全 文 ：园 　艺 　学 　报 　2004 , 31 (5) : 679～681
Acta Horticulturae Sinica
收稿日期 : 2003 - 11 - 24 ; 修回日期 : 2004 - 02 - 163 通讯作者 Author for correspondence
铺散诸葛菜的组织培养及植株再生
吴　俊　祁星华　王　轶　罗　勤　王茂华　杨　毅　李旭锋 3 　谭仲明
(四川大学生命科学学院 , 成都 610064)
摘 　要 : 以铺散诸葛菜的叶柄及叶片为外植体 , 研究了不同的再生方式。在 62BA 和 NAA 配合使用的
MS培养基上 , 叶柄和叶片外植体有高的成芽率 , 具有强的器官再生能力。在 2042D 与 62BA、NAA 结合的
培养基上 , 叶柄和叶片有较高的愈伤组织诱导率 , 在含 62BA 的培养基上也易于分化。叶柄、叶片再生的
芽和经愈伤组织分化而得来的芽快速繁殖后 , 在生根培养基上形成完整植株。研究表明铺散诸葛菜具有极
强的器官分化能力。
关键词 : 铺散诸葛菜 ; 叶柄 ; 叶片 ; 器官发生 ; 植株再生
中图分类号 : S 63 　　文献标识码 : A 　　文章编号 : 05132353X (2004) 0520679203
In Vitro Culture and Plant Regeneration of Orychophragmus dif f usus
Wu J un , Qi Xinghua , Wang Yi , Luo Qin , Wang Maohua , Yang Yi , Li Xufeng 3 , and Tan Zhongming
( College of L if e Science , S ichuan U niversity , Chengdu 610064 , China)
Abstract : The different ways of regeneration of leaves and petioles in vit ro were studied in O2
rychophragm us dif f usus Z. M. Tan et J . M. Xu. On the MS medium with 62BA and NAA , the leaves and
petioles gave the high regeneration rate. When they were cultured on the MS medium with 2042D , 62BA and
NAA , they gave the high induction rate of the calli. The calli were differentiated easily on the medium with 62
BA. The embryonic plants were reproduced rapidly in the same medium. Complete plants were induced on the
rooting medium. This study showed O . dif f usus has apparent regeneration capacity.
Key words : O rychophragm us dif f usus ; Petiole ; Leaf ; Organogenesis ; Plant regeneration
1 　目的、材料及方法
铺散诸葛菜 〔O rychophragm us dif f usus Z. M. Tan et J . M. Xu (2n = 20 , 22)〕为诸葛菜属的
新分类群〔1〕, 与该属其他植物不同的特点是它的茎从基部多分枝 , 铺散 , 叶全部大头羽状分裂 , 顶
裂片心形或肾形 , 长角果较短 , 5～7 cm。对诸葛菜组织培养〔2〕和花药培养〔3〕的研究已有些报道 , 但
对铺散诸葛菜的研究未见报道。
我们将实验室保存的铺散诸葛菜无菌苗快繁 , 取幼嫩的叶柄和叶片为外植体进行器官发生和愈伤
组织诱导。叶柄切成 5 mm 左右的小段 , 叶片切成宽 5 mm、长 10 mm 左右的小片。基本培养基为
MS + 30 g/ L 蔗糖 + 8 g/ L 琼脂粉 , 器官发生和愈伤组织诱导、分化以及芽的快繁培养基为附加不同
植物生长调节剂的 MS 培养基 (表 1～表 4) 。生根培养基为 MS 或 1/ 2 MS。培养温度为 (25 ±3) ℃,
光照强度为 1000 lx , 光照时间为 12 h/ d。
2 　结果分析和讨论
211 　离体叶柄和叶片器官发生
铺散诸葛菜的叶柄、叶片在附加和不加 62BA 和 NAA 的 MS培养基上均能分化出芽。62BA 和 NAA
的浓度对的叶柄出芽影响不大 (表 1) 。但在不加
62BA 和 NAA 的培养基上叶柄、叶片出芽慢 , 且较
高频率地出现根状结构。叶柄在培养半月后 , 切口
处先长出少量瘤状物 (胚性愈伤组织) , 再出芽
(图版 , 1) 。其出芽方式和器官发生方式均为间接
体细胞胚胎发生。叶片在其切口处形成芽蔟 , 其中
在与叶柄相连的切口处更易于长芽。从总体上讲 ,
离体叶柄比叶片在此条件下更易出芽。铺散诸葛菜
的叶柄与叶片具有极强的器官分化能力。这与诸葛
菜的研究结果〔2〕相似 , 但它们的器官发生方式不同。
表 1 　铺散诸葛菜的叶片与叶柄的器官形成
Table 1 　Organogenesis of leaf and petiole of O . dif f usus
62BA
(mg/ L)
NAA
(mg/
L)
叶片 Leaf
培养外植
体数 No.
of explants
成芽率 Rate
of buding( %)
15 d 30 d
叶柄 Petiole
培养外植
体数 No.
