全 文 ：第21卷 第4期
Vol.21 No.4
草 地 学 报
ACTA AGRESTIA SINICA
2013年 7月
July 2013
doi:10.11733/j.issn.1007-0435.2013.04.022
新农1号狗牙根愈伤组织诱导及再生研究
陈 琼1,李培英2,阿不来提2*
(新疆农业大学草业与环境科学学院 新疆草地资源与生态自治区重点实验室,新疆 乌鲁木齐 830052)
摘要:以新农1号狗牙根(Cynodondactylon(L.)Pers.‘XinnongNo.1’)成熟颖果为外植体,研究不同激素浓度组
合对愈伤组织诱导、继代及分化的影响。结果表明:在愈伤组织诱导中,适宜的培养基为添加2.00mg·L-12,4-D
+0.01mg·L-16-BA+500mg·L-1脯氨酸的 MS培养基,出愈率可达71.2%,愈伤形态为半透明水渍状且淡黄色
颗粒较多;继代改造培养基中添加2,4-D0.5mg·L-1+6-BA0.5mg·L-1+ABA2.0mg·L-1+GSH2.0mg·L-1
的 MS培养基上培养4周后,愈伤组织增殖率可达41.3%;分化过程中,在不添加任何激素的1/2MS培养基中培
养10d后,将胚性愈伤组织转入添加6-BA1.0mg·L-1的 MS培养基中,很快绿点变密,继而分化成苗,愈伤组织
再生频率达25%,小植株形成的强度为16.7%。
关键词:新农1号狗牙根;愈伤组织诱导;胚性愈伤组织
中图分类号:Q943.2 文献标识码:A 文章编号:1007-0435(2013)04-0776-07
CalusInductionandRegenerationSystemofCynodondactylon (L.)
Pers.‘XinnongNo.1’
CHENQiong1,LIPei-ying2,Abu-laiti1*
(XinjiangAgriculturalUniversity,Urumqi,Xinjiang830052,China)
Abstract:Influencesofdifferenthormoneconcentrationsoncalusinductionwerestudiedusingseedsof
Cynodondactylon (L.)Pers.‘XinnongNo.1’asexplants.Theeffectsofdifferentsubculturemediaon
calusproliferationanddifferentiationwereinvestigated.Themainresultswere:forcalusinduction,MS
mediumaddedwith2.00mg·L-12,4-D+0.01mg·L-16-BA+500mg·L-1prolinewassuitable;and
theinductionratecouldreach71.2%.Thecaluswastranslucent,water-soakedformwithlightyelow
particles.Theregenerationmediumaddedwith2,4-D0.5mg·L-1+6-BA0.5mg·L-1+ABA2.0mg·L-1
+GSH2.0mg·L-1wasbeneficialtoembryogeniccalusgrowthandcalusproliferationratereached
41.3%.Transferringembryogeniccalusinto1/2MSmedium withoutanyhormonesfor10days,then
transferringintoMSmediumaddedwith6-BA1.0mg·L-1,soongreendotofembryogeniccalusbecame
denseandthendifferentiatedseedlings.Thecalusregenerationfrequencywas25%andtheplantletsrate
was16.7%.
