全 文 ：© 1994-2009 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. http://www.cnki.net
园 　艺 　学 　报 　2009, 36 (6) : 799 - 806
Acta Horticulturae Sinica
收稿日期 : 2008 - 10 - 06; 修回日期 : 2009 - 02 - 04
基金项目 : 教育部科学技术研究重点项目 (109084) ; 南京农业大学人才资金项目 (804066)3 通讯作者 Author for correspondence ( E2mail: fanggg@ njau1edu1cn; Tel: 025284399069)
基于 EST库的枳 APETALA2基因 cDNA克隆及其
表达分析
宋长年 , 房经贵 3 , 王　晨 , 上官凌飞 , 章　镇
(南京农业大学园艺学院 , 南京 210095)
摘 　要 : 根据物种间同源基因相对保守的特点 , 利用生物信息学方法以拟南芥 A PETALA2 cDNA序列作
为模板 , 对柑橘 EST数据库进行同源检索筛选 , 克隆了柑橘 A PETALA2基因的 cDNA序列 , 并以枳 [ Ponci2
rus trifolia ta (L. ) Raf. ] 花 cDNA为模板 , 根据以上 cDNA序列设计特异引物 , 利用 RACE技术分别获得该
基因的 5′和 3′末端 , 序列拼接后获得枳的 A PETALA2 cDNA全长。该 cDNA全长为 1 980 bp, 命名为 Pt2
A P2。P t2A P2核苷酸序列有一个 1 539 bp完整的开放读码框 (ORF) , 5′末端起始密码子 ATG其始于 290
bp, 3′末端非翻译区为 152 bp, 其中含有 27 bp的 Ploy+ (A)。该基因已在 GenBank基因数据库注册 , 注册
号为 EU883665。推导该 cDNA编码 512个氨基酸 , 与苹果、矮牵牛和拟南芥中相应序列同源性分别为
5911%、5917%和 6318%。序列分析表明 , Pt2A P2除了具备完全保守的核定位信号序列 ( KKSR) 外 , 还具
有两个高度保守的重复序列即 AP2结构域。分别采用半定量 RT2PCR和 SYBR Green I实时定量 RT2PCR方
法分析 Pt2A P2在枳叶、茎、根、花和果等不同器官中的表达水平 , 结果一致表明 Pt2A P2在各个器官中的
表达水平不同 , 花中的表达量最高 , 果实中的表达量最低。
关键词 : 柑橘 ; 枳 ; 花器官发育 ; 基因 ; 表达分析
中图分类号 : S 666; Q 78　　文献标识码 : A　　文章编号 : 05132353X (2009) 0620799208
C lon ing and Expression Ana lysis of A PETALA2 Gene from Poncirus trifolia ta
Ba sed on EST Da taba se
SONG Chang2nian, FANG J ing2gui3 , WANG Chen, SHANGGUAN L ing2fei, and ZHANG Zhen
(College of Horticu lture, N anjing A gricu ltura l U niversity, N an jing 210095, Ch ina)
Abstract: Based on the relative conservation of p lant homologous genes, a full2length citrus homologue
of A PETALA2 was bioinformatically cloned by search of citrus EST database via A rabidopsis tha liana
corresponding sequence. Accordingly, the 5′2 and 3′2end sequences were obtained from cDNA of opening
flower of Poncirus trifolia ta (L. ) Raf. by RACE with two gene2specific p rimers designed on the basis of the
citrus sequence. The 1 980 bp comp lete cDNA , designated as P t2A P2, contained an open reading frame
(ORF) of 1 539 nucleotides and 289 bp of 5′2untranslated region (UTR ) and a 152 bp 3′2UTR. The
sequence has been deposited in GenBank database with the accession number of EU883665. The deduced
am ino acid sequence of P t2A P2 (512 residues) showed 5911% , 5917% , 6318% identity with those ofM alus
dom estica, A rabidopsis tha liana, Petun ia hybrida, respectively. P t2A P2 am ino acid sequence contained a
putative nuclear localization signal sequence ( KKSR ) and two highly conserved AP2 domains. The sem i2
quantitative RT2PCR and SYBR Green IReal2time RT2PCR were emp loyed to analyze the exp ression of P t2A P2
in different organs, revealing sim ilar exp ression p rofiles in leaf, stem, root, flower, fruit, in which the flower
and fruit exhibited the highest and the lowest exp ression, respectively.
