全 文 ：园 　艺 　学 　报 　2007, 34 (4) : 859 - 864
Acta Horticulturae Sinica
收稿日期 : 2007 - 03 - 14; 修回日期 : 2007 - 06 - 04
基金项目 : 教育部重点项目 ; 湖南省教育厅青年基金项目 (10124586) ; 国家林业局重点项目 (2006212) ; 湖南省自然科学基金
项目 (9347) ; 湖南省科技计划项目 (5014) ; 中南林学院引进人才项目 (10120023)
白梨品种 4个新 S基因的分离与鉴定
乌云塔娜 1, 2 , 谭晓风 1, 2 , 曹玉芬 3 , 张　林 1, 2 , 邓建军 1, 2
(1 中南林业科技大学经济林育种与栽培国家林业局重点实验室 , 长沙 410004; 2 中南林业科技大学资源与环境学院 ,
长沙 410004; 3 中国农业科学院果树研究所 , 辽宁兴城 125100)
摘 　要 : 利用 S1～8 2RNase氨基酸保守序列 ‘FTQQYQ’和 ‘ IIW PNV’设计兼并引物 , 对白梨 4个品种
冬黄、新梨一号、红皮酥和博山池的基因组 DNA进行 PCR扩增。PCR产物限制性酶切分析显示 : 新梨一
号和冬黄各含有一个 S8 -等位基因。DNA序列测定和生物信息学分析表明 , 这 4个品种中含有与已报道的
S1～19等位基因有差异的 S基因 , 经分析鉴定为新的 S等位基因 , 分别命名为 S20 - 、S22 - 、S26 - 、S27 - 等
位基因 ( GenBank登录号分别为 : AY250988、AY250990、AY339396、AY339397)。冬黄、新梨一号、红皮
酥和博山池的 S基因型分别为 S8 S20、S8 S22、S12 S26和 S19 S27。
关键词 : 白梨 ; 自交不亲和性 ; S -等位基因 ; S基因型
中图分类号 : S 66112　　文献标识码 : A　　文章编号 : 05132353X (2007) 0420859206
Isola tion and Iden tif ica tion of Four New S 2RNa se Genes of W h ite Pear
( Pyrus bre tschne ideri)
WUYUN Ta2na1, 2 , TAN Xiao2feng1, 2 , CAO Yu2Fen3 , ZHANG L in1, 2 , and DENG J ian2jun1, 2
(1 Central2south Forestry U niversity, Key Laboratory of N on2w ood Forest Product of Forestry M in istry, Changsha 410004, China;
2 School of Resources and Environm ent, Central2south Forestry U niversity, Changsha 410004, Ch ina; 3 Fru it Tree R esearch Insti2
tu te, Ch inese A cadem y of A gricu ltura l Sciences, X ingcheng, L iaon ing 125100, China)
Abstract: PCRs were performed on genom ic DNA s of four Chinese white pear ( Pyrus bretschneideri) culti2
vars Donghuang, Xinliyihao, Hongp isu and Boshanchi using degenerate p rimers derived from conserved am ino
acids FTQQYQ and anti2IIW PNV of Japanese pear S1 - 8 2RNases. Restricted digestion analysis of PCR p roducts
revealed that Xinliyihao and Donghuang had a common S8 2allele. Sequencing and bioinformatics analysis of un2
digested PCR p roduct showed that four alleles from the four cultivarswere distincted from published S1 - 19 2alleles
at the DNA and deduced am ino acid sequences level, thereby being identified as new alleles. They were named
as S20 2, S22 2, S26 2 and S27 2alleles, respectively ( GenBank accession numbers AY250988, AY250990,
AY339396 and AY339397). Finally, the four cultivars were S 2genotyped as follows: Donghuang (S8 S20 ) , Xin2
liyihao (S8 S22 ) , Hongp isu (S12 S26 ) and Boshanchi (S19 S27 ).