Keywords:Cynodondactylon (L.)Pers.‘XinnongNo.1’;Calusinduction;Embryogeniccalus
狗牙根 (Condondactylon (L.)Pers.)属禾本
科狗牙根属,又名百慕大草、爬地草、绊根草,具有发
达的根茎、匍匐茎,生长快,繁殖能力与再生性强,极
耐践踏[1]。狗牙根是目前应用最广的暖季型草坪草
之一,但现有的狗牙根品种还较少,特别是缺乏抗
旱、抗盐、耐寒生态型狗牙根新品种。
新农1号狗牙根(C.dactylon‘XinnongNo.1’)
是新疆农业大学培育的优良狗牙根新品种,除具有
色泽青绿、坪用性好、繁殖力强、根茎和匍匐茎发达、
耐土壤瘠薄、耐践踏、建植管理成本低等优良特性
外,还具有国内外狗牙根所欠缺的特点,即抗寒力极
强,耐旱、耐盐碱等,是很珍贵的种质资源[2]。为了
充分开发利用这一珍贵的资源,以此为基础,通过生
物技术手段进一步选育优良的新品种。
收稿日期:2013-01-28;修回日期:2013-04-11
基金项目:新疆维吾尔自治区科技厅高新技术项目“优质抗旱耐盐禾草新品种选育”(201111122)资助
作者简介:陈琼(1987-),女,新疆伊犁人,硕士研究生,研究方向为草坪草育种,E-mail:57459572@qq.com;*通信作者 Authorofcorre-
spondence,Email:xndablt@163.com
第4期 陈 琼等:新农1号狗牙根愈伤组织诱导及再生研究
建立一个高效、稳定的再生体系是利用转基因
技术或体细胞诱变技术选育新品种的基础。狗牙根
的组培研究工作开展的较早[3-4],如1985年,Ahn
等[5]利用普通狗牙根未成熟花序诱导出胚性愈伤组
织,但未获得再生植株。迄今为止,狗牙根的组培工
作中,大都采用未成熟的胚及花序作为外植体。我
国在狗牙根组培方面研究开展的相对较晚,但近年
来此方面的研究越来越受到人们的重视。如胡张华
等[6]首次以成熟胚为外植体获得了再生植株;同年,
卢少云等[7]以杂交狗牙根的匍匐茎节为外植体,获
得再生植株,并筛选出一个矮化变异体。
本研究以新农1号狗牙根成熟颖果为外植体,探
讨激素种类、外源添加物对狗牙根胚性愈伤组织的诱
导、继代及分化的影响,为后期育种工作奠定基础。
1 材料与方法
1.1 材料
新农1号狗牙根成熟颖果,由新疆农业大学草
业与环境科学学院提供。
1.2 试验方法
种子消毒:取适量新农1号狗牙根脱壳颖果,用
无菌水冲洗3次,70%酒精处理2min,再用20%次
氯酸钠浸泡20min,无菌水冲洗数遍至无次氯酸
钠,每次冲洗需在1min以上。
新农1号狗牙根愈伤组织的诱导:将消毒的种
子用解剖刀横切一刀,播于诱导培养基中。每个培
养瓶中接种8粒,每处理30个重复,(25±1.0)℃黑
暗中培养,4周后统计新农1号狗牙根种子发芽情
况和愈伤组织出愈率。采用 MS培养基作为基本培
养基,蔗糖30g·L-1,琼脂8g·L-1,pH 为5.8,
培养基组合处理如表1所示。
新农1号狗牙根愈伤组织的继代培养:在优化
的诱导培养基上,将愈伤组织取出,尽量保留浅黄色
且有相当硬度的颗粒状部分的胚性愈伤组织,去除团
块状的白色疏松状的非胚性愈伤组织,将胚性愈伤组
织转移至继代培养基上,每培养瓶约6块,每处理设
置5个重复。培养条件为:(25±1.0)℃,14h光照与
10h黑暗交替,光照强度约为36mmol·m-2·s-1,
每2周继代1次。2周后观察其愈伤组织的增殖状
况。继代培养基为添加蔗糖60g·L-1,琼脂12
g·L-1的MS培养基。待愈伤组织长至直径约0.4cm
转至分化培养基。继代培养基组合处理如表2所示。
表1 新农1号狗牙根愈伤组织诱导培养基
Table1 Calusinductionmediaof
C.dactylon‘XinnongNo.1’ mg·L-1
培养基编号
MediumNo.
