全 文 ：第 ３９卷　 第 １期
２０１５年 １月
南京林业大学学报 （自然科学版 ）
Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｎａｎｊｉｎｇ Ｆｏｒｅｓｔｒｙ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ （Ｎａｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｅｄｉｔｉｏｎ）
Ｖｏｌ．３９， Ｎｏ．１
Ｊａｎ．， ２０１５
ｄｏｉ：１０．３９６９ ／ ｊ．ｉｓｓｎ．１０００－２００６．２０１５．０１．００６
　 收稿日期：２０１４－１１－０３　 　 　 　 修回日期：２０１４－１２－０８
　 基金项目：国家林业公益性行业科研专项项目（２０１２０４５０１）；国家林业局“９４８”项目（２０１１－４－６９）；江苏高校优势学科建设工程资助
项目（ＰＡＰＤ）
　 第一作者：王张丽，硕士。 ∗通信作者：叶建仁，教授。 Ｅ⁃ｍａｉｌ： ｊｒｙｅ＠ ｎｊｆｕ．ｅｄｕ．ｃｎ。
　 引文格式：王张丽，叶建仁，朱丽华，等． 抗松材线虫病赤松组培苗菌根化研究［ Ｊ］ ． 南京林业大学学报：自然科学版，２０１５，３９（１）：
２７－３２．
抗松材线虫病赤松组培苗菌根化研究
王张丽，叶建仁∗，朱丽华，吴小芹，孙婷玉
（南方现代林业协同创新中心，江苏省有害生物预防与控制重点实验室，南京林业大学林学院，江苏　 南京　 ２１００３７）
摘要：为提高抗病赤松组培苗的生根率及生根质量，以抗松材线虫病赤松瓶内组培苗为试验材料，比较了菌根真
菌发酵液接种、菌块接种及发酵液浸根 ３ 种方式对组培苗生根率及移栽成活率的影响。 结果表明：３ 种接菌方
式对赤松生根率均无显著影响，而对移栽成活率有显著影响。 对赤松组培苗接种美味牛肝菌（Ｂｅ）、黄色须腹菌
（Ｒｌ）和彩色豆马勃（Ｐｔ２） ３种菌根真菌，发现 ３种菌根真菌均能与组培苗形成菌根，但菌根化程度及菌根的形态
表现出一定差异，Ｐｔ２与赤松组培苗形成的菌根状态最好，且移栽成活率较高，是适合赤松组培苗菌根化的优良
菌根真菌。
关键词：赤松；松材线虫病；组培苗；移栽；菌根真菌
中图分类号：Ｓ７６３；Ｑ８１３　 　 　 　 　 　 　 文献标志码：Ａ 文章编号：１０００－２００６（２０１５）０１－００２７－０６
Ｍｙｃｏｒｒｈｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｉｓｓｕｅ⁃ｃｕｌｔｕｒｅｄ ｐｌａｎｔｌｅｔｓ ｏｆ ｎｅｍａｔｏｄｅ⁃ｒｅｓｉｓｔａｎｔ Ｐｉｎｕｓ ｄｅｎｓｉｆｌｏｒａ
ＷＡＮＧ Ｚｈａｎｇｌｉ， ＹＥ Ｊｉａｎｒｅｎ∗， ＺＨＵ Ｌｉｈｕａ， ＷＵ Ｘｉａｏｑｉｎ， ＳＵＮ Ｔｉｎｇｙｕ
（Ｃｏｌｌａｂｏｒａｔｉｖｅ Ｉｎｎｏｖａｔｉｏｎ Ｃｅｎｔｅｒ ｏｆ Ｓｕｓｔａｉｎａｂｌｅ Ｆｏｒｅｓｔｒｙ ｉｎ Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｃｈｉｎａ， Ｊｉａｎｇｓｕ Ｐｒｏｖｉｎｃｅ Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｆｏｒ
Ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ ａｎｄ Ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ ｏｆ Ｉｎｖａｓｉｖｅ Ｓｐｅｃｉｅ， Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｆｏｒｅｓｔｒｙ， Ｎａｎｊｉｎｇ Ｆｏｒｅｓｔｒｙ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｎａｎｊｉｎｇ ２１００３７，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｔｏ ｉｎｃｒｅａｓｅ ｔｈｅ ｒｏｏｔｉｎｇ ｒａｔｅ ａｎｄ ｉｍｐｒｏｖｅ ｔｈｅ ｑｕａｌｉｔｙ ｏｆ ａｄｖｅｎｔｉｔｉｏｕｓ ｒｏｏｔ ｓｙｓｔｅｍ， ｍｙｃｏｒｒｈｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｎｅｍａｔｏｄｅ⁃
ｃｕｌｔｕｒｅｄ ｐｌａｎｔｌｅｔｓ ｏｆ ｎｅｍａｔｏｄｅ⁃ｒｅｓｉｓｔａｎｔ Ｐｉｎｕｓ ｄｅｎｓｉｆｌｏｒａ ｗａｓ ｓｔｕｄｉｅｓ． Ｔｈｒｅｅ ｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄｓ ｗｅｒｅ ｃｏｍｐａｒｅｄ． Ｔｈｅ ｒｅ⁃
ｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅｒｅ ｗａｓ ｎｏ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｅｆｆｅｃｔ ｏｎ ｒｏｏｔｉｎｇ ｒａｔｅ ａｆｔｅｒ ｉｎｏｃｕｌａｔｉｎｇ ｅｃｔｏｍｙｃｏｒｒｈｉｚａｌ ｆｕｎｇｉ ｗｉｔｈ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｍｅｔｈ⁃
ｏｄｓ ａｔ ｔｈｅ ｒｏｏｔ ｅｌｏｎｇａｔｉｏｎ ｓｔａｇｅ， ｂｕｔ ｔｈｅ ｓｕｒｖｉｖａｌ ｒａｔｅ ｗａｓ ａｆｆｅｃｔｅｄ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ． Ｔｏ ｓｏｍｅ ｅｘｔｅｎｔ， ｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｍｙｃｏｒｒｈｉ⁃
ｚａｌ ｆｕｎｇｉ ｃｏｕｌｄ ｉｍｐｒｏｖｅ ｔｈｅ ｓｕｒｖｉｖａｌ ｏｆ ｔｉｓｓｕｅ⁃ｃｕｌｔｕｒｅｄ ｐｌａｎｔｌｅｔｓ． Ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ ｈａｓ ｂｅｅｎ ｏｂｓｅｒｅｒｖｅｄ ａｔ ｔｈｅ ｄｅｇｒｅｅ
ｏｆ ｍｙｃｏｒｒｈｉｚａｔｉｏｎ ａｎｄ ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ ａｆｔｅｒ ｉｎｏｃｕｌａｔｉｎｇ ｗｉｔｈ Ｒｈｉｚｏｐｏｇｅｎ ｌｕｔｅｏｕｓ （Ｒｌ）， Ｐｉｓｏｌｉｔｈｕｓ ｔｉｎｃｔｏｒｉｕｓ
（Ｐｔ２） ａｎｄ Ｂｏｌｅｔｕｓ ｅｄｕｌｉｓ （Ｂｅ）． Ｐｔ２ ｗａｓ ｔｈｅ ｍｏｓｔ ｃｏｍｐａｔｉｂｌｅ ｅｃｔｏｍｙｃｏｒｒｈｉｚａｌ ｐａｒｔｎｅｒ ｆｏｒ Ｐ． ｄｅｎｓｉｆｌｏｒａ． Ｔｈｅ ｓｕｒｖｉｖａｌ ｒａｔｅ
ｏｆ ｐｌａｎｔｌｅｔｓ ｉｎｏｃｕｌａｔｅｄ ｗｉｔｈ Ｐｔ２ ｗａｓ ｈｉｇｈｅｒ ｔｈａｎ ｔｈｏｓｅ ｉｎｏｃｕｌａｔｅｄ ｗｉｔｈ Ｒｌ ａｎｄ Ｂｅ．
Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：Ｐｉｎｕｓ ｄｅｎｓｉｆｌｏｒａ； ｐｉｎｅ ｗｉｌｔ ｄｉｓｅａｓｅ； ｔｉｓｓｕｅ⁃ｃｕｌｔｕｒｅｄ ｐｌａｎｔｌｅｔ； ｔｒａｎｓｐｌａｎｔｉｎｇ； ｍｙｃｏｒｒｈｉｚａｌ ｆｕｎｇｉ
　 　 赤松（Ｐｉｎｕｓ ｄｅｎｓｉｆｌｏｒａ）具深根性，耐贫瘠土壤，
抗风力较强，是荒山造林的先锋树种。 松材线虫病
（ｐｉｎｅ ｗｉｌｔ ｄｉｓｅａｓｅ）对我国的松树资源造成了极大
的破坏，而赤松作为易感树种受到严重威胁。 日本
学者 ２０ 世纪 ７０ 年代开始赤松的抗松材线虫病选
