全 文 ：园艺学报，2015，42 (8)：1542–1550.
Acta Horticulturae Sinica
1542 doi：10.16420/j.issn.0513-353x.2015-0034；http：//www. ahs. ac. cn
收稿日期：2015–03–24；修回日期：2015–07–31
基金项目：浙江省自然科学基金项目（Y3110453）；浙江省竹木农业新品种选育重大科技专项（2012C12908-8）
* 通信作者 Author for correspondence（E-mail：zjulep@hotmail.com）
光皮桦 LFY 同源基因的克隆及表达分析
牛明月 1，周厚君 1，周世水 2，李玉岭 1，黄华宏 1，童再康 1，林二培 1,*
（1 浙江农林大学亚热带森林培育国家重点实验室培育基地，浙江临安 311300；2 浙江省开化县林场，浙江衢州
324300）
摘 要：以珍贵用材树种光皮桦（Betula luminifera）为材料，采用同源克隆与 RACE 的方法，克隆
获得 LFY 同源基因，命名为 BlLFY（GenBank 号：KP970616）。BlLFY 基因 cDNA 全长 1 305 bp，开放阅
读框（ORF）长 1 212 bp，编码 403 个氨基酸。基因结构分析显示，BlLFY 基因具有 2 个内含子和 3 个外
显子，与其它植物同源基因具有一致的基因结构。多序列比对和系统进化分析表明，BlLFY 基因编码蛋白
具有典型的 N-domain 和 C-domain，与板栗（Castanea mollissima）及核桃（Juglans regia）等木本植物的
LFY 具有最高的同源性和进化关系。进一步的表达模式分析结果表明，BlLFY 基因在光皮桦植株进入成年
期时表达水平最高，在开花植株的营养器官和生殖器官中均有表达，且贯穿雌、雄花序发育的整个过程，
但在雌花序中的表达明显高于雄花序，说明 BlLFY 基因可能与花期转换和花器官的发育有关，但在雌、
雄花序发育过程中的调控作用可能不同。
关键词：光皮桦；LFY；开花；表达分析
中图分类号：S 68 文献标志码：A 文章编号：0513-353X（2015）08-1542-09

Cloning and Expression Analysis of a LFY Gene from Betula luminifera
NIU Ming-yue1，ZHOU Hou-jun1，ZHOU Shi-shui2，LI Yu-ling1，HUANG Hua-hong1，TONG Zai-kang1，
and LIN Er-pei1,*
（1Zhejiang Agriculture and Forestry University，Nurturing Station for State Key Laboratory of Subtropical Silviculture，
Lin’an，Zhejiang 311300，China；2Kaihua Forest Farm of Zhejiang，Quzhou，Zhejiang 324300，China）
Abstract：In this study，through homology cloning and RACE strategy，a LFY homologue，named
BlLFY，was isolated from a precious timber tree Betula luminifera. The full length cDNA of BlLFY was
1 305 bp with a 1 212 bp open reading frame，which encoded 403 amino acids. And，the analysis of gene
structure revealed that there were two introns and three exons in genomic sequence of BlLFY，indicating
same gene structure between BlLFY and LFY homologues from other plants. Multiple sequence alignment
showed typical conserved N-domain and C-domain in BlLFY protein. The phylogenetic analysis showed
the highest identity and close evolution relation of BlLFY to those LFY proteins from trees，such as
Castanea mollissima and Juglans regia. Furthermore，expression analysis showed that the transcript of
BlLFY was accumulated when plants transited to reproductive phase. Meanwhile，BlLFY gene was both
detected in vegetative and reproductive organs of flowering plants，and consecutively expressed in all

牛明月，周厚君，周世水，李玉岭，黄华宏，童再康，林二培.
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developmental stages of male and female inflorescence. However，interestingly，the expression of BlLFY
was much higher in female inflorescence than male inflorescence. These results suggested that BlLFY gene
may play important roles in floral transition and development of floral organs，and may be involved in the
different process of female and male inflorescences.
Key words：Betula luminifera；LFY；flowering；expression analysis

