全 文 ：园 　艺 　学 　报 　2006, 33 (4) : 836～838
Acta Horticulturae Sinica
收稿日期 : 2005 - 08 - 16; 修回日期 : 2005 - 11 - 02
基金项目 : 中国科学院重要方向性项目 ( KSCX22SW 2123)3 通讯作者 Author for correspondence ( E2mail: shhli@ ibcas1ac1cn)
葡萄白藜芦醇提取和 HPLC定量测定适宜条件的
研究
李晓东 1, 2 　李绍华 23 　闫树堂 2
(1 中国农业大学农学与生物技术学院 , 北京 100094; 2 中国科学院植物研究所 , 北京 100093)
摘 　要 : 研究了浸提溶剂种类、浸提方式、浸提温度和浸提时间对葡萄果皮和种子白藜芦醇 (Res)
提取的效果。结果表明 , 果皮采用乙酸乙酯浸提溶剂 , 研磨后 25℃下浸提 24 h, 种子采用甲醇浸提溶剂 ,
研磨后 25℃下浸提 48 h, Res浸提效果最好。上述提取条件下 , 采用高效液相色谱测定 ‘北醇 ’葡萄果皮
和种子中的 Res含量分别为 3151μg·g- 1 FM和 8181μg·g- 1 FM。反式 Res在检测波长为 306 nm条件下 ,
采用等浓淋洗能很好地被检测到。
关键词 : 白藜芦醇 ; 葡萄 ; 提取 ; 测定 ; HPLC
中图分类号 : S 66311; Q 946　　文献标识码 : A　　文章编号 : 05132353X (2006) 0420836203
O ptim iza tion for Extraction and D eterm ina tion of Resvera trol in Grapes by
HPLC
L i Xiaodong1, 2 , L i Shaohua23 , and Yan Shutang2
(1 College of A gronom y and B iotechnology, China A gricultural U niversity, B eijing 100094, Ch ina; 2 Institu te of B otany, Chinese
A cadem y of Sciences, B eijing 100093, China)
Abstract: The study focused on the extraction p rocedure, including solvent type, extracting way, tem2
perature and duration, and the determ ination of resveratrol in grape skins and seeds by HPLC. The results
showed that the op timum condition for the extraction of resveratrol in grape skins was extracted in ethyl acetate
for 24 hour at 25℃ after grinding and the op timun condition for the grinded seedswas extracted in methanol for
48 hours at 25℃, and for the grinded seeds. The highest Res content determ ined by HPLC in ‘Beichun’
grape was 3151μg·g- 1 FM and 8181μg·g- 1 FM in skins and seeds under the above conditions, respective2
ly. Res can be determ ines by HPLC under isocratic with wave length of 306 nm.
Key words: Resveratrol; Grapes; Extraction; Determ ination; HPLC
1　目的、材料与方法
白藜芦醇 (Res) , 化学名称为芪三酚 (3, 4pi, 52trihydroxystilbene) , 具有较强的抗氧化功能 , 在
抗癌、防治心血管疾病等方面具有重要作用〔1, 2〕。葡萄皮、籽中富含 Res, 是具有重要开发价值的潜
在天然产物〔3〕。Res定量测定主要有高效液相色谱法 (HPLC)、气谱 —质谱法 ( GC2MS)、毛细管电
泳法 (CE) 等〔4〕, 其中 HPLC具有高效、快速、高灵敏度、操作简便等优点 , 是 Res定量测定中应
用最为广泛的方法〔3, 5, 6〕。HPLC定量测定葡萄组织中 Res含量的色谱条件已得到认同 , 但葡萄组织中
的 Res浸提 , 不同研究者采用不同的有机溶剂 , 如 80%乙醇〔5〕, 乙酸乙酯〔3〕, 甲醇〔6〕等 , 但尚无不
同溶剂浸提葡萄组织中 Res含量的比较研究。此外浸提时的温度及时间长短也对 Res的提取量有一定
影响。本文报道了以 ‘北醇 ’葡萄的果皮和种子为试材 , 进行溶剂种类、浸提的方式、温度及时间
对 Res提取效果的比较结果 , 以期为葡萄组织中 HPLC定量测定 Res含量提供可靠的技术和方法。
　4期 李晓东等 : 葡萄白藜芦醇提取和 HPLC定量测定适宜条件的研究 　
高效液相色谱采用 Summ itTM HPLC系统 (D ionex P680泵 ) , 检测器 : PDA2100二极管阵列检测
器 ; 色谱柱 : Inertsil ODS23 (5μm, 250 mm ×416 mm I. D. ) ; 柱温 : 25℃; 进样量 : 10μL; 流速 :
0160 mL·m in - 1。通过 PDA在 190～380 nm范围内对标准反式 Res ( Sigma公司 ) 进行光谱扫描 , 获