Key words: C itrus; Poncirus trifolia ta; flower; gene; exp ression
© 1994-2009 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. http://www.cnki.net
园 　　艺 　　学 　　报 36卷
A PETALA2是拟南芥一系列调节花发育的重要基因之一。A P2编码一个转录因子 , 其最明显的功
能是参与花器官和种子发育调控 (Jofuku et al. , 1994; V ijayraghavan et al. , 2005)。A P2在拟南芥所
有营养器官及种子发育的各个阶段都有表达 ( Kunst et al. , 1989; Shannon & Meeks2W agner, 1993) ,
它不仅决定花器官的发育、花器官数量 (Chen, 2004) , 而且影响种子的产量 (Jofuku et al. , 2005;
Ohto et al. , 2005 )。目前已经从苹果 (周盛梅 等 , 2006 )、草莓 (宿红艳 等 , 2005 )、拟南芥
(Jofuku et al. , 1994)、玉米 (Chuck et al. , 1998; Lauter et al. , 2005)、矮牵牛 (Maes et al. , 2001)
等植物中克隆到了 A P2的同源基因。而有关枳 A PETALA2同源基因的克隆与研究尚未见报道。
枳 [ Poncirus trifolia ta (L. ) Raf. ] 是柑橘的重要砧木 , 也是柑橘学研究的重要材料。它是柑橘基
因组学研究 , 尤其是 EST测序以及柑橘分子生物学研究的重要对象 (Cristofani2Yaly et al. , 2007)。在
枳上开展 A P2基因功能的分析 , 对于利用该基因达到调控花器官发育、童期转变以及提高砧木育种
效率都有重要的理论价值。作者采用生物信息学的方法以拟南芥 A P2的基因序列为模板 , 对柑橘 EST
数据库 (HarvEST: Citrus, 包含了来源于柑橘属和枳属 89个文库的近 23万个 EST序列 ) 进行同源检
索筛选 , 并对候选的表达序列标签 ( exp ressed sequence tags, ESTs) 序列进行反复延伸 , 分别获得柑
橘 A PETALA2 cDNA的全长序列 , 并以枳花 cDNA为模板 , 经 RACE技术和 RT2PCR获得枳的 cDNA全
长 , 命名为 P t2A P2。采用半定量 RT2PCR和荧光定量 PCR方法分析 P t2A P2在不同器官中的表达情况 ,
结果一致显示 P t2A P2在枳叶、茎、根、花、果等各个器官中的表达水平不同 , 从而表明 P t2A P2在不
同的器官中的功能存在着很大的差异。
1　材料与方法
111　电子克隆
根据不同物种间同源基因的核酸序列相对保守的特点 , 在 GenBank的核酸 ( nr/nt) 数据库中检
索拟南芥的 A P2基因序列 (U12546) , 并以 U12546序列为探针对柑橘属和枳属 EST数据库进行
BLAST检索 , 获得与拟南芥 A P2基因同源的柑橘 EST片段 ; 从获得的柑橘 EST片段中选出同源性最
高的一条 CX667315, 再对柑橘 EST数据库进行 BLAST检索 , 得到多条与之高度同源的柑橘 EST序
列 ; 将获得的 EST序列用 DNAStar软件进行首尾拼接 , 获得新的 Contig; 以获得的 Contig反复对柑橘
EST公共数据库进行 BLAST检索、拼接 , 尽可能获得全长 cDNA (张波 等 , 2008)。
112　实验克隆
11211　材料 　枳的叶、茎、根、花和果 (直径 0150 cm) 于 2008年 3月中旬到 5月初采自江苏省太
湖常绿果树技术推广中心 —苏州科学研究所。大肠杆菌 ( Escherich ia coli) 菌株 DH5 (由本实验室保
存。PowerScrip t ⅡTM反转录酶购自 Clontech公司 , DNase酶 Ⅰ、LA2Taq酶、 Ex2Taq酶、pMD218T载
体、dNTP、DNA Marker购自 TaKaRa公司 , Trizol Reagent购自 Invitrogen公司 , 荧光定量染料 SYBR