育工作，目前已取得成效［１］。 但由于抗病赤松种
子产量有限，优良遗传材料不能在短时间内大量应
用于生产，而利用组织培养方法是快速大量繁殖优
良抗病赤松的最佳途径。
在前期研究中，南京林业大学森林病理课题组
已经通过器官发生途径初步建立了较稳定的抗松
材线虫病赤松无性快繁体系［１］。 由于抗病赤松不
同家系及无性系间生根能力差异较大，为了提高根
系的质量，进而提高移栽成活率，此次研究通过在
根伸长阶段添加一些外生菌根真菌，期望能提高组
培苗的根系质量，从而提高再生植株移栽成活率，
进一步为赤松工厂化育苗提供技术支持。
１　 材料与方法
１．１　 供试组培苗和菌株
所用材料来源于南京林业大学森林病理实验
室经器官发生途径培养得到的赤松无菌组培苗，选
南 京 林 业 大 学 学 报 （ 自 然 科 学 版 ） 第 ３９卷
取 １＃Ａ、１＃ Ｂ、３ ＃１、６＃３、７＃７、７＃５、７＃１３、７＃２１、８＃３、
２３＃ ６、２３＃８ 号共 １１ 个生根情况不同的无性系组
培苗。
选取南京林业大学森林病理实验室保存的美味
牛肝菌（Ｂｏｌｅｔｕｓ ｅｄｕｌｉｓ， Ｂｅ）、黄色须腹菌（Ｒｈｉｚｏｐｏｇｅｎ
ｌｕｔｅｏｕｓ， Ｒｌ）和彩色豆马勃（Ｐｉｓｏｌｉｔｈｕｓ ｔｉｎｃｔｏｒｉｕｓ，Ｐｔ２）
３种优良外生菌根真菌为供试菌株。
１．２　 ３种使用 Ｒｌ菌根真菌的处理方法
选取生根良好的无性系，诱导出根原基后，在
组培苗根伸长阶段，采用 ３ 种不同的方法接入 Ｒｌ
菌根真菌，从而筛选出合适的菌根真菌接种方法。
１．２．１　 根伸长培养基中添加菌根真菌发酵液
发酵液的制备：将活化后的 Ｒｌ 菌根真菌接到
平板上，２周后，用打孔器从平板菌落边缘打孔，用
挑针挑 ５个菌块放入盛有 ５０ ｍＬ 液体 ＰＤ 的三角
瓶中，在摇床上振荡培养 ２５ ～ ３０ ｄ，备用。 将诱导
出根原基的 １＃Ａ、７＃１３ 无性系组培苗，接种到１ ／ ２
ＷＰＭ＋珍珠岩＋０、０􀆰 ２、０􀆰 ４、０􀆰 ６、０􀆰 ８ ｍｇ ／ Ｌ发酵液
（将摇培的 Ｒｌ发酵液在无菌条件下匀碎） 的根伸
长培养基中进行培养。 以不添加发酵液做对照，每
处理接种 １０株，重复 ３ 次。 ２ 个月后统计生根率，
驯化移栽 ４０ ｄ后统计成活率。
１．２．２　 根伸长培养基中接入菌根真菌菌块
将诱导出根原基的 １＃Ａ 无性系组培苗接种到
１ ／ ２ＷＰＭ＋珍珠岩＋不同个数（０、１、２、３、４）Ｒｌ 菌块
的根伸长培养基中进行培养。 以不接入菌根真菌
菌块为对照，每处理接种 １０ 株，重复 ３ 次。 ２ 个月
后统计生根率，驯化移栽 ４０ ｄ后统计成活率。
１．２．３　 用菌根真菌发酵液浸根
将诱导出根原基的 ７＃５、７＃７、８＃３、６＃３ 号 ４ 个
生根能力有差异的无性系组培苗接种到 １ ／ ２ ＷＰＭ
＋珍珠岩的根伸长培养基中进行培养。 移栽前，将
准备移栽的组培苗的根在 Ｒｌ发酵液中浸泡 ５ ｍｉｎ，
对照用 ０􀆰 １％的多菌灵浸根，然后移栽。 每无性系
１０～１２株，重复 ２次。 ４０ ｄ后统计各无性系组培苗
的成活率。
１．３　 不同菌根真菌的接种
根据上述筛选结果，选取在根伸长培养基中接
入菌根真菌菌块的方法比较 Ｒｌ、Ｂｅ、Ｐｔ２ 等 ３ 种不
同外生菌根真菌的菌根化效果。 每瓶苗接种 ２ 个
外生菌根真菌菌块，以不接种任何菌根真菌做对
照。 驯化移栽 ３０ ｄ 后，统计组培苗的成活率，从而
筛选出适合赤松瓶内菌根化的菌根真菌；６０ ｄ 后
统计各无性系菌根感染指数，并观察记录菌根的颜
色和形状。 菌根感染指数的计算方法：先将菌根进
行分级，０ 级为无感染根段，Ⅰ级为感染根段占
１０％以下，Ⅱ级为感染根段占 １１％ ～ ３０％，Ⅲ级为
感染根段占 ３１％ ～ ５０％，Ⅳ级为感染根段占 ５０％
以上。
菌根感染指数 ＝ ∑（菌根感染指数×感染株
数）×１００ ／ （感染最高级×总株数）。
１．４　 数据处理
