全 文 ：第 19 卷 第 2 期
Vol. 19 No. 2
草 地 学 报
ACTA AGRESTIA SINICA
2011 年 3 月
M ar. 2011
青藏高原和新疆地区垂穗披碱草种质的
SRAP及 RAPD分析
苗佳敏1, 张新全1* , 陈智华2 , 钟金城2, 陈仕勇1 , 马 啸1 , 白史且3
( 1. 四川农业大学草业科学系,四川 雅安 625014; 2. 西南民族大学生命科学与技术学院, 四川 成都 610041;
3.四川省草原科学研究院, 四川 成都 611731)
摘要: 使用 SRAP 和 RAPD标记对采集自我国青藏高原和新疆地区的 64 份垂穗披碱草(E lymus nutans Griseb. )
进行遗传多样性和亲缘关系分析,并测其遗传变异和各地理类群的遗传多样性水平。结果表明: 2 种标记都显示供
试材料具有较高的遗传多样性水平( PPB= 85. 86% , 90. 39% ) , 且新疆地区材料的遗传多样性水平高于青藏高原地
区,它们分别得到相似但并不完全相同的聚类图 ,相似生态地理环境的材料可以聚为一类; 2 种标记的分子方差分
析( AMOVA)揭示了地理类群内部和地理类群间分别有 48. 23% , 39. 87%和 51. 77% , 60 13%的变异;通过 2 种标
记的比较分析, SRAP 能更高效地对垂穗披碱草种质进行遗传变异分析; 青藏高原和新疆地区的材料存在明显的
遗传分化,气候和山脉等生态地理条件以及繁育系统等可能是使材料发生遗传变异的重要因素。这些结果将为垂
穗披碱草种质的育种以及种质资源的收集和保存提供基础依据。
关键词: 垂穗披碱草; SRAP; RAPD;遗传变异;分子方差分析
中图分类号: Q346 文献标识码: A 文章编号: 10070435( 2011) 02030611
SRAP and RAPD Analysis of Elymus nutans Griseb.
Germplasm from the QinghaiTibetan Plateau and Xinjiang
M IAO Jiamin1 , ZHANG Xinquan1* , CHEN Zhihua2 , ZH ONG Jincheng2 ,
CHEN Shiyong1 , M A Xiao1 , BAI Shiqie3
( 1. Departm ent of grassland science, S ichu an Agricu ltural U nivers ity, Ya an, Sich uan Province 625014, China;
2. College of lif e s cien ce an d technology, Southw est U nivers ity for Nat ional iti es, Chengdu, Sichu an Province 610041, China;
3. Academ y of Grassland Science, Chen gdu, S ichuan Provin ce 611731, C hina)
Abstract: T he diversity and relat ionships among 64 E. nutans accessions w ere analy zed using sequencere
lated amplif ied polymorphism ( SRAP) and r andom amplif ied polymorphic DNA ( RAPD) molecular mark
ers to measure the genet ic variability and diversity. Results show high genet ic diversity in E. nutans ( PPB
= 85. 86% , 90. 39%) by using both molecular marker s. Cluster analy sis indicates the accessions from sim
ilar origins f requent ly clustered into one group. The analysis o f molecular variance ( AMOVA) by using
bo th molecular markers show s that the propor tion of variance either w ithin o r among geographical g roups
is 48. 23%, 39. 87% and 51. 77%, 60. 13%, respect iv ely . Addit ionally , analy sis of genet ic v ar iat ion using
SRAP marker s is more ef ficient than using RAPD markers for E. nutans. Distinct genet ic differ ent iat ion
accession is revealed betw een QinghaiT ibetan Plateau and Xinjiang . Ecogeog raphical condit ions such as
climate and mountain ranges as w ell as mat ing system may be key factor s of g enetic v ar iat ions. T hese re
sults pr ovide management considerat ions fo r br eeding prog rams and germplasm collect ions as w ell as fo r
the over all conservat ion of E. nutans.
Key Words: Elymus nutans ; SRA P; RAPD; Genet ic variat ion; AMOVA
垂穗披碱草( E lymus nutans Griseb. )为禾本科
( Gramineae)小麦族( T riticeae)披碱草属( E lymus)
多年生优质牧草, 染色体组构成为 StStYYHH ( 2n
= 6x= 42)。在我国内蒙古、河北、陕西、甘肃、宁夏、
收稿日期: 20101012;修回日期: 20110308
基金项目:国家重点基础研究发展计划 973项目( 2007CB108907) ;国家自然科学基金项目( NSFC31072077)资助
作者简介:苗佳敏 ( 1982) , 女, 河南新乡人,博士, 研究方向为牧草育种与种质资源研究, Email: mjmgrass@ 163. com; * 通讯作者
Au thor for corresponden ce, Email : z han gxq@ sicau. edu . cn
第 2期 苗佳敏等:青藏高原和新疆地区垂穗披碱草种质的 SRAP 及RAPD分析
青海、新疆、四川、西藏等地区均有野生分布; 在蒙
古、印度、土耳其以及喜马拉雅、西伯利亚地区有分
布。垂穗披碱草具有广泛的生长可塑性, 喜欢生长
在平原、高原平滩以及山地阳坡、沟谷、半阴坡等地
