全 文 ：园艺学报，2015，42 (10)：2015–2022.
Acta Horticulturae Sinica
doi：10.16420/j.issn.0513-353x.2015-0167；http：//www. ahs. ac. cn 2015
矮生观赏杉木DNA甲基化的水平与模式分析
刘琼瑶，黄华宏，冯惠平，楼雄珍*，童再康
（浙江农林大学林业与生物技术学院，亚热带森林培育国家重点实验室培育基地，浙江临安 311300）
摘 要：为探讨杉木矮化变异与 DNA 甲基化的关系，以矮生观赏杉木与野生杉木为试验材料，采用
基于 DNA 甲基化敏感扩增多态性分析（Methylation-sensitive amplification polymorphism，MSAP）方法，
研究其 DNA 序列 CCGG 位点的甲基化水平及模式变化特征。应用 20 个引物组合，在矮生观赏杉木和野
生杉木的叶片 DNA 中均检测出 745 个 CCGG 位点，其中甲基化位点数分别为 508 个和 505 个，分别占总
扩增位点数的 68.17%和 67.83%；在矮生观赏杉木与野生杉木木质部 DNA 中分别检测到 742 个和 737 个
CCGG 位点，其中甲基化位点数分别为 471 个与 498 个，分别占总扩增位点数的 63.52%和 67.51%，差异
达极显著水平（P < 0.01）。与野生型相比，矮生观赏杉木叶片和木质部 DNA 甲基化模式发生了一定变化，
在叶片 DNA 中，去甲基化率为 17.81%，明显高于超甲基化率 15.44%；在木质部 DNA 中，去甲基化率
17.25%，也明显高于超甲基化率 14.65%。通过甲基化序列的初步克隆及比对分析发现，矮生观赏杉木中
参与 MAPK 级联途径的蛋白磷酸酶 IBR5 基因启动子区域的甲基化水平上升。因此推测，植物激素信号
转导及其调控基因的甲基化变化可能是矮生观赏杉木形成的原因之一。
关键词：杉木；矮生变异；DNA 甲基化；甲基化敏感扩增多态性分析
中图分类号：S 68 文献标志码：A 文章编号：0513-353X（2015）10-2015-08

Analysis of DNA Methylation Levels and Patterns in Dwarf Ornamental
Cunninghamia lanceolata
LIU Qiong-yao，HUANG Hua-hong，FENG Hui-ping，LOU Xiong-zhen*，and TONG Zai-kang
（College of Forestry and Biotechnology，Zhejiang Agriculture and Forestry University，Nurturing Station for State Key
Laboratory of Subtropical Silviculture，Lin’an，Zhejiang 311300，China）
Abstract：In this study，methylation sensitive amplification polymorphism（MSAP）analysis was
performed in dwarf ornamental Cunninghamia lanceolata（dwarf-type）and wild-type，to characterize the
DNA methylation levels and patterns of CCGG sites in leaves and xylem. A total of 745 CCGG loci were
both amplified in leaf of dwarf-type and wild-type using 20 primer combinations. And among them，508
（68.17%）and 505（67.83%）loci were methylated respectively. While the primer combinations totally
amplified 742 and 737 CCGG loci，respectively in the xylem of dwarf-type and wild-type. A 63.52% of
loci were methylated in the xylem of dwarf-type，which was significantly less than that of wild-type
（67.51%）. It was found that the DNA methylation patterns changed in dwarf-type compared with
wild-type. The hypermethylation rate was higher than hypermethylation rate both in leaves and xylem.

收稿日期：2015–05–26；修回日期：2015–09–23
基金项目：国家‘863’计划项目（2011AA100203）；国家自然科学基金项目（31300565）；浙江省农业科技重点项目（2012C12908-11）；
浙江农林大学亚热带森林资源培育中心项目（CCSFR2013002）
* 通信作者 Author for correspondence（E-mail：xzlou@zafu.edu.cn）
Liu Qiong-yao，Huang Hua-hong，Feng Hui-ping，Lou Xiong-zhen，Tong Zai-kang.