以上实验中，生根率＝（生根芽数 ／接种芽数）×
１００％；成活率＝（成活株数 ／移栽株数）×１００％。 数
据采用 Ｅｘｃｅｌ和 ＳＰＳＳ软件进行统计及方差分析。
２　 结果与分析
２．１　 Ｒｌ 菌根真菌不同处理方式对组培苗生根及
移栽成活率的影响
２．１．１　 根伸长培养基中添加 Ｒｌ发酵液的效果
　 　 在根伸长阶段添加不同浓度的 Ｒｌ发酵液对赤
松组培苗的生根率影响并不显著，添加 ５种不同浓
度发酵液后平均生根率约为 ９０％，不同浓度处理
间没有显著差异。 驯化移栽 ４０ ｄ 后的结果表明，
当添加发酵液质量浓度为 ０􀆰 ２ ｍｇ ／ Ｌ 时，抗病赤松
各无性系的成活率较高（表 １），均达到 ７０％，其他
几个浓度处理下的成活率较低，平均为 ６３％。 因
此，在组培苗的根伸长阶段添加 ０􀆰 ２ ｍｇ ／ Ｌ 菌根真
菌发酵液是比较合适，可以一定程度上提高抗病赤
松组培苗的移栽成活率。
表 １　 添加不同浓度黄色须腹菌发酵液对抗病赤松组培苗生根率及成活率的影响
Ｔａｂｌｅ １　 Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｒｈｉｚｏｐｏｇｅｎ ｌｕｔｅｏｕｓ ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｂｒｏｔｈｓ ｏｎ ｒｏｏｔｉｎｇ ｒａｔｅ ａｎｄ ｔｈｅ ｓｕｒｖｉｖａｌ ｒａｔｅ
ｏｆ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔｅｄ ｔｉｓｓｕｅ ｃｕｌｔｕｒｅ ｐｌａｎｔｌｅｔｓ ｏｆ ｄｉｓｅａｓｅ⁃ｒｅｓｉｓｔａｎｔ Ｐｉｎｕｓ ｄｅｎｓｉｆｌｏｒａ ％
质量浓度 ／ （ｍｇ·Ｌ－１）
ｍａｓｓ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ
生根率 ｒｏｏｔｉｎｇ ｒａｔｅ 成活率 ｓｕｒｖｉｖａｌ ｒａｔｅ
１＃Ａ ７＃１３ １＃Ａ ７＃１３
０ ９３．３±４．７１ａ ８６．７±４．７１ａ ６４．１±６．１６ａｂ ６１．６±４．５７ａｂ
０．２ ９０．０±８．１６ａ ９３．３±４．７１ａ ７０．６±３．４１ａ ６７．８±１．５６ａ
０．４ ９６．７±４．７１ａ ９０．０±８．１６ａ ５８．５±２．０７ｂ ５９．４±２．８５ｂ
０．６ ８６．７±４．７１ａ ８３．３±４．７１ａ ６５．３±１．９８ａｂ ６３．９±１．９７ａｂ
０．８ ８３．３±４．７１ａ ８６．７±４．７１ａ ６８．０±５．１９ａｂ ６１．６±４．５７ａｂ
　 　 注：同一列数据不同字母表示在 Ｐ＜０．０５水平下差异显著，应用 Ｄｕｎｃａｎ法检验不同处理的差异程度。
８２
　 第 １期 王张丽，等：抗松材线虫病赤松组培苗菌根化研究
２．１．２　 移栽前用 Ｒｌ发酵液浸根的效果
　 　 移栽前用 Ｒｌ发酵液浸根处理可提高抗病赤松组
培苗的移栽成活率，且不同无性系间差异显著（图 １）。
图 １　 Ｒｌ发酵液浸根对抗病赤松组培苗移栽成活
率的影响
Ｆｉｇ．１　 Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｓｏａｋｉｎｇ ｗｉｔｈ Ｒ． ｌｕｔｅｏｕｓ ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ
ｂｒｏｔｈｓ ｂｅｆｏｒｅ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔｉｎｇ ｏｎ ｔｈｅ ｓｕｒｖｉｖａｌ
ｒａｔｅ ｏｆ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔｅｄ ｔｉｓｓｕｅ⁃ｃｕｌｔｕｒｅｄ ｐｌａｎｔｌｅｔｓ
ｏｆ ｎｅｍａｔｏｄｅ⁃ｒｅｓｉｓｔａｎｔ ｐｉｎｅ
