全 文 ：园艺学报，2015，42 (7)：1347–1355.
Acta Horticulturae Sinica
doi：10.16420/j.issn.0513-353x.2015-0106；http：//www. ahs. ac. cn 1347
收稿日期：2015–03–24；修回日期：2015–05–26
基金项目：国家自然科学基金项目（31372100）；教育部新世纪优秀人才支持计划项目（NCET-12-0890）；江苏省“青蓝工程”和“双
创计划”项目
* 通信作者 Author for correspondence（E-mail：jiangjiafu@njau.edu.cn）
菊花开花抑制基因 CmFLC-like1 的克隆及表达
特性分析
展妍丽，王萃铂，亓钰莹，陈发棣，蒋甲福*
（南京农业大学园艺学院，南京 210095）
摘 要：为深入研究夏菊的春化机理，利用多聚酶链式反应（PCR）结合 5′ RACE、3′ RACE 技术克
隆夏菊品种‘优香’[Chrysanthemum morflorium（Ramat.）Kitam.‘Yuuka’]开花抑制基因 CmFLC-like1
的 cDNA 全长序列，获得其全长为 945 bp，开放阅读框（ORF）为 636 bp，编码 1 条 211 个氨基酸残基
的多肽，且具有典型的 MADS 结构域。同源性分析表明，CmFLC-like1 与葡萄（Vitis vinifera）VvFLC 和
龙眼（Dimocarpus longan）DlFLC 的同源性最高，分别为 55%和 52%。进化树聚类分析表明，CmFLC-like1
蛋白与拟南芥和核桃的 FLC 遗传距离最近。亚细胞定位表明，CmFLC-like1 基因定位在核上。在酵母体
系中发现 CmFLC-like1 没有转录激活活性，拟南芥原生质体转化发现具有转录抑制活性。菊花植株营养
生长期不同组织器官的 RT-PCR 表明 CmFLC-like1 在叶片中表达量最高，茎和茎尖中次之，根中最少。低
温（4 ℃）可抑制 CmFLC-like1 表达，且处理时间越长，抑制表达越明显。
关键词：菊花；春化作用；FLC；RT-PCR
中图分类号：S 682.1+1 文献标志码：A 文章编号：0513-353X（2015）07-1347-09

Cloning and Expression Analysis of Flowering Inhibitor CmFLC-like1 Gene
in Chrysanthemum
ZHAN Yan-li，WANG Cui-bo，QI Yu-ying，CHEN Fa-di，and JIANG Jia-fu*
（College of Horticulture，Nanjing Agricultural University，Nanjing 210095，China）
Abstract：The full-length cDNA sequence of Chrysanthemum morflorium（Ramat.）Kitam.‘Yuuka’
CmFLC-like1 gene was obtained using PCR and RACE. The cDNA was 945 bp in length with a 636 bp
open reading frame which encodes a peptide of 211 residues. CmFLC-like1 has a high homology to VvFLC
（Vitis vinifera）and DlFLC（Dimocarpus longan）contained a typical MADS domain，with the homology
of 55% and 52%，respectively. CmFLC-like1 was located in the nuclear genome by subcellular localization.
And it has no transcription activation activity in yeast system，while it show inhibitory activity in the
plastid transformation system. CmFLC-like1 has the highest expression levels in leaves，while the lowest
expression in stems and shoot tip，followed by root. The expression of CmFLC-like1 was inhibited by low
temperature，especially at 4 . Furthermore℃ ，the longer the cold treatment time，the more suppresser of

Zhan Yan-li，Wang Cui-bo，Qi Yu-ying，Chen Fa-di，Jiang Jia-fu.
Cloning and expression analysis of flowering inhibitor CmFLC-like1 gene in chrysanthemum.
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CmFLC-like1 expression.
Key words：chrysanthemum；vernalization；FLC；RT-PCR

