全 文 ：第２０卷　第１期
　Ｖｏｌ．２０　 Ｎｏ．１
草　地　学　报
ＡＣＴＡ　ＡＧＲＥＳＴＩＡ　ＳＩＮＩＣＡ
　　　２０１２年　 １月
　 Ｊａｎ．　　２０１２
结缕草种子中ＮＣＥＤ基因和ＣＹＰ７０７Ａ基因
的克隆及其表达动态
迟晓雪１，孙洁峰２，方　程１＊
（１．中国农业大学草地研究所，北京　１００１９３；２．青岛海源草坪有限公司，山东 青岛　２６６３１８）
摘要：ＡＢＡ是抑制种子萌发的主要激素，而９－顺式－环氧类胡萝卜素双加氧酶（ＮＣＥＤ）和８’－羟化酶（ＣＹＰ７０７Ａ）是
控制ＡＢＡ合成及代谢的关键基因。为了解基因表达水平与种子萌发率之间的关系，以２种萌发率不同的结缕草
（Ｚｏｙｓｉａ　ｊａｐｏｎｉｃａ）海青一号（Ｈ１）和野生型（ＷＴ）结缕草种子为材料，克隆ＣＹＰ７０７Ａ基因目的片段，通过Ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ
ＰＣＲ测定２种结缕草种子在不同吸胀时间的ＮＣＥＤ和ＣＹＰ７０７Ａ基因表达水平。结果表明：ＮＣＥＤ和ＣＹＰ７０７Ａ
基因在不同吸胀时间和不同材料中基因表达水平不同，在萌发率较高的海青一号（Ｈ１）种子吸胀过程中，ＮＣＥＤ基
因和ＣＹＰ７０７Ａ基因表达持续升高，在萌发率较低的野生型（ＷＴ）结缕草种子吸胀过程中ＮＣＥＤ和ＣＹＰ７０７Ａ基因
表达量先升高，随后又降低到较低水平，ＮＣＥＤ基因和ＣＹＰ７０７Ａ基因在萌发率不同的２种结缕草种子吸胀过程中
的表达存在差异，说明种子的萌发率不仅与ＡＢＡ含量有关，还与ＡＢＡ代谢速率有关，体现两者在影响种子萌发率
过程中相互协作，相互平衡的关系。
关键词：结缕草；ＮＣＥＤ基因；ＣＹＰ７０７Ａ基因；基因克隆；表达水平
中图分类号：Ｑ９４３．２　　　　文献标识码：Ａ　　　　　文章编号：１００７－０４３５（２０１２）０１－０１４６－０７
Ｃｌｏｎｉｎｇ　ａｎｄ　Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　Ｄｙｎａｍｉｃｓ　ｏｆ　ＮＣＥＤａｎｄ　ＣＹＰ７０７ＡＧｅｎｅｓ
ｆｒｏｍＺｏｙｓｉａ　ｊａｐｏｎｉｃａ　Ｓｅｅｄｓ
ＣＨＩ　Ｘｉａｏ－ｘｕｅ１，ＳＵＮ　Ｊｉｅ－ｆｅｎｇ２，ＦＡＮＧ　Ｃｈｅｎｇ１＊
（１．Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ　ｏｆ　Ｇｒａｓｓｌａｎｄ　Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｃｈｉｎａ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｂｅｉｊｉｎｇ　１００１９３，Ｃｈｉｎａ；
２．Ｈａｉｙｕａｎ　Ｔｕｒｆ　Ｌｔｄ，Ｑｉｎｇｄａｏ，Ｓｈａｎｄｏｎｇ　Ｐｒｏｖｉｎｃｅ　２６６３１８，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＡＢＡ　ｉｓ　ａ　ｍａｊｏｒ　ｐｌａｎｔ　ｈｏｒｍｏｎｅ　ｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇ　ｓｅｅｄ　ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ．Ｂｏｔｈ　９－ｃｉｓ－ｅｐｏｘｙｃａｒｏｔｅｎｏｉｄ　ｄｉｏｘｙｇｅｎ－
ａｓｅ（ＮＣＥＤ）ａｎｄ　ＡＢＡ　８’－ｈｙｄｒｏｘｙｌａｓｅ（ＣＹＰ７０７Ａ）ａｒｅ　ｋｅｙ　ｇｅｎｅｓ　ｉｎｖｏｌｖｅｄ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ　ａｎｄ　ｄｅｇｒａｄａ－
ｔｉｏｎ　ｐｒｏｃｅｓｓｅｓ　ｏｆ　ＡＢＡ．Ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｓｅｅｄ　ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｒａｔｅ　ａｎｄ　ｔｈｅｓｅ　ｔｗｏ　ｇｅｎｅｓ　ｈａｓ　ｂｅｅｎ　ｒｅｐｏｒｔｅｄ　ｉｎ　ｍａｎｙ
ｐｌａｎｔ　ｓｐｅｃｉｅｓ，ｂｕｔ　ｆｅｗ　ｉｎ　ｈｅｒｂａｇｅ　ｓｅｅｄｓ．Ｔｗｏ　ｈｅｒｂａｇｅ　ｓｅｅｄｓ　ｆｒｏｍＺｏｙｓｉａ　ｊａｐｏｎｉｃａ－Ｈａｉｑｉｎｇ１（Ｈ１）ａｎｄ　ｗｉｌｄ
ｔｙｐｅ（ＷＴ）ｗｅｒｅ　ｕｓｅｄ　ｔｏ　ｓｔｕｄｙ　ｔｈｅ　ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ｓｅｅｄ　ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｒａｔｅ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓ　ｏｆ　ｔｈｅｓｅ
ｔｗｏ　ｇｅｎｅｓ．Ｔｈｅ　ｇｅｎｅ　ＣＹＰ７０７Ａｗａｓ　ｃｌｏｎｅｄ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ｂｏｔｈ　ＮＣＥＤａｎｄ　ＣＹＰ７０７Ａｉｎ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ
ｍａｔｅｒｉａｌｓ　ｕｎｄｅｒ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｉｍｂｉｂｉｔｉｏｎ　ｒｅｇｉｍｅｓ　ｗｅｒｅ　ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ　ｔｈｒｏｕｇｈ　Ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ　ＰＣＲ．Ｂｏｔｈ　ＮＣＥＤａｎｄ
ＣＹＰ７０７Ａｈａｄ　ａ　ｃｏｎｔｉｎｕｏｕｓ　ｉｎｃｒｅａｓｉｎｇ　ｔｒｅｎｄ　ｉｎ　Ｈ１ｗｉｔｈ　ｓｅｅｄ　ｉｍｂｉｂｉｔｉｏｎ　ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ　ａｎｄ　ｈａｄ　ａ　ｒｅｌａｔｉｖｅｌｙ
ｈｉｇｈｅｒ　ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｒａｔｅ．Ｈｏｗｅｖｅｒ，ｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓ　ｏｆ　ｔｈｅｓｅ　ｔｗｏ　ｇｅｎｅｓ　ｉｎ　ＷＴ　ｗｉｔｈ　ｓｅｅｄ　ｉｍｂｉｂｉｔｉｏｎ　ｐｒｏｃｅｓｓ－
ｉｎｇ　ｓｈｏｗｅｄ　ａｎ　ｉｎｃｒｅａｓｉｎｇ　ｔｒｅｎｄ　ｄｕｒｉｎｇ　ｔｈｅ　ｆｉｒｓｔ　２ｈｏｕｒｓ　ｏｆ　ｉｍｂｉｂｉｔｉｏｎ　ｔｈｅｎ　ｄｒｏｐｐｅｄ　ｔｏ　ａ　ｖｅｒｙ　ｌｏｗ　ｌｅｖｅｌ．Ｔｈｅ
ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｖａｒｉａｎｃｅｓ　ｏｆ　ｔｈｅｓｅ　ｔｗｏ　ｇｅｎｅｓ　ｓｕｇｇｅｓｔ　ｔｈａｔ　ｔｈｅｒｅ　ｗａｓ　ａ　ｍｕｔｕａｌ　ｃｏｏｒｄｉｎａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｂａｌａｎｃｅ　ｒｅｌａｔｉｏｎ－
ｓｈｉｐ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ＡＢＡ　ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ　ａｎｄ　ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ　ｄｕｒｉｎｇ　ｓｅｅｄ　ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ．
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｚｏｙｓｉａ　ｊａｐｏｎｉｃａ；ＮＣＥＤ；ＣＹＰ７０７Ａ；Ｇｅｎｅ　ｃｌｏｎｅ；Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ
　　种子的萌发是由基因本身决定的，同时也受环
境因素的影响。乙烯、赤霉素（ＧＡ）能诱导种子萌
发，脱落酸（ＡＢＡ）则抑制萌发［１］。在高等植物中，
ＡＢＡ的合成主要通过Ｃ４０间接途径，ＡＢＡ在９－顺
式－环氧类胡萝卜素双加氧酶（ＮＣＥＤ）催化下可生
成８’－羟基ＡＢＡ，９－顺式－环氧类胡萝素双加氧酶是催
收稿日期：２０１１－０３－１７；修回日期：２０１１－１０－２０
基金项目：国家自然科学基金（３０９７２１３７）资助
作者简介：迟晓雪（１９８６－），女，内蒙古扎兰屯人，硕士，研究方向为牧草分子技术，Ｅ－ｍａｉｌ：ｃｈｉｘｉａｏｘｕｅ．３３３＠１６３．ｃｏｍ；＊通信作者 Ａｕｔｈｏｒ
ｆｏｒ　ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｅｎｃｅ，Ｅ－ｍａｉｌ：ｆａｎｇｃｈｅｎｇ＠ｃａｕ．ｅｄｕ．ｃｎ
第１期 迟晓雪等：结缕草种子中ＮＣＥＤ基因和ＣＹＰ７０７Ａ基因的克隆及其表达动态
化有生物活性脱落酸合成的关键酶［２～１０］。ＡＢＡ失活
代谢途径主要分为８’－甲基羟基化代谢途径、７’－羟基
化代谢途径和ＡＢＡ酯化降解途径，其中通过８’－羟化
酶分解ＡＢＡ产生红花菜豆酸（ｐｈａｓｅｉｃ　ａｃｉｄ，ＰＡ）和二
氢红花菜豆酸（ｄｅｈｙｄｒｏｐｈａｓｅｉｃ　ａｃｉｄ，ＤＰＡ）是主要的代
谢途径［１１～１６］。Ｓｈｉｇｅｋｉ　Ｓａｉｔｏ等［１５］克隆拟南芥（Ａｒａｂｉ－
ｄｏｐｓｉｓ　ｔｈａｌｉａｎａ）中的ＣＹＰ７０７Ａ家族基因中的４个基
因，并证明了ＣＹＰ７０７基因是编码ＡＢＡ　８’－羟化酶的
关键基因。９－顺式－环氧类胡萝卜素双加氧酶最早从
玉米（Ｚｅａ　ｍａｙｓ）ＡＢＡ缺失突变体ｖｐ１４中发现，之后
相继从菜豆（Ｐｈａｓｅｏｌｕｓ　ｖｕｌｇａｒｉｓ）、鳄梨（Ｐｅｒｓｅａ　ａｍｅｒｉ－
ｃａｎａ）和拟南芥等植物中克隆到［１２～１４］。Ｓｏｎｉａ　Ａｌｉ－
Ｒａｃｈｅｄｉ等［１７］用拟南芥的休眠型为材料，证明 ＡＢＡ
含量与种子的萌发率之间成负相关，但萌发率并不是
由单一激素决定的，是与ＧＡ协同作用的结果。９－顺
式－环氧类胡萝卜素双加氧酶在转基因植物中的过量
表达能增加ＡＢＡ的含量［１８］。ＡＢＡ在植物中的含量