GreenⅠ购自东洋纺 (上海 ) 生物科技有限公司 , DNA回收试剂盒、DL 2000 Plus DNA Marker为北京
全式金生物技术有限公司生产。各种引物由上海英骏生物技术有限公司 ( Invitrogen) 合成 , 其编号
及序列见表 1。
11212　RNA的提取与纯化 　花组织总 RNA的提取按照 Trizol Reagent说明书进行。mRNA的纯化采
用 Promega公司生产的 PloyA TtractÓ mRNA Isolation System Ⅳ试剂盒进行。
11213　cDNA 合成 　以 mRNA为模板 , 引物 P01反转录合成 cDNA第 1条链 , 引物 P02延伸加帽子 ,
空气加热条件下 42 ℃保温 1 h, 75 ℃保温 10 m in, 冰上冷却 2 m in后 , - 70 ℃保存备用。
11214　基因 3′和 5′末端 PCR扩增 　以 cDNA为模板用引物 P03 /P04进行 PCR扩增获得基因的 3′末
端。反应体系为 50μL: LA2Taq酶 0150μL, 10 ×PCR buffer (Mg2 + p lus) 5μL, dNTP M ixture 4μL,
cDNA 2μL, 引物各 1μL。反应参数为 94 ℃预变性 3 m in; 94 ℃ 30 s, 72 ℃ 3 m in, 5个循环 ; 94 ℃
008
© 1994-2009 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. http://www.cnki.net
　6期 宋长年等 : 基于 EST库的枳 A PETALA2基因 cDNA克隆及其表达分析 　
30 s, 70 ℃ 30 s, 72 ℃ 3 m in, 5个循环 ; 94 ℃ 30 s, 68 ℃ 30 s, 72 ℃ 3 m in, 25个循环 ; 72 ℃延
伸 10 m in。琼脂糖凝胶电泳检测后用 DNA回收试剂盒回收目标片段进行 T/A克隆。DNA测序由上海
博亚生物技术有限公司完成 (下同 )。用引物 P05 /P06进行 PCR扩增获得基因的 5′末端 , 反应参数和
反应体系同 3′末端扩增。
11215　基因 ORF的扩增 　以 cDNA为模板用引物 P07 /P08进行 PCR扩增。反应体系为 50μL: cDNA
2μL, 引物各 2μL, Ex2Taq酶 0150μL, 10 ×PCR buffer (Mg2 + p lus) 5 μL, dNTP M ixture 4 μL,
cDNA 2μL, 引物各 1μL。反应参数同上。
11216　生物信息学分析　利用 DNAMAN5122软件对 ORF、3′末端和 5′末端等 3个序列进行拼接分
析 ; 核苷酸和氨基酸序列分别利用 NCB I的 BLASTn和 BLASTp ( http: / / blast1ncbi1nlm1nih1gov/
B last1cgi) 进行相似性分析。
表 1　引物序列及预期片段大小
Table 1　Sequence of pr im ers and pre2production length
编号
Code
序列
Sequence (5′- 3′)
预期片段大小 / bp
Predicted size ofamp lified p roduct
用途
U se
P01 GCAGGACTGCAGCTGACTGACTAC T30VN cDNA合成
P02 GACCAGTGGTATCAACGCAGAGTACGCGGG cDNA synthesization
P03 AACTGGAAGATGGGAATCTCATATATGGG 1 200 扩增 Pt2AP2基因 3′端
P04 GCAGGACTGCAGCTGACTGACTAC 3′2end amp lification
P05 GACCAGTGGTATCAACGCAGAGTAC 820 扩增 Pt2AP2基因 5′端
P06 GGTGGTAGGATCCGACCAGTGGTATCAACGCAG 5′2end amp lification
P07 GGATCCATGTGGGATCTGAATGACTCGC 1 539 P t2A P2基因 ORF扩增