菊花原产中国，多为短日照品种，但夏菊属于量性短日照或日中性品种（潘才博和张启翔，
2010），其花芽分化依赖低温诱导，即春化作用途径。有研究表明，夏菊开花需要至少 3 ~ 7 ℃的低
温诱导约 3 周（周军和李鸿渐，1991），而有些经低温诱导成花的菊花品种亦可通过赤霉素（GA）
处理后开花（Sumitomo & Hisamatsu，2009）。 
开花植物从营养生长到生殖生长的转变是由一系列信号转导和基因调控网络协同完成的。迄今
已发现有 4 条主要的信号通路诱导其开花，分别是光依赖途径、春化作用途径、赤霉素（GA）途径
和自主途径（罗睿和郭建军，2010）。这些途径所形成的开花调控网络中的基因超过 300 个，包含
FT（FLOWERING LOCUS T）、SOC1（SUPPRESSOR OF OVEREXPRESSION OF CO1）、FD 和 FLC
等关键基因（徐雷 等，2011）。其中春化作用主要是通过抑制 FLC 的表达实现促进开花的目的。FLC
属于 MADS 家族基因，编码一个含有 MADS‐box 的转录因子，在拟南芥中通过抑制 FT 和 SOC1 的
表达，负向调控植物开花（Shchennikova et al.，2004）。在大白菜中发现有 4 个 FLC 家族成员，其
中 BrFLC1 和 BrFLC2 是主要的春化反应基因（Wu et al.，2012）。在油菜中也克隆了 5 个抑制开花
的 FLC 家族成员（Tadege et al.，2001）。另外，在甘蓝（Okazaki et al.，2006）、胡萝卜（毛笈华 等，
2013）和早熟橙（Zhang et al.，2009）中均克隆到 FLC。所有的研究表明，FLC 的表达水平随低温
处理时间延长而降低，从而解除 FLC 对开花的抑制作用。
本试验中从夏菊品种‘优香’中克隆了 1 个 FLC 同源基因（CmFLC-like1），分析其序列及不同
组织器官和 4 ℃低温下的表达，以期为深入研究其春化机理及其开花时间的分子调控奠定基础。
1 材料与方法
1.1 试验材料
试验于 2012 年 9 月至 2014 年 11 月在南京农业大学观赏植物遗传育种实验室完成。试供材料夏
菊[Chrysanthemum morflorium（Ramat.）Kitam.]品种‘优香’（Yuuka）来源于南京农业大学“中国
菊花种质资源保存中心”，基因克隆材料使用定植后 2 ~ 3 个月营养期（15 ~ 20 叶片）距生长点 5 ~
6 节位的成熟叶片；组织表达模式分析使用同时期材料的茎尖生长点、叶片（叶位同上）、茎段（3 ~
4 节间）和根；田间表达模式分析使用 2012—2013 年大田苗叶片为材料，叶片均取距生长点 5 ~ 6
节位叶片；低温处理使用组培苗（苗龄 3 周）作为材料，用恒温光照培养箱进行 4 ℃处理，光周期
16 h 光/8 h 暗，光强 80 μmol · m-2 · s-1，分别于 0 d（试验处理前）、处理 14 d 和处理 28 d 时在超净
台取叶片，对照温度条件为 22 ℃。样品用液氮速冻保存备用。
1.2 菊花 CmFLC-like1 基因全长的获得与序列分析
总 RNA 提取使用 Trizol 试剂盒（TaKaRa）。取材料 0.1 ~ 0.2 g 在液氮中研磨，加入 2 mL Trizol
后按说明书步骤进行。其中在第 1 次氯仿抽提后使用 DNaseⅠ消化基因组 DNA，再进行后续步骤。
RNA 溶于 20 μL RNase Free Water 中。使用琼脂糖凝胶电泳和核酸仪（NanoDrop Technologies）检
测浓度和质量，合格的样品用于 cDNA 第 1 链的合成。使用内参基因 Elongation Factor 1α（CmEF1α，
KF305681，引物序列见表 1）进行 cDNA 第 1 链检测。根据夏菊‘优香’转录组库序列分析
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（SRP029991），选择 FLC 相关基因片段设计引物 CmFLC-M-F 和 CmFLC-M-R（表 1），用营养生长
期距生长点 5 ~ 6 节位成熟叶片提取 RNA 获得的 cDNA 第 1 链为模板，扩增基因中间片段。扩增产
物回收、纯化后连接 pMD19-T 载体（TaKaRa），转化大肠杆菌 DH5α感受态细胞（实验室保存菌株），
经蓝白斑筛选阳性克隆后送于南京斯普金公司测序。根据获得的中间片段序列设计 3′RACE 的正向
引物 CmFLC-F1、CmFLC-F2 和 CmFLC-F3（表 1），接头引物使用 AP。根据 3′端与中间片段拼接结
果设计 5′RACE 引物 CmFLC-R1、CmFLC-R2 和 CmFLC-R3（表 1），第 1 轮使用 CmFLC-R1 为引物
进行反转录，第 2 轮使用 CmFLC-R2 和 5′RACE adaptor primer（Abridged Anchor Primer，AAP）进
行扩增，第 3 轮使用 CmFLC-R3 和 5′RACE Abridged Universal Amplification Primer（AUAP）进行扩
增。所得 5′端序列经 ORF finder 程序（http：//www. ncbi. nlm. nih. gov/gorf/gorf. html）进行 ORF 预
测后设计全长引物 CmFLC-ALL-F 和 CmFLC-ALL-R（表 1），进行高保真 PCR 扩增并测序得到基因
全长序列。试验所有引物使用 Prime 5 软件设计。所得到的全长序列用 BLAST（http：//www. ncbi. nlm.
nih. gov/BLAST/）进行同源性分析，使用 MEGA4、DNAMAN 进行多序列比对和系统进化树的构建。