是由９－顺式－环氧类胡萝卜素双加氧酶（ＮＣＥＤ）和
ＡＢＡ　８’－羟化酶（ＣＹＰ７０７Ａ）共同决定的。９－顺式－环
氧类胡萝卜素双加氧酶（ＮＣＥＤ）和 ＡＢＡ　８’－羟化酶
（ＣＹＰ７０７Ａ）在种子吸胀过程中的表达与种子萌发率
的关系在拟南芥、大麦（Ｈｏｒｄｅｕｍ　ｖｕｌｇａｒｅ）等植物中
已有研究［１９］。
结缕草（Ｚｏｙｓｉａ　ｊａｐｏｎｉｃａ）是禾本科结缕草属草
本植物，具有抗旱性强、适应性广，耐磨性和耐践踏
性强、弹性高等特性，被广泛应用于草坪建植、生态
恢复、水土保持和优良饲料等方面［２０］。然而结缕草
种子在未经处理的情况下发芽率较低，周期较长，导
致幼苗参差不齐，严重影响了草坪的美观及使用效
率［２１，２２］。近年来，国内外一些研究人员对结缕草休
眠较深的原因以及打破休眠促进萌发的方法进行了
大量研究，但多为生理及物理方面的研究［２３～２５］，对
分子水平的研究相对较少。本试验采用发芽率不同
的２种结缕草海青１号（Ｈ１）和野生型（ＷＴ）为试验
材料，克隆控制 ＡＢＡ降解的ＣＹＰ７０７Ａ 基因，通过
荧光定量ＰＣＲ测得ＮＣＥＤ 和ＣＹＰ７０７Ａ基因在种
子吸胀过程中表达动态及差异，为从分子水平探究
造成２种结缕草种子萌发率存在差异的原因提供基
础依据。
１　材料与方法
１．１　试验材料与试剂
试验材料为海青１号（Ｈ１）和野生型（ＷＴ）结缕
草种子，于２０１０年７月采自青岛海源草坪结缕草种
子繁殖基地，带回中国农业大学草地研究所低温保
存备用。
ＲＮＡ提取试剂盒，反转录试剂盒，琼脂糖凝胶
回收试剂盒购于北京百泰克生物技术有限公司，所
用的大肠杆菌ＤＨ５ａ菌株，质粒提取试剂盒，克隆载
体ｐＭＤ－１９Ｔ，固相ＲＮＡａｓｅ清除剂、感受态细胞、荧
光定量ＰＣＲ试剂盒均购自于北京天泽基因生物试
剂公司。
１．２　试验方法
１．２．１　发芽试验　海青一号（Ｈ１）和野生型（ＷＴ）
结缕草种子以及去除颖苞的海青一号（Ｈ１）和野生
型（ＷＴ）种子共４种材料，每个培养皿中１００粒种
子，每种材料３个重复，在光照培养箱中进行发芽计
数，发芽的条件为２５℃和３５℃交替，３５℃８ｈ，２５℃
１６ｈ。
１．２．２　ＣＹＰ７０７Ａ 基因目的片段的克隆　分别取
０．３ｇ野生型（ＷＴ）和海青一号（Ｈ１）结缕草种子液
氮研磨后按ＲＮＡ提取试剂盒说明提取ＲＮＡ，反转
录成ｃＤＮＡ，以此ｃＤＮＡ 为模板，引物（Ｆｏｒｗａｒｄ：
５－ＴＧＡＡＴＧＴＧＧＣＡＴＴＧＣＴＧＴＣＣ－３；Ｒｅｖｅｒｓｅ：５－
ＡＣＧＴＴＧＴＣＧＧＣＧＡＴＣＴＧＧ－３）扩增ＣＹＰ７０７Ａ基
因目的片段。引物通过分析其他植物（大麦、水稻
（Ｏｒｙｚａ　ｓａｔｉｖａ）、玉米）ＣＹＰ７０７Ａ 基因保守区域，然
后用Ｐｒｉｍｅｒ　ｐｒｅｍｉｅｒ　５软件设计。ＰＣＲ反应条件为
９４℃，３ｍｉｎ；９４℃，１５ｓ；６０℃，１５ｓ；７２℃，２５ｓ；３０个
循环；７２℃，１０ｍｉｎ。ＰＣＲ产物切胶回收后转移到
ＰＭＤ１９Ｔ载体中，１６℃连接过夜，再转化到大肠杆
菌ＤＨ５α中，平板培养后挑取阳性克隆，扩增后菌液
送至三博生物科技有限公司测序。
１．２．３　多序列比对　用ＤＮＡＭＡＮ软件的多序列
比对功能，分析克隆得到结缕草中的ＣＹＰ７０７Ａ 目
的片段序列与大麦、水稻、玉米保守区域的同源性。
１．２．４　荧光定量ＰＣＲ　海青一号（Ｈ１）与野生型
（ＷＴ）结缕草种子去除颖苞后分别进行吸胀处理
０ｈ，２ｈ，６ｈ，２４ｈ。室温晾干后放入－８０℃冰箱保
存。提取ＲＮＡ后反转录成ｃＤＮＡ，以此ｃＤＮＡ为
模板，引 物 为 ＮＣＥＤ（Ｆｏｒｗａｒｄ：５－ＣＣＴＣＣＧＡＣＡＴＧＧＣ
ＧＡＧＣＡＧ－３；Ｒｅｖｅｒｓｅ：５－ＣＡＣＧＧＡＣＡＣＴＣＧＧＧＣＡＴＣＧ－３）；
ＣＹＰ７０７Ａ（Ｆｏｒｗａｒｄ：５－ＡＣＡＣＡＧＡＡＡＧＡＴＧＣＧＣＴＡＡＴＣＧ－
３；Ｒｅｖｅｒｓｅ；５－ＴＡＣＧＴＴＧＴＣＧＧＣＧＡＴＣＴＧ－３）进行ＰＣＲ扩
增。１８ｓＲＮＡ（Ｆｏｒｗａｒｄ：５－ＣＧＣＡＧＴＴＧＴＴＣＧＴＣＴＴＴＣＡ－
３Ｒｅｖｅｒｓｅ：５－ＣＣＡＴＣＧＣＴＣＴＧＧＡＴＡＣＡＴＴＡＧ－３）为内参。
７４１
草　地　学　报 第２０卷
ＰＣＲ反应在荧光定量ＰＣＲ仪上进行。３个基因的
ＰＣＲ反应程序均为９５℃，４ｍｉｎ；９５℃，１５ｓ；６０℃，
１５ｓ；７２℃，２５ｓ；４０个循环。每个样品３个重复，取
平均值。
２　结果与分析
２．１　发芽率
经过２８ｄ的发芽计数，海青一号（Ｈ１）与野生
型（ＷＴ）以及去除颖苞后海青一号（Ｈ１）与野生型
（ＷＴ）结缕草种子的发芽率结果如图１和图２所
示。
　　海青一号（Ｈ１）结缕草种子在去除颖苞后发芽
率显著提高，与未经处理的海青一号（Ｈ１）差异显著
（Ｐ＜０．０５），且大大缩短了发芽周期，在吸胀的第１４
ｄ已经达到最高水平７６．７％，发芽整齐。野生型
（ＷＴ）结缕草种子去除颖苞后发芽率为４１．５％，较
未经处理的野生型结缕草种子发芽率相比没有显著
差异（Ｐ＞０．０５），但是发芽较整齐，与未经处理的野
生型（ＷＴ）相比发芽所需时间较短，发芽速度较快。
未经处理的海青一号（Ｈ１）和野生型（ＷＴ）结缕草
种子发芽率差异不显著（Ｐ＞０．０５），但是经过去除
颖苞处理后海青一号（Ｈ１）和野生型（ＷＴ）结缕草