2,4-D 6-BA
脯氨酸
Proline
A0 0.0 - -
A1 1.0 - -
A2 2.0 - -
A3 3.0 - -
A4 4.0 - -
A5 2.0 0.10 -
A6 2.0 0.01 -
A7 2.0 0.01 100.0
A8 2.0 0.01 250.0
A9 2.0 0.01 500.0
表2 新农1号狗牙根愈伤组织继代培养基
Table2 Calussubculturemediaof
C.dactylon‘XinnongNo.1’
培养基编号
MediumNo.
2,4-D
/mg·L-1
6-BA
/mg·L-1
KT
/mg·L-1
ABA
/mg·L-1
B0 - - - -
B1 0.5 - - -
B2 2.0 - - -
B3 0.5 0.5 - -
B4 0.5 1.0 - -
B5 0.5 0.5 0.5 -
B6 0.5 0.5 1.0 -
B7 0.5 0.5 0.5 1.0
B8 0.5 0.5 0.5 2.0
B9 0.5 0.5 0.5 3.0
B10 0.5 0.5 - 2.0
新农1号狗牙根胚性愈伤组织的分化:将胚性
愈伤组织分离出来并切成大小约3mm的小块,按
每瓶6块接入分化培养基,每个处理设置10个重
复。培养条件为:(25±1.0)℃,14h光照与10h黑
暗交替,光照强度约为36mmol·m-2·s-1。分化
培养基组合处理如表3所示。
1.3 生根及移栽
再生小苗接于添加15g·L-1蔗糖和8g·L-1
琼脂的1/2MS(大量元素减半)培养基上,2周后打开
瓶盖,洗去培养基,室内炼苗2d,再移栽至盆钵中。
2 结果与分析
2.1 不同激素组合对新农1号狗牙根愈伤组织诱
导的影响
种子接种到固体培养基上后,在黑暗条件下培
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草 地 学 报 第21卷
养3~4d种子开始萌发,10d左右各诱导培养基大
多能够诱导出愈伤组织,20d左右达到了出愈高
峰。
表3 新农1号狗牙根胚性愈伤组织分化培养基
Table3 Embryogeniccalusdifferentiationmedia
ofC.dactylon‘XinnongNo.1’
培养基编号
MediumNo.
基本培养基
Basicmedium
2,4-D
/mg·L-1
6-BA
/mg·L-1
C0 1/2MS - -
C1 1/2MS 0.5 -
C2 1/2MS 1.0 -
C3 MS 0.0 -
C4 MS 0.5 -
C5 MS 1.0 -
C6 1/2MS - 0.5
C7 1/2MS - 1.0
C8 1/2MS - 2.0
C9 MS - 0.5
C10 MS - 1.0
C11 MS - 2.0
C12
1/2MS(不添加任何激素,光照培养10d)
+MS(1.0mg·L-16-BA)
组织培养过程中,添加2,4-D有利于愈伤组织
的形成[8]。本研究对0~4.0mg·L-12,4-D对新
农1号狗牙根出愈研究发现:随着2,4-D浓度的升
高,愈伤出愈率呈现先增后降的趋势,在2,4-D为
2.0mg·L-1时,其愈伤诱导率为最高,达47.7%,
并且其愈伤较大,质量较好,呈现半透明水渍状,其
间夹杂淡黄色颗粒(图1-A和1-C);2,4-D浓度为
0mg·L-1时,出愈率为23.0%,愈伤呈白色疏松
状;当浓度为1.0mg·L-1时,其形态变为半透明水
渍状,可看见少数淡黄色颗粒(图1-B);当浓度超过
2.0mg·L-1时,其出愈率有所下降(45.6%和
46.4%),直径减小(0.37cm,0.41cm)。因此选定