P08 GAGCTCGGAGGGTCTAACAAGGGAGTGGAATC Comp lete ORF amp lification
P09 GCTGCCTTCCTTGGATGTGGT 150 扩增 18SrRNA
P10 TGCCCGTTGCTCTGATGATTC 18SrRNA amp lification
P11 ATCGTCTAATCTCTCATTTCCTTCAG 113 定量 RT2PCR
P12 TTTCGGTGTCTTTCCTCTCTGG Quantitative RT2PCR
　　注 : 方框和双下划线是相互匹配的引物与接头 ; 下划线为添加的酶切位点 , GAGCTC为 SacⅠ, GGATCC为 B am HⅠ。
Notes: Frame and double underline shading denotesmatching p rimers or adap tors; GAGCTC and GGATCC underlined in p rimers indicates re2
striction enzyme sites of SacⅠ and B am HⅠ.
113　枳 P t2A P2基因的表达分析
分别提取枳叶、茎、根、花和果 (直径 0150 cm) 等器官的总 RNA, 用 DNaseⅠ酶 (RNase free)
消化和氯仿抽提后分别取 2μg以 P01和 P09引物反转录合成的 cDNA 做模板 , 用 NCB I新增工具
Primer2BLAST ( http: / /www1ncbi1nlm1nih1gov/ tools/p rimer2blast) 设计引物 P11和 P12进行半定量
RT2PCR和实时定量 PCR研究 P t2A P2在不同器官中的表达特点。内标基因是利用枳 18S rRNA ( Gen2
Bank accession number AF206997) 的特异性引物 ( P09和 P10) PCR扩增获得的长度为 150 bp的基因
片段。利用 Rotor2Gene荧光定量 PCR仪进行实时定量 RCR的反应体系按 SYBR GreenⅠ ( TOYOBO )
说明书进行 , 其优化后的反应条件为 95 ℃预变性 60 s; 95 ℃ 20 s, 57 ℃ 20 s , 72 ℃ 20 s, 45个循
环。试验 3次重复 , 试验数据用 L inRegPCR (Ramakers et al. , 2003) 和 Excel软件分析。
2　结果与分析
211　柑橘 A PETALA2 cD NA全长的电子克隆
利用拟南芥 U12546为信息探针 , 对柑橘 EST数据库进行 BLAST检索 , 得到一个高相似的 EST
序列 CX667315, 然后以此序列作为种子序列 BLAST检索柑橘 EST数据库 , 将检出的与种子序列同源
性较高的或有部分重叠的 EST序列 (DY269701、 EY809026、 EY794932、CX293333、 EY744342、
108
© 1994-2009 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. http://www.cnki.net
园 　　艺 　　学 　　报 36卷
CK665679) 拼接组装为重叠群 ( Contig) , 再以此重叠群序列重复以上 BLAST检索过程 , 反复进行
EST重叠群序列的拼接和比对 , 最后获得柑橘 A PETALA2的 cDNA全长。
212　枳 P t2A P2 cD NA全长的获得
根据柑橘 A PETALA2的 cDNA全长设计特异引物 P03和 P05, 以枳花器官来源 cDNA为模板 , 分
别与引物 P04和 P06进行 3′RACE和 5′RACE扩增 , 经克隆测序分别得到该基因的 3′末端 (823 bp )
和 5′末端 (1 195 bp)。利用引物 P07和 P08, 以枳花器官来源 cDNA为模板获得长度为 1 539 bp的全
长 ORF。对 3′端、5′端以及 ORF全长拼接获得枳 A PETALA2 cDNA全长为 1 980 bp, 有一个 1 539 bp
完整的开放阅读框 (ORF) , 289 bp的 5′非翻译区 (5′UTR ) , 152 bp的 3′非翻译区 (3′UTR ) 以及