of explants
成芽率 Rate
of buding( %)
15 d 30 d
0 0 40 45 95 39 4612 100
015 015 36 50 100 37 5114 100
2 2 38 4714 9417 42 5214 9716
5 5 32 5311 9619 38 5216 9714
212 　愈伤组织诱导、继代和器官发生
铺散诸葛菜的叶柄和叶片接种在不同的愈伤组织诱导培养基上均能出愈 (表 2) 。在诱导培养基
上继代培养 , 愈伤组织可逐渐变成黄绿色、疏松型 , 但在 C1、C2 培养基中变化所需时间较长 , 需继
代 4 次 (20 d 继代 1 次) , 而在 C3 培养基中继代只需 3 次 , 而且愈伤组织颗粒小 , 分散好 , 生长状况
最好。诱导好的愈伤组织还可在 C4 培养基 (表 3) 中继代培养 , 愈伤组织为淡黄色、松散型。在诱
导培养基上多次继代后 , 愈伤组织中出现绿点 , 进而分化形成芽 (图版 , 2) 。在 C3 培养基中分化频
率较高。愈伤组织在 C5、C6 培养基中也能分化出芽 , 具有较高的分化频率 (表 3) 。
表 2 　叶柄、叶片在不同培养基上的诱导情况
Table 2 　Induction of leaf and petiole on the different medium
培养基
编号
No. of
medium
培养基组分
Components of medium(mg/ L)
接种数
No. of inoculation
叶柄
Petiole
叶片
Leaf
诱导频率 Frequency
of induction ( %)
叶柄
Petiole
叶片
Leaf
愈伤组织特点
Character of callus
C1 MS + 2042D 1 + 62BA 012 54 49 9414 9319 黄色 ,较硬 ,生长快 Yellow , rigid and growing fast
C2 MS + 2042D 2 + 62BA 012 49 50 9118 92 黄色 ,较硬 ,生长快 Yellow , rigid and growing fast
C3 MS + 2042D 015 + 62BA 012 + NAA 01250 50 100 98 黄绿色 ,疏松 ,生长较快 Yellow , loose and growing fast
表 3 　不同培养基对叶柄、叶片愈伤组织分化频率的影响
Table 3 　Effect of medium on frequency of differentiation of callus from leaf and petiole
培养基编号
No. of medium
培养基组分
Components of medium(mg/ L)
分化频率 Frequency of differentiation( %)
叶柄 Petiole 叶片 Leaf
每块愈伤组织平均苗数 No. of plantlets
叶柄 Petiole 叶片 Leaf
C1 MS + 2042D 1 + 62BA 012 86 84 7 6
C2 MS + 2042D 2 + 62BA 012 85 83 5 4
C3 MS + 2042D 015 + 62BA 012 + NAA 012 98 95 8 7
C4 MS + 2042D 015 　0 0
C5 MS + 62BA 015 + NAA 012 100 98 11 8
C6 MS + 62BA 2 + NAA 012 100 98 11 9
213 　芽的扩增和生根培养
在愈伤组织上分化形成的芽和叶柄及叶片器
官发生形成的芽 , 长到约 3cm 高时 , 将其沿基部
切下 , 转入含不同浓度 62BA 和 NAA 浓度的培养
基中 , 使其扩增 (图版 , 3) 。在较低浓度 62BA
的培养基中 , 芽生长较好 , 随着 62BA 浓度的升
高 , 苗容易玻璃化 , 还出现了畸形苗 (表 4) 。
将丛生芽沿基部切下 , 接种到生根培养基上
表 4 　铺散诸葛菜芽的扩繁
Table 4 　Propagation of buds from O. dif f uses
培养基
Medium(mg/ L)
繁殖系数
Coefficient of
proliferation
特征
Character
MS + 62BA 015 + NAA
012 9 正常苗 Normal shoots
MS + 62BA 2 + NAA 012
　
11
　
部分有玻化苗
Part of shoots are vitrifiable
MS + 62BA 5 + NAA 012
　
　
15
　
　
部分玻化 ,有畸形苗
Some are vitrifiable shoots ,
some are abnormal shoots
086 园 　　艺 　　学 　　报 31 卷
诱导生根。普通的生根培养基 MS 或 1/ 2MS 均可较好地诱导生根。从叶柄和叶片得到的铺散诸葛菜
小苗的生根率分别达 94 %和 97 %。生根的幼苗经一周的炼苗后 , 移栽到试验田 , 成活率为 98 %左右
(图版 , 4) 。
在试验中观察到 , 2042D 对愈伤组织的诱导具有较强的促进作用。不用 2042D , 叶柄和叶片是另
一种再生方式。在一定范围内 (015～210 mg/ L) , 随着 2042D 浓度增加 , 愈伤组织生长加快 , 但较
高浓度的 2042D 易使愈伤组织褐化。62BA 对愈伤组织的器官分化必不可少。在 2042D 与 62BA 结合使
用时 , 愈伤组织中出现了绿点 , 并在继代过程中逐渐分化形成芽 , 但是分化的时间较长。愈伤组织在
叶柄和叶片外植体的出芽培养基上分化频率提高。
铺散诸葛菜的叶柄和叶片外植体具有强的器官分化能力 , 可作为植物细胞遗传学研究的材料 , 同
时它们对于植物离体培养中器官发生调控机制的研究 , 也是一种好材料。
参考文献 :
1 　谭仲明 , 许介眉 , 赵炳祥 , 等. 中国诸葛菜 (十字花科) 新分类群. 植物分类学报 , 1998 , 36 (6) : 544～548
2 　徐晓昕 , 许智宏. 诸葛菜组织培养中的器官形成. 实验生物学报 , 1987 , 20 (4) : 503～505
3 　吴沿友 , 罗　鹏. 诸葛菜的花药培养. 园艺学报 , 1996 , 23 (4) : 404～406
图版说明 : 1. 铺散诸葛菜叶柄出芽 ; 2. 愈伤组织分化出芽 ; 3. 快繁的铺散诸葛菜 ; 4. 移栽实验田并开花的铺散诸葛菜。
Explanation of plates : 1. Buds regenerated from petioles of O . dif f usus ; 2. Buds differentiated from calli ; 3. The propagated shoots of
O . dif f usus ; 4. The blooming plants of O . dif f usus transplanted into the experiment field.
186　5 期 吴 　俊等 : 铺散诸葛菜的组织培养及植株再生