　 　 注：不同小写字母表示 Ｐ＜０􀆰 ０５下差异显著。 下同。
经发酵液浸根处理后，抗病赤松各无性系组培苗的
移栽成活率平均达到 ７０．６％；而对照中，各无性系
移栽后的平均成活率仅 ４２．４％。 可以得出，组培苗
在移栽前用菌根真菌发酵液浸根处理能明显提高
移栽成活率。
２．１．３　 培养基中接入 Ｒｌ菌块的效果
　 　 在根伸长阶段添加不同个数 Ｒｌ菌块对赤松组
培苗的生根率影响并不显著，平均生根率约为
９４％（表 ２）。 驯化移栽 ４０ ｄ后的结果表明，当添加
２个菌块时，抗病赤松各无性系的成活率最高，达
到 ６５．６％；其他几个处理下的成活率较低，平均为
５４％。 因此，在组培苗的根伸长阶段添加 ２ 个真菌
菌块比较合适，可以在一定程度上提高抗病赤松组
培苗的移栽成活率。
表 ２　 添加不同个数 Ｒｌ菌块对抗病赤松组培苗（１＃Ａ）生根率及成活率的影响
Ｔａｂｌｅ ２　 Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ａｄｄｉｎｇ Ｒｌ ｉｎ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｄｉｓｃｓ ｏｎ ｒｏｏｔｉｎｇ ｒａｔｅ ａｎｄ ｔｈｅ ｓｕｒｖｉｖａｌ ｒａｔｅ ｏｆ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔｅｄ ｔｉｓｓｕｅ⁃ｃｕｌｔｕｒｅ
ｐｌａｎｔｌｅｔｓ ｏｆ ｎｅｍａｔｏｄｅ⁃ｒｅｓｉｓｔａｎｔ ｐｉｎｅ
菌块 ／个
Ｎｏ．ｏｆ ｉｎｏｃｕｌａｔｅｄ
ｍｙｃｅｌｉａ ｄｉｓｃｓ
生根数 ／株
ｐｌａｎｔｌｅｔｓ
ｗｉｔｈ ｒｏｏｔ
接种数 ／株
Ｎｏ． ｏｆ
ｉｎｏｃｕｌａｔｅｄ ｐａｎｔｌｅｔｓ
生根率 ／ ％
ｒｏｏｔｉｎｇ ｒａｔｅ
成活数 ／株
Ｎｏ． ｏｆ ｓｕｒｖｉｖａｌ
ｐａｎｔｌｅｔｓ
移栽数 ／株
Ｎｏ． ｏｆ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔｅｄ
ｐａｎｔｌｅｔｓ
成活率 ／ ％
ｓｕｒｖｉｖａｌ ｒａｔｅ
０ ２７ ３０ ９０．０±８．１６ａ １４ ２７ ５１．９±２．６４ｃ
１ ３０ ３０ １００．０±０．００ａ １６ ３０ ５３．３±４．７１ｂｃ
２ ２９ ３０ ９６．７±４．７１ａ １９ ２９ ６５．６±４．１６ａ
３ ２８ ３０ ９３．３±４．７１ａ １７ ２８ ６０．８±４．５６ａｂ
４ ２８ ３０ ９３．３±４．７１ａ １４ ２８ ５０．０±０ｃ
　 　 注：同一列数据不同字母表示差异显著（Ｐ＜０．０５），应用 Ｄｕｎｃａｎ法检验不同处理的差异程度。
２．２　 ３ 种菌根真菌对赤松组培苗移栽成活率的
影响
２．２．１　 Ｒｌ对赤松组培苗移栽成活率的影响
将诱导出根原基的 １＃Ｂ、２３＃６、２３＃８、３＃１ 号 ４
个无性系的组培苗接种到 １ ／ ２ＷＰＭ＋珍珠岩＋２ 个
Ｒｌ菌块的根伸长培养基中培养，５０ ｄ 后，在体式显
微镜下可观察到二叉分支状菌根形状（图 ２Ａ）。
驯化移栽后，抗病赤松 ４个无性系组培苗的移栽成
活率均有明显提高，平均提高 １５．４％，且 Ｒｌ 对不同
无性系的移栽成活率影响存在显著差异（图 ３Ａ）。
图 ２　 抗病赤松组培再生植株接种菌根真菌 ６０ ｄ后的根部形态
Ｆｉｇ．２　 Ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ ｏｆ ａｄｖｅｎｔｉｔｉｏｕｓ ｒｏｏｔｓ ｏｆ ｒｅｇｅｎｅｒａｔｅｄ ｐｌａｎｔｌｅｔｓ ｏｆ ｎｅｍａｔｏｄｅ⁃ｒｅｓｉｓｔａｎｔ
Ｐ． ｄｅｎｓｉｆｌｏｒａ ６０ ｄａｙｓ ａｆｔｅｒ ｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｅｃｔｏｍｙｃｏｒｒｈｉｚａｌ ｆｕｎｇｕｓ