27 bp的 poly+ (A )。该 cDNA推导编码 512个氨基酸 (图 1)。
图 1　P t2A P2 cD NA全长与推导氨基酸序列
黑体 ATG为起始密码子 , 黑体 TAA为终止密码子。方框为两个保守的 AP2结构域即 AP22R1和 AP22R2,
下划线表示富含丝氨酸的转录激活区域。粗线表示 10个碱性氨基酸区域内含核定位信号 ( KKSR)。
F ig. 1　Nucleotide sequence of com plete P t2A P2 cD NA and its deduced am ino ac ids
ATG ( start codon) and TAA ( stop codon) are showed in bold. Two boxes delineate the AP2 domains (AP22R1 and AP22R2).
Underlined residues indicate am ino acids which are highly serine2rich region that serves as a transcrip tional activation domain.
Thick line highlights the putative nuclear localization signal sequence ( KKSR) with 102am ino acids.
208
© 1994-2009 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. http://www.cnki.net
　6期 宋长年等 : 基于 EST库的枳 A PETALA2基因 cDNA克隆及其表达分析 　
213　枳 A PETALA2氨基酸序列分析
序列分析表明 P t2A P2编码的氨基酸与其它植物的 AP2氨基酸有着高度保守的序列即 A P2结构
域 , 该结构域可以识别 DNA顺式作用元件 (Cis2acting Element) 并与之结合 ( Kim et al1, 2005)。在
其第 146～156氨基酸之间还含有 1个碱性区域 , 内含核定位信号 KKSR (Chelsky et al1, 1989)。在
其 N端第 13～54氨基酸之间有一富含丝氨酸的转录激活区域作为 3个经典的转录因子序列之一 (另
外两个是 A P1和 L FY) 具有促进该基因转录的作用 (M ichell & Tian, 1989)。以上这些结果表明 , 我
们已经从枳中分离出 A P2的同源基因。用 DNAMAN5122软件对枳与苹果 (周盛梅 等 , 2006)、拟南
芥 (Jofuku et al. , 1994)、矮牵牛 (Maes et al. , 2001) 等 A P2氨基酸序列比较 (图 2) , 结果表明 4
个蛋白有着完全相同的核定位信号序列 KKSR (Chelsky et al. , 1989) 以及它们的两个 A P2结构域均
图 2　P t2A P2推导序列与苹果、拟南芥和矮牵牛的 AP2氨基酸的同源性比较
相同氨基酸用蓝色域表示 ; 3氨基酸与 2氨基酸相似分别用红色或绿色域表示 ; 缺失用省略号表示。序列注册号为 :
Poncirus trifoliata ( EU883665) ; M alus ×dom estica (AF332215) ; A rabidopsis thaliana (U12546) ; Petunia ×hybrida (AF132001)。
F ig. 2　Com par ison of the am ino ac id sequence of P t2A P2 ( EU883665) w ith those of M a lus dom estica ( AF332215) ,
A rabidopsis tha liana ( U12546) and Petun ia ×hybrida ( AF132001)
B lue, red and green boxes highlighted the four identical am ino acids, three same am ino acids and
two same am ino acids, respectively. Gap s are shown as dots.
