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Effect of Soil Extract Solution from Different Aged Alfalfa Standings on Seed Germination of Three Species

异龄苜蓿土壤浸提液对3种植物种子萌发的影响



全 文 :第 17 卷  第 6 期
Vol. 17  No. 6
草  地  学  报
ACTA AGRESTIA SINICA
   2009 年  11 月
 Nov.   2009
异龄苜蓿土壤浸提液对 3种植物种子萌发的影响
杨  倩 , 王  希, 沈禹颖*
(农业部草地农业生态系统重点开放实验室,兰州大学草地农业科技学院, 兰州  730020)
摘要: 采用自甘肃庆阳和定西地区不同年龄紫花苜蓿(Medicago sativa L. )土壤制备浸提液, 应用纸上发芽法检测其
对苜蓿、萝卜(Rap hanus sativus L . )和小麦( Triticum aestivum L. )种子萌发的影响。结果表明: 不同生长年龄苜蓿土
壤浸提液对苜蓿种子萌发以及胚根和胚芽的抑制程度为 5年> 3年> 9 年, 在庆阳 5 龄苜蓿土壤浸提液( 500 g干土/
L)中苜蓿发芽率下降 18% , 其胚芽和胚根显著受抑 (P < 0. 05) , 比对照分别降低 69%和 80%。在平均降水 391
mm 的定西, 4 年以下苜蓿土壤无明显自毒性; 苜蓿秋季翻耕休闲有利于 3 个供试种的萌发及胚根和胚芽的生长,
有效解除了 5 年龄以上苜蓿土壤的自毒效应,苜蓿- 小麦轮作系统中,苜蓿后茬小麦建植不受苜蓿毒性的影响。
关键词:紫花苜蓿; 土壤浸提液;自毒作用; 种子萌发
中图分类号: Q945. 34; S158. 4    文献标识码: A      文章编号: 10070435( 2009) 06078405
Effect of Soil Extract Solution from Different Aged Alfalfa
Standings on Seed Germination of Three Species
YANG Qian, WANG Xi, SHEN Yuy ing*
( Key Lab oratory of Gras sland Agr oecosystem of M inist ry of Agricul tu re, College of Pas toral Agricul tu re
Science and T echnology, Lanzhou U nivers ity, Lanzh ou, Gan su Pr ovin ce 730020, Ch ina )
Abstract: Alfalfa (Medicago sat iva L. ) is recognized as a high y ield and good quality fo rage and play ing a
key ro le in bo th forage supply and food security. T he autotox icity has been reported as one of the most im
portant facto rs causing low y ield of succeeding alfalfa crop. A germination bio assay w as conducted to de
termine the to xic ef fect of so il aqueous ext racts fr om dif ferent ag ed alfalfa standings in Qingyang and
Dingxi, Gansu Province on seed germinat ion rate of alfalfa, radish ( Rap hanus sativus L. ) , and wheat
( Tr i ti cum aesti vum L. ) using paper germination test . T he r esults indicate that an inhibit ion effect of soil
aqueous ex t racts f rom dif ferent aged alfalfa standing s in Qingyang on alfalfa seed germinat ion was detec
ted, the tox icity form high to low w as as 5year > 3year > 9year, and the relat ive germinat ion rate of al
falfa tr eated by soil aqueous ex t racts f rom 5y alfalfa standing declined 18% in comparison w ith that in con
t ro l, meanwhile the reduct ion of relat ive plumule length and radicle length reached 69% and 80%, respec
t ively. Alfalfa ag e below 4 years at Dingx i did not show significant autotox icity effect due to low
aboveg round biomass accumulation under condit ion o f annual av er age r ainfall 391mm. Fallow and ploug
hing in fall w as an effect ive method to breakdown the so il to xicity of above 5year old alfalfa standing on
three species seed germ inat ion. In alfalfawheat rotat ional system , alfalfa retained w eak to xicity effect on
the following w heat establishment .