Key words: Pyrus bretschneideri; Self2incompatibility; S 2allele; S 2genotype
梨具有配子体自交不亲和特性 , 无论是配置授粉品种或人工授粉 , 首先要考虑品种间的亲和性。
而梨品种间是否亲和与其自交不亲和基因型有直接关系。两个品种的 S基因型相同 , 则表现为杂交不
亲和 , 否则为杂交亲和 ( Sassa et al. , 1993; N rioka et al. , 1996)。因此 , 梨自交不亲和基因的分离
鉴定及品种自交不亲和基因型的确定 , 可为梨生产及杂交育种提供重要的理论依据。日本科学家通过
田间杂交和分子生物学等方法从日本梨 ( Pyrus pyrifolia Nakai) 品种中鉴定了 S1 ～S9等位基因 , 确定
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了近 60个日本梨品种的 S基因型 (H iratsuka, 1992a, 1995, 1998; Sassa et al. , 1992, 1993; Norioka
et al. , 1995; Shin et al. , 1995; Ishim izu et al. , 1996, 1999; N rioka et al. , 1996; U shijima et al. ,
1998) ; Kim等 (2002) 用分子生物学方法从韩国栽培的砂梨品种中鉴定了 S10等位基因 , 确定了 20
多个亚洲梨品种的 S基因型 ; 我国利用杂交试验和分子生物学方法从中国砂梨和白梨中鉴定了 S11 ～
S19、S21等位基因 , 确定了 50多个梨品种的 S 基因型 (谭晓风 等 , 2005a, 2005b; 乌云塔娜 等 ,
2005, 2006a, 2006b)。本研究从 4个白梨品种中分离鉴定了 4个新的 S基因 , 并确定了相关白梨品
种的 S基因型 , 为梨丰产栽培和遗传改良提供科学依据。
1　材料与方法
111　植物材料与 PCR引物
从中国农业科学院果树研究所 (辽宁兴城 ) 国家梨种质资源圃采集 ‘冬黄 ’、‘红皮酥 ’、‘新梨
一号 ’、‘博山池 ’等梨品种的嫩叶 300 mg左右 , 存储于液氮中 , 带回实验室后于 - 70℃冷冻保存。
限制性核酸内切酶 S fcⅠ、A lwNⅠ、N ruⅠ、PpuM Ⅰ和 AccⅡ以及 100 bp DNA Ladder购自日本
TAKARA公司。限制酶 H incⅡ、B tsBⅠ、A flⅡ和 N deⅠ, Taq DNA聚合酶购自上海海特公司。β - 巯
基乙醇、Tris、饱和酚购自上海生工。KOD2Plus2Polymerase system由日本神户大学农学部果树研究室
中西哲教授赠送 , λ/H ind Ⅲ digest DNA Ladder购自日本 TAKARA公司 , Gene Clean Ⅱ Kit购自日本
B IO101公司。其它生化试剂和常规试剂均为超纯或分析纯。