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Subsequent cloning and analysis of methylation DNA sequences showed that methylation level of IBR5
promoter sequence increased in dwarf-type. IBR5 is a phosphatase that modulates phytohormone signal
transduction. Therefore，it was inferable that methylation of genes involved in phytohormone signal
transduction could be a cause of dwarf-type formation.
Key words：Cunninghamia lanceolata；Chinese fir；dwarf variation；DNA methylation；
methylation-sensitive amplification polymorphism（MSAP）

杉木[Cunninghamia lanceolata（Lamb.）Hook]是中国特有的速生用材树种，分布于秦岭、淮河
以南广大中亚热带地区。矮生观赏杉木是自然存在的变异种质，发现于 20 世纪 70 年代，其无明显
顶端优势，且生长相对缓慢。其叶片柔软不刺手，株形紧凑呈圆球形，与北美园林中被广泛应用的
灌木型蓝云杉（Picea pungens‘Glauca Globosa’）相似，故观赏价值颇高，可作为园林植物栽培。
为探讨该杉木变异形成的原因，近年一些学者对其茎叶解剖结构、光合特性以及蛋白质组等进行了
研究（黄华宏 等，2006，2009；陈奋学 等，2008）。矮生观赏杉木的管胞平均横截面积显著小于野
生杉木，即管胞直径相对偏小，可能不利于水分吸收，以致生长缓慢，植株矮小（陈奋学 等，2008）。
另一方面，矮生观赏杉木的光能利用能力明显不如野生杉木，且叶片的净光合速率、气孔导度及蒸
腾速率等光合参数皆低于野生杉木（黄华宏 等，2009）。
DNA 甲基化是一种主要的表观遗传（Epigenetic）修饰形式，是调节基因组功能的重要方式（Wu
& Morris，2001）。该修饰方式并不改变核苷酸序列，而是通过 DNA 甲基化转移酶的作用使 CpG 二
核苷酸 5′端的胞嘧啶转变为 5–甲基胞嘧啶，具有可遗传性，也可以通过去甲基化酶等作用发生去
甲基化逆转。但是 DNA 甲基化一般比较稳定，一旦形成将可以延续若干个世代（侯雷平和李梅兰，
2001；陈小强 等，2007）。植物 DNA 甲基化的表观遗传作用是近年植物分子生物学研究领域的热
点。Miura 等（2009）研究发现 DNA 甲基化程度降低可以导致具亚稳态矮化表型的水稻向正常表型
转变。李际红等（2014）以萌动期与展叶期的叶籽银杏和银杏为试材，探究了 DNA 序列中 CCGG
位点的甲基化水平及模式变化特征，发现叶籽银杏叶生胚珠的形成与 DNA 甲基化的表观遗传修饰
有关。在植物组培过程中发生的表型变异也常与 DNA 的甲基化变化有关，如组织培养诱发的红掌
花色变异（李丽 等，2014）。由此可见，DNA 甲基化参与调控植物许多性状的发育，导致新变异类
型的产生。为此，矮生观赏杉木特殊表型的形成是否与 DNA 甲基化相关，值得深入探讨。
鉴于矮生观赏杉木与野生杉木木质部管胞大小和叶片光合能力存在显著差异，本试验中采用
MSAP 技术分析矮生观赏杉木和野生杉木叶片和木质部 DNA 甲基化水平与模式，以期探明基因组
DNA 甲基化变化与杉木矮生变异的关系，为该种质的繁育和应用提供科学依据。
1 材料与方法
1.1 试验材料
矮生观赏杉木（Dwarf-type，图 1，A）与野生杉木（Wild-type，图 1，B）无性系种植于浙江农
林大学实验苗圃（119°72′ E，30°23′ N）。该苗圃处于亚热带季风气候区，四季分明，年平均气温 15.2
℃，年降水量 1 457.3 mm，年无霜期 235 d。2013 年 8 月，分别选取两种杉木无性系的 5 年生植株