2,4-D较优浓度为2mg·L-1。
6-BA在植物组织培养中可诱导愈伤组织的发
生[9],对愈伤组织的形成有明显的促进作用。本试验
研究了0.01mg·L-1和0.1mg·L-16-BA对新农1
号狗牙根愈伤组织诱导的影响,发现微量的6-BA对
新农1号狗牙根愈伤组织的诱导有明显的促进作用,
随着6-BA浓度的增加,出愈率和愈伤组织直径明显
减小。在添加0.01mg·L-16-BA 时,出愈率为
47.2%,愈伤直径为0.45cm,其形态由水渍状变为半
透明水渍状,可看见多数淡黄色颗粒(图1);当6-BA
浓度升为0.1mg·L-1时,出愈率降低为45.2%,愈
伤直径减小(0.39cm),只能看到少数淡黄色颗粒(图
1-C)。由此可以选定新农1号狗牙根愈伤组织诱导
最适的6-BA浓度为0.01mg·L-1。
在愈伤组织诱导培养基中添加脯氨酸可明显提
高愈伤组织诱导率[10]。研究发现较高浓度的脯氨
酸对愈伤组织出愈率和愈伤组织质量的提高有明显
的促进作用。在添加100mg·L-1脯氨酸时,出愈
率明显增高,达51.5%,愈伤直径达0.44cm;当浓
度升高为250mg·L-1时,出愈率为60.3%,直径
为0.48cm;当脯氨酸浓度达到500mg·L-1时,出
愈率为71.2%,直径为0.54cm,在水渍状的愈伤组
织中,可看到较多的淡黄色颗粒(图1-D)。
由此可以得出:新农1号狗牙根最适宜的诱导
培养基为添加2,4-D2.0mg·L-1+6-BA0.01
mg·L-1+脯氨酸500mg·L-1的 MS培养基,并
以此培养基为基础,进行后续试验。
表4 不同浓度激素对新农1号狗牙根愈伤组织诱导的影响
Table4 EffectsofhormonesunderdifferentconcentrationsonthecalusinductionofC.dactylon‘XinnongNo.1’
培养基编号
MediumNo.
种子发芽数/个
Numberofgerminatedseeds
愈伤组织诱导率/%
Calusinductionrate
愈伤组织直径/cm
Calusdiameter
愈伤组织形态
Calusforms
A0 78 23.0 0.31 A
A1 82 36.6 0.33 B
A2 133 47.7 0.42 B,C
A3 102 45.6 0.37 A,C
A4 108 46.4 0.41 A,C
A5 110 45.2 0.39 B,C
A6 123 47.2 0.45 B,D
A7 126 51.5 0.44 B,D
A8 152 60.3 0.48 B,C
A9 161 71.2 0.54 B,E
注(Note):A:白色疏松状 Whiteloose;B:半透明水渍状Translucentwater-soaked;C:少数淡黄色颗粒Fewyelowishgranules;D:淡黄色
颗粒Lightyelowparticles;E:淡黄色颗粒较多Paleyelowparticles
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第4期 陈 琼等:新农1号狗牙根愈伤组织诱导及再生研究
图1 新农1号狗牙根愈伤组织类型图
Fig.1 CalustypemapofCynodondactylon ‘XinnongNo.1’
注:A:白色疏松状愈伤组织;B:半透明水渍状愈伤组织;C:白色疏松状、可见少数淡黄色颗粒的愈伤组织;
D:半透明水渍状、淡黄色颗粒较多的愈伤组织