　 　 注：Ａ．黄色须腹菌；Ｂ．彩色豆马勃；Ｃ．美味牛肝菌。 箭头示二叉分支状结构。
９２
南 京 林 业 大 学 学 报 （ 自 然 科 学 版 ） 第 ３９卷
图 ３　 Ｒｌ、Ｐｔ２和 Ｂｅ对赤松组培苗不同无性系移栽成活率的影响
Ｆｉｇ．３　 Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ Ｒ． ｌｕｔｅｏｕｓ， Ｐ． ｔｉｎｃｔｏｒｉｕｓ ａｎｄ Ｂ． ｅｄｕｌｉｓ ｏｎ ｔｈｅ ｓｕｒｖｉｖａｌ ｒａｔｅ ｏｆ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔｅｄ ｔｉｓｓｕｅ⁃ｃｕｌｔｕｒｅｄ
ｐｌａｎｔｌｅｔｓ ｏｆ ｎｅｍａｔｏｄｅ⁃ｒｅｓｉｓｔａｎｔ ｐｉｎｅ
２．２．２　 Ｐｔ２对赤松组培苗移栽成活率的影响
将诱导出根原基的 １＃Ｂ、２３＃６、７＃２１、３＃１、８＃３
号 ５个无性系的组培苗接种到 １ ／ ２ＷＰＭ＋珍珠岩＋
２个 Ｐｔ２菌块的根伸长培养基中进行培养，在根伸
长培养基中培养 ５０ ｄ 后，各无性系的组培苗菌根
化程度不同，有的无性系菌根化程度很高，肉眼即
可观察到很多二叉分支，菌根颜色呈黄褐色，菌根
健壮（图 ２Ｂ）。 而有的无性系菌根化程度较低，菌
根颜色呈浅黄色，且菌根细弱。 驯化移栽结果表
明：接种 Ｐｔ２对不同无性系的移栽成活率影响存在
显著差异，其中 １＃Ｂ、２３＃６ 号无性系的移栽成活率
有明显提高，平均提高 ２１％，７＃２１、３＃１、８＃３ 号无性
系的移栽成活率无明显提高，这说明抗病赤松不同
无性系对 Ｐｔ２的反应不同（图 ３Ｂ）。
２．２．３　 Ｂｅ对赤松组培苗移栽成活率的影响
选取 ４个无性系（２３＃ ６、１＃Ａ、８＃３、３＃１）的组培
苗，待诱导出根原基后接种到 １ ／ ２ＷＰＭ＋珍珠岩＋２
个 Ｂｅ 菌块的根伸长培养基中进行培养，５０ ｄ 后，
大部分生根组培苗针叶发黄，失水，生长不良，且菌
根化程度较低，形成的二叉菌根比较细弱，颜色发
黑（图 ２Ｃ）。 驯化移栽后，大部分组培苗死亡。 可
以得出，接种 Ｂｅ对各无性系组培苗的移栽成活率
有显著影响，各无性系的移栽成活率都明显下降
（图 ３Ｃ），其中 ８＃３无性系无 １株成活。
２．２．４　 ３种菌根真菌对同一无性系组培苗成活率
的影响
　 　 选取 ２３＃６、３＃１ 号 ２ 个无性系的组培苗，待诱
导出根原基后，分别接种到 １ ／ ２ＷＰＭ＋珍珠岩＋３ 种
菌根真菌（Ｒｌ、Ｐｔ２、Ｂｅ）的根伸长培养基中进行培
养。 结果表明，接种 ３ 种不同菌根真菌后，组培苗
的菌根感染指数差异较大，菌根颜色和状态也有差
异（表 ３）。 接种 Ｐｔ２ 后菌根感染指数最高，高达
８４􀆰 ５，且菌根健壮，颜色为黄褐色（图 ４Ａ）；接种 Ｒｌ
后菌根感染指数约为 １１，菌根较短小，呈黄色（图
４Ｂ）；接种 Ｂｅ后菌根感染指数约为 ４５，菌根细弱，
呈黑色（图 ４Ｃ），未接种菌根真菌的组培苗根毛发
达，侧根未见二叉状分支（图 ４Ｄ）。 驯化移栽后，
接种 Ｒｌ和 Ｐｔ２ 可以一定程度提高组培苗的移栽成
活率，而 Ｂｅ则降低其移栽成活率（图 ５）。 不同无
性系对同一种外生菌根的响应也不同，对于 ２３＃６
号无性系，接种 Ｐｔ２后的菌根感染指数及移栽成活
率均较高，因此，Ｐｔ２ 是较合适的菌根真菌；而对于
３＃１号无性系，接种 Ｐｔ２ 和 Ｂｅ 后菌根感染指数高，
移栽后，Ｒｌ和 Ｐｔ２对成活率无明显影响，Ｂｅ 显著降
低成活率。
表 ３　 接种不同菌根真菌后的菌根感染指数及菌根形态
