全 文 ：园 艺 学 报 2013，40（12）：2472–2478 http: // www. ahs. ac. cn
Acta Horticulturae Sinica E-mail: yuanyixuebao@126.com
收稿日期：2013–07–16；修回日期：2013–11–06
基金项目：中央高校基本科研业务费专项基金项目（DL13CA13）；国家自然科学基金项目（30900115，31070275）
* 通信作者 Author for correspondence（E-mail：lyhshen@126.com）
羽衣甘蓝 ARC1 蛋白的原核表达、纯化及泛素
连接酶活性分析
蓝兴国，李晓屿，杨 佳，李玉花*
（东北林业大学生命科学学院，哈尔滨 150040）
摘 要：ARC1 是植物特有的一类含有 U-box/ARM 结构域的蛋白，在芸薹属植物自交不亲和
（self-incompatibility，SI）信号转导中起着正向调控因子的作用。将羽衣甘蓝（Brassica oleracea var.
acephala）BoARC1编码区的序列连接到原核表达载体pET-14b上，通过酶切鉴定和测序分析，构建pET-14b-
BoARC1 表达质粒；将获得的阳性表达质粒转化到大肠杆菌表达菌株 BL21（DE3）pLysS 中，利用 IPTG
进行诱导表达。SDS-PAGE 结果显示，在分子量 69 kD处有BoARC1 蛋白特异性地诱导表达；利用Ni2+-NTA
树脂通过亲和层析的方法获得 BoARC1 融合蛋白。在泛素激活酶（E1）、泛素结合酶 UBC7（E2）和泛素
体外泛素化反应后，通过免疫印迹的方法检测，显示出 BoARC1 融合蛋白能够将底物进行多泛素化修饰；
当 U-box 中保守位点第 323 位 Pro 突变为 Ala 或其他泛素化组分缺少时，底物不能被泛素化修饰。
关键词：羽衣甘蓝；自交不亲和性；ARC1；原核表达；泛素连接酶
中图分类号：S 681.9 文献标志码：A 文章编号：0513-353X（2013）12-2472-07

Prokaryotic Expression，Purification and in Vitro Ubiquitination Assay of
BoARC1 from Ornamental Kale
LAN Xing-guo，LI Xiao-yu，YANG Jia，and LI Yu-hua*
（College of Life Sciences，Northeast Forestry University，Harbin 150040，China）
Abstract：ARC1，which belonging to the plant-specific U-box/ARM protein，acts as a positive
mediator of self-incompatibility signaling in Brassica. Here，the BoARC1 coding region sequence was
amplified and inserted into the prokaryotic expression vector pET-14b. The pET-14b-BoARC1 constructs
were confirmed by the double restriction enzyme and sequencing analysis. The E. coli BL21（DE3）pLysS
cell was transformed pET-14b-BoARC1. SDS-PAGE results showed that the recombinant BoARC1 fusion
protein about 69 kD was induced by IPTG and purification by affinity chromatography using Ni2+-NTA
resin. In vitro ubiquination assays were performed using a yeast E1 enzyme，a E2 enzyme His6-UBC7，
ubiquitin and His6-BoARC1. Western blot results showed that His6-BoARC1 mediated the poly-
ubiquitination of proteins with anti-ubiquitin antibodies. Further，a point mutation of U-box domain at
amino acid position 323 substituting Pro for Ala or omission of any of the components resulted in a loss of
protein ubiquitination.