得 Res的光谱图 , 确定其适宜的检测波长。在已确定的适宜检测波长条件下 , 比较研究了等浓淋洗和
梯度淋洗对 Res检测结果的影响。梯度淋洗色谱条件为 : 二元梯度洗脱 , CH3 CN ∶H2 O ( 0 m in,
10∶90; 10 m in, 50 ∶50; 15 m in, 50∶50; 20 m in, 10 ∶90; 25 m in, 10 ∶90 )。等浓淋洗色谱条件 :
CH3 CN∶H2 O (0～18 m in, 40∶60)。
根据前面的研究结果 , 采用等浓淋洗色谱条件 , 用 4种不同的浸提溶剂 (100%甲醇 , 100%乙酸
乙酯 , 80%乙醇 , 50%甲醇 + 50%乙酸乙酯 ) , 种子采用浸泡和研磨浸提方式 , 果皮只采用研磨浸提
方式 , 在两种不同温度条件 (4℃和 25℃) 和 4种不同浸提时间 ( 12, 24, 36和 48 h) 下对比研究
了 ‘北醇 ’果皮和种子中 Res提取效率 (μg·g- 1 FM ) 的差异。采用 L16 (45 ) 正交试验设计 , 3次
重复。
2　结果与分析
211　Res的适宜检测波长
通过 PDA在 190～380 nm范围内对标准反式
Res进行光谱扫描 , 得到 Res光谱图 (图 1 )。
Res吸收光谱存在肩峰结构 , 在 30612 nm 和
31816 nm附近有较大吸收峰 , 且呈现左肩峰较高
右肩峰较低结构。因此 , 306 nm为 Res的适宜检
测波长。
212　等浓淋洗和梯度淋洗对 Res定量检测的影响
等浓淋洗和梯度淋洗均能够定量检测 Res,
但获得的 HPLC图谱质量存在差异 (图 2)。等浓
淋洗测试时间短 , 样品出峰良好 , 基本无杂质干
扰峰 , 能快速方便地定量 Res, 优于梯度淋洗。
图 1　Res标样的 190～380 nm光谱扫描图
F ig. 1　190 - 380 nm scann ing spectrogram of
resvera trol standard
图 2　等浓淋洗 (左 ) 和梯度淋洗 (右 ) 样品 Res HPLC图谱
F ig. 2　Sam ple Res HPLC map under isocra tic ( left) and grad ien t ( r ight) r in se
213　提取条件对葡萄果皮和种子 Res含量的影响
如表 1所示 , 浸提溶剂的种类、浸提温度、浸提时间对葡萄果皮中 Res的提取效果是 : 浸提溶剂
(A) >浸提时间 (D ) >浸提温度 (B ) , 最优处理组合是 A2 B4D2 , 即用乙酸乙酯做浸提溶剂 , 在
25℃条件下浸提 24 h, 提取量最高 , 达 3151μg·g- 1 FM。对葡萄种子中 Res的提取效果是 : 浸提方
式 (C) >浸提温度 (B ) >浸提溶剂 (A ) >浸提时间 (D ) , 最优处理组合是 A1 B4 C4 D4 , 即用甲
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园 　　艺 　　学 　　报 33卷
醇做浸提溶剂 , 采取研磨浸提方式 , 在 25℃条件下浸提 48 h, 提取量最高 , 达 8181μg·g- 1 FM。各
因素间的差异均达显著或极显著水平。
表 1　‘北醇’葡萄果皮和种子 Res提取试验结果
Table 1　Res extraction exper im en ta l results of grape sk in s and seeds
处理
Treat2
ment
果皮 Skins
A
溶剂
Solvent
B
温度 Tem2
perature (℃)
D
时间
Time ( h)
Res
(μg·g - 1
FM)
种子 Seeds
A
溶剂
Solvent
B
温度
Tempera2
ture (℃)
C
方式
W ay
D
时间
Time ( h)
Res
(μg·
g - 1 FM)
1 A1 (甲醇 Methanol) B1 (4) D1 (12) 0188 A1 B1 C1 (浸泡 Soaking) D1 0148
2 A1 B2 (4) D2 (24) 2122 A1 B2 C2 (浸泡 Soaking) D2 0125
3 A1 B3 (25) D3 (36) 2139 A1 B3 C3 (研磨 Grinding) D3 4187
4 A1 B4 (25) D4 (48) 1183 A1 B4 C4 (研磨 Grinding) D4 8181
5 A2 (乙酸乙酯 Ethyl acetate) B1 D3 1184 A2 B1 C2 D3 0173
6 A2 B2 D4 1175 A2 B2 C1 D4 0168
7 A2 B3 D1 2106 A2 B3 C4 D1 2196
8 A2 B4 D2 3151 A2 B4 C3 D2 3128
9 A3 (80%乙醇 80% ethanol) B1 D4 1189 A3 B1 C3 D4 2147
10 A3 B2 D3 2125 A3 B2 C4 D3 1135
11 A3 B3 D2 2136 A3 B3 C1 D2 0158
12 A3 B4 D1 1183 A3 B4 C2 D1 0181
13
　
A4 (50%甲醇 + 50%乙酸乙酯
50%methanol + 50% ethylacetate)
B1
　
D2
　
1128
　
A4
　
B1
　
C4
　
D2
　
1144
　
14 A4 B2 D1 1173 A4 B2 C3 D1 1119
15 A4 B3 D4 1146 A4 B3 C2 D4 1119
16 A4 B4 D3 1132 A4 B4 C1 D3 1116
R 0184 0165 0172 2136 2165 2191 1193
参考文献 :
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