在植物从营养生长向生殖生长转化过程中，开花受到复杂的基因调控（Srikanth & Schmid，
2011）。LEAFY（LFY）是这个过程的主要调控因子。LFY 不仅决定花分生组织的分化，同时也激活
下游花器官特征基因，如 APETALA1（AP1）、FRUITFULL（FUL）、SEPALLATA3（SEP3）、APETALA3
（AP3）、PISTILLATA（PI）和 AGAMOUS（AG）等，被视为花形成的最早标记基因之一（Irish，2010；
Moyroud et al.，2010；Winter et al.，2011；Engelhorn et al.，2014）。在拟南芥中，LFY 基因的功能
缺失会导致茎样结构取代花序，而 LFY 基因的过量表达则会导致提早开花，以及茎转变成花（Weigel
et al.，1992；Weigel & Nilsson，1995）。同样地，在玉米（Zea mays）、水稻（Oryza sativa）、番茄（Solanum
lycopersicum）、豌豆（Pisum sativum）中，LFY 同源基因对于花序分生组织转变为花分生组织以及
花器官的发育都是不可或缺的（Hofer et al.，1997；Molinero-Rosales et al.，1999；Bomblies et al.，
2003；Dong et al.，2005；Wang et al.，2008；Ikeda-Kawakatsu et al.，2012）。已有研究者从杨树（Populus
trichocarpa）、法国梧桐（Platanus acerifolia）、日本冷杉（Cryptomeria japonica）等林木中分离获得
了 LFY 同源基因，并对其功能进行了研究（Rottmann et al.，2000；Shiokawa et al.，2008；Moyroud
et al.，2010；Lu et al.，2012）。但 LFY 同源基因在林木生殖生长中的确切功能和调控机制仍不明确，
有待进一步深入研究。
光皮桦（Betula luminifera H. Wink.）为桦木科（Betulaceae）桦木属（Betula）落叶乔木，广泛
分布于中国南方，是一种用途广泛的珍贵阔叶用材树种（郑万钧，1985），材质优良，观赏与经济价
值高，多数种质童期较短（约 18 个月），在成花时间上具有丰富变异，是林木遗传研究的优良材料。
近年来光皮桦的遗传育种工作也逐渐受到重视，通过成花调控提高种子生产效率质量，以及培育少
开花或不开花的用材品种成为其育种工作的重要内容。因此，挖掘光皮桦开花相关关键基因，阐明
其调控的分子机制对于光皮桦的种子生产和优良品种培育具有重要意义。本研究中以光皮桦为材料，
克隆了开花关键基因 LFY，通过分析其序列特征和基因结构，研究其在不同年龄植株，以及不同器
官和不同发育时期花序中的表达特性，初步明确了其与光皮桦成花的相关性。这些结果为 LFY 基因
在光皮桦中的功能、调控机制和种内成花性状变异研究，及其在光皮桦生产和育种中的利用提供了
重要基础。
1 材料与方法
1.1 植物材料
以种植于浙江农林大学林木种质资源圃的光皮桦已开花无性系植株（7 年生）及同一无性系不
同年龄的自交实生苗为试材。其中，从 2014 年 3 月初至 4 月中旬，取无性系植株的芽、雌花序、雄
花序、叶、茎尖、苞片、茎及其组培苗的根，提取总 RNA，作为基因克隆和组织特异性表达分析的
模板。按雌花序和雄花序的发育阶段，按时间顺序分 6 个时间点（1 ~ 6）取样，用于不同发育阶段
花器官中的基因表达模式分析。根据 Wang 等（2011）的方法，按自交实生苗的年龄，分别取种子，
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7、21、90、120 和 548 d 幼苗及 7 年生植株的叶片，用于检测基因在不同年龄植株中的表达。其中
清水 25 ℃浸泡 2 d 的种子、7 d 苗全株分别混合后提取 RNA；其余不同年龄的植株材料均为顶端下
数第 2 片完全展开的叶片，至少从 5 棵不同植株采样，混合提取 RNA。
1.2 总 RNA 提取、cDNA 合成及基因组 DNA 提取
植物材料经液氮研磨后，利用 PureLinkTM Plant RNA Reagent（Invitrogen，上海）试剂提取总
RNA，cDNA 合成采用 SMARTTM RACE cDNA Amplification Kit（Clontech，北京），按照说明书进
行反转录过程。
基因组 DNA 的提取按改良的 CTAB 法（谢一青 等，2006）进行。
1.3 基因克隆
根据 LFY 同源基因高度保守序列设计简并引物 LFY1 和 LFY2，以光皮桦的 cDNA 为模板进行
PCR 扩增，获得的基因中间片段进行克隆测序验证。根据基因的中间片段序列设计 5′端特异引物
LFY-GSP1 和 3′端特异引物 LFY-GSP2，结合通用引物 UPM（SMARTTM RACE cDNA Amplification
Kit，Clontech，北京）进行 5′-RACE 和 3′-RACE，将 RACE 获得的序列进行拼接，在 5′和 3′非编码
区位置，设计特异引物 LFY-F 和 LFY-R，采用 Hifi-taq（TransGen Biotech，北京）进行 PCR 扩增基
因全长序列。同时根据全长序列，在基因两端设计引物 L-G-F 和 L-G-R 克隆基因的基因组序列。所
有 PCR 产物均进行测序（南京金斯瑞公司）。克隆涉及引物列于表 1。