区。多分布在海拔 2400~ 4700 m 的高寒草甸区,
具有较强的抗寒和抗旱性, 适应性强、产量高、适口
性好,因此已在高寒山区引入栽培利用[ 1, 2] 。
在众多分子标记中, 相关序列扩增多态性( Se
quencerelated amplified polymorphism, SRAP) 具
有多态性高、高共显性、重复性好、操作简便、稳定可
靠和引物通用性强等特点, 随机扩增多态性 DNA
( Random amplified polymorphic DNA, RA PD) 具
有成本低、简便、仅需少量的 DNA 即能对全基因组
进行随机扩增等特点, 广泛用于农作物等的遗传研
究[ 3, 4] , 在草本植物的研究中也取得了良好效
果[ 5, 6]。目前,垂穗披碱草在同工酶、醇溶蛋白、IS
SR和 AFLP 等标记的研究都有报道[ 7~ 11] , 但结合
SRAP 和 RAPD标记分析其遗传关系的尚未见报
道。因此,为避免单一分子标记方法对研究结果造
成偏差,试验采用 SRAP 和 RA PD标记相结合的方
法对采集自青藏高原和新疆地区的垂穗披碱草种质
的遗传多样性和亲缘关系进行研究。这 2个地区为
特殊生境的典型代表,经过长期演化,较多植物无论
从形态结构、生理生化、基因表达等方面, 还是在遗
传学方面都形成了独有的适应性特征[ 7]。本研究分
析了这 2个地区种质的遗传多样性水平和变异分
布,主要目的是分析不同来源的垂穗披碱草种质的
亲缘关系, 并测定地理类群内/间的遗传变异水平,
以期为保护和利用垂穗披碱草种质资源制定合适的
策略提供基础依据。
1 材料和方法
1. 1 试验材料
供试材料是来自青藏高原(青海、西藏、四川、甘
肃)的 42份和新疆的 22份野生垂穗披碱草种质(表
1) , 由美国国家植物种质资源库 (编号为 PI 和
W6)、四川农业大学小麦研究所(编号为 Y)、四川省
草原科学研究院 (编号为 SAG)提供。根据材料来
源地的不同和生态环境差异, 这 2个地区的材料又
可分为 6个地理类群,分别是青海类群、西藏类群、
四川类群、甘肃类群、北疆类群和南疆类群, 分别用
符号 、、、、 和 表示。
1. 2 研究方法
1. 2. 1 供试材料 DNA 的提取与检测
每份种质取 15个单株的幼嫩叶片等量混合,使
用植物基因组提取试剂盒(北京天根生物公司)提取
DNA。对比已知浓度的标准 DNA 与样本 DNA
在 1. 0%琼脂糖凝胶上的电泳图谱, 利用 Quant ity
One软件( BioRad, U SA)计算出垂穗披碱草各种
质的 DNA 浓度。将 DNA 样品置于- 20 冰箱保
存备用。
1. 2. 2 SRAP 与 RAPD标记引物筛选
参考前人发表的引物 [ 12, 13] , 选用的 SRAP 标记
由 12条上游引物和 19条下游引物组合成 228对引
物,并从美国 Operon 公司和加拿大不列颠哥伦比
亚大学 ( U BC )公布的 10 碱基随机引物中挑选了
150条 RAPD引物, 交由上海生工生物技术服务有
限公司合成。选取 5份 DNA 质量较高且田间性状
表现差异较大的材料对引物进行筛选, 最终各选出
20对条带清晰、稳定性高、多态性好的引物用于正
式试验,所用引物见表 2。
1. 2. 3 SRAP 和 RAPD扩增及产物的检测
SRAP 反应体系参考 Li等[ 12] 的方法, 略有改
动。总体积 20L: 其中北京天根公司的 Golden
easy PCR sy stem ( 5 mL 中含有 500 M dN TP,
20 nM Tr isHCl, 100 mM KCl, 3 mM MgCl2 ,其他
稳定剂和增强剂) 10 L, 模板 DNA 量为 4 L( 10
ng L- 1 ) ,上下游引物各 1 L( 10 pmol L - 1 ) ,
T aq酶 0. 4 L( 2. 5 U L - 1 ) , ddH 2O 补足体积。
RA PD反应体系参考 Sun 等[ 14] 的体系, 略有改动。
总体积为 20 L: 其中 Golden easy PCR sy stem
10 L,模板DNA 4 L( 10 ng L- 1 ) ,引物1. 5 L
( 10 pmo l L - 1 ) , Taq酶 0. 4 L( 2. 5 U L - 1 ) ,
ddH 2O 补足体积。PCR 反应在 BIORAD 公司的
iCycler PCR 扩增仪上进行, SRAPPCR 扩增程序
依据 Li等[ 12] 的报道: 94 预变性 5 min; 94 变性
1 min, 35 退火 1 min, 72 延伸 1 m in, 共 5个循
环; 94 变性 1 min, 50 退火 1 m in, 72 延伸
1 min,共 35 个循环; 72 延伸 10 m in, 4 保存。
RA PDPCR扩增程序为: 94 预变性 3 m in; 94 变
性 1 min, 35 退火 1 min, 72 延伸 2 min,共 45个
循环; 72 延伸 10 min, 4 保存。其中 SRAP 扩增
产物用 2%的琼脂糖凝胶(含 0. 5 g L- 1的 EB)电
泳分离, RAPD产物用 1. 5%的琼脂糖凝胶分离,电
泳缓冲液为 0. 5 T BE,以 D2000 M arker 为分子量
标准,在 150 V电压下电泳 2 h左右, 使二甲苯氰移
动到胶的 2/ 3处停止电泳。然后用 BIORAD 自动
凝胶成像系统照相。
307
草 地 学 报 第 19卷
表 1 供试材料
Table 1 E. nutans accessions tested in this study
材料编号 Acces sion 采样地点 Origins 生境 H ab itat 海拔 Alt itu de, m
PI499612 青海西宁 Xining, Qinghai 路边 Roadside 2450
W6 22069 青海西宁 Xining, Qinghai 路边灌丛 Shrub of r oadside 2300
PI619592 西藏昌都 C han gdu, T ibet 亚高山灌丛 Subalpine sh rub 4200
Y2153 西藏昌都 C han gdu, T ibet 高山草甸 Alpine m eadow 4420
Y2186 西藏昌都 C han gdu, T ibet 亚高山灌丛 Subalpine sh rub 4130
Y2160 西藏贡觉 Gongju e, Tib et 高山草甸 Alpine m eadow 4100
PI619522 西藏贡觉 Gongju e, Tib et 4100
PI619529 西藏江达 Jian gda, Tib et 亚高山灌丛草甸 Subalpin e shrub m eadow 3400
PI619530 西藏拉萨 L asa, Tib et 4020
PI619531 西藏拉萨 L asa, Tib et 3700
PI619533 西藏乃东 Naidong, Tib et 路边 Roadside 3470
PI619589 西藏乃东 Naidong, Tib et 3800
PI619532 西藏羊八井 Yangbajing, Tib et 4150
Y2196 西藏左贡 Zuogong, Tib et 森林边缘 Fringe of forest 3640
Y2193 西藏左贡 Zuogong, Tib et 亚高山灌丛 Subalpine sh rub 4220