308
© 1994-2009 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. http://www.cnki.net
园 　　艺 　　学 　　报 36卷
具有高度的同源性 (分别为 9519%和 9613% )。枳 P t2A P2与苹果 M 2A P2 (AF332215)、拟南芥 A P2
(U12546)、矮牵牛 PhA P2A (AF132001) 的同源性 (5911%、5917%、6318% ) 又表明它们在功能
上可能存在着一定的不同。
214　P t2A P2在枳不同器官中的表达分析
采用半定量 RT2PCR法对 P t2A P2基因进行器官特异性表达分析 , 结果 (图 3) 表明 , 在叶、茎、
根、花、果等各器官均扩增出大小约为 120 bp的片段 , 经克隆测序大小为 113 bp, 且该片段均为 P t2
A P2的 3′UTR片段。P t2A P2在上述器官均有表达 , 但有一定差异 , 在花中的表达水平明显比其它器
官高 , 其次在根中 , 再次在叶和茎中 , 在果中的表达水平最低。
图 3　半定量 RT2PCR检测 P t2A P2基因在枳不同组织中的表达
1、2、3、4、5分别为叶、茎、根、花、果 (直径 0150 cm)。
F ig. 3　Expression of P t2A P2 gene in d ifferen t tissues of Poncirus trifo lia te by sem i2quan tita tive RT2PCR
1. Leaf; 2. Stem; 3. Root; 4. Flower; 5. Fruit ( diameter is 0150 cm).
进一步用荧光定量 PCR方法检测在各器官中的表达量 , 结果 (图 4) 表明 P t2A P2在花中的表达
量最高 , 其次为根 , 在果实中的表达量最少 , 叶和茎的表达量相当。P t2A P2在枳以上等各个器官均
能表达反映该基因编码的蛋白是一种普遍的转录因子 , 在枳的生长阶段的转变、花器官形成、种子发
育乃至果实发育等整个生长发育阶段可能都起着重要的作用。
图 4　荧光定量 PCR检测 P t2A P2基因在枳不同组织中的表达
对照为水。每个柱形图表示 P t2AP2在不同器官中的相对表达量。试验重复 3次 , 标准误差在图中标出。
F ig. 4　Expression of P t2A P2 gene in d ifferen t tissues from Poncirus trifolia ta by fluorescen t quan tita tive PCR
Control is water. Columnar diagram rep resents the relative exp ression levels of P t2A P2
in different organs. Each experiment was repeated three times
and standard error was pointed with bars in diagram.
408
© 1994-2009 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. http://www.cnki.net
　6期 宋长年等 : 基于 EST库的枳 A PETALA2基因 cDNA克隆及其表达分析 　
3　讨论
基于对 AP2突变体的分析 , 人们发现 A P2基因不仅在花瓣和萼片的形成过程中起重要作用 , 而
且与 A P1、L FY及 CAL 等花的分生组织决定基因相互作用 , 参与花的分生组织的早期建立 ( Kunst
et al. , 1989; Shannon & Meeks2W agner, 1993)。在玉米中的研究发现 , g lossy15在幼叶向成熟叶以及
营养生长向生殖生长的转型方面具有重要调控作用 (Lauter et al. , 2005) , 因此该基因在植物的整个
生长发育过程 , 尤其是发育阶段的转变与生殖器官的发育中发挥重要作用。本研究从枳花 cDNA中成
功分离出 A P2的同源基因 P t2A P2, 该基因编码的蛋白质具有 A P2家族典型的特征 , 即含有保守性很
高的两个识别并结合 DNA顺式作用元件的 A P2结构域 ( Kim et al. , 2005)、一个丝氨酸丰富的转录
激活结构域 (M ichell & Tian, 1989) 和一段核定位序列 KKSR (Chelsky et al. , 1989) , 这也说明 P t2
A P2的编码产物亦为转录因子。
氨基酸序列分析表明 , P t2A P2与拟南芥 A P2 ( Jofuku et al. , 1994)、矮牵牛 PhAP2A (Maes et
al. , 2001) 的氨基酸序列同源性分别为 5917% (U12546) 和 6318% (AF132001) , 说明在核定位信
号序列和 A P2结构域之外的序列存在一定差别 , 因此这些物种的 A P2同源基因的功能可能存在一定
的差异。
Jofuku等 (1994) 报道 , A P2不仅在拟南芥的花分生组织和四轮花器官中表达 , 在茎、叶等营养