表 1 用于基因克隆和表达分析的引物
Table 1 Primers used for cloning and expression analysis
引物名称
Primer name
序列（5′–3′）
Sequence
退火温度/℃
Annealing temperature
PCR 产物长度/bp
The length of PCR product
LFY1 GTGACRAAYCARGTGTTTAG 55.7 ~ 300
LFY2 CGTGACAAAGYTGACGAAG 52.0
LFY-GSP1 TCAATGTCCCACCCTTGGCGTGCTG 76.0 ~ 1 200
LFY-GSP2 CAAGCCGAAAATGCGACACTACGTGC 72.8 ~ 1 000
LFY-F GCTGTTGGACATGAAGGAAGAG 61.2 ~ 1 300
LFY-R TGCTCTCTCGACCTACGTTACG 61.8
L-Q-F ACACTGCTGCCTCAGGTGACT 62.4 109
L-Q-R AATGAATGCTCTCTCGACCTACG 62.0
L-G-F TGGACGACATGATGAACAGCCTCT 67.4 ~ 3 000
L-G-R CTCAGCGTGACAAAGTTGACGAAGT 66.0
Actin-Q-F GCCAACAGAGAAAAGATGACTC 56.6 ~ 130
Actin-Q-R TCACCAGAATCCAGCACAATAC 58.5

1.4 序列分析
采用 Vector NTI 11.0（Invitrogen，USA）进行序列拼接和多序列比对，通过 Nucleic Tools（http：//
srs. ebi. ac. uk/srsbin/cgi-bin/wgetz-page + applSelect）分析推测基因编码蛋白的氨基酸组成。利用蛋
白质保守结构域推测工具 InterProScan（http：//ebi. ac. uk/Tools. /InterProScan/）分析其结构域。利用
ProtParam tool（http：//www. expasy. org/ tools/ protparam. html）分析编码蛋白的理化性质。采用
DNAMAN 7.0（Lynnon Corporation，Canada）预测蛋白的二级结构。采用 MEGA 4.0 软件（Tamura
et al.，2007）进行系统进化分析。分析涉及序列均来自数据库 NCBI。
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1.5 实时定量 PCR
以光皮桦 Actin 基因（GenBank 号：FJ410442）为内参，采用相对定量的方法，对 BlLFY 基因
的组织表达特性及其在不同器官发育过程中的表达规律进行分析。按照 SYBR Premix Ex Taq Ⅱ
（TaKaRa，大连）试剂盒说明书进行操作，扩增反应程序为 95 ℃ 3 min；95 ℃ 5 s，60 ℃ 20 s，
72 ℃ 20 s，40 个循环。内参基因 Actin 的引物为 Actin-Q-F 和 Actin-Q-R，BlLFY 的引物为 L-Q-F
和 L-Q-R（表 1）。3 次重复。
2 结果与分析
2.1 光皮桦 LFY 同源基因 cDNA 和基因组全长的克隆与分析
以光皮桦的 cDNA 为模板，利用简并引物 LFY1 和 LFY2，进行 PCR 扩增，得到一条约 300 bp
的特异条带，经测序和 BLAST 比对证明是 LFY 的同源基因片段（图 1）。根据所得的中间片段设计
特异引物 LFY-GSP1 和 LFY-GSP2，进行 5′-RACE 和 3′-RACE，分别得到约 1 200 bp 和 1 000 bp 的
条带（图 1）。对这两个片段同样进行克隆测序，将测序得到的这两段序列与保守区序列进行拼接，
设计特异引物 LFY-F 和 LFY-R 进行 PCR 扩增全长序列，结果得到一条约 1 300 bp 的特异条带（图
1）。经克隆测序和序列分析，结果表明该 cDNA 序列为 LFY 同源基因，全长共 1 305 bp，命名为 BlLFY
（Betula luminifera LFY gene），GenBank 登录号为 KP970616。根据 cDNA 序列设计特异引物（L-G-F
和 L-G-R），以基因组 DNA 为模板克隆 BlLFY 基因的基因组序列，得到约 3 000 bp 的片段（图 1）。