SAG205221 四川阿坝县 A b a County, S ichu an 路边灌丛 Shrub of r oadside 3534
SAG205229 四川阿坝县 A b a County, S ichu an 河边灌丛 Shrub of riverside 3324
Y2227 四川巴塘 Batang, Sichuan 亚高山草甸 Subalpine meadow 4150
SAG205120 四川稻城 Daochen g, Sichuan 河边山坡草地 Slop rageland of riversid e 3759
SAG205089 四川稻城 Daochen g, Sichuan 亚高山草甸 Subalpine meadow 4282
SAG205096 四川稻城 Daochen g, Sichuan 亚高山灌丛 Subalpine sh rub 4287
W6 22118 四川德格 Dege, S ichu an 山坡灌丛 Slop shru b 4050
Y2122 四川德格雀儿山 Dege, S ichuan 碎石山坡 Clast ic rocky slopes 4800
Y2125 四川德格雀儿山 Dege, Sich uan 碎石山坡 Clast ic rocky slopes 4800
Y2155 四川甘孜县 Ganzi County, S ichuan 高山草甸 Alpine m eadow 4650
SAG203031 四川红原 H ongyuan, Sich uan 试验地 Experimen tal place 3516
SAG203032 四川红原 H ongyuan, Sich uan 试验地 Experimen tal place 3516
SAG205097 四川红原 H ongyuan, Sich uan 亚高山灌丛草甸 Subalpin e shrub m eadow 4032
PI639862 四川康定 Kangding, Sichuan 路边 Roadside 3110
W6 22107 四川康定 Kangding, Sichuan 路边灌丛 Shrub of r oadside 3800
Y2091 四川康定 Kangding, Sichuan 路边 Roadside 3500
SAG205106 四川理塘 L itang, Sich uan 河谷沟边灌丛 Shrub of ditch side 3889
SAG205143 四川理塘 L itang, Sich uan 高山草甸 Alpine m eadow 4394
Y2101 四川炉霍 L uhuo, Sichu an 山谷灌林 Valley , bush edw ood 3190
Y2105 四川炉霍 L uhuo, Sichu an 山坡灌丛 Slop shru b 3740
Y2110 四川炉霍 L uhuo, Sichu an 路边 Roadside 3520
Y2095 四川乾宁 Qiannin g, S ichuan 路边 Roadside 3310
Y2097 四川乾宁 Qiannin g, S ichuan 森林边缘 Fringe of forest 3620
SAG205218 四川壤塘 Rangtang, Sichuan 路边山坡灌丛 Slop shrub of r oadside 3824
PI639855 甘肃碌曲 L uqu, Gansu 亚高山灌丛草甸 Subalpin e shrub m eadow 3060
PI628698 甘肃天祝 Tianzhu , Gan su 河边 Riverside 2860
PI639852 甘肃夏河 Xiahe, Gan su 亚高山草甸 Subalpine meadow 2960
PI619519 新疆布尔津 Burqin, Xinjiang 河边 Riverside 450
PI619575 新疆哈巴河 Habahe, Xinjiang 河边 Riverside 1200
PI619574 新疆喀喇 Kala, Xinjiang 山坡灌丛 Slop shru b 3800
PI619576 新疆喀喇 Kala, Xinjiang 河边山坡草地 Slop rageland of riversid e 2150
PI619578 新疆喀喇 Kala, Xinjiang 山坡灌丛 Slop shru b 2800
Y0497 新疆和静 H ejing, Xinjiang 山坡 On s lope 2670
Y1558 新疆富蕴 Fuyun, Xinjiang 路边 Roadside 770
Y1608 新疆富蕴 Fuyun, Xinjiang 河边 Riverside 1120
Y1611 新疆富蕴 Fuyun, Xinjiang 森林边缘 Fringe of forest 1180
Y0672 新疆塔什库尔干 Taxkorgan, Xinj iang 河边 Riverside 3480
Y0685 新疆塔什库尔干 Taxkorgan, Xinj iang 路边 Roadside 2900
Y0605 新疆叶城 Yecheng, Xinjiang 路边 Roadside 1820
308
第 2期 苗佳敏等:青藏高原和新疆地区垂穗披碱草种质的 SRAP 及RAPD分析
续表 1
材料编号 Acces sion 采样地点 Origins 生境 H ab itat 海拔 Alt itu de, m
Y0612 新疆叶城 Yecheng, Xinjiang 路边 Roadside 2820
Y0618 新疆叶城 Yecheng, Xinjiang 沟渠边 Beside a ditch 3670
Y0620 新疆叶城 Yecheng, Xinjiang 河滩 Floodlan d 3600
Y0627 新疆叶城 Yecheng, Xinjiang 路边 Roadside 3680
Y0634 新疆叶城 Yecheng, Xinjiang 路边 Roadside 3320
Y0650 新疆叶城 Yecheng, Xinjiang 路边 Roadside 2750
Y0655 新疆叶城 Yecheng, Xinjiang 河滩 Floodlan d 2530
Y0639 新疆叶城 Yecheng, Xinjiang 路边 Roadside 3150
Y0642 新疆叶城 Yecheng, Xinjiang 路边 Roadside 3120
Y0644 新疆叶城 Yecheng, Xinjiang 路边 Roadside 3120
注: 表示该部分信息缺失
Note: mean s missin g data
1. 2. 4 数据统计与分析
将扩增产物每个条带视为一个位点,统计位点
总数和多态位点数。按条带有无分别赋值, 有带记
为 1,无带记为 0,具有相同迁移率的条带视为同一
条带,构成二元数据矩阵。根据二元矩阵,统计扩增
产物的条带总数和多态性条带数量,计算多态位点
百分率 PPB ( Percentag e o f po lymo rphic bands)。
用 NTSYSpc V2. 10软件[ 15] 分析二元矩阵, 计算各
种质材料间的 Jaccard遗传相似系数( Genet ic simi
larity, GS) ,并按基于遗传相似系数的不加权成对
群算术平均法( UPGMA)对各种质材料进行聚类分