表 1 菊花 CmFLC-like1 基因克隆及表达分析的引物
Table 1 Primers used for amplification and expression analysis of CmFLC-like1 in chrysanthemum
引物 Primer 序列 Sequence（5′–3′） 引物 Primer 序列 Sequence（5′–3′）
CmFLC-M-F TACAGAAGCGGGAGAGAGAACCAAC CmFLC-ALL-F GAGGATGGGGCGAGAAAAGCTAGAAA
CmFLC-M-R ATGTTGGGCTGAATTTGTCTGG CmFLC-ALL-R GAAGTTTTACGGTAGAGATGTGTTA
CmFLC-F1 GAAGGTAAGGAAGAACTGGAAAAGC CmFLC-1A-F CGGGATCCATGGGGCGAGAAAAGCTAGAA
CmFLC-F2 AGAACTGGAAAAGCAGGTTGCATCA CmFLC-1A-R TTGCGGCCGCCTAGCCATTGAAAAGAGGAAGTG
CmFLC-F3 CAAGTAACCAGACAAATTCAGCCCA CmFLC-RT-F TGCTCCGGAATAACACATCTCT
CmFLC-R1 GCGATAAAACCTCCAACTGCCCACC CmFLC-RT-R ACTGATAGTTGCAAGATAACAAAGT
CmFLC-R2 CCTCCAACTGCCCACCAGCTCCATT CmEF1α-F TTTTGGTATCTGGTCCTGGAG
CmFLC-R3 CATTGTTGGTTCTCTCTCCCGCTTC CmEF1α-R CCATTCAAGCGACAGACTCA
AAP GGCCACGCGTCGACTAGTACGGGIIGGGIIGGGIIG
AUAP GGCCACGCGTCGACTAGTAC