Note:A:whiteloosecalus;B:translucentwater-soakedcalus;C:whiteloosecaluswithafewvisiblelightyelowparticles;
D:translucentwater-soaked,paleyelowparticlesmorecalus
2.2 不同继代培养基对新农1号狗牙根愈伤组织
增殖状况的影响
将由诱导培养产生的愈伤组织转入继代培养基
中,在刚转入继代培养的1~2d后,部分愈伤组织
表现出不适应,形态上有变稀软的现象;1周后,较
小的愈伤组织出现严重的褐化并死亡。转入继代培
养基后,各愈伤组织在形态上差异不大,但普遍由乳
白色柔软的半透明活水渍状的愈伤组织转变为淡黄
色的、颗粒状较为疏松的胚性愈伤组织,并且有部分
胚性愈伤组织出现增殖。
研究发现2,4-D对愈伤组织的增殖具有重要作
用。本试验对0.5和2.0mg·L-12,4-D对新农1
号狗牙根愈伤组织继代的研究发现:在培养基中添
加2,4-D后,胚性愈伤组织有明显的增殖现象,其中
添加0.5mg·L-12,4-D的B1培养基的增殖率最
高,达23.3%,且褐化率最低,为25.9%。因此,0.5
mg·L-12,4-D是新农1号狗牙根较为适宜的继代
浓度(表5)。
在继代培养基中添加生长素的作用主要是促进
细胞分裂和愈伤组织分化成器官,同时也可以促进
愈伤组织的增殖[11]。研究表明,在培养基中添加
6-BA后,胚性愈伤组织增殖率明显上升,褐化率降
低。其中,B3培养基(0.5mg·L-16-BA)在胚性愈
伤组织诱导率(26.3%)和增殖率(20.5%)方面均高
于B4培养基(1.0mg·L-16-BA,24.8%和18.7%),且
褐化率较低(20.6%和24.3%)。说明继代培养基
中6-BA较适宜浓度为0.5mg·L-1(表5)。
KT对愈伤组织增殖有明显的促进作用。由表
5可以得出,B5培养基的胚性愈伤组织诱导率
(46.7%)和增殖率(37.2%)均高于 B6培养基
(30.0%,25.2%),说明低浓度的KT对新农1号狗
牙根继代有利。
在培养基中添加ABA的主要作用是抑制在继代
过程中的生根现象,抑制外植体形成体细胞胚状体[11]。
愈伤组织在添加2.0mg·L-1ABA的B8培养基上生
长良好,且胚性愈伤组织的诱导率(46.74%)和增殖率
(37.2%)明显高于其他培养基(B7:16.7%,12.6%;B9:
33.3%,17.9%),褐化率也最低,为20.3%。由此可以
说明,新农1号狗牙根继代培养过程中较为适宜的
ABA浓度为2.0mg·L-1。
在继代过程中,不添加 KT,即培养基为添加
2,4-D0.5mg·L-1,6-BA0.5mg·L-1,ABA2.0
mg·L-1,琼脂12g·L-1,蔗糖60g·L-1的 MS
培养基。继代2次后,发现胚性愈伤组织诱导率可
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草 地 学 报 第21卷
达53.3%,增殖率达47.2%,均比其他组合高,且褐
化率为16.7%,明显低于其他组合(表5)。
最佳的继代培养基为:添加2,4-D0.5mg·L-1
+6-BA0.5mg·L-1+ABA2.0mg·L-1+琼脂12
g·L-1+蔗糖60g·L-1的 MS培养基,以此为基础
进行分化试验。
表5 不同浓度激素对新农1号狗牙根愈伤组织继代的影响
Table5 ImpactsofhormonesunderdifferentconcentrationsonthecalussubcultureofC.dactylon‘XinnongNo.1’ %
培养及编号
MediumNo.
