全 文 ：园 艺 学 报 2003，30(2)：242～244
Aeta Hortieulturae Sireca
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蝴蝶兰花葶的离体培养
陈之林 叶秀 梁承邺
(中国科学院华南植物研究所，广州 510650)
摘 要：蝴蝶兰花梗腋芽培养在含 vw无机盐 +肌醇 100 nag·L．1+、rB110 nag·L．1+VBd nag‘L．1+烟酸
1 nag·L一 +蔗糖20 g·L．1+BA 5．0 nag·L．1的培养基上22~C培养，可分化出花葶。花葶切片在含 Ms无机盐
+肌醇 100 nag·L一 +VB110 nag·L一 +、 1 mg·L一 +烟酸 1 nag·L一 +蔗糖 15 g‘L．1+BA 5．0 nag。L．。+NAA
0．5 nag·L 的培养基上诱导分化不定芽。不定芽在同一培养基上继代增殖，在附加香蕉汁 100 g·L 的 Hy-
ponex 1号生根培养基上壮苗生根。
关键词：蝴蝶兰 ；花葶；不定芽 ；离体培养
中图分类号：S 68 文献标识码 ：A 文章编号：0513．353X (2003)02-0242-03
1 目的、材料与方法
蝴蝶兰因是单轴生长类型，难以进行传统的营养繁殖，目前通过组织培养进行种苗生产的主要方法
有：(1)花梗腋芽诱导营养芽，然后以丛生芽方式增殖u刮 ；(2)通过花梗腋芽、茎尖、叶片、花葶节
间组织等多种外植体诱导生成类原球茎体 (protocorm like body，PLB)，并用之来进行增殖u J。近年来有
通过诱导愈伤组织途径进行植株再生的研究[4-6]。作者用花梗腋芽为起始材料诱导出花葶，由花葶节间
组织切片直接诱导生成大量不定芽，不定芽可形成丛生芽进行增殖，为蝴蝶兰的组织培养提供了新的途
径。
试验材料为本研究组温室栽培的蝴蝶兰杂交种 (Phalaenopsis hybrid)。花葶诱导培养基为、 无机
盐或 Ms无机盐 +肌醇 100 rag·L +VB110 rag·L-1+VB6 1 rag·L +烟酸 1 rag·L一 (B5有机成分)，分
别附加 1、2、5、10 rag·L-1的 BA，蔗糖20 g·L一，琼脂 8 g·L一，pH 5．0～5．4。在供试植株开花后，
将花葶剪下，取花下第 1、2茎节，长度约 1～2 em，在70％酒精中1 min，0．1％升汞15 min灭菌，无
菌水清洗 5遍，接种于诱导培养基上培养。培养条件：温度 (22±1)℃，每天光照 12 h，光照强度
1 500～2 000 lx。每周观察，4周后进行统计。不定芽的诱导培养基为MS无机盐+肌醇100 rag·L-1+
VB110 rag·L-1+VB61 rag·L-1+烟酸 l nag·L一，附加不同浓度的BA、NAA、蔗糖，Gelan gum 2 g·L～，
pH 5．0～5．4。将由腋芽诱导出的长约 2 em的幼嫩花葶切成厚 1～2 l／ln的圆片，接种于不定芽诱导培
养基上，每处理5瓶，每瓶接种5个切片，试验重复2次。培养条件：温度 (25±1)℃，每天光照 l2
h，光照强度1 500～2 000 Ix。诱导出的不定芽丛分割成单个芽或几个芽一丛，接种在不定芽诱导培养
基上增殖。将丛生芽切割成单个芽，接种在含 Hyponex 1号 3 g·L一、蔗糖 15 g·L一、香蕉汁 100 g·
L一，活性碳 2 g·L～，琼脂8 g·L一，pH 5．0～5．4的生根培养基上生根。培养条件：温度 (25±
1)℃，每天光照 12 h，光照强度l 500～2 000 Ix。
2 结果与分析
2．1 花葶的诱导
收稿日期：2002—07—03；修回日期-2002—11—11
基金项目：中国科学院院长基金资助项 目 (767)；广东省科技计划资助项 目 (C2f304)
*通讯作者
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2期 陈之林等：蝴蝶兰花葶的离体培养 243
在 vW和 MS培养基上，腋芽在 BA为5．0 mg·L一 时启动频率分别达到 84％和60％。BA浓度对腋
芽分化有一定影响，在BA为1．Omg·L一 时只诱导出小植株 ；在BA浓度较高时往往形成花葶，在
10 mg·L-1时只形成花葶。ⅦIr培养基中花梗腋芽
的启动和花葶诱导率均好于 MS培养基 (表 1)。
在已有报道中，施加细胞分裂素或生长素拮抗剂
可以打破腋芽的休 眠【1]，在较低培养温度，如
22℃时腋芽可向花芽方向分化，发育成花葶 ，在
培养温度为 28~C时发育成小植株【8】。本试验结果
表明，培养温度在 22℃时供试外植体的分化方向
与 BA的浓度有关。
花葶的启动和形成十分迅速，一般接种 1周
后腋芽就开始萌动，2周后可达 lcm长，其形态
结构如正常的幼嫩花葶。花芽在培养基上长期培
养，并不能形成花，这可能与培养条件不能满足
其开花生理有关。以带腋芽的花梗节段为材料诱
导花葶，可获得较多的不定芽诱导起始材料。如
直接采切栽培植株的幼嫩花葶做外植体，存在容
易污染 ，表面灭菌时会损伤材料的缺点。
2．2 蔗糖浓度、激素配比对不定芽诱导的影响
表 1 培养基和 BA浓度对花梗外植体诱导花葶的影响
Table 1 Efect ofmedimn and BA concentration Oil the
taductlon of Ⅱk e奠 noesfrom flower stalkbuds
* +肌醇 100 mg·L一 +VBl10 mg·L一 +Ⅶ 61 mg·L一 +烟酸
1 mg·L一 (pH 5．0～5．4)。
* +Inositol 100 mg·L一 +VBl 10 mg·L一 +VB6 1 mg·L一 +
Nicotinic acid1 mg·L一 (pn 5．0～5．4)．