种子发芽率存在显著差异（Ｐ＜０．０５）。
２．２　ＣＹＰ７０７Ａ基因的克隆与测序
在结 缕 草 种 子 中 克 隆 到 ２４８ 个 碱 基 的
ＣＹＰ７０７Ａ基因目的片段，通过 ＤＮＡＭＡＮ软件进
行多序列比对发现，所克隆结缕草中的ＣＹＰ７０７Ａ
基因目的片段与水稻、大麦和玉米的保守区同源性
较高，达到 ９１．２７％ ，根据 Ｓｃｈｕｌｅｒ　ａｎｄ　Ｗｅｒｃｋ
Ｒｅｉｃｈｈａｒｔ［２６］的定义体系，该基因为结缕草中的
ＣＹＰ７０７Ａ基因（图３和图４），命名为ＺｊＣＹＰ７０７Ａ。
图３　ＣＹＰ７０７Ａ基因ｃＤＮＡ片段扩增结果
Ｆｉｇ．３　Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｒｅｓｕｌｔ　ｏｆ　ＣＹＰ７０７Ａ
ｇｅｎｅ　ｆｒｏｍ　ｃＤＮＡ　ｆｒａｇｍｅｎｔ
Ｍ：ｍａｒｋｅｒ，Ｃ：ＣＹＰ７０７Ａ
２．３　ＣＹＰ７０７Ａ 基因与ＮＣＥＤ 基因的相对 ｍＲＮＡ
表达
图５是以ＮＣＥＤ 基因为例，得出的 Ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ
ＰＣＲ试验结果图。
　　对海青一号（Ｈ１）与野生型（ＷＴ）２种结缕草不
同吸胀时间的 ＮＣＥＤ 基因及ＣＹＰ７０７Ａ 基因进行
荧光定量检测，分析其结果，如图６和图７所示。
通过荧光定量ＰＣＲ分析检测海青一号（Ｈ１）和
野生型（ＷＴ）结缕草种子在不同吸胀时间内的相对
ｍＲＮＡ水平（图６，图７）。海青一号（Ｈ１）和野生型
（ＷＴ）结缕草种子在未经吸胀处理时 ＮＣＥＤ 基因
的表达量相近，但是经过２ｈ吸胀处理后野生型
（ＷＴ）结缕草种子中ＮＣＥＤ基因的相对表达量是
８４１
草　地　学　报 第２０卷
图７　ＣＹＰ７０７Ａ基因在野生型（ＷＴ）和海青一号（Ｈ１）结缕草种子吸胀过程中的表达
Ｆｉｇ．７　Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｌｅｖｅｌ　ｏｆ　ＣＹＰ７０７Ａｗｉｔｈ　Ｚｏｙｓｉａ　ｊａｐｏｎｉｃａ　Ｓｅｅｄｓ（Ｈ１，ＷＴ）ｉｍｂｉｂｉｔｉｏｎ　ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ
海青一号（Ｈ１）结缕草种子的１０倍；吸胀处理６ｈ
后，野生型（ＷＴ）结缕草种子ＮＣＥＤ 基因表达量略
低于海青一号（Ｈ１），但是经过６ｈ到２４ｈ吸胀处理
后，海青一号（Ｈ１）结缕草种子中ＮＣＥＤ 基因的表
达量急速上升，而野生型（ＷＴ）结缕草种子则略有
下降；吸胀处理２４ｈ时，海青一号（Ｈ１）结缕草种子
中ＮＣＥＤ 基因的表达量是野生型（ＷＴ）结缕草种
子的１００倍。ＣＹＰ７０７Ａ 基因在未进行吸胀处理的
野生型（ＷＴ）结缕草种子中的表达量是海青一号
（Ｈ１）结缕草种子的４倍；经过２ｈ的吸胀处理过
程，野生型（ＷＴ）结缕草种子中ＣＹＰ７０７Ａ基因的表
达量明显上升，达到海青一号（Ｈ１）结缕草种子的
１０倍；吸胀处理２ｈ到６ｈ过程中，野生型（ＷＴ）结
缕草种子中的ＣＹＰ７０７Ａ 基因的表达量急速下降；
吸胀处理６ｈ到２４ｈ过程中，海青一号（Ｈ１）结缕草
种子中ＣＹＰ７０７Ａ 基因的表达量急速上升，而野生
型（ＷＴ）结缕草种子的ＣＹＰ７０７Ａ 基因的表达量持
续下降，吸胀处理２４ｈ时，海青一号（Ｈ１）结缕草种
子中ＣＹＰ７０７Ａ基因的表达量是野生型（ＷＴ）结缕
草种子的１００倍。
３　讨论与结论
母株的生长环境（光照、温度、水分、土壤养分
等）能影响种子的休眠性，在成熟前的３０ｄ日均温
度高，母株处于水分充足，土壤含氮量高的条件下，
种子的萌发率较高。干旱和低温会引起种子体内
ＡＢＡ含量的变化［２７］。野生型（ＷＴ）结缕草生长在
山坡上，土壤质地紧密，吸水保水能力差，而海青一
号（Ｈ１）结缕草种植于平整的土地上，土质疏松，水
分充足，土壤透水性和透气性较好，这是影响海青一
号（Ｈ１）与野生型（ＷＴ）结缕草种子发芽率有差异
的原因之一。
未经处理的结缕草种子具有深度休眠，是由于
结缕草种子的包覆组织太紧密，密封性好，含有蜡
质、胶质、粘质或革质化，使水分和氧气不易进入，二
氧化碳和其他一些化学抑制性物质不能快速排出，
从而导致休眠加深［２１］。去除颖苞处理后能提高种
子的萌发率，由图１可知未经处理的海青一号（Ｈ１）
和野生型（ＷＴ）结缕草种子发芽率差异不显著，但
是经过去颖苞处理后的海青一号（Ｈ１）和野生型
（ＷＴ）结缕草种子之间发芽率达到显著水平（Ｐ＜
０．０５）（图２）。无论是野生型（ＷＴ）还是海青一号
（Ｈ１）结缕草种子在吸胀过程中ＡＢＡ含量均呈下降
趋势［２８］，由图６和图７可知，在海青一号（Ｈ１）结缕
草种子吸胀过程中，ＮＣＥＤ 基因在吸胀过程中表达
量升高，有利于 ＡＢＡ的合成，但是ＣＹＰ７０７Ａ 基因
的表达也在上升，有利于ＡＢＡ的降解，而结缕草种
子在吸胀过程中 ＡＢＡ 含量下降［２８］，说明这时
ＣＹＰ７０７Ａ基因对 ＡＢＡ 含量的影响占主导作用。
在野生型（ＷＴ）结缕草种子中，ＮＣＥＤ 基因表达水
平在种子吸胀的前２ｈ过程中，表达量明显升高，有
利于ＡＢＡ的合成，ＣＹＰ７０７Ａ基因表达量也明显升
高，有利于ＡＢＡ的降解，而 ＡＢＡ在种子吸胀过程
