体积比 oµ 为称取样品的质量kªl ∀
2 结果和分析
u1t 结果 测定结果见表 t o表中数据为平均值k ν € xl o各项测定的相对标准偏差k• ≥⁄l分别在 t1sw h ∗
t1|u h之间 ∀
sxt 林 业 科 学 ww卷
表 1 不同林区蛹虫草主要活性成分含量
Ταβ .1 ∆ιφφερεντ φορεστ Χορδψχεπσ µιλιταρισ µαιν αχτιϖε χονστιτυεντ χοντεντ °ª#°pt
样 品
≥¤°³¯¨
虫草素
≤²µ§¼¦¨³¬±
腺 苷
„§¨±²¶¬±¨
虫草酸
≤²µ§¼¦¨³¶¤¦¬§
虫草多糖
°²¯¼¶¤¦¦«¤µ¬§¨
活性成分总量
ײ·¤¯ ∏´¤±·¬·¼ ²©¤¦·¬√¨¬±ªµ¨§¬¨±·
„ ts1u| s1tx w|1v{ vv1sx |u1{z
… y1x| s1u{ u|1|v vz1{u zw1yu
≤ us1zs ) wt1us v{1{s tss1zs
⁄ us1uu s1uv wt1vw v{1|v tss1zu
u1u 分析 tl从上表可以看出 o来自不同林区的蛹虫草 o主要活性成分虫草素的含量存在较大差异 o含量最
低的是井冈山林区的菌株 o其次为伏牛山林区的菌株 ~江苏紫金山和老子山 u个林区菌株的虫草素含量均
很高 o最高的紫金山菌株是井冈山菌株的 v1tw倍 ∀虫草素是蛹虫草最重要的活性成分k梁宗琦 oussz ~刘东
泽 ousswl o其含量高低在很大程度上影响着蛹虫草的医疗保健功效 ∀腺苷含量则以紫金山菌株最低 o用高效
液相色谱未能检出 o而井冈山菌株的腺苷含量最高 ∀
ul虫草酸含量以伏牛山菌株最高 o井冈山菌株最低 o前者是后者的 t1yx倍 ~江苏 u个菌株相近 o均处于
较高水平 ∀虫草多糖则以伏牛山菌株最低 o江苏老子山菌株最高 o紫金山菌株与老子山菌株基本一致 o井冈
山菌株也很高 ∀
vl综合 w种主要活性成分总量 o江苏 u个菌株仍然相近并处于最高水平 o伏牛山菌株次之 o井冈山菌株
最低 ∀
3 小结与讨论
tl来自不同林区蛹虫草的活性成分含量 o存在较为明显的差距 o这里既有菌株之间的差异 o也有林区条
件k如林木种类和郁闭度 !昆虫种类和习性 !土壤质地和酸碱度 !气温和降水量等l不同所产生的影响 ∀江苏
u个林区自然条件相近 o所以 u个菌株的活性成分含量很接近 o而且均处于很高水平 ∀
ul本研究仅对不同林区蛹虫草菌株的固体培养物进行了检测比较 o未检测自然采集的野生蛹虫草和代
料栽培的人工蛹虫草 ∀据研究 o蛹虫草固体培养物的活性成分含量 o较野生蛹虫草和人工蛹虫草高得多k温
鲁等 ouss{l o而且含量高低同样体现出野生蛹虫草和人工蛹虫草的差异 ∀
vl受菌种来源制约 o对国内其他林区的蛹虫草未能进行检测比较 o今后将创造条件 o扩大检测比较的
范围 ∀
wl不同林区蛹虫草的活性成分含量和对昆虫的寄生能力之间 o是否有某种相关性 o如果有 o可否通过改
变活性成分含量来提高蛹虫草对林区害虫的防治能力 o是一个值得研究的新问题 ∀
参 考 文 献
来永斌 o王 琦 o孙 月 qusst1 蛹虫草多糖含量的测定与分析 q中成药 ouvkzl }xtz p xt{1
梁宗琦 qussz1 中国真菌志 }第 vu卷 虫草属 q北京 }科学出版社 ou p v1
刘东泽 o陈 伟 o高新华 o等 qussw1 虫草菌素kv. p脱氧腺苷l研究进展 q上海农业学报 ouskul }{| p |v1
蒲蛰龙 o李增智 qt||y1 昆虫真菌学 q合肥 }安徽科学技术出版社 ouu{ p uvt1
韦会平 o肖 波 o胡开治 qussw1 蛹虫草药用价值考 q中药材 ouzkvl }utx p utz1
温 鲁 o尹起范 o唐玉玲 o等 qussw1 蚕虫草与有关虫草活性成分检测比较 q食品科学 ouxk{l }txx p txz1
温 鲁 o翁 梁 o朱明伟 o等 quss{1 蛹虫草新型菌粉活性成分含量的测定 q江苏农业学报 ouwkul }ut| p uus1
夏 敏 o温 鲁 qussy1 微波法提取虫草素研究 q食品科学 ouzktsl }uw{ p uxt1
夏 敏 o尹起范 o温 鲁 o等 qussz1 高效液相色谱法测定蛹虫草中腺苷和虫草素 q理化检验 p化学分册 owvkxl }v{y p v{{1
k责任编辑 朱乾坤l
txt 第 {期 温 鲁等 }不同林区蛹虫草活性成分含量的比较