析。在输入软件 DCFA 1. 1[ 16 ]的帮助下, 将矩阵输
入 POPGENE 1. 31 [ 17] , 在假设等位基因频率符合
哈迪温伯格( H ardyWeinberg )平衡时计算各地理
类群 Nei s基因多样性指数( H )和 Shannon 多样性
指数( I ) ,并计算将所有材料看成一个整体时 2种多
样性指数的总的多样性( T otal)和各地理类群的平
均多样性指数( Average) ; 同时将矩阵输入 AMO
VA 1. 55软件进行分子变异方差分析( Analy sis o f
molecular variance, A MOVA) [ 18]。各地理类群的
聚类分析则是先用 AMOVA 1. 55软件计算出各材
料间的 ST遗传距离, 再用 NT SYSpc V2. 10 绘制
出 UPGMA聚类图。
以分子标记指数 ( Marker Index ) [ 19, 20] 比较不
同标记的标记效率。M I值由位点平均信息量 Ibav
( Average band informat iveness) 和有效多元比率
( Effect ive mult iplex r at io, EMR)的乘积求得,其中
EMR按 Ar chak 等[ 20]解释为多态位点的数量。Ibav
的计算公式为: Ibav= 1/ n 1- ( 20. 5- pi)。其
中, p i代表样品第 i个扩增位点所占比例, n 代表扩
增位点总数。
2 结果与分析
2. 1 垂穗披碱草种质的遗传多样性
筛选的 20对SRAP 引物组合对64份材料进行
PCR 扩增, 扩增的 DNA 片段大约集中在 100 ~
1500 bp(图 1)。共扩增出 495条清晰的带,其中多
态带 425条,多态性条带比率( PPB)为 85. 86%, 平
均每个引物的扩增条带数为 24. 75 条, 平均每个引
物扩增的多态性条带为 21. 25 条, 每对引物扩增条
带的多态性位点率为 76. 19% ~ 96. 00% (表 2)。
POPGENE 分析表明(表 3) : 新疆地区各个多样性
指数( P p = 79. 80%, H = 0. 2707, I= 0. 4065)都比
青藏高原地区 ( Pp = 39. 19% , H = 0. 1000, I =
0 1579)高, 可见新疆地区的垂穗披碱草种质的遗传
多样性要高于青藏高原地区。对各个地理类群而
言,南疆类群具有最高的遗传多样性指数 ( Pp =
60 00% , H = 0. 1734, I= 0. 2667) ,西藏和四川类群
次之,青海和甘肃类群具有较低的遗传多样性指数。
将所有材料看成一个整体时, Nei s 多样性指数和
Shannon多样性指数分别为 0. 1981 和 0. 3223, 代
表供试材料的总体遗传多样性水平。
20条 RAPD引物共扩增出 385 条带, 多态带
348条,多态性条带比率( PPB)为 90. 39%, 平均每
个引物扩增的多态性条带为 17. 40 条, 每个引物扩
增条带的多态性位点率为 68. 42% ~ 100. 00% (表
3) ,扩增条带主要集中在 250~ 1500bp之间(图 2)。
经 POPGENE 分析, 新疆地区多样性指数 ( Pp =
82 08% , H = 0. 2669, I = 0. 4041)比青藏高原地区
( P p= 31. 17% , H = 0. 0668, I= 0. 1085)高,南疆类
群具有最高的遗传多样性指数( P p = 57. 14% , H =
0. 1520, I= 0. 2358) ,青海和甘肃类群具有较低的遗
传多样性指数。供试材料总的 Nei s和 Shannon多
样性指数分别为 0. 1791 和 0. 3009(表 3)。这和
SRAP 所得结果基本一致。
309
草 地 学 报 第 19卷
表 2 SRAP 和 RAPD标记引物的扩增结果
Table 2 Am plification results using SRAP and RAPD primer s
引物编号
Primer
code
总条带数
T otal
b ands
多态位点数
Polymorphic
bands
多态位点率
Percentage of polymorph icbands
( PPB, % )
位点平均信息量
Average band informat ivenes s
( Ibav )
标记指数
Marker
in dex
SRAP
m e1+ em4 37 32 86. 49 0. 236 7. 541
m e1+ em5 35 29 82. 86 0. 365 10. 590
m e1+ em9 19 14 73. 68 0. 174 2. 441
m e1+ em16 29 27 93. 10 0. 197 5. 324
m e2+ em13 33 30 90. 91 0. 242 7. 273
m e3+ em4 24 22 91. 67 0. 299 6. 589
m e3+ em15 31 26 83. 87 0. 203 5. 268
m e4+ em3 21 16 76. 19 0. 165 2. 643
m e4+ em13 22 21 95. 45 0. 331 6. 950
m e4+ em14 23 20 86. 96 0. 224 4. 484
m e4+ em16 24 22 91. 67 0. 301 6. 617
m e4+ em19 20 16 80. 00 0. 191 3. 050
m e8+ em13 20 16 80. 00 0. 128 2. 050
m e9+ em12 17 14 82. 35 0. 267 3. 732
m e9+ em13 23 17 73. 91 0. 196 3. 326
m e9+ em14 24 22 91. 67 0. 326 7. 161
m e9+ em15 23 20 86. 96 0. 262 5. 245
m e9+ em16 25 21 84. 00 0. 273 5. 723
m e10+ em1 25 24 96. 00 0. 195 4. 680
m e10+ em5 20 16 80. 00 0. 224 3. 575
Total 495 425 85. 86 4. 799 104. 262
Average 24. 75 21. 25 85. 39 0. 240 5. 213
RAPD
OPA12 19 18 94. 74 0. 219 3. 938
OPB04 23 21 91. 30 0. 232 4. 879
OPB12 19 17 89. 47 0. 258 4. 390
OPC13 27 26 96. 30 0. 186 4. 845
OPC15 21 19 90. 48 0. 183 3. 478
OPC17 21 21 100. 00 0. 277 5. 813
OPD01 22 20 90. 91 0. 257 5. 142
OPD02 18 16 88. 89 0. 184 2. 944
OPD15 11 8 72. 73 0. 114 0. 909
OPD19 20 20 100. 00 0. 322 6. 438
OPF02 19 17 89. 47 0. 153 2. 600
OPF07 19 13 68. 42 0. 090 1. 176