Key words: Alfalfa; Soil aqueous ex tr act ; Autotox icity; Seed germination
  紫花苜蓿(M edicago sat iv a L. ) (以下简称苜
蓿)是当今公认的高品质优良牧草,我国种植面积已
达 133万 hm2 , 在国内外草产品需求变化和一系列
食物安全质量事件发生的形势下,苜蓿产业的作用
和地位愈显突出 [ 1]。据报道,苜蓿草地生长几年后,
会出现密度下降的现象, 严重影响了其经济产量, 短
期间隔内重茬种植, 后茬苜蓿难以建植成功[ 2] , 即
使能够建植, 产量也不如前茬[ 3] ,并出现植株矮化等
现象 [ 4] ,这是由于苜蓿根、茎、叶、花和种子等组织含
有某些水溶性化学物质, 以枯枝落叶和残留根方式
在土壤中逐年富集[ 5~ 11] , 对苜蓿自身引起自毒, 对
其他植物具有化感作用。研究亦表明, 自毒性的表
现依赖于分泌到环境中的化学物质, 自毒物质的生
理活性随土壤类型和植物生长年限不同而表现出时
收稿日期: 20081231;修回日期: 20091015
基金项目:教育部重点科技项目( 103164) ;国家重点基础研究发展规划项目( 2007CB106804)
作者简介:杨倩( 1985 ) , 女, 甘肃兰州市人, 硕士研究生, 研究方向为草地农业生态系统, Email: yangqian08@ lzu. cn; * 通讯作者 Au
thor for correspondence, Email: yy. shen@ lzu. edu. cn
第 6期 杨倩等:异龄苜蓿土壤浸提液对 3种植物种子萌发的影响
空差异[ 12, 13] ,重茬种植苜蓿应在自毒物质分解或有
效扩散之后[ 6, 12] ,翻耕或轮作可有效解除苜蓿自毒
危害,但解毒过程至少需要 1年 [ 11]。黄土高原适宜
苜蓿生长,而苜蓿是甘肃中东部地区发展草地畜牧
业,农民增产增收的当家优质栽培牧草之一。苜蓿
- 小麦轮作在当地有一定的种植历史, 本研究通过
实验室发芽生物测试,探讨苜蓿自毒效应与其生境和
生长年限的关系,以及翻耕后短期休闲对自毒效应的
缓解作用,为促进区域内苜蓿产业发展提供参考。
1  材料与方法
1. 1  样地选择
研究地点: 兰州大学庆阳黄土高原试验站( 35
40N, 107 51E) ,行政区域属甘肃庆阳市西峰区什
社乡,海拔 1300 m,年降雨量 563 mm, 年均气温 8.
2  , 土壤为黑垆土, 以下简称庆阳;甘肃农业大学定
西试验站( 35 28N, 104 44E) , 行政区域属甘肃
省定西市安定区李家堡乡, 海拔 2 000 m,年降雨量
391 mm, 年均气温 6. 4  。土壤为黄绵土, 以下简
称定西。
1. 2  土样采集
2007年 6 月于苜蓿盛花期, 选取庆阳生长 3
年、5年和 9年苜蓿草地, 清除地表枯枝落叶, 每个
地块选取 10个样点,以苜蓿植株为中心采集 0~ 20
cm 的根际土壤。选取定西生长 2年和 4年的紫花
苜蓿草地,同法取土样。
同年 8月,庆阳 5年和 9 年苜蓿地每个小区分
出一半,挖取苜蓿,翻耕休闲, 4周后用同法取土样。
所有土样 36  下烘干, 挑除细根, 过筛, 4  下
保存备用。
1. 3  土壤浸提液的制备
各年龄处理土样分别取 5、10、50 g 土样置于三
角瓶内, 加 100 mL 蒸馏水, 放入振荡器 (振速 150
转/分)震荡 24 h, 定量滤纸过滤,得上清液, 浓度分
别为 50 、100和 500 g 干土/ L 的根际土壤浸提液。
1. 4  室内发芽测试处理与观测项目
发芽测试供试种子为萝卜( Raphanus sat ivus
L. )、小麦( T r it icum aesti vum L. )和苜蓿。选取外
观一致、籽粒饱满的种子, 并用 1% NaClO 消毒 30
min, 蒸馏水冲洗干净后用滤纸吸干。采用培养皿
纸上发芽法,培养皿(直径 9 cm )铺双层滤纸, 每皿
均匀摆放 50粒种子,培养皿各加 10 mL 土壤浸提
液。5个年龄、3个浓度共 15个处理,每一处理设 4
