全 文 ：第 wt卷 第 u期
u s s x年 v 月
林 业 科 学
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¤µqou s s x
疫木中松材线虫的免疫学检测方法的研究 3
白 钢t 王玉 u 马洪周t 李海燕u 杨文博t
kt q南开大学生命科学学院 天津 vssszt ~ u q国家林业局森林病虫害防治总站 沈阳 ttssvwl
摘 要 } 以松材线虫的粉碎虫体免疫家兔制备抗血清 o通过免疫印迹考察抗血清的特异性 ∀利用固相松材线虫
抗原和游离线虫抗原同线虫抗体相竞争 o建立竞争型 ∞Œ≥„法用于疫木中松材线虫的分析 ∀该方法可以直接检测
出 ts °ª的木屑中 s1t Λª微量的线虫蛋白 o约 z条线虫的存在 ∀利用该方法对 us个不同地区 !树种及类型的松材
样品进行检测 o疫木中松材线虫的检出率为 tss h o但拟松材线虫也呈现了一定的交叉反应 ∀研究结果表明 o以松
材线虫抗原蛋白为指标的免疫学检测方法简便快速 !灵敏度高 o为松材线虫的快速检疫提供一种可能的途径 ∀
关键词 } 松材线虫 ~线虫鉴定 ~免疫印迹 ~∞Œ≥„
中图分类号 }≥zyv1z 文献标识码 }„ 文章编号 }tsst p zw{{kussxlsu p ss|t p sx
收稿日期 }ussv p sv p sv ∀
基金项目 }国家/十五0重点科技攻关课题/林业重大病虫害预警及控制技术研究0中的专题 t ∀
3 本研究采样工作得到浙江 !安徽 !江苏 !江西森防站及江苏林科院大力支持 o在此表示感谢 ∀
∆εϖελοπ µεντ ανδ Αππλιχατιον οφ αν Ιµ µ υνοασσαψ Μετηοδ φορ
Ιδεντιφιχατιον οφ Βυρσαπηελενχηυσ ξψλοπηιλυσιν Πινεωοοδ
…¤¬Š¤±ªt • ¤±ª ≠∏¼¤±u ¤ ‹²±ª½«²∏t ¬‹¤¬¼¤±u ≠¤±ª • ±¨¥²t
kt qΧολλεγε οφ Λιφε Σχιενχε o Νανκαι Υνιϖερσιτψ Τιανϕιν vssszt ~
u qΓενεραλΣτατιον οφ Φορεστ Πεστ ανδ ∆ισεασε Χοντρολo Τηε Στατε Αδµινιστρατιον οφ Φορεστρψ Σηενψανγ ttssvwl
Αβστραχτ } פ®¬±ª·«¨ ¶³¨¦¬°¨ ±¶²© Βυρσαπηελενχηυσ ξψλοπηιλυσ k…÷l ¤±§ Βq µυχρονατυσ k…l ©µ¤ª°¨ ±·¶¤¶µ¨¶¨¤µ¦«²¥2
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Κεψ ωορδσ} Βυρσαπηελενχηυσ ξψλοπηιλυσ~±¨ °¤·²§¨ ¤±¤¯¼¶¬¶~º¨ ¶·¨µ± ¥¯²·~∞Œ≥„
松材线虫k Βυρσαπηελενχηυσ ξψλοπηιλυσl是对松树具有严重危害的一种病原生物 o它借助于媒介昆虫松墨天
牛k Μονοχηαµυσ αλτερνατυσl 成虫传播危害松树 o造成严重的松林毁灭性灾害 o为国内外重要的森林植物检疫