1.3 载体构建
使用 Gateway 系统（Invirtrogen）构建 pMDC43-CmFLC 载体（Curtis & Grossniklaus，2003）。
根据 CmFLC-like1 基因 cDNA 的 ORF 设计特异性引物，上、下游分别加 BamHⅠ和 NotⅠ酶切位点：
CmFLC-1A-F 和 CmFLC-1A-R（表 1），以含有目的基因的 pMD19-T 的质粒为模板进行高保真扩增。
产物进行琼脂糖凝胶电泳检测，并切胶纯化回收。将上述 PCR 纯化产物和 pENTR1A 载体质粒同时
进行 BamHⅠ和 NotⅠ双酶切，纯化回收并进行连接、测序验证，获得入门载体 pENTR1A-CmFLC。
pENTR1A-CmFLC 经 PvuⅠ单酶切线性化后与亚细胞定位表达载体 pMDC43 质粒进行 LR 重组，获
得 pMDC43-CmFLC 载体；与 pDEST-GBKT7 载体进行 LR 重组，获得 pDEST-GBKT7-CmFLC 载体；
与 35S-GAL4-DB 载体进行 LR 重组，得到 GAL4-DB-CmFLC 载体。
1.4 亚细胞定位分析
通过洋葱表皮细胞瞬时表达系统进行亚细胞定位。在超净工作台上将洋葱表皮切成约 1 cm2 的
方块，剥取内表皮细胞层，翻转，光面向下，平铺在含有 72.8 mg · mL-1 山梨醇的 1/2MS 固体培养
基上，24 ℃高渗避光预培养 10 ~ 12 h，然后将洋葱表皮转移到 1/2MS 固体培养基上预培养 2 ~ 4 h。
pMDC43-CmFLC-like1 载体质粒进行金粉处理后使用基因枪（Biolistic PDS-1000 /He Particle Delivery
System）轰击方法导入预处理好的洋葱表皮细胞。基因枪轰击后于 24 ℃暗培养 16 ~ 24 h，在激光
共聚焦显微镜（Zeiss LSM780）下拍照记录。
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1.5 转录激活活性分析
1.5.1 酵母转化
将载体质粒 pDEST-GBKT7-CmFLC、pDEST-GBKT7（阴性对照）和 pCL1（阳性对照），使用
MatchmarkerTM Yeast Transformation System 2（Clontech）酵母转化试剂盒分别转入酵母 Y2H 感受
态中，YPDA 培养基摇菌至 OD600 = 0.5 ~ 0.6 后，涂布于 SD/-Trp 培养基，pCL1 涂布 SD/-Leu 培养
基，30 ℃倒置培养 3 d，待单菌落长至 2 mm 左右时挑取单克隆划线于 SD/-Ade/-His 培养基，30 ℃
倒置培养，观察菌落生长情况并拍照记录。
1.5.2 拟南芥原生质体转化
原生质体转化参照 Yoo 等（2007）的方法，选取 3 ~ 4 周苗龄未抽薹的野生型拟南芥 Col-0 完全
展开真叶中间部分，用胶带黏贴，小心撕下叶片下表皮，浸泡在加入酶液的培养皿中，真空抽气 30
min，压强 25 kPa。暗培养 3 h，静置酶液变绿色，在显微镜下观察计数原生质体得率。用 35 ~ 75 μm
尼龙滤网过滤酶液，100 × g 室温离心 1 min，并用 2 mL W5 溶液洗 2 次，最后悬浮于约 1 mL W5
溶液中，并在显微镜下进行数量统计，适当稀释至终浓度 1 ~ 2 × 105个 · mL-1，冰浴 30 min。使用 PEG
法分别将 GAL4-DB-CmFLC、阳性对照 GAL4-DB-ARF5 和阴性对照 35S-GAL4-DB 质粒与报告质粒
35S-GAL4-LUC 一起转化进入拟南芥原生质体，转化后置于 6 孔板过夜暗培养。荧光素酶（Luciferase）
的测定参照 Fujikawa 和 Kato（2007）的方法，每 150 μL 原生质体加入 10 μL D-luciferin（0.78
mmol · L-1)，室温暗处放置 15 min 后，通过 20/20 n Luminometer（Turner BioSystems）测定荧光值。
1.6 荧光实时定量 PCR
设计特异定量引物 CmFLC-RT-F 和 CmFLC-RT-R，使用菊花 CmEF1α 基因作为内参对照，对比
CmFLC-like1 基因表达量的差异。内参引物为：CmEF1α-F 和 CmEF1α-R，普通 PCR 扩增并测序验
证特异性扩增的准确性（表 1）。定量 PCR 仪使用 Mastercycler ep realplex 2S（Eppendorf），程序
为：95 ℃ 2 min，95 ℃ 15 s，55 ℃ 15 s，72 ℃ 20 s，40 个循环。程序结束后得到每个样品的 CT
值，假定扩增效率为 100%，并假定标准曲线及每次扩增之间的效率保持一致，采用∆∆Ct 法进行相
对定量分析（Livak & Schmittgen，2001）。每个样品进行重复试验 3 次。
2 结果与分析
2.1 CmFLC-like1 的克隆和序列分析
引物 CmFLC-M-F 和 CmFLC-M-R 扩增得到 397 bp 中间片段，基于此中间片段分别设计引物进
行 3′RACE 和 5′RACE 扩增。获得 321 bp 的 3′片段和 285 bp 的 5′ 端，拼接后得到 945 bp 的基因全长。
分析发现所得 CmFLC-like1 基因开放阅读框为 636 bp，编码 1 条包含 211 个氨基酸残基的多肽。
对ORF编码的多肽进行分析发现，1 ~ 74位氨基酸序列属于MADS-box的保守序列，即典型的MADS
家族结构域，121 ~ 176 位氨基酸为 1 个 K-box，说明其在 MADS 家族两种类型中，属于Ⅱ型（MEF2）。
同源性分析表明，CmFLC-like1 与葡萄（Vitis vinifera）VvFLC、龙眼（Dimocarpus longan）DlFLC、
白桦树（Betula platyphylla）BpFLC、望天树（Shorea beccariana）SbFLC、油菜（Brassica napus）、
可可（Theobroma cacao）TcFLC、核桃（Juglans regia）JrFLC、大白菜（Brassica rapa）和拟南芥
（Arabidopsis thaliana）的同源性分别为 55%、52%、49%、48%、45%、44%、44%、43%和 42%（图 1）。
聚类分析表明，CmFLC-like1 蛋白与 JrFLC 和 AtFLC 遗传距离最近（图 2）。
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图 1 不同植物 FLC 同源性比较
Fig. 1 Alignment of predicted amino acid sequences of FLC genes from different plant species
VvFLC：葡萄 Vitis vinifera，NP_001268057.1；DlFLC：龙眼 Dimocarpus longan，AHZ89709.1；BpFLC：白桦树 Betula platyphylla，AGC94569.1；
SbFLC：望天树 Shorea beccariana，BAN89459.1；TcFLC：可可 Theobroma cacao，XP_007043954.1；JrFLC：核桃 Juglans regia，AHF20809.1；
BrFLC：大白菜 Brassica rapa，ABO40820.1；BnFLC：油菜 Brassica napus，AFU61563.1；
AtFLC：拟南芥 Arabidopsis thaliana，NP_196576.1.