PCR引物设计合成参照文献 (乌云塔娜 等 , 2006a) 进行。引物 P1 ( FTQQYQ ) : 5′2TTTACGCAG2
CAATATCAG23′; P2 ( IIW PNV) : 5′2AC (A /G) TTCGGCCAAATAATT23′。P1和 P2可以扩增出白梨 S基
因 P1 + C1 + C2 + HV +内含子 + P2的片段。其中 C1和 C2为 S基因保守区 1和 2; HV为 S基因高变区。
112　基因组 D NA的提取
基因组 DNA提取采用改良的 SDS - CTAB法 (乌云塔娜 等 , 2005, 2006b)。对纯度低的基因组
DNA进一步纯化 , 参考 “精编分子生物学实验指南 ” (Ausubel et al. , 1998) 并稍做修改 , 用 Du2640
核酸蛋白分析仪测定其浓度和纯度。
113　S基因的 PCR扩增
在 200μL 的离心管中依次加入如下 PCR 成分 : 115μL 10 ×PCR Buffer, 01012μmol dNTPs,
0105μmolMgCl2 , 17 pmol P1和 P2, 1 U TaqDNA聚合酶 , 10 ng Temp late DNA, 总体积为 20μL。涡
旋混匀 , 并加入 100μL的矿物油 , 瞬时离心后 , 进行 PCR扩增。
94℃预变性 2 m in; 94℃变性 15 s, 48℃退火 30 s, 68℃延伸 1 m in, 10个循环 ; 94℃变性 15 s,
48℃退火 30 s, 68℃延伸 90 s, 25个循环 , 68℃延伸 5 m in; 4℃保温。
114　PCR - RFL P检测系统及限制酶反应
‘FTQQYQ’和 ‘anti2IIW PNV’一组引物扩增片段的 S1～9 - 等位基因 PCR - RFLP检测系统参照
文献 ( Kim et al. , 2002; 谭晓风 等 , 2005a, 2005b; 乌云塔娜 等 , 2005, 2006a, 2006b) 进行。酶
切反应体系及产物检测按照生产厂家说明书进行。
115　KOD 2Plus D NA聚合酶 PCR扩增
利用 P1 ( FTQQYQ ) 和 P2 ( anti2IIW PNV) 引物对 , 对白梨品种 P1 + C1 + C2 + HV +内含子 + P2
区进行高保真酶 PCR扩增。反应体系按照说明书进行 , 稍做修改。
循环条件为 94℃变性 2 m in; 94℃变性 30 s, 48℃退火 30 s, 68℃延伸 90 s, 10个循环 ; 94℃变
性 30 s, 48℃退火 30 s, 68℃延伸 2 m in, 25个循环 ; 68℃延伸 7 m in; 4℃保存。
116　目的片段的回收及测序
利用 Gene Clean II Kit回收纯化 PCR产物。步骤按说明书进行。500 bp以下的片段直接进行测
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　4期 乌云塔娜等 : 白梨品种 4个新 S基因的分离与鉴定 　
