全 文 ：园 艺 学 报 2011，38（增刊）：2545 http: // www. ahs. ac. cn
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收稿日期：2011–08–01
基金项目：农业部大宗蔬菜产业技术体系项目（CARS-25）；中央级公益性科研院所基本科研业务费专项（201109）；农业部园艺作物
遗传改良重点开放实验室项目
* 通信作者（E-mail：zhuangmu@mail.caas.net.cn；Tel：010-82108756）
甘蓝自交系 S 单元型的快速分类鉴定
田 磊，庄 木*，苗雯雯，方智远，刘玉梅，杨丽梅，张扬勇
（中国农业科学院蔬菜花卉研究所，北京 100081）
在甘蓝杂种优势利用中，自交不亲和系和雄性不育系是配制杂种一代的两条主要途径。近年来
甘蓝雄性不育系在杂种优势利用中的地位越来越重要，而利用自交亲和系作为保持系和杂交种的父
本，由于它们的繁殖不需人工授粉，因而可大幅降低种子生产成本。甘蓝属于孢子体自交不亲和体
系，在遗传上由一个高度多态性的 S位点控制，其中 SRK（S-locus receptor kinase，SRK）基因是雌
蕊柱头中表达的自交不亲和识别反应的决定因子。根据序列的相似性以及 S单元型之间的显隐性关
系，芸薹属自交不亲和性分为两大类：ClassⅠ型和 ClassⅡ型。其中 ClassⅠ为花粉显性，表现强自
交不亲和；ClassⅡ为花粉隐性，表现弱自交不亲和。快速、准确鉴定甘蓝材料的自交不亲和性以及
携带的 S单元型，可以指导杂交组合的配置，避免杂交不结实的发生，加速新品种的选育。本研究
中通过 PCR 扩增 SRK 基因序列，初步分析供试甘蓝材料 S 单元型的类型，可为杂交组合选配提供
参考依据。
以来源于不同国家或地区、不同球形（尖球、圆球、扁圆形）、选育的不同世代（F3、F4、高代
自交系等）、适应不同栽培季节（春甘蓝、秋甘蓝、越冬甘蓝）的 107个甘蓝种质资源的 154个株系
为试验材料。利用改良的 CTAB 法提取材料叶片的基因组 DNA。根据国内外相关报道搜集了 2 对
SRK基因引物（ClassⅠ型：PK1/PK4；ClassⅡ型：KD4/KD7），并根据公开报道的 SRK基因序列保
守区设计通用性引物 DF/DR。
ClassⅠ型SRK基因引物PK1/PK4在供试甘蓝材料中扩增得到大约950 bp的条带；ClassⅡ型SRK
基因引物 KD4/KD7扩增得到约 1 100 bp的条带。结果表明：在 154个甘蓝株系材料中，除 14个株
系没有扩增产物外，有 49个株系得到了约 950 bp的扩增条带，推测它们属于 ClassⅠ型；81个株系
材料得到了约 1 100 bp的扩增条带，推测它们属于 ClassⅡ型；此外，有 10个株系同时含有Ⅰ型和
Ⅱ型两种 SRK 基因扩增条带，初步推测这些材料在 S 位点上可能是杂合的，属于杂合体。引物对
DF/DR在所有甘蓝材料中均扩增出约 750 bp的条带，这有助于引物 PK1/PK4和 KD4/KD7无扩增产
物的 14个株系的序列克隆分析及 S单元型的鉴定。对扩增得到的目标片段利用试剂盒法进行回收，
并分别连接到 pMD18-T载体上，转化感受态大肠杆菌 Top10，进行蓝白斑筛选，然后挑取阳性克隆
进行测序，进而确定试验材料具体的 S单元型等后续工作正在进行中。

关键词：甘蓝；自交不亲和性；S单元型；SRK基因
中图分类号：S 635.1 文献标识码：A 文章编号：0513-353X（2011）S-2545-01