12 期 蓝兴国等：羽衣甘蓝 ARC1 蛋白的原核表达、纯化及泛素连接酶活性分析 2473

Key words：Brassica oleracea var. acephala；self-incompatibility；ARC1；prokaryotic expression；
ubiquitin ligase E3

自交不亲和性（Self-incompatibility，SI）是显花植物避免自交，促进种内遗传多样性的一种机
制，在植物进化过程中起着非常重要的作用（Franklin-Tong，2008）。芸薹属植物的 SI 信号转导是
花粉外壁蛋白 SCR（S-locus cysteine-rich protein）/SP11（S-locus protein 11）与柱头乳突细胞膜 SRK
（S-locus receptor kinase）受体特异性相互作用引起的（Kachroo et al.，2001；Takayama et al.，2001）。
SCR/SP11 配体是一个富含半胱氨酸的分泌蛋白，决定花粉的 SI（Schopfer et al.，1999；Takayama et
al.，2000）。SRK 具有 3 个功能域：胞外域、跨膜域和具有丝氨酸/苏氨酸激酶活性的胞内域，控制
柱头乳突细胞的 SI（Goring & Rothstein，1992；Takasaki et al.，2000；Naithani et al.，2007）。当花
粉落到柱头表面之后，花粉 SI 信号分子 SCR/SP11 转运到柱头乳突细胞的表面，被受体 SRK 的胞
外域识别，并引起 SRK 胞内域的磷酸化，通过下游的信号传递来完成 SI 反应（Cabrillac et al.，2001；
Ivanov et al.，2010；Tantikanjana et al.，2010）。
ARC1（arm repeat containing 1）被认为是 SRK 信号复合体的下游信号传递因子（Gu et al.，1998；
Indriolo et al.，2012）。在油菜（Brassica napus）中鉴定出来的 BnARC1，其蛋白结构主要包括 N 端
的 UND 结构域；中间有一个 U-box 结构域；C 末端含有一个 ARM 结构域（Stone et al.，2003）。在
转基因试验中，导入 BnARC1 反义基因的植株有部分打破 SI 的现象（Stone et al.，1999）。ARC1 特
异性地在柱头乳突细胞中表达，并且 ARC1 通过其 C 末端 ARM 功能域特异地与 SRK 的激酶域结合
（Gu et al.，1998；蓝兴国 等，2011）。U-box 功能域被认为是一类具有 E3 泛素连接酶活性的功能
域（Hatakeyama & Nakayama，2003）。并且在体外泛素连接酶活性分析中，发现 BnARC1 具有依赖
U-box 功能域的 E3 连接酶活性（Stone et al.，2003）。通过酵母双杂交的方法筛选到 ARC1 相互作用
蛋白 Exo70A1，而且在过量表达 Exo70A1 的植株具有部分打破自交不亲和性的现象；并且 Exo70A1
功能丧失的植株干扰了亲和花粉管的生长（Samuel et al.，2009；杨佳 等，2012）。因此认为
ARC1-Exo70A1 信号途径在 SI 反应过程中起到重要作用。
本研究中对前期从羽衣甘蓝自交不亲和系（S13-bS13-b）得到的 BoARC1 进行结构域分析，发现
其含有一个 U-box 结构域，并且氨基酸序列与 BnARC1 的 U-box 序列具有高度一致性；通过原核表
达系统获得 BoARC1 蛋白，探讨 BoARC1 的体外泛素连接酶活性，从而为 BoARC1 的生物学功能
研究奠定基础。
1 材料与方法
1.1 试验材料