序 , 测序引物为 FTQQYQ和 anti2IIW PNV , 以纯水悬浮目的片段后委托上海基康生物技术公司代测。
117　生物信息学分析
用 Chromas3125软件打开测序图 , 所得到的 S 基因序列采用 BLAST软件从 GenBank + EMBL +
DDBJ中进行同源性搜索 , 再用 DNA sis软件进行 HV区全序列同源性比较分析 , 用 GeneDoc软件将
DNA序列转化成氨基酸序列 , 并打印输出。利用各种在线资源 , 对中国白梨的 S 2RNase新基因进行
了生物信息学分析。将新 S基因通过 Banklt程序提交到 GenBank中。
2　结果与分析
211　梨品种 S基因的分离
利用 S基因 HV区特异性引物 ‘FTQQYQ’和 ‘anti2IIW PNV’对梨品种基因组 DNA进行 PCR扩
增结果表明 , 4个品种皆可获得两条 PCR产物。片段大小 370～550 bp (图 1)。
212　PCR - RFL P系统检测
对 4个白梨品种进行 PCR - RFLP系统检测结果表明 , 冬黄和新梨一号具有 S1和 S8基因特异性限
制酶 S fcⅠ的酶切产物 (图 2) , 冬黄和新梨一号 450 bp左右的 PCR产物被 S fcⅠ酶切割 , 其酶切产物
大小在 182和 252 bp左右 , 推测这两个梨品种含有 S8 -等位基因。博山池和红皮酥 S基因 PCR产物
未被 S fcⅠ切割 , 故这两个梨品种不含有 S1或 S8。
　　4个白梨品种中冬黄和新梨一号被 S7和 S8等位基因的特异性限制酶 A ccⅡ切割 , 新梨一号 450 bp
片段被切割成大小为 249和 186 bp的片段 , 可推测新梨一号含有一个 S8 - 等位基因。而冬黄的两个
片段均被 A ccⅡ切割 , 大小为 114、186和 249 bp左右 , 可推测该品种含有 S7 - 和 S8 - 等位基因 (图
3) , 而博山池和红皮酥的 S基因产物未被切割。4个白梨品种中冬黄和新梨一号被 S8 -等位基因的特
异性限制酶 N ruⅠ切割 , 切割片段大小为 249和 186 bp, 可推测该品种含有 S8 - 等位基因 (图 4) ,
其他两个品种的 S基因产物未被切割。
图 3　A ccⅡ酶切
1. 冬黄 ; 2. 博山池 ; 3. 红皮酥 ; 4. 新梨一号。
F ig. 3　Restr iction pa ttern of A ccⅡ
1. Donghuang; 2. Boshanchi; 3. Hongp isu; 4. Xinliyihao.
图 4　 N ruⅠ酶切
1. 冬黄 ; 2. 博山池 ; 3. 红皮酥 ; 4. 新梨一号。
F ig. 4　Restr iction pa ttern of N ruⅠ
1. Donghuang; 2. Boshanchi; 3. Hongp isu; 4. Xinliyihao.
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　　4个白梨品种均未被 S2、S3、S4、S5、S6的特异性限制酶 A flⅡ、 PpuM Ⅰ、N deⅠ、 PpuM Ⅰ、
A lwNⅠ、H incⅡ切割 , 故这 4个品种不含有 S2 - 、S3 - 、S4 - 、S5 -和 S6 -等位基因 , 限制酶切割情
况见表 1。
表 1　白梨品种 S - 基因的 PCR - RFL P检测
Table 1　The PCR - RFL P determ ina tion S2genes of P. bretschneideri
品种名
Enzyme
SfcⅠ
(S1 )
A flⅡ
(S2 )
PpuMⅠ
(S3 , S5 )
N deⅠ
(S4 , S9 )
A lwNⅠ
(S5 )
H incⅡ
(S6 )
AccⅡ
(S6 , S7 , S8 )
N ruⅠ
(S8 )
B tsBⅠ
(S9 )
冬黄 Donghuang + × - - - - + + + ×
新梨一号 Xinliyihao + × - - - - + + ×
红皮酥 Hongp isu - × - - - - - × ×
博山池 Boshanchi - × - - - - - - ×
　　注 : + , 有酶切产物 ; - , 无酶切产物 ; ×, 该品种不存在与该等位基因相同或相似的扩增片段 (未进行酶切检测 )。
Note: + , existing PCR p roducts; - , no PCR p roducts; ×, this cultivar has no ampufing bands sim ilar with this allele.
213　S20 - 、S22 - 、S26 - 、S27 -等位基因的测序鉴定与命名
为了进一步确认品种的 S基因型 , 对所有 PCR产物进行回收 , 并进行 DNA测序。从冬黄中分离
到了一个大小为 368 bp的片段。DNA序列分析表明 , 该片段含有 167 bp的内含子 , 与 S1～16 -等位基