胚性愈伤组织诱导率
Embryogeniccalusinductionrate
胚性愈伤组织增殖率
Embryogeniccalusappreciationrate
褐化率
Browningrate
B0 13.3 17.5 38.3
B1 17.2 23.3 25.9
B2 16.7 12.6 33.2
B3 26.3 20.5 20.6
B4 24.8 18.7 24.3
B5 46.7 37.2 20.3
B6 30.0 25.2 30.3
B7 16.7 12.6 33.2
B8 46.7 37.2 20.3
B9 33.3 17.9 32.6
B10 50.2 41.3 15.6
2.3 不同培养基对新农1号狗牙根愈伤组织分化
的影响
2,4-D在愈伤组织分化过程中的作用不大。试
验研究得出:无论以1/2MS或 MS为基本培养基,
较高浓度的2,4-D不利于愈伤组织的分化。在以
1/2MS为基本培养基时,将胚性愈伤组织转入不添
加2,4-D的C0培养基中,胚性愈伤组织几乎无褐
化,生根也较少,绿点率高达66.7%;而C2培养基
(1.0mg·L-12,4-D)的绿点率最低,仅为22.2%;
C1培养基 (0.5 mg·L-12,4-D)的绿点率为
38.9%。以 MS培养基为基本培养基时,C3培养基
(0mg·L-12,4-D)的绿点率为55.6%,C4培养基
(0.5mg·L-12,4-D)的绿点率为44.4%;C5培养
基(1.0mg·L-12,4-D)的绿点率仅为33.3%。由
此可以得出,不添加2,4-D的1/2MS培养基的绿点
率最高(表6)。
6-BA对愈伤组织的分化有重要作用,能够促进
愈伤组织分化成苗,但单独作用于胚性愈伤组织时,
效果不明显。以1/2MS为基本培养基时,C7培养
基(1.0mg·L-16-BA)的绿点率最高,为44.4%;
C6培养基(0.5mg·L-16-BA)的绿点率为38.9%;
当6-BA浓度增至2.0mg·L-1时(C8培养基),绿
点率仅为22.2%。在以 MS为基本培养基时,C9
培养基(0.5mg·L-16-BA)的绿点率为33.3%;
C10培养基(1.0mg·L-16-BA)的绿点率高达
50.2%;C11培养基(2.0mg·L-16-BA)的绿点率
为38.9%。但培养基中的胚性愈伤组织均保持绿
点状态,不分化成苗。
将胚性愈伤组织转入不添加任何激素的1/2MS培
养基中培养10d后,再转入添加6-BA1.0mg·L-1的
MS培养基中(C12),很快绿点变密,继而绿点分化
成苗,愈伤组织再生频率达25%;小植株形成的强
度为16.7%(表6,图2)。
表6 不同培养基对胚性愈伤组织分化的影响
Table6 EffectsofdifferentmediaontheembryogeniccalusdifferentiationofC.dactylon‘XinnongNo.1’
培养基编号
MediumNo.
绿点数/个
Ratepoints
绿点率/%
GreenPointrate
再生愈伤组织频率/%
Regenerativecalusfrequency
小植株形成强度/%
Plantletsformationstrength
C0 12 66.7 0.0 0.0
C1 7 38.9 0.0 0.0
C2 4 22.2 0.0 0.0
C3 10 55.6 0.0 0.0
C4 8 44.4 0.0 0.0
C5 6 33.3 0.0 0.0
C6 7 38.9 0.0 0.0
C7 8 44.4 0.0 0.0
C8 4 22.2 0.0 0.0
C9 8 33.3 0.0 0.0
C10 6 50.2 0.0 0.0
C11 7 38.9 0.0 0.0
C12 12 66.7 25.0 16.7
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第4期 陈 琼等:新农1号狗牙根愈伤组织诱导及再生研究
图2 建立新农1号狗牙根再生体系
Fig.2 RegenerationsystemofCynodondactylon ‘XinnongNo.1’