对象 ∀自从 t|{u年秋在南京紫金山松林中首次发现松材线虫病害后 o至今已有多个省份观测到松材线虫病
害的存在 o对我国国民经济及生态环境等造成十分巨大的损失 ∀目前因对松材线虫病的防治尚无经济有效
的措施 o严格检疫是阻止该病的发生 !传播和蔓延的最重要的途径之一 o因此多年来松材线虫病的检测方法
的研究一直是一个热点k陈玉惠等 ousstl ∀长期以来对松材线虫的鉴定多采用传统的形态学鉴定方法 ous世
纪 {s年代以后 o采用聚丙烯酰胺凝胶电泳的同工酶分析k胡凯基等 ot||xl !°≤• p • ƒ°k陆伟等 ousstl !• „°⁄
k张路平等 oussul以及 °≤• p ≥≥≤°k张立海等 ousstl分析等分子生物学技术 o在鉴别松材线虫和拟松材线虫
株系的理论研究方面取得了一定进展 ∀本文利用免疫学原理 o建立微量线虫蛋白的 ∞Œ≥„检测方法 o可直接
用于测定疫木中的松材线虫 o为疫木的快速鉴定及口岸检疫提供一种实用型的新方法 ∀
t 材料和方法
111 材料
试剂 }弗氏佐剂kŠŒ…≤’ …• l ~硝酸纤维素膜 kŒŒ°’• ∞l ~辣根过氧化物酶k‹• °l标记羊抗兔 ŒªŠ o邻苯二
胺k’°⁄l ov ovχ p二氨基联苯胺k⁄„…l o牛血清白蛋白k…≥„l购于华美生物工程公司 o其他试剂均为分析纯 ∀
主要仪器 }酶标仪k…Œ’×∞≤‹ o∞÷{ssl o冷冻干燥机k≤«µ¬¶·o„°‹„t p wl o高速冷冻离心机k…¨ ¦®°¤±o
us• °xu⁄l o电泳及电转移系统k国产l o超声波细胞粉碎仪k国产l ∀
112 线虫样品的制备
本试验从江苏 !安徽 !浙江 !广东 !湖南等地共采集了 ux株黑松 k Πινυστηυνβεργιιl 和 wx株马尾松 k Πq
µασσονιαναl 样木 o分别采用贝尔曼漏斗法分离线虫 o镜检 o根据形态学分类法鉴定线虫的种类 ∀并根据分离
到的线虫的量以及纯度k|x h以上l筛选出了 z个株系的线虫进行研究 o其中松材线虫 w株 o拟松材线虫 v
株 ∀然后再分别对所选中的样木 o仍采用贝尔曼漏斗法收集线虫 o收集后即置于冰箱内冷藏 o逐渐积累线虫 o
直到足够分析用的量 o作为本试验线虫样品 ∀
113 抗松材线虫血清(Αντι − ΒΞ抗松)的制备
取清洗后的松材线虫kt ∗ ts万条l记数 o并加入 u °°…≥ ks1st °²¯#pt磷酸缓冲液 os1t °²¯#pt ‘¤≤¯ o
³‹z1ul中 o于冰水浴中超声波粉碎虫体kuss • ots °¬±l ∀w ε ov sss µ#°¬±pt离心 ts °¬±o以 ²ºµ¼法k²µµ¼ ετ
αλqot|xtl测定蛋白含量 o约 yz条线虫的蛋白含量为 t Λª∀取上述 t °ª#°pt松材线虫蛋白提取液 t °与
等体积的弗氏完全佐剂混合乳化后 o对家兔皮下进行多点注射进行免疫 ∀每隔 u周加强注射一次 o定期测定
抗血清效价 o待获得最高效价后 o收集血清 o灭活 op us ε 保存备用 ∀
114 抗体效价的测定
取松材线虫抗原溶液于 s1sx °²¯#pt ‘¤‹≤’v缓冲液k³‹ |1yl中 o制成 ts Λª#°pt包被液 ∀取 tss ˏ包