羽衣甘蓝 S13-bS13-b 自交不亲和系于 2009 年 6 月—2010 年 5 月种植于东北林业大学花卉生物工
程研究所（杨佳 等，2012）。
1.2 原核表达质粒 pET-14b-BoARC1 的构建
引物 pET-14b-BoARC1-S（5′-GGAATTCCATATGGCCACTGATTCAGCAATGTTC-3′），下划线
代表 NdeⅠ酶切位点；pET-14b-BoARC1-R（5′-TAAAAGTTGCGGCCGCTTATCTCTGTGTGTTTTG
GTCGC-3′），下划线代表 NotⅠ酶切位点。以 pGEM-BoARC1 质粒为模板，扩增编码 BoARC1 蛋白
的编码区序列（蓝兴国 等，2011）。PCR 反应采用 KOD 高保真酶（东洋纺），扩增条件为 94 ℃变
2474 园 艺 学 报 40 卷
性 15 s，55 ℃退火 30 s，68 ℃延伸 2 min，共 30 个循环后，72 ℃延伸 7 min。PCR 产物回收、双
酶切后，插入 pET-14b 载体中。pET-14b 载体是经过改造过的，在 NdeⅠ和 XhoⅠ之间加入了 ApaⅠ、
KpnⅠ、SmaⅠ和 NotⅠ酶切位点（刘瑜 等，2006）。连接产物转化大肠杆菌 DH5α。重组质粒经 PCR
和酶切鉴定正确后，进行 DNA 序列分析。
BoARC1 点突变（323 位点的 Pro 突变 Ala）载体构建采用的是 KOD-Plus 突变试剂盒（东洋纺
SMK-101）。通过反向 PCR 的方法进行扩增。引物为 323-P-S（5′-TGTGCCAAAACAGGACA
GAAGCTAGTGG-3′）和 323-P-X（5′-AGTAGAGCGACCTTCTTGATG-3′），下划线代表突变位点。
阳性克隆通过 DNA 测序进行鉴定。
1.3 BoARC1 重组蛋白质的原核表达
将鉴定正确的阳性质粒转化到 BL21（DE3）pLysS 菌株中。分别挑取单菌落于 5 mL LB 培养基
（含氨苄青霉素）中，37 ℃振摇培养至对数期 A600 = 0.6，加入终浓度为 1 mmol · L-1 的异丙基 β–
D–硫代半乳糖苷（isopropy-β-D-thiogalactoside，IPTG），37 ℃诱导 4 h 后进行 12%的 SDS-PAGE
电泳，通过考马斯亮蓝染色进行表达检测。
1.4 BoARC1 融合蛋白的纯化
以 100 mL 进行大量扩增诱导，并收集细菌；将细菌沉淀重悬于 5 mL 结合缓冲液（20 mmol · L-1
Tris-base；30 mmol · L-1 NaCl；10 mmol · L-1 咪唑；pH 8.0），超声破碎后，12 000 r · min-1、4 ℃离
心 15 min。取上清液加入用结合缓冲液平衡 Poly-Prep chromatography column 层析柱中，加入 100 µL
Ni2+-NTA 琼脂糖（Novagen 公司），4 ℃结合 30 min。依次用 20、30 和 40 mmol · L-1 咪唑洗脱缓冲
液冲洗 Ni2+-NTA 琼脂糖，最后用 250 mmol · L-1 咪唑洗脱并收集融合蛋白。
对形成包涵体的融合蛋白采用如下方法纯化：取诱导后的 100 mL 细菌，加入 5 mL 的 buffer B
溶液（100 mmol · L-1 NaH2PO4；10 mmol · L-1 Tris-HCl；6 mol · L-1 盐酸胍；pH 8.0）重悬。室温下
温和震荡 30 min。室温 12 000 r · min-1 离心 20 min，取上清液。向裂解上清液中加入 50 µL Ni2+-NTA
树脂，室温下结合 30 min。取 Poly-Prep chromatography column 层析柱，将裂解液和树脂混合物加