含量减少，说明在野生型结缕草种子吸胀的２ｈ过
程中，ＣＹＰ７０７Ａ基因起主导作用。在野生型（ＷＴ）
结缕草种子吸胀的２ｈ到２４ｈ过程当中，ＮＣＥＤ和
ＣＹＰ７０７Ａ 基因表达量都明显下降，说明不利于
ＡＢＡ的合成及降解，ＡＢＡ含量的减少与ＮＣＥＤ 基
因有着更加密切的关系，ＮＣＥＤ 在吸胀２ｈ到２４ｈ
过程中起着主导作用。Ｓａｉｔｏ等［１９］在对拟南芥的休
眠型（Ｄ）及非眠型（ＮＤ）种子的研究过程中发现，
ＡｔＣＹＰ７０７Ａ２基因的表达对ＡＢＡ含量的影响占主
导作用。
ＮＣＥＤ 基因和ＣＹＰ７０７Ａ 基因在海青一号
０５１
第１期 迟晓雪等：结缕草种子中ＮＣＥＤ基因和ＣＹＰ７０７Ａ基因的克隆及其表达动态
（Ｈ１）结缕草种子吸胀过程中表达量都持续上升，说
明 ＡＢＡ 的 生 理 代 谢 进 程 加 快。ＮＣＥＤ 及
ＣＹＰ７０７Ａ基因在野生型（ＷＴ）结缕草种子吸胀２ｈ
过程中，表达量均上升，ＡＢＡ的生理代谢进程加快，
但是吸胀２ｈ到２４ｈ过程中ＡＢＡ的生理代谢进程
减慢。说明ＡＢＡ在种子吸胀过程中的代谢速率也
是影响野生型结缕草（ＷＴ）和海青一号（Ｈ１）结缕
草种子萌发率差异的原因之一，ＡＢＡ代谢速率加
快，有利于种子的萌发，该结果与Ｓｃｈｍｉｔｚ等［２９］的
研究相一致，即胚对ＡＢＡ的敏感性以及ＡＢＡ的代
谢能力是影响种子萌发的关键因素。层积处理增加
了８’－羟化酶的代谢活性，从而增加了种子的萌发
率。
ＡＢＡ在影响种子萌发及萌发后生长的过程中
除了与控制它合成及降解的基因有关，还与内源信
号分子乙烯和糖等有关，ＡＢＡ对种子萌发具有强烈
的抑制作用，能抑制淀粉酶的形成，降低植物糖代谢
的速度［３０］。控制ＡＢＡ合成的另一个基因ＺＥＰ 基
因在拟南芥的研究中发现，它的表达能增加 ＡＢＡ
的含量并且能延迟休眠［１８］。在结缕草种子中对
ＺＥＰ和ＮＣＥＤ 基因的表达与 ＡＢＡ含量的关系研
究中发现，ＮＣＥＤ 基因是结缕草种子中 ＡＢＡ合成
途径中的关键基因［２９］。马铃薯（Ｓｏｌａｎｕｍ　ｔｕｂｅｒｏｓ－
ｕｍ）中ｌｅＮＣＥＤ基因的过量表达能增加ＡＢＡ的含
量，增强种子休眠性［３１］。诱导豆类作物中ｐｖＮＣＥＤ
基因的表达能延迟种子的萌发［５］。
本试验研究了控制ＡＢＡ合成及代谢的ＮＣＥＤ
基因及ＣＹＰ７０７Ａ基因的表达动态与种子萌发率的
关系，对于控制赤霉素合成及代谢的基因［３２～３４］内根
一贝 壳 杉 烯 酸 氧 化 酶 （ＫＡＯ）、ＧＡ２０－氧 化 酶
（ＧＡ２０ｏｘ）、ＧＡ３－氧化酶 （ＧＡ３ｏｘ）、ＧＡ２－氧化酶
（ＧＡ２ｏｘ）在种子吸胀过程中的表达动态与萌发率
的关系尚待进一步研究。
参考文献
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ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｃｕｒｒｅｎｔ　Ｏｐｉｎｉｏｎ　ｏｆ　Ｐｌａｎｔ　Ｂｉｏｌｏｇｙ，２００２，５
（１）：３３－３６
［２］　Ｎａｍｂａｒａ　Ｅ，Ｍａｒｉｏｎ　Ｐ　Ａ．Ａｂｓｃｉｓｉｃ　ａｃｉｄ　ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ　ａｎｄ　ｃａ－
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１８５
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ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｚｅａｘａｎｔｈｉｎ　ｅｐｏｘｉｄａｓｅ　ｏｆ　Ｎｉｃｏｔｉａｎａ　ｐｌｕｍｂａｇ－
ｉｎｉｆｏｌｉａ，ａｇｅｎｅ　ｉｎｖｏｌｖｅｄ　ｉｎ　ａｂｓｃｉｓｉｃ　ａｃｉｄ　ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ　ａｎｄ　ｃｏｒ－
ｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ　ｔｏ　ｔｈｅ　ＡＢＡ　ｌＯＣＵＳ　ｏｆ　Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ　ｔｈａｌｉａｎａ［Ｊ］．
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ａｂｓｃｉｓｉｃ　ａｃｉｄ　ａｎｄ　ｐｈａｓｅｉｃ　ａｃｉｄ　ｌｅｖｅｌｓ　ａｎｄ　ｅｎｈａｎｃｅｓ　ｄｒｏｕｇｈｔ　ｔｏｌ－
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［６］　Ｌｕｉｓ　Ｄ　Ｂ，Ｄｏｎｎａ　Ｋ，Ｌｉｎｄａ　Ｈ，ｅｔ　ａｌ．Ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｐｏｓｔｈａｒｖｅｓｔ
ｓｔｏｒａｇｅ　ａｎｄ　ｄｏｒｍａｎｃｙ　ｓｔａｔｕｓ　ｏｎ　ＡＢＡ　ｃｏｎｔｅｎｔ，Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ，ａｎｄ
ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ｇｅｎｅｓ　ｉｎｖｏｌｖｅｄ　ｉｎ　ＡＢＡ　ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ　ａｎｄ　ｍｅｔａｂｏ－
ｌｉｓｍ　ｉｎ　ｐｏｔａｔｏ　ｔｕｂｅｒ　ｔｉｓｓｕｅｓ［Ｊ］．Ｐｌａｎｔ　Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｂｉｏｌｏｇｙ，
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ｔｏｌｅｒａｎｃｅ　ｂｙ　ｇｅｎｅ　ｍａｎｉｐｕｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　９－ｃｉｓ－ｅｐｏｘｙｃａｒｏｔｅｎｏｉｄ　ｄｉｏｘｙ－
ｇｅｎａｓｅ，ａ　ｋｅｙ　ｅｎｚｙｍｅ　ｉｎ　ａｂｓｃｉｓｉｃ　ａｃｉｄ　ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ　ｉｎ　Ａｒａｂｉｄｏｐ－
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ｗｉｔｈ　ｍａｉｚｅ　Ｖｐｌ４［Ｊ］．Ｔｈｅ　Ｐｌａｎｔ　Ｊｏｕｒｎａｌ，１９９９，１７（４）：４２７－４３１
［１３］Ｌｕｃｈｉ　Ｓ，Ｋｏｂａｙａｓｈｉ　Ｍ，Ｓｈｉｎｏｚａｋｉ　Ｋ．ｅｔ　ａｌ．Ａ　ｓｔｒｅｓｓ　ｉｎｄｕｃｉｂｌｅ
ｇｅｎｅ　ｆｏｒ　９－ｃｉｓ－ｅｐｏｘｙｃａｒｏｔｅｎｏｉｄ　ｄｉｏｘｙｇｅｎａｓｅ　ｉｎｖｏｌｖｅｄ　ｉｎ　ａｂｓｃｉｓｉｅ
ａｃｉｄ　ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ　ｕｎｄｅｒ　ｗａｔｅｒ　ｓｔｒｅｓｓ　ｉｎ　ｄｒｏｕｇｈｔ－ｔｏｌｅｒａｎｔ　ｃｏｗ－
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ｏｘｙ－ｃａｒｏｔｅｎｏｉｄ　ｄｉｏｘｙｇｅｎａｓｅ　ｇｅｎｅ　ｆａｍｉｌｙ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ　ｏｆ
ａｂｓｃｉｓｉｃ　ａｃｉｄ　ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ　ｉｎ　ａｖｏｃａｄｏ［Ｊ］．Ｐｌａｎｔ　Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ，
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ｅｎｃｏｄｅ（＋）－Ａｂｓｅｉｓｉｃ　ａｃｉｄ　８’－ｈｙｄｒｏｘｙｌａｓｅ，ａ　ｋｅｙ　ｅｎｚｙｍｅ　ｉｎ　ｔｈｅ
ｏｘｉｄａｔｉｖｅ　ｃａｔａｂｏｌｉｓｍ　ｏｆ　ａｂｓｃｉｓｉｃ　ａｃｉｄ［Ｊ］．Ｐｌａｎｔ　Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ，
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［１６］Ｋｕｓｈｉｒｏ　Ｔ，Ｏｋａｍｏｔｏ　Ｍ，Ｎａｋａｂａｙａｓｈｉ　Ｋ，ｅｔ　ａｌ．Ｔｈｅ　Ａｒａｂｉ－
ｄｏｐｓｉｓ　ｃｙｔｏｃｈｒｏｍｅ　Ｐ４５０ＣＹＰ７０７Ａｅｎｃｏｄｅｓ　８’－ｈｙｄｒｏｘｙｌａｓｅｓ；
ｋｅｙ　ｅｎｚｙｍｅｓ　ｉｎ　ＡＢＡ　ｃａｔａｂｏｌｉｓｍ［Ｊ］．ＥＭＢＯ，２００４，２３：１６４７－
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［１７］Ａｌｉ－Ｒａｃｈｅｄｉ　Ｓ，Ｂｏｕｉｎｏｔ　Ｄ．Ｃｈａｎｇｅｓ　ｉｎ　ｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓ　ａｂｓｃｉｓｉｃ　ａｃｉｄ
ｌｅｖｅｌｓ　ｄｕｒｉｎｇ　ｄｏｒｍａｎｃｙ　ｒｅｌｅａｓｅ　ａｎｄ　ｍａｉｎｔｅｎａｎｃｅ　ｏｆ　ｍａｔｕｒｅ
ｓｅｅｄｓ：ｓｔｕｄｉｅｓ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ｃａｐｅ　ｖｅｒｄｅ　ｉｎｌａｎｄｓ　ｅｃｏｔｙｐｅ，ｔｈｅ　ｄｏｒ－
ｍａｎｔ　ｍｏｄｅｌ　ｏｆ　Ａｒｏｂｉｄｏｐｓｉｓ　ｔｈａｌｉａｎａ［Ｊ］．Ｐｌａｎｔａ，２００４，２１９
（３）：４７９－４８８
（下转１６５页）
１５１
第１期 高雪芹等：红三叶新品系组织培养和植株再生
ｏｎ　ｔｈｅ　ｋｉｎｅｔｉｃｓ　ａｎｄ　ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ　ｏｆ　ｔｈｅｒｍａｌ　ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ　ｏｆ　ＰＭ－
ＭＡ［Ｊ］．Ｐｏｌｙｍｅｒ　Ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ　ａｎｄ　Ｓｔａｂｉｌｉｔｙ，２００２，７７（３）：４３５－