被液于酶标板的各孔中 o室温放置 v «o包被酶标板 ∀以 uss ˏ封闭液ks1st °²¯#pt磷酸缓冲液 os1t °²¯#
pt ‘¤≤¯ ot h …≥„ os1t h ‘¤‘v o³‹z1ul室温放置 v «o封闭酶标板 ∀分别加入以稀释液 ks1st °²¯#pt磷酸缓
冲液 os1st °²¯#pt ∞⁄ׄ os1t h …≥„ o³‹z1wl系列稀释的 „±·¬p …÷ 血清 tss ˏo室温反应 v «∀用 uss ˏ
°…≥×ks1st °²¯#pt磷酸缓冲液 os1t °²¯#pt ‘¤≤¯ os1t h ׺¨ ±¨ us o³‹z1ul 清洗 w次后 o加入 u sss倍稀释的
辣根过氧化物酶k‹• °l标记羊抗兔 ŒªŠ的酶标二抗 tss ˏo室温反应 t «∀°…≥×清洗 w次后 o加入新配 ’°⁄
底物溶液ks1x °ª#°pt邻苯二胺 os1stu h ‹u ’u os1t °²¯#pt柠檬酸缓冲液 o³‹x1ultss ˏo反应 x °¬±后 o加
入 xs ˏt °²¯#pt ‹u≥’w终止反应 o于 w|s ±°处测定吸光度 ∀
115 免疫印迹分析
分别取松材线虫 …÷ ¤o¥o¦o§以及拟松材线虫 … ¤等 x种抗原 kus ∗ ws Λª#º¨ ¯¯ p tl o按照¤¨ °°¯¬方法
kt|zsl采用 ts h ≥⁄≥ p °„Š∞凝胶电泳分离线虫蛋白 ∀按照 ײº¥¬±方法kt|z|l 将分离的线虫抗原电转移至
硝酸纤维素膜上 ∀经封闭液封闭后 o加入 t sss倍稀释的 „±·¬p …÷ 血清 ts °o室温反应 v «∀以 °…≥×充分
冲洗后 o加入 xss倍稀释的 ‹• °标记的羊抗兔 ŒªŠ抗体溶液 x °o室温继续反应 t «o充分洗涤 o加入 ⁄„…底
物显色 ∀
116 ΕΛΙΣΑ检测方法的建立
取 ts Λª#°pt松材线虫抗原溶液 tss ˏ于酶标板的各孔中 o包被酶标板 ∀封闭后 o分别加入系列稀释
的线虫抗原溶液k或样品ltss ˏo和 us sss倍稀释的 „±·¬p …÷ 血清 tss ˏo室温反应 y «∀ °…≥×清洗后 o分
别加入 u sss倍稀释的酶标二抗 tss ˏo室温反应 t «∀充分冲洗后 o再加入 ’°⁄底物显色 o并于 w|s ±°处测
定吸光度 ∀
u 结果与分析
211 松材线虫特异性抗原的分析
经 w次追加注射后 o„±·¬p …÷ 血清对松材线虫抗原包被的固相显示很高的结合活性 ∀线虫中的特异性
抗原采用免疫印迹方法 o通过对松材线虫和拟松材线虫 x种抗原样品的分析进行了确认k图 tl ∀凝胶分析
的结果表明 ou种线虫在 uu ∗ || ®∏之间存在多种相近的蛋白成分 o其中 vt和 ws ®∏处较明显 ∀免疫印迹的
结果也表明 „±·¬p …÷ 血清对 u种线虫中存在 ws ®∏以上的蛋白显示良好的反应性 o分别在 ws owv oyw和 z{
®∏等多处均呈现了相同的抗原带 ∀虽然在 uu ovw o|| ®∏处线虫蛋白存在一定的差别 o但 „±·¬p …÷ 血清尚不
能明确地区分 u种线虫 ∀
u| 林 业 科 学 wt卷