图 2 不同植物 FLC 编码氨基酸序列的进化树分析
Fig. 2 Phylogenetic tree analysis of the deduced amino acid sequences of FLC in different plants

2.2 亚细胞定位分析
将 CmFLC-like1 构建在载体 pMDC43-CmFLC 上，与 GFP 蛋白融合表达，即 35S-GFP-CmFLC。
使用基因枪方法将表达载体转化进入洋葱表皮细胞。转化对照 35S-GFP 的洋葱表皮细胞中绿色荧光
在整个细胞中全部可见，而转化 35S-GFP-CmFLC 的洋葱表皮细胞的绿色荧光仅在细胞核（图 3），
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图 5 CmFLC-like1 在拟南芥原生质体中转录活性分析
Fig. 5 Thanscript activity of CmFLC-like1 in the protoplast
说明 CmFLC-like1 基因的蛋白表达定位于细胞核中。
图 3 CmFLC-like1 的亚细胞定位分析
A、D：绿色荧光通道；B、E：白光通道；C、F：叠加效果。A、B、C：35S-GFP；D、E、F：35S-GFP-CmFLC。
Fig. 3 Subcellular localization of CmFLC-like1 protein in the onion epidermis cells
A，D：In green fluorescence channel images；B，E：Bright light images；C，F：Merged plot images. A，B，C：35S-GFP；D，E，F：35S-GFP-CmFLC.

2.3 转录活性分析
首先使用 SD/-Trp、SD/-Leu 缺陷培养基进行初步的筛选，挑取单菌落在涂有 X-α-Gal 的
SD/-Ade/-His 缺陷型培养基上划线培养，观察结果（图 4）。阳性对照，即转入 pCL1 质粒的酵母正
常生长且显蓝色；而阴性对照，即转入 pGBKT7 质粒的酵母不能生长，转入 pDEST-GBKT7-CmFLC
质粒的酵母也无法正常生长，说明 CmFLC-like1 不具有转录激活活性。

图 4 CmFLC-like1 酵母中转录活性分析
Fig. 4 Thanscript activity of CmFLC-like1 in yeast

将构建好的 GAL4-DB-CmFLC 载体与报
告质粒 35S-GAL4-LUC 通过 PEG 法转入拟南
芥原生质体。转入具有激活作用的阳性对照质
粒 35S-GAL4-DB-ARF5 的荧光值为 205.3
units，转入具有抑制作用的阴性对照质粒
35S-GAL4-DB 的荧光值为 109.3，而转入
35S-GAL4-DB-CmFLC 质粒的荧光值为 98.0
（图 5），可见 35S-GAL4-DB-CmFLC 与阳性对
照荧光值差异显著，且比阴性对照荧光值低，
说明 CmFLC-like1 具有转录抑制活性。
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图 6 CmFLC-like1 基因在不同组织中的表达
Fig. 6 Relative expressions level of CmFLC-like1 gene in
different tissues
2.4 CmFLC-like1 表达模式分析
对田间夏菊‘优香’营养期的根、茎、叶
和茎尖中 CmFLC-like1 表达量进行 RT-PCR 分
析。CmFLC-like1 在叶片中的表达量均明显高
于其他部位，在根中最低，而茎和茎尖之间表
达差异不显著（图 6）。
采用 RT-PCR 对 CmFLC-like1 响应低温进
行检测，结果表明，4 ℃处理后的组培苗叶片
CmFLC-like1 表达量较对照（22 ℃）明显下降，
并且处理时间越长，对其表达的抑制作用越明
显（图 7）。
2012 年 12 月至 2013 年 7 月每月对‘优香’
大田苗叶片取样的定量结果表明，CmFLC-like1
的表达有明显的随时间变化趋势，2012 年 12
月叶片中表达量相对最高，2013 年 2 月脚芽萌动前大幅度下降，于 3 月脚芽萌动时达到最低值，5
月花芽分化完成后叶片中的 CmFLC-like1 开始回升，7 月盛开后到达较高水平（图 8）。