器官中亦有表达。宿红艳等 (2005) 采用 RT2PCR方法分析 SA P2在草莓不同组织中的表达情况 , 结
果显示 SA P2在草莓营养组织、花芽以及不同花器官中均有表达。本试验通过半定量 RT2PCR和荧光
定量 PCR研究结果发现 P t2AP2在枳叶、茎、根、花、果等各个器官均有表达 , 但表达水平有着一定
的差异 , 其中在花和果实中的表达量最高与最低。基因表达的结果说明了 P t2A P2对于枳营养与生殖
器官的发育都具有一定作用 , 但作用的大小有着差异。本研究在进行表达分析时 , 为了保证半定量
RT2PCR和实时荧光定量 PCR引物的可靠性把其引物设计在该基因的 3′非翻译区 (3′UTR ) 而且对半
定量 PCR产物克隆测序 , 且后续的 southern杂交显示 (文中未列出 ) 表明 P t2A P2在枳的基因组中为
单一的拷贝存在 , 这与拟南芥的 A P2 (Jofuku et al. , 1994) 和矮牵牛的 PhA P2A (Maes et al. , 2001)
研究结果是一致的。
为了更好地认识 P t2A P2的功能 , 我们将利用已经构建的 P t2A P2正义和反义表达载体转化枳开展
进一步的研究。
References
Chelsky D, Ralph R, Jonak G. 1989. Sequence requirements for synthenic pep tide mediated translocation to the nucleus. Mol Cell B iol, 9:
2487 - 2492.
Chen X. 2004. A m icro RNA as a translational rep ressor of APETALA2 in A rabidopsis flower development. Science, 303: 2022 - 2025.
Chuck G, Meeley R B, Hake S. 1998. The control of maize sp ikelet meristemfate by the APETALA22like gene indeterm inate sp ikelet 1. Genes
Dev, 12: 1145 - 1154.
Cristofani2Yaly M, Berger I J, Targon M L P N, Takita M A, Dorta S O, Freitas2A stúa J, Souza A A, Boscariol2Camargo R L, ReisM S, Macha2
do M A. 2007. D ifferential exp ression of genes identified from Poncirus trifoliata tissue inoculated with CTV through EST analysis and in silico
hybridization. Genet and Mol B io, 30: 972 - 979.
Jofuku K D, Boer B G W D, Montagu M V, Okamuro J K. 1994. Control of A rabidopsis flower and seed development by the homeotic gene A P2
ETALA2. Plant Cell, 6 (9) : 1211 - 1225.
Jofuku K D, Om idyar P K, Gee Z, Okamuro J K. 2005. Control of seed mass and seed yield by the floral homeotic gene A PETALA2. Proc Natl
Acad Sci USA, 102 (8) : 3117 - 3122.
Kim S, Soltis P S, W all K, SoltisD E. 2005. Phylogeny and domain evolution in the APETALA22like gene fam ily. MolB iol Evol, 23: 107 - 120.
Kunst L, Klenz J E, Martinez2Zapater J, Haughn GW. 1989. AP2 gene determ ines the identity of perianth organs in flowers of A rabidopsis thali2
508
© 1994-2009 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. http://www.cnki.net
园 　　艺 　　学 　　报 36卷
ana. Plant Cell, 1: 1195 - 1208.
Lauter N, Kampani A, Carlson S, Goebel M, Moose S P. 2005. m icroRNA172 down2regulates glossy15 to p romote vegetative phase change in
maize. Proc Natl Acad Sci USA, 102 (26) : 9412 - 9417.