OPF15 19 19 100. 00 0. 301 5. 719
OPG01 17 17 100. 00 0. 191 3. 250
OPG09 20 16 80. 00 0. 136 2. 175
OPM18 23 21 91. 30 0. 148 3. 110
OPR10 10 9 90. 00 0. 231 2. 081
OPR11 18 16 88. 89 0. 149 2. 389
OPS01 21 18 85. 71 0. 186 3. 348
OPS06 18 16 88. 89 0. 155 2. 472
Total 385 348 90. 39 3. 972 71. 096
Average 19. 25 17. 40 89. 88 0. 199 3. 555
2. 2 垂穗披碱草地理类群的遗传结构
经 AMOVA 分析(表 4) , SRAP 标记获得的总
遗传变异的 68. 17%发生在青藏高原和新疆 2个地
区内部, 31. 83%的变异发生在 2 个地区间; 而在各
个地理类群内部有 48. 23%的变异, 各个类群间有
51. 77%的变异。RAPD标记分析结果与 SRAP 类
似,有 62. 95%的变异发生 2个地区内部, 37. 05%
的变异发生在 2 个地区间; 各个地理类群内部有
310
第 2期 苗佳敏等:青藏高原和新疆地区垂穗披碱草种质的 SRAP 及RAPD分析
39. 87%的变异, 60. 13%的变异存在于各个类群间。
2种标记所揭示的类群间的遗传分化系数 st分别
为 0. 5157和 0. 6013, 地区间和内部及类群间和内
部的变异均为极显著( P< 0. 001)。
对各地理类群的 AMOVA 分析也得到了它们
之间的 ST值(表 5) ,可以代表标准化的的类群间遗
传距离( Pairw ise ST distance)。SRAP 的结果显
示,各个类群间 ST值在 0. 0719(四川类群和西藏类
群) 到 0. 8606 (甘肃类群和北疆类群) 之间; 由
RAPD分析, ST值在 0. 0043(四川类群和甘肃类
群)到 0. 8912(四川类群和北疆类群)之间。2 种标
记获得的遗传距离总体趋势是一致的, 北疆类群和
其他几个类群的距离较远,表现出一定的特异性。
2. 3 基于遗传相似系数的聚类分析
用 NTSYSpcV 2. 10软件分析 20个引物扩增
结果所得的二元矩阵, 计算出供试材料的 Jaccard
遗传相似系数。SRAP 数据所得的 64 份供试材料
的 GS 值变化范围为 0. 374( W6 22069和 Y1558) ~
0. 997( Y2122和 Y2125) ,变幅为 0. 623,平均 GS 值
为 0. 741。RAPD 数据所得的 GS 值变化范围为
0 263( Y2153和Y1608) ~ 0. 983( Y2122和 Y2125) , 变
幅为 0. 720,平均 GS 值为 0. 756。
对所有材料的 U PGMA 聚类分析表明: SRAP
标记在大约 GS= 0. 76处可把 64份垂穗披碱草材
料聚为 5类:第类全为青藏高原的材料,共 42份;
第 类为南疆的大部分材料, 共 15份; 第类为新
疆叶城的一份材料 Y0612; 第类为来自新疆叶城
的另一份材料 Y0644; 第类为北疆的 5份材料,分
别来自布尔津、哈巴河和富蕴( PI619519, PI619575
和 Y1558, Y1608, Y1611) (图 3)。RAPD标记在大
约 GS= 0. 79处可把供试材料聚为 6类:第 类为
青藏高原的材料, 共 40份; 第类为南疆的材料,共
15份;第类为四川德格雀儿山的 2份材料( Y2122
和 Y2125) ; 来自新疆叶城的 Y0612 和 Y0644分别
组成了第类和第类; 第 类为来自北疆的 5份
材料(图 4)。2种标记的聚类结果基本一致,都显示
出聚类结果和其地理分布间具有一定的相关性, 青
藏高原和新疆的材料可以明显区分, 新疆的材料又
可按南疆和北疆而分; 但也有例外,如四川德格雀儿
311
草 地 学 报 第 19卷
山的 2份材料没有和其他青藏高原的材料聚为一类
( RAPD聚类图) ;新疆叶城的 2 份材料分别独立聚
为一类,而其他 9份叶城的材料归为一类( SRAP 和
RA PD聚类图)。
表 3 SRAP 和 RAPD 标记下各地理类群的遗传多样性指数
Table 3 Genetic diversity indexes of g eog raphical g roups generated by SRAP and RAPD marker s
类群 Groups PL Pp ( % ) H I
SRAP
青海 Qinghai 20 4. 04 0. 0167 0. 0244
西藏 T ibet 150 30. 30 0. 0928 0. 1418
四川 Sichuan 155 31. 31 0. 0923 0. 1420
甘肃 Gan su 34 6. 87 0. 0244 0. 0369
青藏高原 Qingh aiT ibetan Plateau 194 39. 19 0. 1000 0. 1579
北疆 Northern Xinjiang 73 14. 75 0. 0539 0. 0804
南疆 Southern Xin jiang 297 60. 00 0. 1734 0. 2667
新疆 Xinjian g 395 79. 80 0. 2707 0. 4065
总计 T otal 425 85. 86 0. 1981 0. 3223
平均 Average 0. 0756 0. 1154
RAPD
青海 Qinghai 16 4. 16 0. 0172 0. 0251
西藏 T ibet 83 21. 56 0. 0672 0. 1022
四川 Sichuan 90 23. 38 0. 0611 0. 0960
甘肃 Gan su 20 5. 19 0. 0195 0. 0290
青藏高原 Qingh aiT ibetan Plateau 120 31. 17 0. 0668 0. 1085
北疆 Northern Xinjiang 56 14. 55 0. 0529 0. 0791
南疆 Southern Xin jiang 220 57. 14 0. 1520 0. 2358
新疆 Xinjian g 316 82. 08 0. 2669 0. 4041
总计 T otal 348 90. 39 0. 1791 0. 3009
平均 Average 0. 0617 0. 0945
注: P L :多态性位点; P p :多态性位点比率; H : Nei s多样性指数; I: S hannon多样性指数
Note: PL : Polymorphic loci; P p : Percentage of polymorphic loci; H : Nei s genetic diversity index; I : S han non genetic diversity index
表 4 垂穗披碱草各地理类群间的分子变异方差分析(AMOVA)
T able 4 Analy sis of molecular va riance ( AMOVA) among geog raphica l g roups o f E. nutans
变异来源
Source of variat ion
自由度
d. f.