次重复,用蒸馏水处理作对照。置于 25  , 暗周期
24 h的人工气候箱中发芽。每天补充适量蒸馏水
以保持培养皿内滤纸的湿度。
参照国际种子检验规程以胚根突破种皮,伸出
1 mm 为发芽标准, 第 4 d进行初次计数。第 7 d每
皿随机取 10株幼苗,在坐标纸上测胚芽和胚根长。
硬实种子按未发芽处理 [ 14]。
7天发芽率 % = (前 3 d累计发芽数)∕ 50  100%
相对发芽率 %= 处理发芽率/对照发芽率
相对胚芽长= 处理种子胚芽/对照种子胚芽
相对胚根= 处理种子胚根/对照种子胚根
1. 5  数据统计分析
用 Genstat Discovery Edit ion 2进行数据处理
和统计分析,检验以上各苜蓿土壤浸提液对供试种
子萌发的影响,用 LSD法进行多重比较。
2  结果与分析
2. 1  浸提液对种子萌发及胚芽胚根生长的影响
庆阳 3年生、5 年生和 9 年生苜蓿土壤浸提液
( 500 g 干土/ L )刺激了萝卜种子发芽, 发芽率高于
其对照,但各年限间无显著差异。(表 1)。
  定西 2年和 4年苜蓿土壤浸提液( 500 g 干土/
L )中,萝卜相对发芽率均低于对照。2年和 4年苜
蓿土壤浸提液中苜蓿发芽率均显著低于对照 ( P<
0. 05) (表 1)。
  庆阳不同年龄苜蓿土壤浸提液对萝卜和小麦的
胚芽生长无显著影响,而苜蓿在 3 年和 5 年苜蓿土
壤浸提液中的相对胚芽长显著低于其对照及萝卜和
小麦( P< 0. 05)。5 年苜蓿土壤浸提液中相对胚芽
长仅是其对照的 31%,在 9年土壤浸提液中比其对
照下降了14%,不同年龄苜蓿土壤浸提液对苜蓿胚
芽的抑制程度为 5年> 3 年> 9 年。定西 2年和 4
年苜蓿土壤浸提液中小麦胚芽长均高于对照,萝卜
和苜蓿的胚芽长度则无显著变化。
庆阳苜蓿土壤浸提液中萝卜和小麦胚根的生长
与胚芽生长趋势相同, 而苜蓿胚根生长则受到显著
抑制( P< 0. 05) , 其相对长度仅是对照的 20%, 按生
长年限来看,苜蓿土壤浸提液对苜蓿胚根的抑制作
用表现为: 5年> 3年> 9年。定西 2个年龄苜蓿土
壤浸提液对 3个供试物种的相对胚根长度无显著影
响(表 2)。
2. 2  不同浓度苜蓿土壤浸提液的影响
在 5年龄苜蓿土壤浸提液为 0- 500 g 干土/ L
的浓度范围内, 萝卜、小麦的发芽率均低于其对照,
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草  地  学  报 第 17卷
表 1 不同年龄苜蓿土壤浸提液( 500 g干土/ L)对相对发芽率的影响
Table 1 Relativ e germination percentag e under soil aqueous ext racts ( 500 gDW/ L ) fr om different ag es o f alfalfa stands
物种
Species
庆阳 Qingyan g
3龄 5龄 9龄 LSD (0. 05)
定西 Din gxi
2龄 4龄 LSD ( 0. 05)
萝卜 Radish 104. 01 103. 9 103. 48 8. 68 99. 16 98. 93 5. 07
小麦 Wheat 107. 45 91. 37 103. 28 13. 36 101. 78 102. 35 1. 76
紫花苜蓿 Alfal fa 97. 32 92. 65 99. 59 29. 42 80. 75 88. 87 11. 77
L SD ( 0. 05) 23. 57 14. 48 18. 63 7. 26 5. 3
表 2  不同年龄苜蓿土壤浸提液( 500 g干土/ L)对相对胚芽长和相对胚根长的影响
Table 2 Relativ e shoot and radica l leng th under so il aqueous ex tr acts ( 500 g DW L - 1 ) f rom differ ent ag es o f alfalfa stands
物种
Species
庆阳 Qingyang
苜蓿年龄 Alfal fa age ( year)