t1 标准分子量蛋白 ¤µ®¨µ³µ²·¨¬±~u1…÷¤~v1…÷¥~w1…÷¦~x1…÷§~y1…¤
图 t x种线虫的 ≥⁄≥ p °„Š∞和免疫印迹分析
ƒ¬ªqt ≥⁄≥ p °„Š∞ ¤±§º ¶¨·¨µ± ¥¯²·¤±¤¯¼¶¨¶²©©¬√¨ ®¬±§¶²©±¨ °¤·²§¨
线虫蛋白量 „°²∏±·²©±¨ °¤·²§¨ ³µ²·¨¬± ¤±·¬ª¨ ±ΠkΛª#º¨¯¯p tl
图 u 线虫蛋白的 ∞Œ≥„法测定曲线
ƒ¬ªqu ×¼³¬¦¤¯ §²¶¨ µ¨¶³²±¶¨ ¦∏µ√¨ ¶²©±¨ °¤·²§¨ ¤±·¬ª¨ ± ° ¤¨¶∏µ¨§¥¼ ∞Œ≥„ ° ·¨«²§
212 ΕΛΙΣΑ法的特异性考察
以松材线虫蛋白为固相抗原 o使抗
„±·¬p …÷ 抗体与游离松材线虫抗原和固
相抗原相竞争 o以 ‹• °标记的羊抗兔 ŒªŠ
为示踪抗体 o如图 u所示 o在 s1t ∗ ts Λª#
º¨ ¯¯ p t浓度范围内 o线虫蛋白浓度与 ‹• °
的结合酶活性呈现良好的剂量关系 ∀该竞
争型 ∞Œ≥„在上述测定范围内的变异系数
k¦q√ ql为 t1y h ∗ {1u h k ν € xl o检测灵敏
度为 s1t Λª#º¨ ¯¯ p t ∀特异性的考察结果表
明k表 tl ox种松材线虫呈现良好的反应
性 o其 xs h的抑制酶活性k∞≤xsl在 s1vt ∗
s1xs Λª之间 ∀拟松材线虫也呈现了一定
的交叉反应 o其 ∞≤xs为 t1sx ∗ ts1u Λª明显
高于松材线虫 o松树中腐生的小杆目的双胃线虫 !小杆线虫 o以及其他植物线虫如大豆孢囊线虫和花生根结
线虫则未检出 o说明该方法对松材线虫和拟松材线虫具有一定的专属性 ∀
表 1 ΕΛΙΣΑ法对线虫样品 ΕΧ50值的考察
Ταβ . 1 Τηε ΕΧ50 ϖαλυεσ οφ νεµατοδε σπεχιµενσ δετερµινεδ βψ ΕΛΙΣΑ µετηοδ
线虫样品
‘¨ °¤·²§¨ ¶¤°³¯¨
采集地
∞³¬§¨ °¬¦¤µ¨¤¶
寄主
‹²¶· ∞≤xsΠΛª
…÷¤ 浙江宁波 ‘¬±ª¥²o«¨­¬¤±ª 黑 松 Πq τηυνβεργιι s1vu
松材线虫 Β q ξψλοπηιλυσ …÷¥ 江苏南京 ‘¤±­¬±ªo¬¤±ª¶∏ 黑 松 Πq τηυνβεργιι s1w|
…÷¦ 江苏南京 ‘¤±­¬±ªo¬¤±ª¶∏ 马尾松 Πq µασσονιανα s1vt
…÷§ 江苏南京 ‘¤±­¬±ªo¬¤±ª¶∏ 马尾松 Πq µασσονιανα s1xs
拟松材线虫 Β q µυχρονατυσ …¤ 安徽黄山 ‹∏¤±ª¶«¤±o„±«∏¬ 马尾松 Πq µασσονιανα t1sx
…¥ 浙江绍兴 ≥«¤²¬¬±ªo«¨­¬¤±ª 马尾松 Πq µασσονιανα t1t{
…¦ 浙江绍兴 ≥«¤²¬¬±ªo«¨­¬¤±ª 马尾松 Πq µασσονιανα ts1u
双胃线虫 ∆ιπλογαστερ¶³q  tss
小杆线虫 Ρηαβδιτισ¶³q  tss
大豆孢囊线虫 Ηετεροδερα γλψχινεσ  tss
花生根结线虫 Μελοιδογψνε αρεναρια  tss