各 3 株，采集当年生叶，并从当年生茎段取正在发育的木质部，于–80 ℃低温保存备用。
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图 1 矮生观赏杉木（A）和野生杉木（B）
Fig. 1 Dwarf-type（A）and wild-type（B）of Cunninghamia lanceolata

1.2 DNA提取
杉木叶片和木质部 DNA 的提取采用 CTAB 法，具体步骤参照黄发新和河村嘉一郎（2000）的
报道。提取得到的 DNA 沉淀溶于已加入 RNase A（10 mg · mL-1）的 TE 溶液，37 ℃温浴 0.5 h 以纯
化 DNA。DNA 质量和浓度采用 1%琼脂糖凝胶电泳和分光光度法进行检测。符合实验要求的 DNA
置于–20 ℃冰箱保存备用。
1.3 MSAP分析
MSAP 分析的具体操作参照 Xu 等（2000）的报道。此外，增加 EcoRⅠ单酶切组作为对照，以
排除 EcoRⅠ单酶切产生的假阳性条带。所有接头、预扩增引物及选择扩增引物序列见表 1。选择扩
增后的产物于 95 ℃变性 3 min，取其中 5 μL 并加入 3 μL 的上样缓冲液后于 6%的聚丙烯酰胺凝胶进
行垂直电板电泳。75 W 电泳 130 min 后银染观察。读取每块玻璃板上的条带，将清晰可见的条带记
为 1，否则记为 0。

表 1 MSAP 分析所用的接头和引物序列
Table 1 Sequence of adapters and primers used for MSAP
EcoRⅠ Hpa /Ⅱ MspⅠ 名称 Name
编号 No. 序列 Sequence 编号 No. 序列 Sequence
E1 CTCGTAGACTGCGTACC HM1 GACGATGAGTCTAGAA 接头 Adaptor
E2 AATTGGTACGCAGTCTAC HM2 CGTTCTAGACTCATC
预扩增引物
Preselective primer
E3 GACTGCGTACCAATTCA HM3 GATGAGTCTAGAACGGT
选择性扩增引物 EP1 GACTGCGTACCAATTCAAC HMP1 GATGAGTCTAGAACGGTAT
Selective primer EP2 GACTGCGTACCAATTCAAG HMP2 GATGAGTCTAGAACGGTAG
combination EP5 GACTGCGTACCAATTCACC HMP8 GATGAGTCTAGAACGGTCT
EP8 GACTGCGTACCAATTCAGG HMP9 GATGAGTCTAGAACGGTCG
EP9 GACTGCGTACCAATTCAAA

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参照钱晓伟等（2014）的方法对甲基化变异类型和甲基化变异模式进行分类。甲基化变异分为
4 种类型。Ⅰ型：EcoRⅠ+ HpaⅡ酶切无条带，EcoRⅠ+ MspⅠ酶切有条带，表示 CCGG 位点双链
内侧胞嘧啶甲基化；Ⅱ型：EcoRⅠ+ HpaⅡ酶切有条带，EcoRⅠ+ MspⅠ酶切无条带，即 CCGG 位
点外侧或内外侧胞嘧啶同时半甲基化；Ⅲ型：两种酶切皆无条带，表示 CCGG 位点外侧或内外侧
胞嘧啶同时甲基化；Ⅳ型：两种酶切中都有条带，表示该 CCGG 位点为非甲基化位点或内侧胞嘧啶
半甲基化，但一般在统计中将这种类型当作无甲基化。矮生观赏杉木与野生杉木相比，其甲基化的
变异模式可分为 A、B、C 和 D，4 个大类，15 个亚类，其中 A 类型包括 3 个亚类，B 与 C 类型分
别包括 5 个亚类，D 类型包括 2 个亚类，相应电泳条带变化模式见表 3。所有统计数据采用 SPSS16.0
统计分析软件进行分析。
1.4 MSAP多态性片段的克隆与序列分析
切下聚丙烯酰胺凝胶上的部分差异片段，利用水浴法回收 DNA 片段，具体操作步骤参照章蕾
等（2011）的报道。回收的 DNA 经 PCR 扩增电泳后用凝胶回收试剂盒（AxyPrep 公司）进行回收。
连接 T 载体并转化大肠杆菌，经蓝白斑互补筛选和菌液 PCR 验证后，挑选阳性克隆送华大基因科技