入亲和柱中。用 buffer C（100 mmol · L-1 NaH2PO4；10 mmol · L-1 Tris-HCl；6 mol · L-1 盐酸胍；pH
6.3）洗两次，每次 4 mL。用 buffer D （100 mmol · L-1 NaH2PO4；10 mmol · L-1 Tris-HCl；6 mol · L-1
盐酸胍；pH 5.9）洗 4 次，每次 0.5 mL。用 buffer E （100 mmol · L-1 NaH2PO4；10 mmol · L-1 Tris-HCl；
6 mol · L-1 盐酸胍；pH 4.5）洗 4 次，每次 0.5 mL，收集留下来的液体。对含有目的蛋白的洗脱液
进行 Amicon® Ultra-4（3 kD 截流，Millipore 公司）过滤透析。
1.5 BoARC1 融合蛋白体外泛素连接酶活性分析
参考 Stone 等（2003）的方法，在 30 µL 反应缓冲液（1 mmol · L-1 磷酸肌酸；1 U 磷酸肌酸激
酶；1 mmol · L-1 MgCl2；100 mmol · L-1 NaCl；2 mmol · L-1 ATP；0.5 mmol · L-1 DTT；50 mmol · L-1
Tris-HCl，pH 7.5）中加入 0.5 µg 酵母 E1 泛素激活酶（Sigma 公司），1 µg 纯化的 His-UBC7，1 µg
的 BoARC1 或突变形式的 BoARC1，5 µg 的酵母泛素（Sigma 公司），1 µg 细菌蛋白。在 30 ℃下孵
育 2 h，加入 2 × SDS 上样缓冲液终止反应。
1.6 免疫印迹分析
取反应后的蛋白样品，以 6%的 SDS-PAGE 凝胶电泳分离。Western blot 分析时，将凝胶中的蛋
白质转移至 PVDF 膜（Amersham Biosciences）。用含有 5%牛血清白蛋白的 TBST（含 0.1%的
Tween-20）于室温下封闭 2 h，一抗为抗泛素的抗体（Sigma Aldrich，稀释倍数为 1︰100），二抗为
12 期 蓝兴国等：羽衣甘蓝 ARC1 蛋白的原核表达、纯化及泛素连接酶活性分析 2475

图 2 羽衣甘蓝 BoARC1 的 PCR 扩增产物
Fig. 2 PCR products of BoARC1
与辣根过氧化物酶偶联的山羊抗兔抗体（稀释倍数为 1︰5 000）。制备 LumiGLO混合液（Cell Signaling
Technology）均匀地滴在 PVDF 膜上，在 Kodak IS2000R 图像工作站上进行化学发光检测。
2 结果与分析
2.1 BoARC1 的结构域分析
羽衣甘蓝 BoARC1（GenBank 收录号为 EU344909）是一个含有 663 氨基酸的蛋白。通过结构
域分析发现，BoARC1 含有 N 端 UND 结构域（1 ~ 279）、中间 U-box 结构域（280 ~ 361）和 C 端
的 ARM 结构域（362 ~ 663），这表明 BoARC1 的结构域组合方式与油菜 BnARC1 一致。其中 BoARC1
的 U-box 结构域氨基酸序列与 BnARC1 的 U-box 序列具有 92%一致性（图 1），这表明 BoARC1 可
能具有泛素连接酶的活性。



图 1 BoARC1 与 BnARC1 在 U-box 结构域的氨基酸序列比对
灰色背景显示不一致的氨基酸序列；箭头表示保守的 P 位点。
Fig. 1 Alignment of U-box amino acid sequences between BoARC1 and BnARC1
Different residues are shaded gray. Arrow indicated a conserved P amino acid residue.