因的 DNA和推导氨基酸序列同源性均较高 , HV区 +周边区的推导氨基酸的序列相似性为 61% ～
93% , HV区的序列差异较大。该片段的 PCR产物大小和内含子大小与 S1 -和 S11 -等位基因较类似 ,
但 HV区的 DNA序列和氨基酸序列却与 S13 -等位基因的同源性最高。S13 -等位基因与冬黄 370 bp片
段的外显子 DNA序列 14个碱基有差异 (图 5) , HV区有 3个氨基酸被替换 , 因此将该片段确定为新
的 S基因 , 并命名为 S20 -等位基因 ( GenBank中登录号为 AY250988)。
图 5　 S - 等位基因 HV区 +周边区外显子 D NA序列的比较
F ig. 5　D NA sequence a lignm en t of HV reg ion s and flank ing exon s S2a llele
从新梨一号中分离到一个 346 bp的片段 , 其内含子大小为 148 bp, 与 S1～16 -等位基因序列比较 ,
HV区有较大的差异 , HV +周边区的推导氨基酸序列的相似性为 69% ～84%。该基因片段大小类似
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　4期 乌云塔娜等 : 白梨品种 4个新 S基因的分离与鉴定 　
于 S16 -等位基因 , 但 HV区却与 S2 - 等位基因更相似 , 其同源性最高。新梨一号 370 bp的片段与
S2 -等位基因的外显子 DNA序列有 21个碱基替换或缺失现象 , 其中 HV区就 13个碱基有差异 (图
5) , HV区推导氨基酸序列比较出现 8个氨基酸的替换或缺失 , 由此鉴定该片段为新的 S基因 , 并命
名为 S22 -等位基因 ( GenBank中登录号为 AY250990)。
用 PCR和 DNA序列测定方法 , 从红皮酥中鉴定了一个新的 S基因 , 其 P1与 P2之间的扩增片段
大小为 345 bp, 内含子大小为 144 bp。该片段与 S1～16 -等位基因具有很高的同源性 , HV +周边区的
推导氨基酸的相似性达 67% ～87%。其中与 S16 -等位基因的同源性最高 , 在外显子 DNA中 6个碱基
有差异 , HV区中只有 1个碱基被替换 (图 5 )。在红皮酥 370 bp扩增片段的 HV区 , 推导氨基酸序
列中只有一个氨基酸被替换 , 但在周边区具有 6个氨基酸被替换 , 因此将该片段确定为新的 S基因 ,
命名为 S26 -等位基因 ( GenBank中登录号为 AY339396)。
从博山池中分离得到了大小为 353 bp (内含子为 152 bp) 的片段 , 它与 S1～16 - 等位基因的相似
性为 81% ～97%。其中与 S7 -等位基因的同源性最高 , 片段大小和内含子大小均只差一个碱基。但
在 S7 -等位基因和博山池 370 bp的外显子 DNA中 , 有 10个碱基存在差异 (图 5)。S7 - 等位基因和
博山池 370 bp的推导氨基酸 HV区的氨基酸序列完全相同 , 其它区域只有两个氨基酸出现差异 , 但
PCR - RFLP分析结果显示 , 该片段没有被 S7 -等位基因的特异性限制酶 A ccⅡ切割 , 根据这个结果和
以上序列分析将该片段确定为新的 S 基因 , 并命名为 S27 - 等位基因 ( GenBank 中登录号为
AY250991)。
214　品种 S基因型的确定
在测序和生物信息学分析中发现 , 博山池品种的大片段与 S19 (AY250987 ) (乌云塔娜 等 ,
2006a) 基因序列相似性达 100% , 可以确定博山池的一个 S基因为 S19 -等位基因 ; 红皮酥 550 bp片
段与 S12 (AY250987) (乌云塔娜 等 , 2006b) 基因序列相似性达 100% , 确定为 S12 - 等位基因 ; 冬
黄和新梨一号的 450 bp片段与 S8 -等位基因序列相似性达 100% , 故确定为 S8 -等位基因。
根据 PCR - RFLP系统和序列分析 , 可以确定白梨 4个品种的 S基因型 : 冬黄为 S8 S20 , 红皮酥为
S12 S26 , 新梨一号为 S8 S22 , 博山池为 S19 S27。
3　讨论
本试验通过分子生物学方法鉴定了 4个新的 S基因。不同 S 2RNase等位基因的差异往往表现在 HV
区所编码的蛋白质差异上 , 因此除了基因组水平上需要进行深入研究外 , 还应进行 mRNA或蛋白质水平
的差异分析 (H iratsuka et al. , 1992; Shin et al. , 1995; U shijima et al. , 1998) , 并与 S基因型已被确定
的品种进行杂交亲和性分析 (Sassa et al. , 1993; Ishim izu et al. , 1996; H iratsuka et al. , 1998; Ishim izu
et al. , 1999) , 才能全面考察新基因的存在。我们正在进行新基因 cDNA的全序列克隆和序列分析 , 并