接种在含 30 g·L-1蔗糖的Ms培养基上的花葶切片产生较多分泌物 ，使培养基变成褐色或黑色，
部分外植体生长停滞，逐渐坏死。蔗糖浓度 15 g·L-1的培养基上分泌物较少，诱导率显著升高；附加
5 mg·L-1BA的培养基诱导不定芽的效果较好，接种 1周后可见外植体膨大，一般接触培养基的切面
生长较快 ，切片的边缘颜色变浅，有多个细微的突起状，突起逐渐变大，3周后在切片的边缘上有不
定芽形成，6周后不定芽形成可分割的小植株；
多数情况只在接触培养基的一面的圆周处产生不
定芽，也有一些切片在两面都诱导出不定芽。当
BA浓度为 10 lIlg·L-1时，外植体诱导出的不定芽
少数有玻璃化现象。培养基中加人 0．5 mg·L-1的
NAA对不定芽的诱导和生长有明显的促进作用，
MS+5 mg·LI1 BA+0
．5 mg·LI1NAA培养基上单个
外植体诱导出的不定芽数较 MS+5 mg·LI1BA高
出近0．5倍 (表 2)，芽也更健壮。Tse等( ]将蝴
蝶兰花梗腋芽上端切除后培养，产生愈伤组织再
分化为不定芽；王怀宇( ]报道由营养芽诱导出不
定芽的报道；本试验中幼嫩的花葶节间切片可以
高频率诱导分化不定芽；而 Tanada~ ]等曾报道由
花葶节间切片诱导出类原球茎。可见，影响花葶
节间切片向不定芽和 PLB两种不同方向分化的因
素有必要作进一步的研究。
2．3 不定芽的增殖
表2 蔗糖浓度、激素配比对蝴蝶兰花葶切片不定芽诱导的影响
Table 2 the ettect of剐日豫 伽n睫嘣列 m dgrap hH哥lh
Oil shootinductionflmm segments of n0嘲 舢 西 r删
黼Sucrose BA
⋯
N从 葶切片数 数
(g．L-1)(ms ) N0．
30 1．0 0 25 0．0±0．0 0
30 2．0 0 25 3．1±0．4 10
30 5．0 0 25 3．8±0．3 12
30 10．0 0 25 2．0±2．0 2
30 5．0 0．5 25 4．1±0．3 18
15 1．0 0 25 0．0±0．0 0
15 2．0 0 25 6．9±0．8 36
15 5．0 0 25 10．6±1．0 5O
15 10．0 0 25 7．2±2．0 28
15 5．0 0．5 25 14．1±0．7 58
注：数据为两次独立试验结果的平均值 ±SE。基本培养基
为 盐 +肌醇 100mg·L一 +VBl 10mg·L一 +Ⅶ61 mg·L一 +烟酸
1 mg·L一1 o
Note：The abovedata aIethe皿Ie明s±SE 0ftwotimes 0f曲中 ⅡHlt．
Th e basicln~ unlis salt ekmmts 0fMS+lnmitol100嘴 ·L一 +VB1 10
唱 ‘L一 +V 1唱 ‘L一 +Nicotinic acid 1唱 ‘L一 ．
将形成的不定芽切割成数丛，接种到附加蔗糖 15 g·L一 +BA 5．0 mg·L一 +NAA 0．5 mg·L一 的不
定芽诱导培养基上继代增殖，6—8周后可产生大量丛生芽，增长率约为250％，可反复切割成丛芽或
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244 园 艺 学 报 30卷
单个小植株进行增殖。采用本方法，一年内可继代 6次以上，按每个花葶切成 10切片，则可诱导出
10×14．1×58％：81．78个不定芽，一年内可增殖 81．78×2．56=19965．8个芽，可作为蝴蝶兰快速繁殖
的途径之一。
2．4 壮苗生根
将单个芽接种到生根培养基上壮苗生根，植株生长迅速，2周后可见新根长出，2个月后长成健
壮的完整植株，炼苗后即可出瓶移栽。
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In Vitro Culture of the InnoleSCelCe of Phalaenopsis
Chen Zhilin，Ye Xiulin， and Liang Chengye
(South Ch／na Inst／tute ofBotany，Academ／a S／n／ca，Q删 跳 510650，Ch／na)
Abstract：Inflorescences were induced by culturing flower-stalk buds of Pha／aenops／a on V&W nlediull con—
taining vitamin component of B5 medium and 5．0 nag‘LI1 benzylaminopurine(BA)under 22~C．Adventitious
shoot were induced from the intemodal segments of inflorescence by using the NS medium containing vitamin of B5
medium．5 mg·L一 BA and 0．5mg·L～ NAA．The low 81elOSe concentration benefits the shoot’8 diferentiation
and growth． Shoot were propagated on the same medium and developed into plantlet on Hyponex 1 nlediuln contain—
ing 100 g‘L banana juice and 2 g‘L— active ehan~ ．
Key words： Pha／aenops／s； Inflorescences；Adventitious shoot；In vitro culture
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