图 1 BlLFY 基因克隆 PCR 产物电泳
1：保守的中间片段；2：3′-RACE 产物；3：5′-RACE 产物；4：BlLFY cDNA 全长；5：BlLFY 基因组序列全长；M：DNA marker。
Fig. 1 Electrophoresis of PCR products for cloning of BlLFY
1：The conserved fragment；2：Products of 3′-RACE；3：Products of 5′-RACE；4：Full length cDNA；5：Genomic fragment；
M：DNA marker.


测序结果表明 BlLFY 编码区基因组序列长 3 115 bp，包含 3 个外显子和 2 个内含子（图 2）。与
拟南芥、杨树等物种 LFY 同源基因的基因结构相比，BlLFY 基因外显子、内含子数与同源基因相同，
外显子长度差异不大，但在第 2 个内含子的长度上有较大差异（图 2）。
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图 2 BlLFY 与其它物种同源基因基因组结构比较
Fig. 2 Gene structures of BlLFY and other LFY homologues

2.2 BlLFY 序列特征与系统进化分析
序列分析显示 BlLFY 的 cDNA 序列含有 1 个长 1 212 bp 的开放阅读框，编码由 403 个氨基酸组
成的蛋白，其理论 pI 7.0，分子量为 45 213.7 Da。将 BlLFY 编码的氨基酸序列与其它植物 LFY 蛋白
进行多序列比对，结果显示，BlLFY 与其同源蛋白类似，包含两个保守的结构域 N-domain 和
C-domain，与板栗 CmLFY 及核桃 JrLFY 的同源性均高达 88%，与山核桃 CcLFY 具有 87%的相似
性，而与垂柳 SdLFY、毛果杨 PTLF 及毛白杨 PtLFY 等的同源性均为 80%（图 3）。


















图 3 BlLFY 与其它 LFY 同源基因编码氨基酸序列比对
Fig. 3 Alignment of deduced amino acids of BlLFY and other LFY homologues
BlLFY：光皮桦 Betula luminifera（KP970616）；CmLFY：板栗 Castanea mollissima（ABB83126）；CcLFY：山核桃 Carya cathayensis（ABI58284）；
JrLFY：核桃 Juglans regia（ADL61865）；FLO：金鱼草 Antirrhinum majus（AAA62574）；LEAFY：拟南芥
Arabidopsis thaliana（AAA32826）；SdLFY：银柳 Salix discolor（AAO73539）；PtLFY：毛白杨
Populus tomentosa（AAO53547）；PTLF：毛果杨 Populus trichocarpa（AAB51533）。
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进一步通过 DNAMAN 7.0 对 BlLFY 蛋白的二级结构进行预测，结果发现，该蛋白二级构象中，
螺旋结构（Helix）、线状结构（Strand）、卷曲结构（Coil）交替出现，以卷曲结构最多，占 53.5%；
其次是螺旋结构，占 31.4%；线状结构最少，占 15.1%（图 4）。