股份有限公司测序。获得的 DNA 片段序列信息利用 NCBI 平台（National Center for Biotechnology
Information）进行 BLAST（Basic Local Alignment Search Tool）序列比对和分析。
2 结果与分析
2.1 矮生观赏杉木DNA甲基化水平分析
应用 20 个引物组合对杉木叶片和木质部 DNA 进行选择性扩增，经 PAGE 后对条带进行统计分
析。统计结果表明，排除因 EcoRⅠ单酶切造成的 583 个假阳性条带，含 CCGG 位点的条带共有 2 969
个。4 种甲基化类型皆有被检测到，图 2 所示为相应的电泳条带。













图 2 杉木基因组 DNA 甲基化位点的 MSAP 扩增图谱
A：选择性扩增引物组合为 EP1-HMP1；B：选择性扩增引物组合为 EP9-HMP8。
Fig. 2 MSAP fingerprints of Cunninghamia lanceolata genomic DNA
A：Amplification by primer combination EP1-HMP1；B：Amplification by primer combination EP9-HMP8.
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在矮生观赏杉木和野生杉木叶片 DNA 检测出的 CCGG 位点均为 745 个，其中甲基化位点数分
别占总扩增位点数的 68.17%（508 个）和 67.83%（505 个），两者差异不显著（表 2）；而木质部 DNA
中分别检测到 742 和 737 个 CCGG 位点，分别占总扩增位点数的 63.52%（471 个）和 67.51%（498
个），且两者差异达极显著水平（P < 0.01，表 2）。值得注意的是，在矮生观赏杉木木质部 DNA 中，
甲基化类型Ⅰ的水平显著低于野生杉木（P < 0.01，表 2）。

表 2 矮生观赏杉木与野生杉木叶片和木质部 DNA 甲基化水平
Table 2 Methylation levels of the leaves and xylem DNA in the dwarf-type and wild-type
酶切条带
Enzyme digestion
叶片 Leaf 木质部 Xylem 类型
Type EcoRⅠ+
HpaⅡ
EcoRⅠ+
MspⅠ
甲基化模式
Methylation pattern 野生杉木
Wild-type
矮生观赏杉木
Dwarf-type
野生杉木
Wild-type
矮生观赏杉木
Dwarf-type
CCmG G I 0 1
GG CmC
256（34.41%） 246（33.03%） 262（35.61%） 232（33.31%）**
CmCGG CmCmGG II 1 0
G GCC
or
G G CC
122（16.38%） 148（19.87%） 121（16.38%） 134（18.01%）
CmCmGG CCGG III 0 0
G G CC
or
GGCCm
127（17.05%） 114（15.26%） 114（15.52%） 105（14.20%）
CCGG CCmGG IV 1 1
GGCC
or
GG CC
240（32.17%） 237（31.83%） 239（32.49%） 271（36.48%）
I + II + III 505（67.83%） 508（68.17%） 498（67.51%） 471（63.52%）**
I + II + III + IV 745（100.00%） 745（100.00%） 737（100%） 742（100%）
注：1：有条带；0：无条带。**表示矮生观赏杉木与野生型相比，甲基化水平差异达到 P 为 0.01 时的水平。下同。
Note：1：Band present；0：Band absent. ** indicates that methylation level differences between dwarf-type and wild-type reach the level of P = 0. 01.
The same below.