v| 第 u期 白 钢等 }疫木中松材线虫的免疫学检测方法的研究
u1v 样木的测试
分别将 ussu年 { ) tt月采自安徽 !浙江 !江苏 !江西 !四川和天津等松材线虫病疫区和非疫区不同类型
的松木样木共计 us株 o分别利用贝尔曼漏斗法进行线虫分离 o根据形态学分类方法进行常规检验k表 ul o确
认松材线虫疫木 ts株k‘²qt ∗ tsl o无松材线虫但有拟松材线虫的病死木或濒死木 x株k‘²qtt ∗ txl o无任何
线虫的健康木 x株k‘²qty ∗ usl ∀分别用电钻在木质部多点钻取以上样木的木屑 o混匀后各取 t ª木屑于 ts
°°…≥中超声波处理 o各取上清液 tss ˏo用上述 ∞Œ≥„法检测线虫抗原含量 o每个样品重复测定 v次 o结
果取平均值列于表 u ∀
测试结果表明 o感染松材线虫的 w株黑松和 y株马尾松疫木均被检出 ox株健木的线虫蛋白含量均为 s ∀
另外 o拟松材线虫也呈现一定的交叉反应 ox株感染了拟松材线虫的马尾松中有 w株被检出 o说明该方法尚
不能区分松材线虫和拟松材线虫 ∀但与健木相对照 o松材线虫感染疫木的检出率为 tss h o形态学鉴定的感
染状况也同 ∞Œ≥„法的检测结果基本相符合 o疫木中混生的其他线虫如腐生线虫对 ∞Œ≥„检测不产生干扰 ∀
表 2 20 个松树样木中松材线虫抗原的 ΕΛΙΣΑ法检测结果 ≠
Ταβ . 2 Τηε ρεσυλτσ οφ 20 πινεωοοδ σαµ πλεσ αναλψζεδ βψ ΕΛΙΣΑ µετηοδ φορ νεµατοδε αντιγεν
样号
‘²q
采样地点
∞³¬§¨ °¬¦¤µ¨¤¶
寄主种类
‹²¶·
感染状况 Œ±©¨¦·¨§¦²±§¬·¬²±
松材线虫
Β q ξψλοπηιλυσ
拟松材线虫
Β qµυχρονατυσ
其他线虫
’·«¨µ±¨ °¤·²§¨¶
线虫蛋白含量
°µ²·¨¬± ¦²±·¨±·
Π≈Λª#kts °ªlp t 
t 浙江宁波 ‘¬±ª¥²o«¨­¬¤±ª
u 浙江平湖 °¬±ª«∏o«¨­¬¤±ª
v 江苏南京 ‘¤±­¬±ªo¬¤±ª¶∏
w 安徽和县 ‹ ¬¨¬¤±o„±«∏¬
x 浙江宁波 ‘¬±ª¥²o«¨­¬¤±ª
y 江苏铁心桥 ׬¨¬¬±´ ¬¤²o¬¤±ª¶∏
z 江苏南京 ‘¤±­¬±ªo¬¤±ª¶∏
{ 安徽巢湖 ≤«¤²«∏o„±«∏¬
| 安徽当涂 ⁄¤±ª·∏o„±«∏¬
ts 安徽和县 ‹ ¬¨¬¤±o„±«∏¬
tt 浙江宁波 ‘¬±ª¥²o«¨­¬¤±ª
tu 浙江绍兴 ≥«¤²¬¬±ªo«¨­¬¤±ª
tv 安徽黄山 ‹∏¤±ª¶«¤±o „±«∏¬
tw 江西九江 ¬∏­¬¤±ªo¬¤±ª¬¬
tx 四川邻水 ¬±¶«∏¬o≥¬¦«∏¤±
ty 安徽马鞍山 ¤¤±¶«¤±o„±«∏¬
tz 浙江平湖 °¬±ª«∏o«¨­¬¤±ª
t{ 天津南开 ‘¤±®¤¬o׬¤±­¬±
t| 天津南开 ‘¤±®¤¬o׬¤±­¬±
us 天津南开 ‘¤±®¤¬o׬¤±­¬±
黑 松
Πq τηυνβεργιι
马尾松
Πq µασσονιανα
马尾松
Πq µασσονιανα
黑松
Πq τηυνβεργιι