注:A:愈伤组织的诱导;B:愈伤组织的继代;C:愈伤组织的褐化;D:愈伤组织分化成绿点;E:愈伤组织分化成苗;F:再生植株
Note:A:calusinduction;B:calussubculture;C:browningcalus;D:caluswithgreenpoint;
E:regeneratedseedling;F:regeneratedplantlets
3 讨论与结论
狗牙根是一种具有很高经济价值的草坪草,但
其与别的禾本科植物一样,对组织培养不敏感,组织
培养再生很困难,尤其暖季型草坪草,难度比冷季型
草坪草更大[10]。目前在进行狗牙根的组织培养时,
多采用的外植体是根尖、茎尖、未成熟胚、幼穗等,虽
然这些培养材料也有较好的培养效果,但材料的分
离比较困难,取材受生长周期的约束,难以满足长年
试验的需要[12]。因此本试验以新农1号狗牙根成
熟颖果这一来源广泛、便于操作、易于推广的材料为
外植体建立再生体系。
本试验证实以 MS为基础培养基,添加2,4-D
对新农1号狗牙根愈伤组织诱导有明显的促进作
用,其中添加2.0mg·L-12,4-D最为适宜。这与
谢海燕等[13]所研究发现在2.00~6.00mg·L-1范
围内才诱导出一定数量和质量的胚性愈伤组织的试
验结果相符合。Chaudahury等[14]认为以幼穗为材
料,低浓度6-BA(0.01mg·L-1)在百慕大胚状结
构的发生与植株再生中起关键作用,而高浓度6-BA
对百慕大胚性愈伤组织的诱导反而有害。本文研究
了2种6-BA浓度(0.1mg·L-1和0.01mg·L-1)
对新农1号狗牙根出愈率的影响,发现低浓度6-BA
可明显提高出愈率。但在继代培养基中添加0.5
mg·L-1与1.0mg·L-1的6-BA相比较,发现低
浓度6-BA有助于新农1号狗牙根胚性愈伤组织的
增殖,且适宜的浓度为0.5mg·L-1。卢少云等[15]
的研究表明:在以狗牙根匍匐茎节为外植体时,添加
脯氨酸可提高愈伤组织的诱导率,本文进一步对脯
氨酸的浓度进行研究,发现在诱导培养基中添加
500mg·L-1脯氨酸,有利于愈伤组织的诱导,出愈
率和胚性愈伤组织诱导率均明显提高。
胡张华等[6]的研究表明:在培养基中添加高浓
度蔗糖(6g·L-1)、琼脂(12g·L-1)和适宜浓度
ABA(2.0mg·L-1)的固化培养基以及附加一定比
例的生长素和细胞分裂素,实现了狗牙根致密颗粒
状胚性愈伤组织的高频发生。本研究在此基础上进
一步研究了ABA浓度对新农1号狗牙根胚性愈伤
继代的影响,发现添加ABA2.0mg·L-1可使愈伤
组织明显增大,胚性愈伤组织诱导率和胚性愈伤组
织增值率明显高于其他组合,且褐化率最低。这与
胡张华等[6]得出的2.0mg·L-1ABA对禾本科植
物的胚性愈伤组织发生和分化有普遍意义的结论相
一致。
在继代培养过程中,狗牙根愈伤组织转入继代
培养基后约4d,愈伤组织出现了褐化现象。一是由
于培养基内细胞分裂素物质有增进酚氧化酶活性的
作用,从而在培养基内产生并积累了酚、醌类深褐色
物质,这些物质产生毒害作用,抑制愈伤组织的生
长;褐化的另一种原因可能是试验采用的是琼脂固
化培养基。由于在固化培养基中,只有在植物周围
的营养物和激素被吸收,从而导致愈伤组织缺乏营
养而变褐,解决褐化问题的方法是及时继代培养。
这与何阳鹏等[16]的研究存在一定的相似之处。
普通狗牙根种子的组织培养受多种因素制约,
组织培养及植株再生比较困难,诱导愈伤组织所需
要的时间较长,分化率也不是很高。在姜茜等[17]的
研究中指出:最适于狗牙根种子的最佳分化培养基
为添加6-BA0.1mg·L-1的 MS培养基。但在本
试验的研究中发现:在分化过程中,1/2MS和 MS
培养基均无再生植株的形成,而不添加任何激素的
1/2MS培养10d后,转入添加6-BA1.0mg·L-1
的 MS培养基中,很快绿点变密,继而绿点分化成
苗,愈伤组织再生频率达25%;小植株形成的强度
为16.7%。这可能与激素浓度及配比不同有关。
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(责任编辑 刘云霞)
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