3 5 9
LSD( 0. 05)
定西 Dingx i
苜蓿年龄 Alfal fa age ( year)
2 4
LSD ( 0. 05)
相对胚芽长 Relat ive plum ule length ( mm)
萝卜 Radish 0. 98 0. 99 1. 04 0. 10 0. 93 1. 02 0. 16
小麦 Wheat 0. 92 0. 86 0. 89 0. 22 1. 04 1. 02 0. 07
紫花苜蓿 Alfal fa 0. 67 0. 31 0. 86 0. 20 1. 02 0. 98 0. 06
L SD ( 0. 05) 0. 19 0. 22 0. 14 0. 06 0. 12
相对胚根长 Relative radicle len gth ( mm )
萝卜 Radish 0. 80 0. 91 1. 03 0. 11 0. 99 1. 15 0. 10
小麦 Wheat 1. 00 0. 92 1. 07 0. 16 1. 04 1. 04 0. 05
紫花苜蓿 Alfal fa 0. 34 0. 20 0. 68 0. 12 1. 03 1. 04 0. 18
L SD ( 0. 05) 0. 13 0. 20 0. 19 0. 13 0. 09
但各浓度之间无显著差异。当土壤浸提液浓度为
50 g 干土/ L 时,苜蓿的发芽率是其对照的107. 8% ,
在浓度为 500 g 干土/ L 的处理下,比对照显著下降
18% ( P< 0. 05) (图 1)。
图 1  不同浓度 5 年龄苜蓿土壤浸提液对相对发芽率的影响
Fig. 1  Relative germination rate under different concentrations
of so il aqueous ex tracts from 5 year alfalfa stands
* 表示在 0. 05 水平显著, n s表示在 0. 05水平上无显著差异。
* means sign ificance at P< 0. 05, ns mean s n o
s ignifi cant dif feren ce am ong species.
  萝卜和小麦胚芽不受苜蓿浸提液测试浓度的影
响,低浓度浸提液( 50 g 干土/ L )刺激了苜蓿胚芽生
长, 500 g 干土/ L 处理下胚芽长显著受到抑制( P<
0. 05) , 比对照下降 67%。
  同胚芽一样, 萝卜和小麦胚根均随苜蓿浸提液
浓度的升高而降低,在 500 g 干土/ L 处理下分别比
对照下降 4%和 7%,紫花苜蓿胚根随着苜蓿浸提液
浓度的升高而降低, 500 g 干土/ L 处理下胚根长仅
为对照的 25% ( P< 0. 05) (表 3)。
表 3  不同浓度 5 年龄苜蓿土壤浸提液对相对胚芽
长和相对胚根长的影响
Table 3  Relative shoot and radical length under different
concent rations of soil aqueous ex tracts fr om 5 year alfalfa stands
物种
Species
浓度 Con. ( g DW L- 1 )
0 50 100 500
LSD( 0. 05)
相对胚芽长 Relat ive plumu le length ( mm)
萝卜 Radish 1. 00 1. 00 0. 97 0. 95 0. 06
小麦 Wheat 1. 00 0. 99 0. 99 0. 94 0. 07
紫花苜蓿 Alfalfa 1. 00 1. 01 0. 94 0. 31 0. 17
LSD ( 0. 05) 0. 15 0. 06 0. 09 0. 05
相对胚根长 Relat ive radicle length ( mm)
萝卜 Radish 1. 00 0. 99 0. 99 0. 96 0. 05
小麦 Wheat 1. 00 0. 97 0. 93 0. 93 0. 08
紫花苜蓿 Alfalfa 1. 00 1. 07 0. 97 0. 20 0. 15