图 4 光皮桦LFY蛋白二级结构预测
Fig. 4 Prediction of secondary structure for BlLFY protein

进一步利用 MEGA4 软件的邻接法（Neighbor-Joining，NJ），对 BlLFY 及水稻、拟南芥、毛果
杨等植物的 LFY 同源蛋白进行系统进化分析，构建光皮桦和拟南芥等植物的 LFY 蛋白的系统进化
树。系统进化树显示，光皮桦 LFY 蛋白与核桃、山核桃及苹果等林木的 LFY 亲缘较近聚为一类，
而与禾本科的水稻、玉米 LFY 及裸子植物辐射松 LFY 亲缘较远（图 5）。













图 5 光皮桦 LFY 与相关 LFY 同源蛋白的系统进化分析
Fig. 5 Phylogenetic analysis of the LFY proteins from Betula luminifera and related plants
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图 6 BlLFY 基因在不同年龄植株叶片中的表达分析
Fig. 6 Expression analysis of BlLFY in leaves with different ages
图 7 BlLFY 基因在不同器官中的表达分析
Fig. 7 Expression analysis of BlLFY in different organs
2.3 BlLFY 表达模式分析
基因的表达分析是非模式林木植物基因功能研究的有效手段之一。多数林木要经历较长的童期
才能进入生殖生长阶段，也就是发生开花这一过程。因此，首先对 BlLFY 在不同年龄植株中的表达
进行了分析，研究 BlLFY 与光皮桦童期到生殖生长的转变是否相关。其中 7 d 苗取全株；其余不同
年龄的植株材料均为顶端下数第 2 片完全展开的叶片。检测结果表明，在开花前，BlLFY 基因在不
同年龄植株间的表达没有明显差异；但在植株成熟进入生殖生长阶段后，即苗龄达 18 个月（图 6，
548 d），BlLFY 基因的表达明显上调，其表达量达到峰值，在 7 年生植株中表达量也比较高。这表
明 BlLFY 基因与光皮桦从童期到生殖生长的转变有一定的相关性。
本研究中进一步对 BlLFY 基因在已开花植株（7 年生）的组织表达特性及其在不同发育阶段的
雄花序、雌花序中的表达规律进行了分析。组织表达特性分析结果显示，BlLFY 在芽中表达量最高，
在雌花序中的表达量也相对较高，而在根中几乎检测不到（图 7）。









芽最终会发育成花序或叶片，说明 BlLFY 基因可能与光皮桦花序或叶片早期的发育有关。不同
发育阶段雌雄花序的表达分析显示，BlLFY 在雌花序中的表达水平整体上比雄花序高，且在雌花序
中随着发育过程呈递减趋势；而在雄花序发育的中期表达量最高（图 8）。这些结果暗示 BlLFY 基因
可能调控了光皮桦雌雄花序发育的不同阶段。









