全 文 ：园 艺 学 报 2011，38（增刊）：2548 http: // www. ahs. ac. cn
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收稿日期：2011–08–17
基金项目：浙江省农业科学院科技创新项目
* 通信作者（E-mail：hwangling@sina.com；Tel：0571-86404376）
结球甘蓝下胚轴原生质体培养再生植株
黄 玲，钟新民*，王五宏，李必元，岳智臣
（浙江省农科院蔬菜研究所，杭州 310021）
对影响结球甘蓝下胚轴原生质体培养的主要因素进行研究，以初步建立适合结球甘蓝原生质体
游离、纯化、收集、培养以至再生出完整植株的实用技术体系，为结球甘蓝的非对称细胞融合及品
种改良与创新等研究奠定基础。
以早熟型结球甘蓝品种 QL为材料，使用不同浓度组合的纤维素酶（Cellulase R-10）与果胶酶
（Pectolase Y-23）混合酶溶液，对 QL下胚轴进行酶解，游离纯化，分别计算所得原生质体产量及
活力。调整原生质体密度至约 105个· mL-1，采用 B5改良培养基（B5无机成分 + B5有机成分 + 2–
脱氧–D–核糖 0.125 g · L-1 + 甘露醇 45.5 g · L-1 + 山梨醇 45.5 g · L-1 + 2.5 g · L-1葡萄糖 + 水解酪
蛋白 0.15 g · L-1）作为原生质体培养基，使用固液双层培养法进行原生质体培养。原生质体培养至
10 d时，观察原生质体分裂情况，并统计细胞分裂频率。培养至 40 d时，统计植板率，并开始将再
生微愈伤组织移至含不同激素的固体增殖培养基上培养。培养 3 ~ 4周，待愈伤组织逐渐长大并转
绿后，将其分别移入不同分化培养基中进行芽分化培养，4 周后观察并统计出芽率。分化的芽长至
1.5 cm左右长时，将绿芽或丛生芽切下，移至无激素的MS固体培养基中生长 7 ~ 10 d，再移入生根
培养基（1/2MS + IBA 0.2 mg · L-1）中，于培养室中进行正常光照培养，使其生根，长成再生小植株。
3 ~ 4周后，取根系发达的再生植株进行正常炼苗，转移至温控玻璃温室中生长。
试验结果表明：（1）进行原生质体的游离，以 2% Cellulase R-10 + 0.05% Pectolase Y-23 + 9CPW +
5 mmol · L-1 MES酶液组合的酶解效果最佳。其对 4 d苗龄的结球甘蓝下胚轴原生质体进行酶解，
16 h后对游离的原生质体进行纯化，得到原生质体产量为 16.85 × 105个 · g-1，所获得原生质体活力
为 86.3%。（2）在原生质体的培养及植株再生中，以 B5改良培养基 + NAA 0.2 mg · L-1 + 2,4-D 0.5
mg · L-1 + 6-BA 0.2 mg · L-1的原生质体培养效果最佳，采用固液双层培养的方法，10 d后细胞分裂
频率与 40 d后植板率分别为 20.8%和 0.53%。由MS培养基添加 NAA 0.025 mg · L-1 + 2,4-D 0.025
mg · L-1 + 6-BA 0.1 mg · L-1对结球甘蓝下胚轴原生质体微愈伤组织增殖效果好。MS培养基附加 6-BA
2 mg · L-1，ZT 0.5 mg · L-1对结球甘蓝下胚轴原生质体再生愈伤组织芽分化效果较佳。在结球甘蓝原
生质体培养再生植株过程中，在芽分化培养基中添加 AgNO3 7.5 mg · L-1，能明显提高再生绿芽的分
化，出芽率由 51.3%提高至 65.2%，褐化率下降约 5个百分点。取生长状态好的再生绿芽，以 1/2MS
附加 IBA 0.2 mg · L-1为生根培养基进行生根培养，能全部生根获得完整再生植株，植株再生率为
100%。试验最终获得结球甘蓝下胚轴原生质体再生植株 148株。

关键词：结球甘蓝；原生质体培养；下胚轴；植株再生
中图分类号：S 635.1 文献标识码：A 文章编号：0513-353X（2011）S-2548-01