2.2 BoARC1 原核表达质粒的构建
为了构建原核表达质粒，以含有 BoARC1
的核酸序列质粒为模板，利用 PCR 方法扩增
BoARC1 的编码区序列。图 2 电泳条带显示，
扩增的 PCR 片段在 2 000 bp 左右，与预测的片
段大小相符。对 PCR 获得的核酸片段和原核表
达 载 体 进 行 双 酶 切 ， 通 过 连 接 ， 构 建
pET-14b-BoARC1 表达质粒；最后通过测序鉴
定其序列正确性。
2.3 BoARC1 融合蛋白的表达及纯化
将构建好的 pET-14b-BoARC1 表达质粒转
化到大肠杆菌 BL21（DE3）pLysS 菌株中。在
37 ℃下 IPTG 进行４h 诱导，对表达后的细菌进行裂解。SDS-PAGE 结果显示 IPTG 诱导后的菌液
蛋白中有一条 69 kD 左右的特异蛋白条带（图 3）。将表达菌液进行大量扩增，利用 Ni2+-NTA 亲合
树脂亲合层析纯化后进行 SDS-PAGE 电泳。图 4 中的结果显示出这个 69 kD 左右的蛋白质
（His6-BoARC1）被纯化出来。
2476 园 艺 学 报 40 卷





2.4 BoARC1 融合蛋白的泛素连接酶活性分析
蛋白质泛素化涉及到泛素激活酶（E1）、泛素连接酶（E2）和泛素连接酶（E3）。为了分析 BoARC1
是否具有泛素连接酶的活性，进行蛋白质体外泛素化进行鉴定。在泛素、泛素激活酶 E1（酵母）和
His6-UBC7（拟南芥）存在的情况下进行体外泛素化反应。然后利用抗泛素的抗体进行 Western blot
检测，结果发现 BoARC1 能够介导细菌蛋白形成多泛素化（图 5，泳道 5）；而当 BoARC1 的 U-box
结构域中保守 323 位点 Pro 突变 Ala（BoARC1P323A）或缺少泛素化反应的组分时（图 5，泳道 1 ~
4、6），却没有检测到细菌蛋白形成多泛素化。


图 5 BoARC1 体外泛素化分析
Fig. 5 In vitro ubiquitination assay for BoARC1
3 讨论
U-box/ARM 蛋白被认为是植物界中目前特有的一类蛋白质（Samuel et al.，2006；杨佳 等，2008）。
U-box 结构域大多数具有 E3 泛素连接酶的活性，参与蛋白质在泛素/26S 蛋白酶体降解过程（Aravind
图 4 BoARC1 重组蛋白的纯化
1：纯化的 His6-BoARC1；M：蛋白分子量标准。
Fig. 4 Purification of recombinant BoARC1
1：Purification of His6-BoARC1；M：Protein marker.
图 3 BoARC1 重组蛋白的诱导表达
1：诱导前细菌蛋白；2：诱导后细菌蛋白；M：蛋白分子量标准。
Fig. 3 Induced expression of recombinant BoARC1
1：Bacteria cell extracts before IPTG induction；2：Bacteria cell
extracts after IPTG induction；M：Protein marker.
12 期 蓝兴国等：羽衣甘蓝 ARC1 蛋白的原核表达、纯化及泛素连接酶活性分析 2477

& Koonin，2000；Mudgil et al.，2004）。ARM 结构域参与蛋白质间的相互作用（Samuel et al.，2006）。
U-box/ARM 蛋白参与植物光周期反应、细胞死亡和防御反应等方面调控（Kim et al.，2000；Amador
et al.，2001；Zeng et al.，2004）。在本研究中发现 BoARC1 含有 U-box 和 ARM 结构域，而且通过
原核表达系统进行了 BoARC1 的表达和纯化。
在原核表达中，一个分子量大小在 69 kD 的蛋白明显诱导出来，与预测的融合蛋白分子量相符。
在纯化方面，发现 His6-BoARC1 主要是以包涵体的形式存在。改变了诱导温度、诱导时间和 IPTG
浓度，但纯化的效率依然很低。进而，采用盐酸胍的方法进行融合蛋白的纯化，取得了较好的效果
（图 4）。此外，利用细菌蛋白作为底物进行体外泛素连接酶分析（Hatakeyama et al.，2001），BoARC1
具有泛素连接酶的活性能够介导底物多泛素化，而且泛素连接酶活性可能是依赖于 U-box 结构域的
（图5）。考虑到BnARC1在体外具有泛素连接酶的活性（Stone et al.，2003），这些结果说明了BoARC1
与 BnARC1 具有相似的生物学功能。
目前，Exo70A1 在油菜中被鉴定出来并且被认为是自交不亲和的负调控因子，参与调控授粉反
应（Samuel et al.，2009）。但 ARC1-Exo70A1 信号途径不能完全的打破自交不亲和，这就暗示着自
交不亲和信号网络还存在其它分支的可能，说明自交不亲和信号传递的复杂性。但对于 ARC1 在体
内细胞内的定位、表达等方面目前还没有鉴定。本研究中通过原核表达系统纯化了 BoARC1 蛋白，
进行了体外泛素连接酶活性分析。这为下一步获得 BoARC1 的抗体，检测 ARC1 定位、表达及生物
学功能奠定了基础。

References
Amador V，Monte E，García-Martínez J L，Prat S. 2001. Gibberellins signal nuclear import of PHOR1，a photoperiod-responsive protein with
homology to Drosophila armadillo. Cell，106：343–354.