建立 S基因纯合系 , 为品种 S基因型的杂交试验确定和果树自交不亲和性研究提供基础。
利用现有的 PCR - RFLP分析方法确定的冬黄品种 S基因型为 S7 S8。该品种的特异性酶切分析结
果符合 S7 -和 S8 -等位基因的特异性内切酶酶切情况。但 DNA测序结果显示 , 冬黄的一个等位基因
确实为 S8 -等位基因 , 而另一个等位基因与 S7 -等位基因的 HV区差异较大 , 在 HV区中只有 4个氨
基酸是相同的 , 因而不是 S7 -等位基因 , 是一个新的 S基因 , 定名为 S20 - 等位基因。酶切分析结果
表明 , S20 -等位基因中确实存在 A ccⅡ的识别位点 , 而且 DNA sis软件酶切分析和网上 (基因岛 ) 酶
切分析结果均表明 , 多数 S基因中都存在该限制酶识别序列 , 如中国沙梨 S13 - 、S14 - 、S15 - 等位基
因 , 因此 S7 -等位基因的特异性内切酶 AccⅡ不是特异的。我国梨资源丰富 , 栽培品种就包括白梨、
沙梨、秋子梨、新疆梨 , 还有许多野生种和半野生种。同时 , S等位基因也很丰富 , DNA序列上变异
也较大 , 因此 , 利用日本梨 PCR - RFLP系统鉴定我国梨品种 S基因存在一定的局限性。随着新 S基
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因的不断发现 , 及时改进和完善 PCR - RFLP分析系统 , 或提出更有效的 S基因鉴定方法 , 为发现新
S基因或准确确定品种的 S基因型提供可靠的依据。
References
Ausubel F, B rent R, Kingston R E, Moore D D, Seidman J G, Sm ith J A, Struhl K. 1998. Curent p rotocols in molecular biology. New York:
Cold Sp ring Harbor Laboratory Press.
H iratsuka S. 1992. Detection and insic p roteins corresponding to 5 self2incompatibility alleles obility genotype of Japanese pear. Euphytica, 61:
55 - 59.
H iratsuka S, Kubo T, Okada Y. 1998. Estiation of self2incom tibility genotype in Japanese pear cultivars by stylar p rotein analysis. Japan Soc.
Hor. Sci. , 67: 491 - 496.
H iratsuka S, Okada Y, Kawai Y. 1995. Exp ression and indertance of S2p rotein in self2incompatible and incompatible Japanese pear. Soc. Hor.
Sci. , 64: 479 - 484.
Ishim izu T, Inoue K, Shimonaka M. 1999. PCR2based method for identifying the S 2genotypes of Japanese pear cultivars. Theor. App l.
Genel. , 98: 961 - 967.
Ishim izu T, Sato Y, Saito T. 1996. Identification and partial am ino acid sequenes of seven S 2RNase associated with self2incompatibility of Japa2
nese pear ( Pyrus pyrifotia) . J. B iochbem. , 120: 326 - 334.
Kim H T, H irata Y, Nou I S. 2002. Determ ination of S2genotypes of pear ( Pyrus pyrifolia) cultivars by S2RNase sequencing and PCR2RFLP
analyses. Mol Cell, 13 (3) : 444 - 451.
Norioka Y, Ishim izu S, Nakanishi T. 1995. Nucleotide sequences of cDNA s encoding S2 2 and S4 2RNases (D49527 and D49528 for EMBL )
from Japanese pear ( Pyrus pyrifolia) ( PGR95020) . Plant Physiol. , 108: 1343 - 1347.