2.2 矮生观赏杉木DNA甲基化模式的变化分析
由表 3 可知，矮生观赏杉木叶片和木质部 DNA 中 A 型位点分别占相应总扩增位点的 65.65%和

表 3 矮生观赏杉木与野生杉木甲基化模式的变化
Table 3 Variation of DNA methylation patterns between the dwarf-type and wild-type
野生杉木 Wild-type 矮生观赏杉木 Dwarf-type 带型
Banding pattern EcoRⅠ+ HpaⅡ EcoRⅠ+ MspⅠ EcoRⅠ+ HpaⅡ EcoRⅠ+ MspⅠ
叶片位点数
Leaf DNA site
木质部位点数
Xylem DNA site
A1 1 1 1 1 186 194
A2 1 0 1 0 82 82
A3 0 1 0 1 193 186
甲基化模式相同
Same methylation
A 461（65.65%） 462（66.84%）
B1 1 0 1 1 5 9
B2 0 1 1 1 36 45
B3 0 0 1 1 18 10
B4 0 0 0 1 15 10
B5 0 0 1 0 50 45
甲基化水平下降
Methylation level
decreased
B 125（17.81%） 119（17.25%）
C1 1 1 1 0 13 10
C2 1 1 0 1 33 24
C3 1 1 0 0 8 10
C4 1 0 0 0 31 29
C5 0 1 0 0 23 28
甲基化水平上升
Methylation level
increased
C 108（15.44%） 101（14.65%）
甲基化模式转变 D1 0 1 1 0 4 5
Methylation pattern D2 1 0 0 1 4 4
changed D 8（1.09%） 9（1.25%）

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66.84%，该类位点表示对比野生型，矮生观赏杉木 DNA 甲基化模式未发生改变，属于单态型位点。
B 型表示与野生型相比，矮生观赏型的甲基化程度下降，即发生了去甲基化。矮生观赏杉木叶片 DNA
发生去甲基化的位点在相应总扩增位点中占 17.81%，而木质部 DNA 中的去甲基化位点占相应总扩
增位点的 17.25%。C 型与 B 型相反，代表相应位点发生了超甲基化，超甲基化位点在矮生观赏杉木
叶片和木质部 DNA 总扩增位点中分别占 15.44%和 14.65%。D 型表现为 DNA 甲基化模式的转变，
无法评价其甲基化水平的差异，发生该模式变化的位点很少，矮生观赏杉木叶片和木质部 DNA 中
属该类型的位点分别为 1.09%和 1.25%。另外，经不同类型间的比较分析发现，除 A 型位点数显著
大于其他类型以外，B 型位点数也显著高于 C 型的相应数值，即矮生观赏杉木叶片和木质部 DNA
中发生去甲基化的位点均明显多于发生超甲基化的位点。
2.3 MSAP差异片段的BLAST结果
选取 MASP 分析得到的 43 个差异条带进行测序，结果显示序列长度在 100 ~ 308 bp 之间变化。
利用 BLAST 软件比对到 NCBI 数据库，5 条分别匹配到相似性较高的序列，其中 4 条获得了具体的
功能基因注释信息（表 4）。
表 4 甲基化序列比对结果
Table 4 Results of BLASTn for part of methylated sequences
序列编号
Number
基因注释
Gene description
甲基化变化模式
Methylation pattern
E值
E-value
GenBank登录号
Accession number
1-10 葡萄类枯草杆菌蛋白酶，转录本 X6，mRNA 序列
Vitis vinifera subtilisin-like protease，transcript variant
X6，mRNA
C2 5.00E-53 XM_002269750
2-25 莲类蛋白酪氨酸磷酸酶 IBR5，mRNA 序列
Nelumbo nucifera protein-tyrosine-phosphatase
IBR5-like，mRNA
C3 1.00E-133 XM_010254308
3-2 北美云杉 F-box 类似蛋白 VD400，mRNA 序列，部分编码区
Picea sitchensis isolate VD400 F-box-like protein
mRNA，partial cds
B4 3.00E-116 HM199487