Aravind L，Koonin E V. 2000. The U box is a modified RING finger–a common domain in ubiquitination. Curr Biol，10：132–134.
Cabrillac D，Cock J M，Dumas C，Gaude T. 2001. The S-locus receptor kinase is inhibited by thioredoxins and activated by pollen coat proteins.
Nature，410：220–223.
Franklin-Tong V E. 2008. Self-incompatibility in flowering plants：Evolution，diversity and mechanisms. Berlin：Springer-Verlag.
Goring D R，Rothstein S J. 1992. The S-locus receptor kinase gene in a self-incompatible Brassica napus line encodes a functional serine/threonine
kinase. Plant Cell，4：1273–1281.
Gu T，Mazzurco M，Sulaman W，Matias D D，Goring D. 1998. Binding of an arm repeat protein to the kinase domain of the S-locus receptor kinase .
Proc Natl Acad Sci USA，95：382–387.
Hatakeyama S，Nakayama K I. 2003. U-box proteins as a new family of ubiquitin ligases. Biochem Biophys Res Commun，302：635–645.
Hatakeyama S，Yada M，Matsumoto M，Ishida N，Nakayama K I. 2001. U box proteins as a new family of ubiquitin-protein ligases. J Biol Chem，
276：33111–33120.
Indriolo E，Tharmapalan P，Wright S I，Goring D R. 2012. The ARC1 E3 ligase gene is frequently deleted in self-compatible Brassicaceae species
and has a conserved role in Arabidopsis lyrata self-pollen rejection. Plant Cell，24：4607–4620.
Ivanov R，Fobis-Loisy I，Gaude T. 2010. When no means no：Guide to Brassicaceae self-incompatibility. Trends Plant Sci，15：387–394.
Kachroo A，Schopfer C R，Nasrallah M E，Nasrallah J B. 2001. Allele-specific receptor-ligand interactions in Brassica self-incompatibility. Science，
293：1824–1826.
Kim Y S，Lee J H，Yoon G M，Cho H S，Park S W，Suh M C，Choi D，Ha H J，Liu J R，Pai H S. 2000. CHRK1，a chitinase-related receptor-like
kinase in tobacco. Plant Physiol，123：905–915.
Lan Xing-guo，Yang Jia，Zhao Xin，Li Yu-hua. 2011. Isolation，expression of ARC1 from ornamental kale and interaction analysis between ARC1
and SRK. Acta Horticulturae Sinica，38 (12)：2342–2348. (in Chinese)
蓝兴国，杨 佳，赵 昕，李玉花. 2011. 羽衣甘蓝 ARC1 的基因分离、表达及与 SRK 相互作用的分析. 园艺学报，38 (12)：2342–2348.
Liu Yu，Liu Ya-wei，Li Hai-yu，Liu Jing-hua，Deng Peng，Jiang Yong. 2006. Construction of random peptide library and screening of penetrating
2478 园 艺 学 报 40 卷
peptides. Chinese Journal of Biochemistry and Molecular Biol，22 (6)：491–497. (in Chinese)
刘 瑜，刘亚伟，李海玉，刘靖华，邓 鹏，姜 勇. 2006. 一种用于穿透多肽筛选的随机文库的构建及筛选. 中国生物化学与分子生
物学报，22 (6)：491–497.