N rioka N, Norilka S, Ohnishi Y. 1996. Molecular cloning and nucleotide sequenece of cDNA encoding S2allele specific stylar RNases in a self2
incompatible cultivar and its self2compatible mutant of Japanese pear. J. B iochem. , 120: 335 - 345.
Sassa H, H irano H, Ikehashi H. 1992. Self2incompatibility2ralated RNase in styles of Japanese pear ( Pyrus serotina) . Plant Cell Physiol. ,
33: 811 - 814.
Sassa H, H irano H, Ikehashi H. 1993. Identification and characterization of stylar glycop roteins associated with self2incompatibility genes of Jap2
anese pear. Mol. Gen. Gent. , 241: 17 - 25.
Shin H, Yoshiji O. 1995. Stylar basic p roteins corresponding to 5 self2incompatibility alleles of Janpanese pears. Japan Soc. Hort. Sci. , 64
(3) : 471 - 478.
Tan Xiao2feng, W uyun Ta2na, Nakanixi T S, L i Xiu2gen, Cao Yu2fen, Yang Gu2liang. 2005a. Isolation and identification of self2incompatible
gene of Chinese pear. Journal of Central South Forestry University, 25 (1) : 1 - 3. ( in Chinese)
谭晓风 , 乌云塔娜 , 中西 ƒ ≤ , 李秀根 , 曹玉芬 , 杨谷良. 2005a. 中国梨品种自交不亲和基因的分离鉴定. 中南林学院学报 ,
25 (1) : 1 - 3.
Tan Xiao2feng, W uyun Ta2na, Nakanixi T S, L i Xiu2gen. 2005b. Identification and sequencing of seven new S 2RNase gene from Pyrus pyrifo2
lia. Journal of Central South Forestry University, 25 (4) : 1 - 6. ( in Chinese)
谭晓风 , 乌云塔娜 , 中西 ƒ ≤ , 李秀根. 2005b. 中国沙梨 7个自交不亲和新基因的分离与测序. 中南林学院学报 , 25 (4) : 1 - 6.
U shijima K, Sassa H, Tao R. 1998. Cloning and characterization and cDNA s encoding S2RNases from almond: Primary structural features and
sequence diversity of the S 2RNase in Rosaceae. Mol. Gen. Genet. , 260: 261 - 268.
W uyun Ta2na, Tan Xiao2feng, B i Fang2cheng, Cao Yu2fen, L i Xiu2gen. 2005. Determ ination of 7 cultivars of the S2genotype and identification of
two new allele of self2incompatibility of Pyrus bretschneideri. Journal of Central South Forestry University, 25 (4) : 7 - 12. ( in Chinese)
乌云塔娜 , 谭晓风 , 毕方铖 , 曹玉芬 , 李秀根. 2005. 7个白梨品种 S基因型确定和 2个新 S基因的鉴定. 中南林学院学报 , 25
(4) : 7 - 12.
W uyun Ta2na, Tan Xiao2feng, Cao Yu2fen, L i Xiu2gen. 2006a. Cloning of a new self2incompatibility S 2allele in white pear ( Pyrus bretschnei2
deri) . Acta Horticulturae Sinica, 33 (2) : 385 - 388. ( in Chinese)
乌云塔娜 , 谭晓风 , 曹玉芬 , 李秀根. 2006a. 白梨新 S基因的克隆. 园艺学报 , 33 (2) : 385 - 388.
W uyun Ta2na, Tan Xiao2feng, L i Xiu2gen, Cao Yu2fen, Zhang L in. 2006b. Isolation and identification of S12 2RNase gene of Pyrus bretschnei2
deri. Scientia Silvae Sinicae, 42 (2) : 117 - 121. ( in Chinese)
乌云塔娜 , 谭晓风 , 李秀根 , 曹玉芬 , 张　林. 2006b. 梨自交不亲和新基因 S12 2RNase的分离鉴定及序列分析. 林业科学 , 42
(2) : 117 - 121.
468