Maes T, van de Steene N, Zethof J, Karim iM, DpiHauw M, Mares G, van Montagu M, Gerats T. 2001. Petunia AP22like genes and their role in
flower and seed development. Plant Cell, 13 (2) : 229 - 244.
Ohto M, Fischer R, Goldberg R B, Nakamura K, Harada J J. 2005. Control of seed mass by APETALA2. Proc Natl Acad Sci USA, 102 (8) :
3123 - 3128.
Ramakers C, Ruijtera J M, Lekanne Dep reza R H, Moorman A FM. 2003. A ssump tion2free analysis of quantitative real2time polymerase chain re2
action ( PCR) data. Neuroscience Letters, 339: 62 - 66.
Shannon S, Meeks2W agner D R. 1993. Genetic interactions that regulate inflorescence development in A rabidopsis. Plant Cell, 5: 639 - 655.
Su Hong2yan, Zhou Sheng2mei, W ang Lei, Zhang Xian2sheng, Shu Huai2rui. 2005. Cloning and exp ression analysis of APETALA2 homologous
genes in strawberry. Acta Botanica Boreali2Occidentalia Sinica, 25 (10) : 1937 - 1942. ( in Chinese)
宿红艳 , 周盛梅 , 王　磊 , 张宪省 , 束怀瑞. 2005. 草莓 APETALA2同源基因的克隆及表达分析. 西北植物学报 , 25 ( 10) : 1937 -
1942.
V ijayraghavan U, Prasad K, Meyerowitz E. 2005. Specification and maintenance of the floral meristem: Interactions between positively2acting p ro2
moters of flowering and negative regulators. Current Science, 89 (11) : 1835 - 1843.
Zhang Bo, L i Xian, Chen Kun2song. 2008. Molecular cloning of lipoxygenase gene fam ily members in kiwifruit based on EST database. Acta
Horticulturae Sinica, 35 (3) : 337 - 342. ( in Chinese)
张　波 , 李　鲜 , 陈昆松. 2008. 基于 EST库的猕猴桃脂氧合酶基因家族成员的克隆. 园艺学报 , 35 (3) : 337 - 342.
Zhou Sheng2mei, Su Hong2yan, W angLei, Zhang Xian2sheng, Shu Huai2rui. 2006. Cloning and transformation of apeta la2 homologues genes from
app le. Acta Horticulturae Sinica, 33 (2) : 239 - 243. ( in Chinese)
周盛梅 , 宿红艳 , 王　磊 , 张宪省 , 束怀瑞. 2006. 苹果 apetala2同源基因的克隆和转化研究. 园艺学报 , 33 (2) : 239 - 243.
图书推荐
　　　《中国蔬菜品种志》　　　
本书由中国农业科学院蔬菜花卉研究所主编 , 已于 2002年 9月出版发行。全书分上、下卷 , 1～6章为上卷 , 包
括根菜类、白菜类、芥菜类、甘蓝类、绿叶菜类及葱蒜类 , 计 2 263个品种 , 1 347页 ; 7～12章为下卷 , 包括瓜类、
茄果类、豆类、薯芋类、水生蔬菜类和多年生蔬菜类 , 计 2 550个品种 , 1 177页。入志的品种中 , 地方品种占 90%
以上 , 少量在全国栽培时间较长、种植面积较大的一代杂种也选入其中。本书较全面系统而又有重点地反映了中国丰
富的蔬菜品种资源概貌、研究成果及育种水平 , 可供蔬菜科研、教学、生产及种子公司、农业行政单位的人员参考。
本书出版后受到读者普遍好评 , 现尚有少量存书 , 特以优惠价格 490元 (上、下卷 ) 提供给读者 (原价 980元 )。
购书者请通过邮局汇款至北京中关村南大街 12号中国农科院蔬菜花卉所 《园艺学报 》编辑部 , 邮编 100081。
608