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［９］　Ｍｙｅｒｓ　Ｊ　Ｒ，Ｇｒｏｓｓｅｒ　Ｊ　Ｗ，Ｔａｙｌｏｒ　Ｎ　Ｌ，ｅｔ　ａｌ．Ｇｅｎｏｔｙｐｅ　ｄｅｐｅｎｄ－
ｅｎｔ　ｗｈｏｌｅ　ｐｌａｎｔ　ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ　ｆｒｏｍ　ｐｒｏｔｏｐｌａｓｔｓ　ｏｆ　ｒｅｄ　ｃｌｏｖｅｒ
（Ｔｒｉｆｏｌｉｕｍ　ｐｒａｔｅｎｓｅ　Ｌ．）［Ｊ］．Ｐｌａｎｔ　Ｃｅｌ　ａｎｄ　Ｔｉｓｓｕｅ　Ｏｒｇａｎ　Ｃｕｌ－
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［１０］Ｑｕｅｓｅｎｂｅｒｒｙ　Ｋ　Ｈ，Ｓｍｉｔｈ　Ｒ　Ｒ．Ｒｅｃｕｒｒｅｎｔ　ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ　ｆｏｒ　ｐｌａｎｔ
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［１３］高雪芹，王俊杰，云锦凤，等．红三叶新品系无菌苗培养体系优
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［１４］邓百万，张兆清，刘世贵．几种豆科牧草植物组织培养体细胞胚
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［１５］李俊琴．新麦草新品系组织培养再生体系研究［Ｄ］．呼和浩特：
内蒙古农业大学，２００８：１４－１５
［１６］卞晓燕．６０Ｃｏ－γ辐射和秋水仙素诱导直立扁蓿豆多倍体研究
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［１７］Ｐｈｉｌｉｐｓ　Ｇ　Ｃ，Ｃｏｌｉｎｓ　Ｇ　Ｂ．Ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　ｔｉｓｓｕｅ　ｃｕｌｔｕｒｅ　ｏｆ　ｓｅｌｅｃｔｅｄ
ｌｅｇｕｍｅｓ　ａｎｄ　ｐｌａｎｔ　ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ　ｆｒｏｍ　ｃａｌｕｓ　ｃｕｌｔｕｒｅｓ　ｏｆ　ｒｅｄ　ｃｌｏ－
ｖｅｒ［Ｊ］．Ｃｒｏｐ　Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９７９，１０：５９－６４
［１８］Ｍａｃｌｅａｎ　Ｎ　Ｌ，Ｎｏｗａｋ　Ｊ．Ｐｌａｎｔ　ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ　ｆｒｏｍ　ｈｙｐｏｃｏｔｙｌｓ　ａｎｄ
ｐｅｔｉｏｌｅ　ｃａｌｕｓ　ｏｆ　Ｔｒｉｆｏｌｉｕｍ　ｐｒａｔｅｎｓｅ［Ｊ］．Ｐｌａｎｔ　Ｃｅｌ　Ｒｅｐｏｒｔｓ，
１９８９，８：３９５－３９８
［１９］Ｗａｎｇ　Ｈ，Ｈｏｌ　Ｆ　Ｂ．Ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　ｃｕｌｔｕｒｅ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｉｎｃｉｄｅｎｃｅ　ｏｆ　ｓｏｍａ－
ｃｌｏｎａｌ　ｖａｒｉｖａｔｉｏｎ　ｉｎ　ｒｅｇｅｎｅｒａｔｅｄ　ｐｌａｎｔｓ［Ｊ］．Ｐｌａｎｔ　Ｓｃｉｅｎｃｅ，
１９８８，５５：１５９－１６７
（责任编辑　李美娟
欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍
）
（上接１５１页）
［１８］Ｆｒｅｙ　Ａ，Ａｕｄｒａｎ　Ｃ．Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ　ｓｅｅｄ　ｄｏｒｍａｎｃｙ　ｂｙ　ｔｈｅ　ｍｏｄｉｆｉｃａ－
ｔｉｏｎ　ｏｆ　ｚｅａｘａｎｔｈｉｎｅ　ｅｐｏｘｉｄａｓｅ　ｇｅｎｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ［Ｊ］．Ｐｌａｎｔ　Ｍｏ－
ｌｅｃｕｌａｒ　Ｂｉｏｌｏｇｙ，１９９９，３９（６）：１２６７－１２７４
［１９］Ｍｉｌａｒ　Ａ　Ａ，Ｊｏｈｎ　Ｖ．Ｓｅｅｄ　ｄｏｒｍａｎｃｙ　ａｎｄ　ＡＢＡ　ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ　ｉｎ
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［２１］郭海林，刘建秀．结缕草种子的休眠机理及其打破休眠的方法
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［２２］韩建国，钱俊芝，刘自学．ＰＥＧ渗调处理改善结缕草种子活力
的研究［Ｊ］．中国草地，２０００，２２（３）：２２－２８
［２３］孙建华，王彦荣，余玲，等．聚乙二醇引发对几种牧草种子发芽
率和活力的影响［Ｊ］．草业学报，１９９９，８（２）：３４－４２