白皮松 Πq βυνγεανα
雪松 Χεδρυσ δεοδαρα
油松 Πqταβυλαεφορµισ
n n p nΠp s1vy
n n p p s1x{
n n p nΠp s1uy
n n p n n s1x{
n p n n n s1tw
n p p s1ux
n p nΠp s1tz
n n n p p s1|s
n p nΠp s1tx
n p n n s1uz
p n n s1ut
p n n nΠp s1yu
p n nΠp s1tx
p n n p s1ys
p n n p s
p p p s
p p p s
p p p s
p p p s
p p p s
≠ n n n on n on onΠp op }分别为形态学检测的线虫数量和感染状况 ∀ ±∏¤±·¬·¼ ²© ±¨ °¤·²§¨ ¤±§¬±©¨¦·¨§¦²±§¬·¬²± ²¥¶¨µ√ §¨¥¼ °²µ³«²¯²ª¼
° ·¨«²§µ¨¶³¨¦·¬√¨ ¼¯ q
v 讨论
生物物种的多样性基于基因的多态性 o而基因的多态性可以体现在形态表征 !组成成分等不同的水平
上 ∀分子生物学技术的发展使松材线虫的鉴定从传统的形态表征 !理化性质的判别扩展到生物信息大分子
如 ⁄‘„ !• ‘„和蛋白质等生命信息载体的研究 ∀抗体作为分析试剂则具有优越的特异性和亲和性 o分析样
品不需要或只要简单的预处理即可直接测定 o并且具有较高的稳定性 o因此已广泛应用于细菌 !病毒 !支原体
等的定性定量的检测手段 ∀
¤º¯ µ¨等kt||v¤l曾采用以葡萄孢培养的松材线虫和拟松材线虫提取总蛋白为材料 o分别免疫家兔制备
抗血清 o用 ∞Œ≥„和免疫印迹方法鉴定线虫 ∀培养线虫提取物的 ≥⁄≥ p °„Š∞电泳分析的结果未见二者的明
显区别 o以其制备的抗血清之间也呈现一定的交叉反应 o其中 vt ∗ |z ®∏的线虫蛋白为主要抗原 ∀进一步 o
¤º¯ µ¨等kt||v¥l用抗松材线虫的多克隆抗体检出了存在于欧洲赤松k Πινυσσψλϖεστρισl木材表面的 s1w Λª微量
w| 林 业 科 学 wt卷
的线虫蛋白质 o相当于 ux条线虫 ∀但由于 ¤º¯ µ¨等认为木材的种类和感染情况的不同 o松材线虫常常以 t
至 ts条不等的数量分散或聚集于木材内部 o因而未能对自然感染松材线虫的疫木进行更深入的研究 ∀本研
究以直接从疫木上分离的松材线虫为抗原制备抗血清 o可避免人工培养中产生的非特异性干扰提高了特异
性 o采用竞争型 ∞Œ≥„法本研究可检测出 ts °ª木屑中 s1t Λª微量线虫蛋白质 o约相当于 z条线虫 ∀试验结
果表明 o形态学鉴定的结果同免疫学的检测数据基本吻合 o树种 !采样地点和疫木中其他腐生线虫等因素并
不影响该方法的检测结果 ∀
松材线虫和拟松材线虫均为伞滑刃属的种 o这 u种线虫常混生或单独出现在病树木上 o二者形态极其相
似 o较难区分k张路平等 ousssl ∀同工酶谱以及基因的多态分析等分子生物学的研究结果也表明二者有十分
相近的同源性 o给鉴定带来了不便 o但也存在一定的差异 ∀本研究虽然利用多克隆抗体不能完全区分 u种线
虫 o但能发现特定松材线虫株系的特异性抗原之间存在一定的差异 o这同 ¤º¨ µ研究的结果相吻合 o也为进