4-3 苹果类 slowmo 同源蛋白 2，mRNA 序列
Malus × domestica protein slowmo homolog 2-like，mRNA
B4 1.00E-87 XM_008356780
4-12 未知 Unknown B4 3.00E-31 XM_002269750

序列 1-10 的甲基化模式为矮生观赏杉木木质部 DNA 甲基化水平升高（表 4，C2），注释为葡萄
类枯草杆菌蛋白酶；序列 2-25 来自矮生观赏杉木叶片 DNA，其甲基化水平升高（表 4，C3），且与
蛋白酪氨酸磷酸酶 IBR5 基因高度同源。其余 3 条序列的甲基化模式为矮生观赏杉木甲基化水平降
低（表 4，B4）。
3 讨论
过去的一些研究发现，DNA 甲基化水平的下降会导致某些植物出现矮生相关的表型。Finnegan
等（1996，1998）发现拟南芥 DNA 甲基化水平降低会引起植株矮化、叶片形态改变、开花时间改
变等。用去甲基剂 5–胞苷处理甘蓝幼苗和水稻种子，或通过反义 RNA 技术抑制烟草 S–腺苷–L–
高半胱氨酸水解酶（SAHH）基因的表达，均会使处理植株或转化植株 DNA 甲基化水平降低，表现
出矮化、丛状等异常性状（King，1995；Tanaka et al.，1997）。本研究中发现，虽然两种类型杉木
叶片 DNA 的甲基化水平差异不显著，但矮生观赏杉木木质部 DNA 甲基化水平（63.52%）显著低于
野生型（67.51%）。因此，推测这种甲基化程度的降低与杉木矮生变异类型的产生具有一定联系。
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另外，无论是叶片 DNA 还是木质部 DNA，矮生观赏型与野生杉木之间甲基化模式存在广泛的变异，
且多态性变异的比例明显高于单态性变异。这与李际红等（2014）发现叶籽银杏与银杏间甲基化模
式存在丰富变异的研究结果一致。DNA 甲基化的状态对染色体结构、转座子活性以及基因的表达调
控等至关重要，植物体固有甲基化状态的改变可以造成某些基因功能的丧失或发生亚功能化，并产
生稳定遗传的新表型（Rapp & Wendel，2005）。矮生观赏杉木叶片和木质部 DNA 中去甲基化位点
百分率分别为 17.81%和 17.25%，均显著大于相应超甲基化位点百分率（15.44%和 14.65%）。一般
认为，植物基因中的启动子和编码区的过度甲基化能阻碍转录因子复合体与 DNA 的结合，以致抑
制基因的表达；而去甲基化则有利于基因的表达（Lukens & Zhan，2007）。可见，杉木 DNA 中 CCGG
位点的甲基化或去甲基化，可能引起了某些结构基因失活或者被重新激活，导致矮生观赏杉木的形
成。经进一步的差异条带克隆测序和比对，发现序列2-25注释为参与促分裂原活化蛋白激酶（MAPK）
级联途径的蛋白磷酸酶 IBR5（Indole-3-Butyric Acid Response 5），是该酶基因启动子区域的部分序
列。IBR5 是 1 个具双重特异性的蛋白磷酸酶，参与调控植物激素的信号转导，且在生长素、脱落酸
两种信号转导途径间起连接作用（Monreo-Augustus et al.，2003；Lee et al.，2009；Jayaweera et al.，
2014）。生长素具有促进细胞伸长、促进木质部细胞分化、诱导生根等作用；而脱落酸是一种抑制生
长的植物激素，对细胞的伸长具有抑制作用（Danquah et al.，2014）。拟南芥 IBR5 突变体表现为植
株矮小、维管分化异常、侧根少和主根长等特征（Monreo-Augustus et al.，2003；Strader et al.，2008）。
杉木 IBR5 基因启动子区域甲基化水平上升极可能会抑制该基因的表达，并导致出现植株矮小，无
明显顶端优势等表型。可见，矮生观赏杉木的形成与植物激素信号转导及其调控基因甲基化引起的
表达变化关系密切，但具体的作用机制有待深入研究。

References
Chen Fen-xue，Huang Hua-hong，Tong Zai-kang，Zhu Yu-qiu，He Fu-ji. 2008. Anatomical characteristics of dwarf Cunninghamia lanceolata. Journal
of Zhejiang Forestry College，25 (5)：619–623. (in Chinese)
陈奋学，黄华宏，童再康，朱玉球，何福基. 2008. 矮生杉木的解剖特性. 浙江林学院学报，25 (5)：619–623.