Ｔａｂｌｅ ３　 Ｍｙｃｏｒｒｈｉｚａｌ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ｉｎｄｅｘ ａｎｄ ｍｙｃｏｒｒｈｉｚａ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ ａｆｔｅｒ ｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｅｃｔｏｍｙｃｏｒｒｈｉｚａｌ ｆｕｎｇｉ
无性系
ｃｏｄｅ ｏｆ ｃｌｏｎｅ
菌根真菌
ｍｙｃｏｒｒｈｉｚａｌ
ｆｕｎｇｉ
接种数 ／株
Ｎｏ． ｏｆ ｉｎｏｃｕｌａｔｅｄ
ｐｌａｎｔｌｅｔｓ
菌根感染指数 ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ｉｎｄｅｘ
Ⅰ Ⅱ Ⅲ 平均值 ｍｅａｎ ｖａｌｕｅ
菌根形态
ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ
ｏｆ ｍｙｃｏｒｒｈｉｚａ
２３＃６ Ｒｌ ３４ １３．６ １１．４ １２．５ １２．５±０．８９ｃ 黄色，短小
２３＃６ Ｐｔ２ ３７ ８３．３ ８７．５ ８２．７ ８４．５±２．６２ａ 褐色，健壮
２３＃６ Ｂｅ ２９ ４５．０ ４０．０ ４７．２ ４４．６±３．６８ｂ 黑色，细弱
３＃１ Ｒｌ ３５ ９．０ １１．４ １０．４ １０．２±１．２１ｂ 黄色，短小
３＃１ Ｐｔ２ ３２ ４５．５ ５０．０ ４０．１ ４５．２±４．９６ａ 褐色，健壮
３＃１ Ｂｅ ２８ ４７．２ ４４．４ ４２．５ ４４．７±２．３６ａ 黑色，细弱
　 　 注：同一列数据不同字母表示差异显著（Ｐ＜０．０５），应用 Ｄｕｎｃａｎ法检验不同处理的差异程度。
０３
　 第 １期 王张丽，等：抗松材线虫病赤松组培苗菌根化研究
图 ４　 接种不同菌根真菌 ６０ ｄ后形成的菌根
Ｆｉｇ．４　 Ｍｙｃｏｒｒｈｉｚａ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｏｎ ａｄｖｅｎｔｉｔｉｏｕｓ ｒｏｏｔｓ ｏｆ ｔｉｓｓｕｅ⁃ｃｕｌｔｕｒｅｄ ｐｌａｎｔｌｅｔｓ ｏｆ ｎｅｍａｔｏｄｅ⁃ｒｅｓｉｓｔａｎｔ Ｐ． ｄｅｎｓｉｆｌｏｒａ
６０ ｄａｙｓ ａｆｔｅｒ ｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｅｃｔｏｍｙｃｏｒｒｈｉｚａｌ ｆｕｎｇｉ
　 　 注：Ａ．彩色豆马勃（Ｐｔ２）；Ｂ．黄色须腹菌；Ｃ．美味牛肝菌， Ｄ．ＣＫ。 箭头示二叉分支状结构。
图 ５　 黄色须腹菌（Ｒｌ）、彩色豆马勃（Ｐｔ２）和美味牛
肝菌（Ｂｅ）对赤松组培苗同一无性系移栽成活
率的影响
Ｆｉｇ．５　 Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ Ｒｈ． ｌｕｔｅｏｕｓ， Ｐ． ｔｉｎｃｔｏｒｉｕｓ ａｎｄ Ｂ． ｅｄｕｌｉｓ ｏｎ
ｔｈｅ ｓｕｒｖｉｖａｌ ｒａｔｅ ｏｆ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔｅｄ ｔｉｓｓｕｅ⁃ｃｕｌｔｕｒｅｄ
ｐｌａｎｔｌｅｔｓ ｏｆ ｎｅｍａｔｏｄｅ⁃ｒｅｓｉｓｔａｎｔ ｐｉｎｅ
３　 讨　 论
自然界中，很多树种都能形成菌根，而组培繁
育过程是在无菌条件下进行的，由于缺乏菌根真菌
的帮助，组培苗移栽成活率较低。 为了解决该难
题，已有学者考虑将菌根生物技术引入组培繁育过
程中。 但有关外生菌根真菌在木本植物组培技术
中应用的报道较少。 Ｇａｙ［２］在离体条件下接种外
生菌根真菌促进了地中海松（Ｐｉｎｕｓ ｈａｌｅｐｅｎｓｉｓ） 下
胚轴切根苗的生根。 Ｎｏｒｍａｎｄ 等［３］研究了菌根真
菌 Ｈｅｂｅｌｏｍａ ｈｉｅｍａｌｅ不同菌株对欧洲赤松和海岸松
组培苗离体生根和驯化的影响，结果表明，接种的
所有菌株均促进了生根。 成小飞等［４］、郑来友
等［５］、Ｚｈｕ等［６］亦曾报道彩色豆马勃与马尾松组培