LSD ( 0. 05) 0. 21 0. 10 0. 11
2. 3  翻耕休闲前后苜蓿土壤浸提液的影响
5年龄苜蓿土壤翻耕后, 萝卜在其土壤浸提液
( 500 g 干土/ L)中的发芽率高于翻耕前, 但差异不
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第 6期 杨倩等:异龄苜蓿土壤浸提液对 3种植物种子萌发的影响
显著。在 5年龄、9 年龄紫花苜蓿翻耕后土壤浸提
液( 500 g 干土/ L )中, 小麦发芽率均显著地高于翻
耕前( P< 0. 05)。5年龄苜蓿翻耕后土,苜蓿在其土
壤浸提液( 500 g 干土/ L)中的发芽率显著高于翻耕休
闲前( P< 0. 05) ,说明该土壤中存有影响种子萌发的
物质。9年紫花苜蓿地同样处理后 500 g 干土/ L 土
壤浸提液处理下的苜蓿发芽率高于翻耕前(表 4)。
  在翻耕 4周后的 2个年龄苜蓿土壤浸提液中,
萝卜和小麦的胚芽长均略高于翻耕前, 其中 5年苜
蓿浸提液中,苜蓿胚芽长显著高于翻耕前 3. 2倍( P
< 0. 05) ,萝卜、小麦和苜蓿的胚根长比翻耕前显著增
加 2. 74、0. 29和2. 9倍( P< 0. 05) , 9年苜蓿草地翻耕
后,苜蓿胚根长度显著增加,约 1. 55倍( P< 0. 05) ,萝
卜和小麦的胚根长度对翻耕无显著响应(表 5)。
表 4 休闲翻耕后苜蓿土壤浸提液( 500 g干土/ L)对发芽率的影响
Table 4 Effect of so il aqueous ex tracts ( 500 g DW L - 1 ) after so il fallow and ploughing on seed germination rate
物种  
Species  
苜蓿年龄 Alfalfa age ( year)
5
翻耕前
Before ploughing
翻耕后
After plou ghing
LSD (0. 05)
9
翻耕前
Before ploughing
翻耕后
After plou ghing
LSD ( 0. 05)
萝卜 Radish 85. 5 92. 5 5. 91 89. 5 93. 00 7. 96
小麦 Wheat 67 99. 5 9. 13 74. 5 99. 00 7. 71
紫花苜蓿 Alfal fa 65. 5 80 10. 64 71 78. 5 13. 97
表 5 休闲翻耕后苜蓿土壤浸提液( 500 g干土/ L)对胚芽长和胚根长的影响
T able 5 Effect of soil aqueous ext racts ( 500 g DW  L- 1) after so il fa llow and ploughing on plumule and radicle leng th
物种  
Species  
苜蓿年龄 Alfalfa age ( year)
5
翻耕前
Before ploughing
翻耕后
After plou ghing
LSD (0. 05)
9
翻耕前
Before ploughing
翻耕后
After plou ghing
LSD ( 0. 05)
胚芽长 Plumule len gth ( mm)
萝卜 Radish 4. 86 4. 90 0. 73 5. 04 5. 31 0. 67
小麦 Wheat 7. 64 7. 61 2. 39 7. 77 9. 67 2. 33
紫花苜蓿 Alfal fa 1. 07 4. 51 0. 65 3. 57 3. 98 1. 08
L SD ( 0. 05) 0. 23 0. 33 0. 65 1. 23
胚根长 Radicle length ( mm)
萝卜 Radish 2. 43 9. 11 2. 67 6. 94 8. 00 1. 75
小麦 Wheat 9. 2 11. 88 1. 28 10. 55 10. 62 2. 72
紫花苜蓿 Alfal fa 0. 99 3. 87 0. 58 1. 00 2. 55 0. 99
L SD ( 0. 05) 1. 34 1. 34 1. 11 0. 45
3  讨论