3 讨论
FLC 属于 MADS-box 家族基因，而 MADS-box 家族基因作为真核生物中重要的一类转录因子
普遍存在于动植物和真菌中，在生长发育调控和信号转导中起着不可或缺的作用。目前的研究发现
MADS-box 家族基因具有两个不同的类型分支，分别为Ⅰ型（SRF）和Ⅱ型（MEF2），而在植物的
Ⅱ型MADS-box中存在一个K-box结构，是其他生物MADS家族基因所没有的（Alvarez et al.，2000）。
本试验中克隆到的 CmFLC-like1 基因具有典型的 MADS-box 保守序列，为 MADS 家族基因，同时
具有 K-box 结构，故其应为 MADS 家族基因中的Ⅱ型（MEF2），与拟南芥、白菜和油菜中的相似
（Tadege et al.，2001；Okazaki et al.，2006）。这些相似的结构暗示可能有相似的功能或作用。
图 7 4 ℃处理对 CmFLC-like1 表达的影响
Fig. 7 Relative expressions level of CmFLC-like1 in response
to 4 treatment℃
图 8 CmFLC-like1 基因在田间叶片的表达变化
Fig. 8 The expression change of CmFLC-like1 in leaves
under field condition
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FLC 作为一个成花和开花的抑制因子，其表达会受春化途径、FRl 途径和自主途径的调节，三
者均影响 FLC 的染色质状态（He，2009）。FLC 主要通过直接或间接与下游的 3 个基因结合（FT、
FD、SOC1）抑制它们的表达，而这 3 个基因表达产物为直接影响花芽分化的开花促进因子（Searle
et al.，2006）。亚细胞定位和转录激活活性试验分别证明了 CmFLC-like1 的表达定位于细胞核，且具
有转录抑制活性，因此其为一个定位于细胞核上的转录抑制因子，这也与其开花抑制功能一致。在
不同物种中含有不同数量的 FLC 同源基因，例如甘蓝中存在 4 个（Okazaki et al.，2006），油菜中存
在 5 个（Tadege et al.，2001）。在拟南芥中，FLC 拷贝数的多少会使植物的开花时间产生差异（Nah
& Chen，2010）。菊花中是否有更多 FLC-like 基因有待进一步分析。CmFLC-like1 在‘优香’根、茎、
叶和茎尖中具有一定程度的表达，但主要表达部位是叶，根中的表达量极少，而拟南芥中却是茎尖
和根中表达最高，叶片中较低（Michaels & Amasino，1999）。在不同拟南芥中 FLC 的表达方式也存
在多样性（Nah & Chen，2010）。菊花 CmFLC-like1 主要在叶中表达，这是否与抑制 FT 表达，进而
影响花芽分化有关，需要进一步验证。
周军和李鸿渐（1993）的研究表明，夏菊开花需要一定时间（3 周左右）的适当低温（3 ~ 7 ℃）
诱导。CmFLC-like1 表达量从 12 月的高水平至次年 2 月大幅下降，根据南京全年平均温度统计分析，
经过 1 月的全年最低温度（平均为–3 ~ 5 ℃，江苏省气象局数据），‘优香’进入春化时期，此时
CmFLC-like1 表达受到抑制，随气温回升和花芽发育，CmFLC-like1 的抑制作用被解除。4 ℃处理可
使 CmFLC-like1 表达量明显下降，并且处理时间越长其表达量越低，验证了低温对 CmFLC-like1 的
表达具有抑制作用。而有些经低温诱导成花的菊花品种，亦可通过赤霉素（GA）处理后开花
（Sumitomo & Hisamatsu，2009）。GA 处理与 CmFLC-like1 表达的关系，以及 CmFLC-like1 的具体
作用机理还需进一步研究。

References
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