苗在无菌条件下形成了菌根。
接种方式对菌根形成有较大的影响。 无菌条
件下的接种，通常是采用培养于琼脂培养基上的菌
丝块［３，７］，也可以采用悬浮培养的菌丝或事先将菌
块接种在珍珠岩基质中［６］或泥炭土和珍珠岩混合
基质中［８］。 笔者通过在根伸长阶段使用不同方式
添加不同浓度的菌根真菌，筛选出适合的菌根真菌
接入方式和接种浓度，在此基础上，分别接种 ３ 种
不同的菌根真菌。 结果显示，所选用的 ３种不同接
种方式均对组培苗的生根率无显著影响，但对移栽
成活率有显著影响。 在抗病赤松组培苗根伸长阶
段接种 ２个菌块的方法较为合适。
优良共生真菌的筛选是组培苗菌根化的基础。
Ｒｅｄｄｙ 等［７］ 对细叶桉组培苗分别接种 Ａｍａｎｉｔａ
ｍｕｒｉｎａ、Ｈｙｓｔｅｒａｎｇｉｕｍ ｉｎｃａｒｃｅｒａｔｕｍ、Ｌａｃｃａｒｉａ ｌａｃｃａｔａ、
Ｐｉｓｏｌｉｔｈｕｓ ｔｉｎｃｔｏｒｉｕｓ、Ｓｃｌｅｒｏｄｅｒｍａ ｃｅｐａ 和 Ｓ． ｆｌａｖｉｄｕｍ
共 ６ 种菌根真菌，结果显示，Ｓｃｌｅｒｏｄｅｒｍａ 属的 ２ 个
种和 Ｈ． ｉｎｃａｒｃｅｒａｔｕｍ 不能与细叶桉形成菌根。 他
们在另一项研究中发现，在所接种的 ５种外生菌根
真菌中，仅 Ｐａｘｉｌｌｕｓ ｉｎｏｖｌｕｔｕｓ 能与 Ｐｏｐｕｌｕｓ ｄｅｌｔｏｉｄｅｓ
组培苗形成菌根真菌［９］。 该试验中，在根伸长阶
段分别接种了 Ｒｌ、Ｐｔ２、Ｂｅ３种菌根真菌后的结果显
示，３种菌根真菌均能与组培苗形成菌根，但菌根
化程度及菌根的形态表现出一定差异。 接种 Ｐｔ２
后的菌根化程度最高，且菌根呈膨大的二叉分支
状，颜色为黄褐色，菌根很健壮；接种 Ｂｅ 后，菌根
化程度较高，菌根多呈二叉分支状，无明显膨大，较
细弱，颜色为黑色；接种 Ｒｌ后，菌根化程度很低，肉
眼几乎观察不到，在体式显微镜下可观察到菌根的
形态，菌根呈膨大的二叉分支状，形态短小，颜色为
黄色。
菌根菌接种促进了组培苗的生长、改善了再生
植株对移栽环境的适应性［６，１０］。 Ｏｌｉｖｅｉｒａ 等［１０］的
研究结果亦表明，与菌根真菌共培养促进了意大利
石松组培苗不定根的持续生长，改善了根系质量。
此外，亦有报道菌根菌接种明显改善了巨尾
桉［１１－１２］、细叶桉［７］、美洲黑杨［８］、金叶连翘［１３］组培
苗的生长。 接种 Ｒｌ、Ｐｔ２ 的组培苗成活率较高，而
接种 Ｂｅ 的组培苗大量死亡，原因可能是 Ｂｅ 的菌
丝非常紧实，接种后缠绕在不定根附近，使得根部
通气情况不良，影响组培苗根的有氧呼吸，从而使
１３
南 京 林 业 大 学 学 报 （ 自 然 科 学 版 ） 第 ３９卷
得营养吸收困难，致使组培苗发黄，营养不良，驯化
移栽后，大量死亡。 综合比较可以得出，Ｐｔ２ 与赤
松组培苗形成的菌根状态是最好的，且移栽成活率
较高，是适合赤松的菌根化菌株。 综上，筛选适合
的优良共生菌根真菌对组培苗进行接种可能是克
服组培技术应用于林木树种所遇到生根及移栽困
难等问题的有效手段。
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ｚａｌ ｆｕｎｇｉ ｏｎ ｇｒｏｗｔｈ ｏｆ ｍｉｃｒｏｐｒｏｐａｇａｔｅｄ Ｆｏｒｓｙｔｈｉａ ｋｏｒｅａｎｎａ
‘ＳａｕｏｎＧｏｌｄ’ ｓｈｏｏｔ ［ Ｊ］ ． Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｅｉｊｉｎｇ Ｆｏｒｅｓｔｒｙ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，
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（责任编辑　 刘昌来）
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