方差和
Sum of squ ares
变异组分
Varian ce compon ent
变异百分率
Percentage of Variat ion, %
P 值
P value
SRAP
地区间 Among region s 1 548. 86 17. 70 31. 83 < 0. 001
地区内 With in r egions 62 2349. 66 37. 90 68. 17 < 0. 001
类群间 Among groups 5 1420. 19 27. 36 51. 77 < 0. 001
类群内 With in gr ou ps 58 1478. 33 25. 49 48. 23 < 0. 001
总计 T otal 63 2898. 52
RAPD
地区间 Among region s 1 454. 57 14. 87 37. 05 < 0. 001
地区内 With in r egions 62 1566. 29 25. 26 62. 95 < 0. 001
类群间 Among groups 5 1147. 92 22. 70 60. 13 < 0. 001
类群内 With in gr ou ps 58 872. 94 15. 05 39. 87 < 0. 001
总计 T otal 63 2020. 86
2. 4 SRAP和 RAPD标记的比较分析
由表 3可知, SRA P 和 RAPD扩增的多态位点
率分别为 85. 86%和 90. 39% ,这说明 2种标记都具
有较高的扩增多态率。但是, RAPD的总扩增条带
( 385条)和有效多元比率( EMR ) ( 348)低于 SRAP
的数目( 495 条和 425 条) ;且 RAPD的位点平均信
息量( I bav ) ( 0. 199)也低于 SRAP 数值 ( 0. 240) ; 标
记指数(MI )是衡量不同类型标记扩增效率和扩增
产物信息含量的综合指标, 本研究中 SRAP 的 M I
值( 5. 213) 高于 RAPD 的 MI 值( 3. 555)。因此,
SRAP 具有更大的标记效率,也具有较高的多样性
检测能力,比 RAPD标记更适合于对垂穗披碱草进
行遗传多样性分析。
为了检测 SRAP 和 RAPD 标记分析结果间的
312
第 2期 苗佳敏等:青藏高原和新疆地区垂穗披碱草种质的 SRAP 及RAPD分析
相关程度,利用 NT SYSpc V2. 10软件对 2种标记
所揭示的材料间的遗传相似系数矩阵进行了 Man
tel检测。结果表明, SRAP 和 RA PD分析结果具有
显著的相关性( r= 0. 986)。
表 5 6个垂穗披碱草地理类群间的 ST遗传距离
Table 5 Pairwise ST distance among six geogr aphical gr oups o f E. nutans
地理类群
Geographical groups
青海
Qinghai
西藏
T ibet
四川
S ichuan
甘肃
Gansu
北疆
Northern Xinjiang
南疆
S outh ern Xinjian g
青海 Qinghai 0. 1311 0. 2111 0. 5140 0. 8547 0. 3317
西藏 T ibet 0. 0608 0. 0719 0. 1961 0. 7970 0. 3359
四川 Sichuan 0. 1625 0. 0769 0. 1696 0. 8160 0. 3792
甘肃 Gan su 0. 2836 0. 0369 0. 0043 0. 8606 0. 3883
北疆 Northern Xinjiang 0. 8718 0. 8733 0. 8912 0. 8887 0. 7452
南疆 Southern Xin jiang 0. 2548 0. 3420 0. 3939 0. 2931 0. 7837
注: SRAP 数据生成 (对角线上方)和 RAPD 数据生成 (对角线下方)
Note: SRAP ( above diagon al) and RAPD ( below diagon al)
图 3 基于 SRAP遗传相似系数的 64 份垂穗披碱草种质的聚类
Fig . 3 Dendrog ram of 64 E. nutans accessions based on genet ic similarit y coefficients of SRAP
3 讨论
3. 1 垂穗披碱草种质的遗传多样性
本研究用 SRAP 和 RAPD标记对青藏高原和
新疆地区的垂穗披碱草种质进行遗传多样性分析,
其中 RA PD 标记检测到的多态位点率略高于
SRAP 标记,但都具有较高的多态率。近年来对于
我国垂穗披碱草种质的遗传多样性研究也都显示出
其具有较高水平的遗传多样性, 如醇溶蛋白研究
( PPB= 93. 33%)
[ 8]
, ISSR 研究 ( PPB= 91. 40%) [9]。
以上研究所用垂穗披碱草材料都来自于中国西部,
对垂穗披碱草材料遗传多样性研究的结果都显示了
我国垂穗披碱草在多样的生态环境下有着丰富的遗
传变异。
根据 SRAP 和 RAPD标记 Nei s指数和 Shan
non指数的计算结果, 新疆地区的垂穗披碱草材料
313
草 地 学 报 第 19卷
的遗传多样性( H = 0. 2707, 0. 2669; I = 0. 4065,
0 4041)高于青藏高原地区( H = 0. 1000, 0. 0668; I
= 0. 1579, 0. 1085)。各地理类群的遗传多样性水平
为南疆类群 ( H = 0. 1734, 0. 1520; I = 0. 2667,
0 2358) > 西藏类群 ( H = 0. 0928, 0. 0672; I =
0 1418, 0. 1022) > 四川类群( H = 0. 0923, 0. 0611; I
= 0. 1420, 0. 0960) > 北疆类群 ( H = 0. 0539,
0 0529; I = 0. 0804, 0. 0791) > 甘肃类群 ( H =
0 0244, 0. 0195; I = 0. 0369, 0. 0290) > 青海类群
( H = 0. 0167, 0. 0172; I= 0. 0244, 0. 0251)。但同时
也可以发现,甘肃、青海和北疆 3个类群具有较少的
样本数量( 3个、2个和 5个) , 西藏类群和南疆类群
样本数量居中( 13个和 17个) , 四川类群样本数量
最多( 24个)。有研究表明遗传多样性水平和群体
样本数量间存在明显的相关性[ 21~ 24] ,且分布范围广
泛的物种具有更高的遗传多样性 [ 25]。可能正是由
于甘肃、青海和北疆 3个类群较少的样本数量, 导致
了其在本研究中较低的多样性; 西藏和南疆类群样
本数量均少于四川类群, 但遗传多样性水平却高于
它,这可能是由于这 2 个类群的材料来源分布范围
较广。因此今后在进一步开展垂穗披碱草遗传多样
性研究工作中,在采集种质时应充分重视样本数量
和采集地范围,避免因材料数量太少、来源过于集中
对研究结果造成影响。
图 4 基于 RAPD遗传相似系数的 64 份垂穗披碱草种质的聚类
F ig . 4 Dendrogr am of 64 E. nutans accessions based on genetic simila rity coefficients of RAPD
3. 2 垂穗披碱草的群体遗传结构
群体遗传结构是指遗传变异在物种或群体中的
一种非随机分布,即遗传变异在群体内、群体间的分
布样式以及在时间上的变化[ 26]。遗传分化是研究
群体遗传结构的重要参数,基于 SRAP 和 RAPD标
记的 AMOVA分析对垂穗披碱草地理类群的遗传
结构进行分析, 发现 2种标记的结果基本一致,均表
明垂穗披碱草的遗传变异主要存在于类群间( st =
0. 5177 和 0. 6013) , 其分化系数大于单子叶植物的
平均分化系数( G st= 0. 231)和多年生草本植物的平
均分化系数( G st = 0. 233) [ 25] , 说明垂穗披碱草类群
发生了较大程度的遗传分化。
一般来说,相对于异交植物而言,自交植物具有
较高的群体间遗传变异和较低的群体内遗传变
异[ 2 7, 28]。AMOVA分析表明垂穗披碱草类群间的
变异( 51. 77%, 60. 13%)大于类群内的变异( 48. 23%,
314
第 2期 苗佳敏等:青藏高原和新疆地区垂穗披碱草种质的 SRAP 及RAPD分析
39. 87%)。本结果与马啸等[ 8]对垂穗披碱草醇溶蛋
白遗传多样性研究结果一致, 都是类群间的变异
( 57. 06% )大于类群内变异( 42. 94% )。Dew ey[ 29]
指出广义披碱草属物种具有自花传粉的生殖特性,
从本研究结果也证明了垂穗披碱草的有性繁殖符合
自交物种的特点。但是对垂穗披碱草的 ISSR 研
究[ 9]、AFLP 研究 [ 10]和穗部形态研究[ 3 0]都表明遗传
变异主要存在于类群内。这些不同结果可能是由于
取样策略的不同所造成的, 但这也说明垂穗披碱草