Mudgil Y，Shiu S H，Stone S L，Salt J N，Goring D R. 2004. A large complement of the predicted Arabidopsis ARM repeat proteins are members of
the U-box E3 ubiquitin ligase family. Plant Physiol，134：59–66.
Naithani S，Chookajorn T，Ripoll D R，Nasrallah J B. 2007. Structural modules for receptor dimerization in the S-locus receptor kinase extracellular
domain. Proc Natl Acad Sci USA，104：12211–12216.
Samuel M A，Chong Y T，Haasen K E，Aldea-Brydges M G，Stone S L，Goring D R. 2009. Cellular pathways regulating responses to compatible
and self-incompatible pollen in Brassica and Arabidopsis stigmas intersect at Exo70A1，a putative component of the exocyst complex. Plant
Cell，21：2655–2671.
Samuel M A，Salt J N，Shiu S H，Goring D R. 2006. Multifunctional arm repeat domains in plants. Int Rev Cytol，253：1–26.
Schopfer C R，Nasrallah M E，Nasrallah J B. 1999. The male determinant of self-incompatibility in Brassica. Science，286：1697–1700.
Stone S L，Anderson E M，Mullen R T，Goring D R. 2003. ARC1 is an E3 ubiquitin ligase and promotes the ubiquitination of proteins during the
rejection of self-incompatible Brassica pollen. Plant Cell，15：885–898.
Stone S L，Arnoldo M，Goring D R. 1999. A breakdown of Brassica self-incompatibility in ARC1 antisense transgenic plants. Science，286：
1729–1731.
Takasaki T，Hatakeyama K，Suzuki G，Watanabe M，Isogai A，Hinata K. 2000. The S receptor kinase determines self-incompatibility in Brassica
stigma. Nature，403：913–916.
Takayama S，Shiba H，Iwano M，Shimosato H，Che F S，Kai N，Watanabe M，Suzuki G，Hinata K，Isogai A. 2000. The pollen determinant of
self-incompatibility in Brassica campestris. Proc Natl Aca Sci USA，97：1920–1925.
Takayama S，Shimosato H，Shiba H，Funato M，Che F S，Watanabe M，Iwano M，Isogai A. 2001. Direct ligand-receptor complex interaction controls
Brassica self-incompatibility. Nature，413：534–538.
Tantikanjana T，Nasrallah M E，Nasrallah J B. 2010. Complex networks of self-incompatibility signaling in the Brassicaceae. Curr Opin Plant Biol，
13：520–526.
Yang Jia，Lan Xing-guo，Hao Ai-xin，Li Yu-hua. 2012. Isolation and expression analysis of Exo70A1 of ornamental kale. Acta Horticulturae Sinica，
39 (1)：127–135. (in Chinese)
杨 佳，蓝兴国，郝艾馨，李玉花. 2012. 羽衣甘蓝 Exo70A1 基因的分离及表达分析. 园艺学报，39 (1)：127–135.
Yang Jia，Lan Xing-guo，Li Yu-hua. 2008. U-box/ARM proteins in plants. Plant Physiology Communications，44 (6)：1216–1222. (in Chinese)
杨 佳，蓝兴国，李玉花. 2008. 植物 U-box/ARM 蛋白. 植物生理学通讯，44 (6)：1216–1222.
Zeng L R，Qu S，Bordeos A，Yang C，Baraoidan M，Yan H，Xie Q，Nahm B H，Leung H，Wang G L. 2004. Spotted leaf11，a negative regulator
of plant cell death and defense，encodes a U-box/armadillo repeat protein endowed with E3 ubiquitin ligase activity. Plant Cell，16 (10)：
2795–2808.