Chen Xiao-qiang，Wang Chun-guo，Li Xiu-lan，Song Wen-qin，Chen Rui-yang. 2007. DNA methylation in plants and its epigenetic function. Chinese
Journal of Cell Biology，29 (4)：519–524. (in Chinese)
陈小强，王春国，李秀兰，宋文芹，陈瑞阳. 2007. 植物 DNA 甲基化及其表观遗传作用. 细胞生物学杂志，29 (4)：519–524.
Danquah A，de Zelicourt A，Colcombet J，Hirt H. 2014. The role of ABA and MAPK signaling pathways in plant abiotic stress responses.
Biotechnology Advances，32 (1)：40–52.
Finnegan E J，Genger K，Kovac W，Peacock J，Dennis E S. 1998. DNA methylation and the promotion of flowering by vernalization. Proc Nail Acad
Sci USA，95：5824–5829.
Finnegan E J，Peacock W J，Dennis E S. 1996. Reduced DNA methylation in Arabidopsis thaliana results in abnormal plant development. Proc Natl
Acad Sci USA，93：8449–8454.
Hou Lei-ping，Li Mei-lan. 2001. DNA methylation and plant growth and development. Plant Physiology and Molecular Biology，37 (6)：584–588.
(in Chinese)
侯雷平，李梅兰. 2001. DNA 甲基化与植物的生长发育. 植物生理学通讯，37 (6)：584–588.
Huang Hua-hong，Chen Fen-xue，Tong Zai-kang，Zhu Yu-qiu. 2009. Photosynthetic properties and chlorophy florescence parameters of dwarf
Chinese fir. Journal of Beijing Forestry University，31 (2)：69–73. (in Chinese)
黄华宏，陈奋学，童再康，朱玉球. 2009. 矮生杉木光合特性及叶绿素荧光参数研究. 北京林业大学学报，31 (2)：69–73.
Huang Hua-hong，Tong Zai-kang，Zhu Yu-qiu，Gao Yan-hui，Xu Chang-shou，He Fu-ji. 2006. Proteome study of dwarf mutant in Cunninghamia
lanceolata by 2D-DIGE. Journal of Zhejiang Forestry College，23 (3)：265–269. (in Chinese)

Liu Qiong-yao，Huang Hua-hong，Feng Hui-ping，Lou Xiong-zhen，Tong Zai-kang.
Analysis of DNA methylation levels and patterns in dwarf ornamental Cunninghamia lanceolata.
2022 Acta Horticulturae Sinica，2015，42 (10)：2015–2022.
黄华宏，童再康，朱玉球，高燕会，许长寿，何福基. 2006. 矮化杉木蛋白质组的差异凝胶电泳分析. 浙江林学院学报，23 (3)：265–
269.
Huang Xin-fa，Kawamura Kaichiro. 2000. Study on the sampling time and the DNA extraction methods of Chinese fir. Hubei Forestry Science and
Technology，(suppl)：4–7. (in Chinese)
黄发新，河村嘉一郎. 2000. 杉木采样时间及 DNA 提取方法的研究. 湖北林业科技，(增刊)：4–7.
Jayaweera T，Siriwardana C，Dharmasiri S，Quint M，Gray W M，Dharmasiri N. 2014. Alternative splicing of Arabidopsis IBR5 pre-mRNA generates
two IBR5 isoforms with distinct and overlapping functions. PLoS ONE，9 (8)：e102301.
Miura K，Agetsumaa M，Kitanoa H，Yoshimurab A，Matsuokaa M， Jacobsenc S E，Ashikaria M. 2009. A metastable DWARF1 epigenetic mutant
affecting plant stature in rice. Proc Natl Acad Sci，106 (27)：11218–11223.