3. 1  苜蓿生长年限与生长环境的自毒效应表现
植物枯枝落叶、脱落的种子和残茬腐解、根系分
泌物是自毒物质的产生源, 而土壤则是自毒物质累
积的媒介和库。从产生源释放到土壤中, 经过一系
列的滞留、转化、迁移等途径, 在植物中逐渐富集, 并
维持一定浓度和持续活性 [ 17] , 自毒效应的表现取决
于化感物质的累积程度[ 25] 。本研究表明,庆阳 5年
苜蓿土壤浸提液对苜蓿萌发的抑制作用强于 3年苜
蓿,说明苜蓿自毒作用随生长年限的逐年增加而增
强[ 10]。9年苜蓿的自毒性又有所减弱, 可认为苜蓿
一般在种植第 4- 5年处于生长旺盛期,苜蓿群体数
量增加,生物量达到高峰,积累在土壤中的化学物质
含量增加,自毒效应增强,然而第 5年后苜蓿根系活
力逐渐衰退,产量开始下降[ 18] ,苜蓿群体数量降低,
导致进入土壤的自毒物质减少, 自毒效应较弱。依
据之前对植株浸提液自毒效应的研究, 由于自毒物
质积累在源中有所减少[ 2] , 从而使 9 龄苜蓿的自
毒作用减轻。
定西 2个苜蓿土壤浸提液未见显著的自毒效
应,大概与定西年平均降水仅 391 mm 有关, 苜蓿生
物量比庆阳低[ 26] ,土壤中积累的化学物质含量少于
庆阳。说明苜蓿自毒积累过程及其表现与立地环境
条件有一定关系[ 22] 。
3. 2  紫花苜蓿自毒效应的抑制浓度
Chung 等[ 19] 用 7个品种的苜蓿水浸提液进行
的自毒试验表明, 化感抑制作用随着浓度的升高而
增强。苜蓿自毒物质效应往往呈现 低促高抑趋
势,即低水平时并不抑制生长,反而具有一定的促进
作用。本研究表明,低浓度( 50 g 干土/ L )苜蓿土壤
787
草  地  学  报 第 17卷
浸提液处理促进了苜蓿胚芽和胚根的生长, 说明苜
蓿的自毒作用主要依赖其化学物质浓度高低, 当积
累到一定浓度水平才具有抑制作用,这与前人的研
究结果一致[ 10, 15, 16]。
苜蓿土壤浸提液对小麦种子萌发的抑制作用最
小,各浓度处理下与对照均无显著性差异。说明小
麦对苜蓿化感物质的耐受性较强,也说明苜蓿- 小
麦轮作模式具有被当地普遍采用的合理性。
庆阳苜蓿土壤浸提液对苜蓿种子发芽率无明显
抑制作用,但对胚根和胚芽表现出明显的抑制作用,
特别是在浓度为 500 g 干土/ L 的 5年龄苜蓿土壤
浸提液中,相对胚芽和胚根长度比对照下降 67%和
75% ,表明重茬苜蓿在重新建植或补播时虽然可以
萌发,但萌发后由于受自毒物质的影响,胚根和胚芽
的伸长受阻,这是由于苜蓿土壤浸提液中含有的水
溶性化学物质显著抑制了根尖细胞伸长和分裂, 从
而抑制其对养分的吸收, 进而影响生长所致[ 6] 。
3. 2  苜蓿地翻耕休闲对自毒效应的解除作用
众多研究认为欲使苜蓿自毒作用降低到最低,
重茬种植至少应该间隔 12个月 [ 3, 21~ 23]。也有报道
指出苜蓿重茬播种间隔越长, 播种当年的植株密度
和产量越高[ 24]。苜蓿自毒表现受多种条件的影响,
需要根据立地条件确定适宜的休闲间隔时间。本研
究表明,苜蓿草地土壤经翻耕休闲后其浸提液对萝
卜、苜蓿和小麦发芽的抑制显著解除,证明翻耕利于
0~ 20 cm 土壤中化学物质的分解,能够降低对后续
植物萌发生长的毒性 [ 15] ,说明在庆阳, 5龄以上苜蓿
经秋季翻耕间歇 4周后, 重新种植苜蓿成功率高, 这
与庆阳 8、9月集中降雨的立地条件有关。
4  结论
经室内发芽生物测验,年平均降水 563 mm 的
庆阳 5年苜蓿土壤表现出明显的自毒效应, 9 年苜
蓿土壤自毒性有所减弱;年平均降水 391 mm 的定
西, 4年以下苜蓿土壤无明显自毒性; 苜蓿自毒物质
通过抑制胚芽和胚根生长影响苜蓿生长, 仅观测发
芽率, 不能完全反映其自毒效应。秋季翻耕休闲可
有效解除 5年龄以上苜蓿土壤的自毒效应, 苜蓿-
小麦轮作系统中,苜蓿后茬小麦不会受到苜蓿毒性
影响,自毒作用的强度与生长年龄和立地条件有关。
参考文献
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(责任编辑  邵新庆)
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