图 8 BlLFY 基因在不同发育阶段（1 ~ 6）花序中的表达分析
Fig. 8 Expression analysis of BlLFY in inflorescence from different development stages（1–6）
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3 讨论
LFY 基因及其直系同源物在开花植物中广泛存在，很多植物中的该同源基因都在花序分生组织
转变为花分生组织和成花诱导过程中发挥主导作用（Weigel et al.，1992；Frohlich & Parker，2000；
Gocal et al.，2001；Moyroud et al.，2010）。本研究中获得的光皮桦 BlLFY 基因全长 cDNA 序列，编
码由 403 个氨基酸组成的蛋白，在氨基酸结构上包含有 2 个高度保守的区域（N–端和 C–端），具
有其它同源基因编码蛋白的典型特征（Maizel et al.，2005），表明它是 LFY 基因的直系同源基因。
前人研究认为 LFY 同源基因结构上相对保守，都含有 3 个外显子和 2 个内含子，BlLFY 也具有类似
的基因结构，说明 LFY 及其同源基因在进化上的保守性（Maizel et al.，2005）；但 BlLFY 基因第 2
个内含子的长度明显比其同源基因要长，对其功能是否有影响，需要进一步研究。系统进化分析也
表明，光皮桦 BlLFY 蛋白与核桃、山核桃及苹果等木本植物的 LFY 具有较近的亲缘，说明在进化
上林木 LFY 同源基因与草本植物的 LFY 同源基因可能存在功能上的分化。这些序列分析结果表明，
BlLFY 在核酸和蛋白水平上都与其它该类同源基因类似，很可能在光皮桦的成花过程中发挥重要作
用。
LFY 基因在不同植物之间的表达模式差异较大。如拟南芥中，LFY 大量表达于幼嫩的花序分生
组织，在花发育完成后的营养器官中也有大量表达（Weigel et al.，1992）；而水稻中，LFY 基因在幼
穗中大量表达，但在成熟的叶片中却没 LFY 的表达（Kyozuka et al.，1998）。在林木中，毛果杨 PTLF
不仅在发育的花序中强烈表达，而且在叶原基、幼叶、幼小实生苗中也有表达（Rottmann et al.，2000）。
安新民等（2010）在毛白杨中发现 PtLFY 在雌雄花芽发育过程中持续稳定表达，而且在雄花芽中的
表达水平远高于同期的雌花芽。在其它木本植物中，LFY 同源基因的表达也不总是在生殖发育过程
中表达，在桉树和葡萄的叶原基中也有表达（Southerton et al.，1998；Carmona et al.，2002）。本研
究中发现 BlLFY 基因的表达在 18 个月植株中明显上调，且高于完全成熟的 7 年生植株，由于光皮
桦植株在 18 月时即可形成花序进入生殖生长阶段，这说明 BlLFY 基因可能参与了光皮桦从童期向
生殖生长阶段转变的过程。同时，BlLFY 基因在光皮桦中除根外，在营养组织和生殖器官中均有表
达，在有可能发育成花序或叶片的芽中表达水平最高，且在雌雄花序的整个过程均能检测到表达，
但与杨树不同的是，BlLFY 在雌花序中的表达水平比其在雄花序中相对的表达水平要高，说明 BlLFY
基因在雌花序和雄花序的发育中可能起不同的作用，但其与童期向生殖生长转变过程间的确切关系
需要进一步研究。以上结果为研究 LFY 同源基因在光皮桦成花和花器官发育中的功能提供了重要基
础。