可能并非严格的自花授粉植物,也有一定的异交率。
Nevo[ 31]强调了生态因子在遗传多样性的水平
和分布中起了重要作用。由 2个聚类图可知, 相似
生态环境或相同、相近地理来源的材料具有较高的
相似性和较近的亲缘关系。由于青藏高原地区和新
疆地区有较大的地域差异, 如青藏高原为特殊的高
原气候,而新疆地区为温带大陆性气候,还有昆仑山
脉位于青藏高原和新疆之间, 导致群体之间彼此隔
离,阻碍了种子和花粉的远距离传播,进一步促使群
体间的遗传分化。可能正是因为此青藏高原的材料
能与新疆地区的材料区分开; 北疆和南疆可能由于
天山的阻隔,限制了种子和花粉的传播,所以它们也
能明显区分开, 这也是北疆地区与青藏高原地区材
料亲缘关系较远的原因[ 9]。在本研究中, 大部分材
料都能按地域划分,但也存在一些没有按地域特征
的划分,如四川德格雀儿山的 2 份材料没有和其他
青藏高原的材料聚为一类; 新疆叶城的 2 份材料
Y0612和 Y0644,与其他几份叶城的材料区分开来,
各自独立聚为一类。由于青藏高原和新疆这 2个地
区内部也存在复杂的地貌和不同的气候条件等因
素,造成 2个地区内部生态环境的异质性,导致 2个
地区内部不同来源地的材料出现遗传和地理分化;
也可能是发生了基因突变,物种在进化过程中,有个
别的基因发生了变异, 且该突变体能较好地适应当
地的环境,这个变异基因就能得到保存;自然因素和
人类活动如江河冲刷、风力输送、鸟类和人类交通工
具的携带等都可能使其转入异地扩展繁殖, 产生变
异。
3. 3 SRAP和 RAPD标记的比较
2种标记获得了类似但不完全相同的聚类结
果,这可能和它们扩增的基因座位不同有关, SRAP
扩增的是基因组中的开放阅读框, RAPD是对全基
因组进行随机扩增。由于 SRAP 和 RAPD 标记分
析结果间具有较高的相关性, 它们在本研究中也具
有较高的多态扩增率, 所以具有相似的检测力, 都适
合对垂穗披碱草进行遗传多样性分析。但 SRAP
具有更大的标记效率, 因为 SRA P 的 MI 值( 5. 213)
高于 RAPD的 M I 值( 3. 555) , 其引物扩增条带也
较 RA PD多, 且 SRAP 对垂穗披碱草的聚类更符合
地域性分布,如 SRAP 的聚类结果中青藏高原的所
有材料聚为一类, 但是 RAPD聚类结果中来自四川
德格的 2份材料没有和其他青藏高原的材料聚为一
类。因此 SRAP 作为一种较新的标记对垂穗披碱
草遗传多样性的研究更具潜力。
3. 4 垂穗披碱草种质资源的保护
对遗传变异分布和水平的研究是建立和实施有
效而经济的物种保护措施的前提条件[ 32]。本研究
揭示了垂穗披碱草种质具有较高的遗传多样性和明
显的地理分化,诸如气候条件、山脉阻隔等生态因子
对其遗传分化起了明显作用,因此应该关注特殊生
态地理类群种质材料的收集和保护。虽然垂穗披碱
草在我国的自然分布比较广泛, 但随着开发利用的
不断扩大,以及一些外来物种的引进等,导致垂穗披
碱草生长的自然环境不断遭到破坏, 遗传多样性也
受到威胁。因此, 对其就地保护时应阻止滥砍滥伐
和过度放牧,保护适宜其生存的生境,从而保护其遗
传多样性。就地保护时除了对所有种群进行必要的
保护外,应选择遗传多样性高的居群进行重点保护,
如南疆、西藏和四川类群。北疆的材料虽然遗传多
样性不高,但是和其他材料具有较远的遗传距离,也
应重点保护。同时, 由于垂穗披碱草的遗传多样性
在类群内和类群间都有较高的分布, 在异地保护时
应在每个居群中收集较多的单株, 以涵盖该物种的
基因库,最大程度地保护垂穗披碱草的遗传多样性。
此外,还应扩大收集范围,尽量保证其生态型或地理
来源的多样性,这样才能最大限度的保护和利用其
遗传多样性。
4 结论
根据 SRAP 和 RAPD分析,青藏高原和新疆地
区的垂穗披碱草种质具有较高的遗传多样性,且新
疆地区的遗传多样性水平高于青藏高原地区;聚类
分析结果表明相似生态地理环境的材料具有较高的
相似性和较近的亲缘关系;遗传变异主要存在于类
群间,这可能和垂穗披碱草自花授粉有关,青藏高原
和新疆地区的材料存在明显的遗传分化, 像气候和
315
草 地 学 报 第 19卷
山脉等生态地理条件以及繁育系统等可能是使材料
发生遗传变异的重要因素; 通过 2种标记的比较分
析, SRAP 能更高效地对垂穗披碱草种质进行遗传
变异分析。这些研究结果将有助于垂穗披碱草种质
的育种以及种质资源的收集和保存。
参考文献
[ 1] 陈默君,贾慎修.中国饲用植物[ M ] . 北京:中国农业出版社,
2002. 119120
[ 2] 蒋尤泉. 中国作物及其野生近缘植物 饲用及绿肥作物卷
[ M ] .北京:中国农业出版社, 2007. 142144
[ 3] 黄进勇,盖树鹏, 张恩盈,等. SRAP 构建玉米杂交种指纹图谱
的研究[ J ] .中国农学通报, 2009, 25( 18) : 4751
[ 4] 李苗,高丽美,李永锋,等.增强 UVB辐射对小麦幼苗基因组
DNA 的影响及 RAPD 分析体系的建立 [ J] . 生物技术通报,
2010, 5: 8792
[ 5] 周良彬,卢欣石,王铁梅,等.杂花苜蓿种质 SRAP 标记遗传多
样性研究[ J] .草地学报, 2010, 18( 4) : 544549
[ 6] 刘荣霞,于林清,张宇,等.利用 RAPD 标记对不同秋眠级苜蓿
种质的聚类和评价[ J] .草地学报, 2010, 18( 1) : 108114
[ 7] 严学兵,郭玉霞,周禾,等.青藏高原垂穗披碱草遗传变异的地
理因素分析[ J] .西北植物学报, 2007, 27( 2) : 03280333
[ 8] 马啸,周永红,于海清,等.野生垂穗披碱草种质的醇溶蛋白遗
传多样性分析[ J] .遗传, 2006, 28( 6) : 699706
[ 9] C hen S Y, Ma X, Zh ang X Q, et al . Genetic variat ion an d geo
graphical diverg ence in E lymus nutans Griseb. ( Poaceae: T rit
iceae) f rom West Chin a [ J] . Bioch emical System at ics an d E
cology, 2009, 37( 6) : 716722
[ 10] Yan X B, Guo Y X, Liu F Y, et al . Population st ructu re af fect
ed by exces s gene flow in s elfpollinat ing E ly mus nu tans and
E . bur chanbu ddae ( T rit iceae: Poaceae) [ J] . Populat ion E col
ogy, 2010, 52( 1) : 233241
[ 11] Yan X B, Gu o Y X, Zhao C, e t al . Int rapopulat ion genet ic di
versity of tw o wh eatgras s species alon g alt itude gradients on
th e Qin ghaiT ibetan Plateau : it s im plicat ion for conservat ion
and ut ilizat ion[ J] . Conserv Gen et , 2009, 10( 2) : 359– 367
[ 12] Li G, Qurios C F. Sequence related amplif ied polymmph ism
( SRAP) , a new m ark er system based on a sim ple PCR reac
t ion: it s applicat ion to mapping and gene tagging in Bra ssi ca
[ J ] . T heoret ical and Applied Genet ics, 2001, 103: 455461
[ 13] Budak H, S hearman R C, Parmaksiz I, et al . Molecular charac
t erizat ion of Buf f a logr ass germplasm us ing sequencer elated
ampli fied polym orphism markers [ J] . Th eoret ical an d Appl ied
Genet ics, 2004, 108( 2) : 328334
[ 14] S un G L, S alom on B, Bothmer R. An alys is of tet raploid Ely
mus species using w h eat microsatellit e markers and RAPD
m ak ers[ J ] . Gen om e, 1997, 40: 806814