King G J. 1995. Morphological development in Brassica oleracea is modulated by in vivo treatment with 5-azacytidine. Hort Sci，70 (2)：33–342.
Lee J S，Wang S，Sritubtim S，Chen J G，Ellis B E. 2009. Arobidopsis mitogen-activated protein kinase MPKl2 interacts with the MAPK phosphatase
IBR5 and reguzates auxin signaling. The Plant Journal，57：975–985.
Li Ji-hong，Xing Shi-yan，Zhang Qian，Yao Pei-juan，Wang Cong-cong. 2014. The changes in DNA methylation levels and patterns of Ginkgo biloba
var. epiphylla. Acta Horticulturae Sinica，41 (8)：1535–1544. (in Chinese)
李际红，邢世岩，张 倩，姚培娟，王聪聪. 2014. 叶籽银杏 DNA 甲基化水平与模式变异的研究. 园艺学报，41 (8)：1535–1544.
Li Li，Xu Li，Zhang Zhi-ying. 2014. Analysis of DNA methylation of white-spathed mutant of Anthurium andraeanum. Molecular Plant Breeding，
12 (3)：485–491. (in Chinese)
李 丽，徐 立，李志英. 2014. 白色佛焰苞红掌突变系 DNA 甲基化分析. 分子植物育种，12 (3)：485–491.
Lukens L N，Zhan S H. 2007. The plant genome’s methylation status and response to stress，implications for plant improvement. Curr Opin Plant
Biol，10 (3)：317–322.
Monreo-Augustus M，Zolman B K，Bartel B. 2003. IBR5，a dual-specificity phosphatase-like protein modulating auxin and abscisic acid
responsiveness in Arabidopsis. The Plant Cell，15：2979–2991.
Qian Xiao-wei，Yuan You-lu，Rong Ping，Zhu Xin-yu，Liu Ya-tai，Jiang Peng，Liu Shang，Wang Bao-hua. 2014. Analysis of methylation-sensitive
amplified polymorphism in cotton genome under salt stress based on capillary electrophoresis. Chinese Journal of Biochemistry and Molecular
Biology，30 (3)：298–306. (in Chinese)
钱晓伟，袁有禄，荣 平，朱新宇，刘亚泰，江 鹏，刘 尚，汪保华. 2014. 盐胁迫下棉花基因组基于毛细管电泳的 MSAP 分析. 中
国生物化学与分子生物学报，30 (3)：298–306.
Rapp R A，Wendel J F. 2005. Epigenetics and plant evolution. New Phytol，168 (1)：81–91.
Strader L C，Monroe-Augustus M，Rogers K C，Grace L Lin，Bartel B. 2008. Arobidopsis iba response 5 suppressors separate responses to various
hormones. Genetics，180：2019–2031.
Tanaka H，Masuta C，Uataoka K，Kataoka J，Koiwai A，Noma M. 1997. Morphological changes and hypomethylation of DNA in transgenic tobacco
expressing antisense RNA of the S-adenosyl-l-homocysteine hydrolase gene. Plant Molecular Biology，135：981–986.
Wu C，Morris J R. 2001. Genes，genetics and epigenetics：A correspondence. Science，293：1103–1105.
Xu M L，Li X Q，Korban S S. 2000. AFLP-based detection of DNA methylation. Plant Mol Biol Rep，18：361–368.
Zhang Lei，Yuan Ling，Huang Jian-an，Wu Wen-liang，Chen Dong-sheng，Liu Zhong-hua. 2011. Comparative study on two methods of recycling
short DNA fragments from nondenaturing polyacrylamide gel. Chinese Agricultural Science Bulletin，27 (7)：227–230. (in Chinese)
章 蕾，袁 玲，黄建安，吴文亮，陈东生，刘仲华. 2011. 从非变性聚丙烯酰胺凝胶中回收 DNA 小片段的两种方法比较. 中国农学
通报，27 (7)：227–230.