一步筛选松材线虫的特异性抗原 o制备其单克隆抗体 o建立松材线虫的特异性免疫学分析方法提供了可能
性 ∀从这个角度来看 o这种方法优于利用有机溶液萃取被检木再进行指示反应的检测方法k王玉 等 o
usstl ∀
综上所述 o建立快速免疫学鉴定方法可以为松材线虫检疫提供实用的方法 o与电泳法和核酸分析相比 o
免疫学检测具有简便快速 !利于普及应用的特点 o对森林检疫特别是口岸检疫具有重要的意义 ∀
参 考 文 献
陈玉惠 o叶建仁 o魏初奖 qusst q松材线虫病诊断方法研究进展 q南京林业大学学报 ouxkyl }{v
胡凯基 o杨宝君 qt||x q松材线虫和拟松材线虫不同株系酶电泳的研究 q林业科学研究 o{ktl }zv p zz
刘 伟 o杨宝君 o徐福元 o等 qt||{ q松材线虫病早期诊断的研究 ) ) ) 马尾松 !黑松松材线虫病树的早期诊断 q林业科学研究 ottkxl }wxx p wys
陆 伟 o陈学新 o郑经武 o等 qusst q松材线虫和拟松材线虫 µ⁄‘„中 Œ×≥区的比较研究 q农业生物技术学报 o|kwl }v{z p v|t
王玉 o李海燕 o舒朝然 o等 qusst q几种松树松材线虫病木和健木 ³‹值差异的研究 q植物病理学报 ovtkwl }vwu p vw{
杨宝君 o刘 伟 o徐福元 o等 qt||| q松材线虫病早期诊断的研究 ) ) ) µ松树品种 !接种量及线虫来源对流胶法的影响 q林业科学研究 otukvl }
uxt p uxx
张立海 o廖金铃 o冯志新 qusst q松材线虫 µ⁄‘„的测序和 °≤• p ≥≥≤°分析 q植物病理学报 ovtktl }{w p {|
张路平 o孔繁瑶 o杨宝君 qussu q松材线虫和拟松材线虫不同株系线粒体 ⁄‘„ • „°⁄分析 q林业科学研究 otxktl }z p tu
张路平 o李记标 o孔繁瑶 qusss q松材线虫和拟松材线虫扫描电镜的结构的比较研究 q电子显微学报 ot|kxl }yz| p y{v
¤¨ °°¯¬˜ Žqt|zs q ≤¯ ¤¨√¤ª¨ ²©¶·µ∏¦·∏µ¤¯ ³µ²·¨¬±¶§∏µ¬±ª·«¨ ¤¶¶¨ °¥¯¼ ²©·«¨ «¨ ¤§²©¥¤¦·¨µ¬²³«¤ª¨ ×w1 ‘¤·∏µ¨ k²±§²±l ouuz }y{s p y{x
¤º¯ µ¨≤ o ‹¤µ° ¼¨  „ qt||v¤qŒ°°∏±²¯²ª¬¦¤¯ §¨·¨¦·¬²± ²©±¨ °¤·²§¨ ¤±·¬ª¨ ±¶²±·«¨ ¶∏µ©¤¦¨ ²©¤ º²²§¶¨¦·¬²±qƒ∏±§¤°¨ ±·¤¯ ¤±§„³³¯¬¨§ ‘¨ °¤·²¯²ª¼otykyl }
xut p xuv
¤º¯ µ¨≤ o²¼¦¨ ° o ‹¤µ°¨ ¼  „ qt||v¥qŒ°°∏±²¯²ª¬¦¤¯ §¬©©¨µ¨±·¬¤·¬²± ¥¨·º¨¨ ± Βυρσαπηελενχηυσ ξψλοπηιλυ󤱧 Β q µυχρονατυσq‘¨ °¤·²¯²ª¬¦¤ov|kwl }xvy p
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