References
An Xin-min，Wang Dong-mei，Wang Ze-liang，Wang Jing-cheng，Cao Guan-lin，Bo Wen-hao，Zhang Zhi-yi. 2010. Expression profile of PtLFY
in floral bud development associated with floral bud morphological differentiation in Populus tomentosa. Scientia Silvae Sinicae，46 (2)：31–
38. (in Chinese)
安新民，王冬梅，王泽亮，王静澄，曹冠琳，薄文浩，张志毅. 2010. 毛白杨 PtLFY 在花芽发育中的表达模式与花芽形态分化. 林业科
学，46 (2)：31–38.
Bomblies K，Wang R L，Ambrose B A. 2003. Duplicate FLORICAULA/LEAFY homologs zfl1 and zfl2 control inflorescence architecture and flower
patterning in maize. Development，130：2385–2395.
Carmona M J，Cubas P，Martinez-Zapater J M. 2002. VFL，the grapevine FLORICAULA/LEAFY ortholog，is expressed in meristematic regions
independently of their fate. Plant Physiol，130：68–77.
Niu Ming-yue，Zhou Hou-jun，Zhou Shi-shui，Li Yu-ling，Huang Hua-hong，Tong Zai-kang，Lin Er-pei.
Cloning and expression analysis of a LFY gene from Betula luminifera.
1550 Acta Horticulturae Sinica，2015，42 (8)：1542–1550.
Dong Z C，Zhao Z，Liu C W. 2005. Floral patterning in Lotus japonicus. Plant Physiol，137：1272–1282.
Engelhorn J，Moreau F，Fletcher J C. 2014. ULTRAPETALA1 and LEAFY pathways function independently in specifying identity and determinacy at
the Arabidopsis floral meristem. Ann Bot，114：1497–1505.
Frohlich M W，Parker D S. 2000. The mostly male theory of flower evolutionary origins：From genes to fossils. Syst Bot，25 (2)：155–170.
Gocal G F，King R W，Blundell C A. 2001. Evolution of floral meristem identity genes：Analysis of Lolium temulentum genes related to APETALA1
and LEAFY of Arabidopsis. Plant Physiol，125 (4)：1788–1801.
Hofer J，Turner L，Hellens R. 1997. UNIFOLIATA regulates leaf and flower morphogenesis in pea. Curr Biol，7：581–587.
Ikeda-Kawakatsu K，Maekawa M，Izawa T. 2012. ABERRANT PANICLE ORGANIZATION 2/RFL，the rice ortholog of Arabidopsis LEAFY，
suppresses the transition from inflorescence meristem to floral meristem through interaction with APO1. Plant J，69：168–180.
Irish V F. 2010. The flowering of Arabidopsis flower development. Plant J，61：1014–1028.
Kyozuka J，Konishi S，Nemoto K. 1998. Down-regulation of RFL，the FLO/LFY homolog of rice，accompanied with panicle branch initiation.
PNAS，95：1979–1982.
Lu S，Li Z，Zhang J，Yi S. 2012. Isolation and expression analysis of a LEAFY/FLORICAULA homolog and its promoter from London plane
（Platanus acerifolia Willd.）. Plant Cell Rep，31 (10)：1851–1865.
Maizel A，Busch M A，Tanahashi T. 2005. The floral regulator LEAFY evolves by substitutions in the DNA bliding domain. Science，308：260–
263.
Molinero-Rosales N，Jamilena M，Zurita S. 1999. FALSIFLORA，the tomato orthologue of FLORICAULA and LEAFY，controls flowering time and
floral meristem identity. Plant J，20：685–693.
Moyroud E，Kusters E，Monniaux M. 2010. LEAFY blossoms. Trends Plant Sci，6：346–352.
Rottmann W H，Meilan R，Sheppard L A. 2000. Diverse effects of overexpression of LEAFY and PTLF，a poplar（Populus）homolog of
LEAFY/FLORICAULA，in transgenic poplar and Arabidopsis. Plant J，22 (3)：235–245.
Shiokawa T，Yamada S，Futamura N，Osanai K，Murasugi D，Shinohara K，Kawai S，Morohoshi N，Katayama Y，Kajita S. 2008. Isolation and
functional analysis of the CjNdly gene，a homolog in Cryptomeria japonica of FLORICAULA/LEAFY genes. Tree Physiol，28 (1)：21–28.
Southerton S G，Strauss S H，Olive M R. 1998. Eucalyptus has a functional equivalent of the Arabidopsis floral meristem identity gene LEAFY. Plant
Mol Biol，37：897–910.
Srikanth A，Schmid M. 2011. Regulation of flowering time：All roads lead to Rome. Cell Mol Life Sci，68：2013–2037.
Tamura K，Dudley J，Nei M，Kumar S. 2007. MEGA4：Molecular evolutionary genetics analysis（MEGA）software version 4.0. Mol Biol Evol，
24：1596–1599.
Wang H，Chen J，Wen J. 2008. Control of compound leaf development by FLORICAULA/LEAFY ortholog SINGLE LEAFLET1 in Medicago
truncatula. Plant Physiol，146：1759–1772.
Wang J W，Park M Y，Wang L J，Koo Y，Chen X Y，Weigel D，Poethig R S. 2011. miRNA control of vegetative phase change in trees. PLoS Genet，
7：e1002012.
Weigel D，Alvarez J，Smyth D R. 1992. LEAFY controls floral meristem identity in Arabidopsis. Cell，69：843–859.
Weigel D，Nilsson O. 1995. A developmental switch sufficient for flower initiation in diverse plants. Nature，377：495–500.
Winter C M，Austin R S，Blanvillain-Baufume S. 2011. LEAFY target genes reveal floral regulaory logic，cismotifs and a link to biotic stimulus
response. Dev Cell，20：430–443.
Xie Yi-qing，Li Zhi-zhen，Huang Ru-zhu，Xiao Xiang-xi，Wang Zhi-hao. 2006. Comparison of different genomic DNA isolation methods in Betula
luminifera. Journal of Zhejiang Forestry College，23 (6)：664–668. (in Chinese)
谢一青，李志真，黄儒珠，肖祥希，王志浩. 2006. 光皮桦基因组 DNA 提取方法比较. 浙江林学院学报，23 (6)：664–668.
Zheng Wan-jun. 1985. The Sylva of China. Vol 2. Beijing：China Forestry Publishing House：2124–2131. (in Chinese)
郑万钧. 1985. 中国树木志. 第 2 卷. 北京：中国林业出版社：2124–2131.