[ 15] Rohlf F J. NT SYSpc numerical taxonomy and mult ivariate a
nalysi s system , version 2. 1. User Guide [ M ] . New York: Ex
eter Softw are, 2000
[ 16] 张富民,葛颂.群体遗传学研究中的数据处理方法 I. RAPD数
据的 AMOVA 分析[ J] . 生物多样性, 2002, 10(4) : 438444
[ 17] Yeh F C, Boyle T J B. M icrosof t w indowb ased f reew are for
p opu lat ion analysis Popgen e version 1. 31. [ M ] . U nivers ity of
Alberta and Cen t re for In ternat ional Forest ry Research, Edm
onton, AB, 1999
[ 18] E xcof ier L, Sm ou se P E, Qu at t ro J M . Analysi s of molecular
variance inferred from metric dis tances am on g DN A haplo
t ypes: applicat ions to hum an m itochondrial DNA res t rict ion da
t a [ J] . Genet ics, 1992, 131: 479491
[ 19] M ilb ou rne D, Rhonda M, Bradshaw J E, et al . Com pari son of
PCRbased marker sys tems for the an aly sis of genetic relation
ships in cult ivared potato [ J ] . M olecular Breeding, 1997, 3:
127136
[ 20] Arch ak S, Gaikw ad A B, Gautan D, et al . Comparat ion assess
men t of DNA fingerprint ing techniques ( RAPD, ISSR and
AFLP) for gen et ic analysis of cashew ( Anacar dium occidental e
L. ) acces sions of India [ J] . Genom e, 2003, 46: 362369
[ 21] Daz O, S un G L , Salomon B, e t al . Levels and dist ribut ion of
al lozyme and RAPD variat ion in populat ions of E lymus f ibro
sus ( Schrenk) T zvel ( Poaceae) [ J ] . Genet ic Resources an d
Crop Evolut ion, 2000, 47( 1) : 1124
[ 22] Gaudet t M , S alom on B, Sun G L. M olecu lar variat ion and pop
ulat ion s tru cture in Ely mu s tr achycau lu s and com pari son with
it s morphologically similar Elymus alaskanus [ J ] . Plant Sys
t emat ics an d Evolu tion, 2005, 250: 8191
[ 23] Godt M J W, John son B R, H am rick J L. Genet ic divers ity an d
populat ion size in fou r rare southern Appalachian plant species
[ J] . Conservat ion Biology, 1996, 10: 796805
[ 24] Sun M. E ffects of populat ion siz e, matin g system, and evolu
t ion ary origin on genet ic diversity in S p ir anthe s sinensis and S .
hongkongensis [ J] . Con ser vat ion Biology, 1996, 10: 785795
[ 25] H amr ick J L, Godt M J W. Allozym e diversity in plant species
[ A] . In: Brown A H D, Clegg M T , Kahler A L, et al . eds .
Plan t populat ion gen et ics , breeding and genet ic r esour ces [ C ] .
Sinauer, Sunderland, Mass, 1990. 4363
[ 26] H amr ick J L, Loveless M D. Associat ions betw een the br eed
ing system and the gen et ic st ructu re of t ropical t ree popu la
t ion s [ A] . In: Bock J, Lin hart Y B, eds. E volut ionary Ecology
of Plants [M ] . Wes tview Press, Boulder, 1989. 129146
[ 27] Schoen D J, Brown A H D. Int raspecif ic variat ion in population
gen e diversity an d effect ive populat ion siz e correlates w ith the
mat ing system in plants [ J] . Proceedings of the Nat ional A
cademy of Sciences of the U SA, 1991, 88: 44944497
[ 28] Larson S R, J on es T A, Jen sen K B. Populat ion st ructure in
P seud or oeg neria sp i cata ( Poaceae: Trit iceae ) meth od b y
Bayesian clustering of A FLP g enotypes [ J] . American Jou rnal
of Botany, 2004, 91: 17891801
[ 29] Dew ey D R. T he gen om e system of classif icat ion as a guide to
intergeneric hybridiz at ion w ith the perennial T rit iceae [ A ] .
In: Gustafs on J P, ed. Gen e Manipulat ion in Plant Improve
men t [ M ] . New York: Plenum Press, 1984. 209280
[ 30] 张建波,白史且,张新全,等.川西北高原不同野生垂穗披碱草
种群穗部形态研究[ J] .四川大学学报( 自然科学版) , 2009, 46
( 5) : 15051509
[ 31] Nevo E. Genetic diversity in w ild cereals: regional an d local
studies and their bearing on conservat ion in s itu [ J] . Genet ic
Resources and C rop Evolut ion, 1998, 45: 355370
[ 32] H amr ick J L, Godt M J W, Muraw shi D A, et al . Correlat ions
betw een species t rait s and al lozyme diver sity: Impl icat ions for
conservation biology [ A] . In: Falk D A, H ols inger K E, eds .
Genet ics and Conservat ion of Rare Plants [ C] . New York : Ox
ford University Press , 1991. 7586
(责任编辑 李美娟)
316