［２４］姜丽．渗透调节对结缕草种子发芽与活力的影响及其机理初探
［Ｄ］．北京：中国农业大学，２００５
［２５］赵昕，李玉霖．结缕草种子打破休眠的研究［Ｊ］．种子，２００２，２１
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［２６］Ｓｃｈｕｌｅｒ　Ｍ　Ａ，Ｗｅｒｃｋ－Ｒｅｉｃｈｈａｒｔ　Ｄ．ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ　ｇｅｎｏｍｉｃｓ　ｏｆ
Ｐ４５０ｓ［Ｊ］．Ａｎｎｕａｌ　Ｒｅｖｉｅｗ　ｏｆ　Ｐｌａｎｔ　Ｂｉｏｌｏｇｙ，２００３，５４：６２９－６６７
［２７］Ｍ　Ｆｅｎｎｅｒ．Ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｐａｒｅｎｔ　ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ　ｏｎ　ｓｅｅｄ　ｇｅｒｍ－
ｉｎａｂｉｌｉｔｙ［Ｊ］．Ｓｅｅｄ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ，１９９１，１（２）：７５－８４
［２８］张鹂．结缕草 ＡＢＡ生物合成途径中关键基因的确定［Ｄ］．北
京：中国农业大学，２０１０
［２９］Ｓｃｈｍｉｔｚ　Ｎ，Ａｂｒａｍｓ　Ｓ　Ｒ，Ｋｅｍｏｄｅ　Ａ　Ｒ，Ｃｈａｎｇｅｓ　ｉｎ　ＡＢＡ　ｔｕｒｎ－
ｏｖｅｒ　ａｎｄ　ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ　ｔｈａｔ　ａｃｃｏｍｐａｎｙ　ｄｏｒｍａｎｃｙ　ｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ
ｙｅｌｏｗ－ｃｅｄａｒ（Ｃｈａｍａｅｃｙｐａｒｉｓ　ｎｏｏｔｋａｔｅｎｓｉｓ）ｓｅｅｄｓ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ
ｏｆ　Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ　Ｂｏｔａｎｙ，２００２，５３（３６６）：８９－１０１
［３０］付婷婷，程红焱，宋松泉．种子休眠的研究进展［Ｊ］．植物学报，
２００９，４４（５）：６２９－６４１
［３１］Ｔｈｏｍｐｓｏｎ　Ａ　Ｊ．Ｅｃｔｏｐｉｃ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ａ　ｔｏｍａｔｏ　９－ｃｉｓｅｐｏｘｙｃａｒｏ－
ｔｅｎｏｉｄ　ｄｉｏｘｙｇｅｎａｓｅ　ｇｅｎｅ　ｃａｕｓｅｓ　ｏｖｅｒ－ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ａｂｓｃｉｓｉｃ　ａｃｉｄ
［Ｊ］．Ｔｈｅ　Ｐｌａｎｔ　Ｊｏｕｒｎａｌ，２０００，２３（３），３６３－３７４
［３２］Ｃｈｒｉｓｔｉｎｅ　Ｍ　Ｆ，Ｓｈｉｎｊｉｒｏ　Ｙ．Ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ＡｔＣＰＳ　ａｎｄ
ＡｔＫＳ　ｉｎ　Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ　ｃｏｎｆｅｒｓ　ｉｎｃｒｅａｓｅｄ　ｅｎｔ－ｋａｕｒｅｎｅ　ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ
ｂｕｔ　ｎｏ　ｉｎｃｒｅａｓｅ　ｉｎ　ｂｉｏａｃｔｉｖｅ　ｇｉｂｂｅｒｅｌｉｎｓ［Ｊ］．Ｐｌａｎｔ　Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ，
２００３，１３２（２）：８３０－８３９
［３３］Ｈｅｌｉｗｅｌ　Ｃ　Ａ，Ｃｈａｎｄｌｅｒ　Ｐ　Ｍ，Ｐｏｏｌｅ　Ａ，ｅｔ　ａｌ．Ｔｈｅ　ＣＹＰ８８Ａ
ｅｙｔｏｃｈｒｏｍｅ　Ｐ４５０，ｅｎｔ－ｋａｕｒｅｎｏｉｃ　ａｃｉｄ　ｏｘｉｄａｓｅ，ｃａｔａｌｙｚｅｓ　ｔｈｒｅｅ
ｓｔｅｐｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｇｉｂｂｅｒｅｌｉｎ　ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ　ｐａｔｈｗａｙ［Ｊ］．Ｔｈｅ　Ｐｒｏ－
ｃｅｅｄｉｎｇｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ｎａｔｉｏｎａｌ　Ａｃａｄｅｍｙ　ｏｆ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ｕｎｉｔｅｄ
Ｓｔａｔｅｓ　ｏｆ　Ａｍｅｒｉｃａ，２００１，９８（４）：２０６５－２０７０
［３４］Ｊａｋｅ　Ｍ　Ｍ．Ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｇｉｂｂｅｒｅｌｉｎ　ｐｌａｎｔ　ｈｏｒｍｏｎｅｓ［Ｊ］．
Ｎａｔｕｒａｌ　Ｐｒｏｄｕｃｔ　Ｒｅｐｏｒｔｓ，１９９７，１４（３）；２２１－２４３
（责任编辑　邵新庆）
５６１