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Vol.23 No.3
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ACTA AGRESTIA SINICA
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May. 2015
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YANGLi1,2,ZHANGXueyun1,WANGYu1,YUANQinghua1
(1.InstituteofAnimalSciences,CAAS,Beijing100193,China;
2.SchoolofPastoralAgricultureScienceandTechnology,LanzhouUniversity,Lanzhou,GansuProvince730000,China)
犃犫狊狋狉犪犮狋:Caliofthreewhiteclovervarietiesatdifferentgrowthstages(50dand70d)weremutagenized
usingdifferent60Coγirradiationdosesandthedifferentiationrateofmutagenesiswasanalyzed.Themuta
geniceffectsofradiationontheembryoniccalusof犜狉犻犳狅犾犻狌犿狉犲狆犲狀狊wereinvestigatedinthisstudyto
provideevidenceforwhitecloverbreeding.Experimentalresultsshowedthatwiththeincreaseofradiation
dose,thevariationofdifferentiationratewasdifferentamongdifferentvarietiesinthesamegrowthperi
od,andthecalusdifferentiationrateofthesamespeciesalsodifferedfromdifferentgrowthstages.The
semilethaldosesofalvarietieswereobtainedbyanalyzingthemutageniceffectof70dcalususinglinear
regressionanalysis,and‘Rivendel’is23.18Gy,‘Haifa’is19.59Gy,‘Prop’is4.38Gy.Twomutant
individualswithlargeandthickleaves,aswelasthickeningstemswereselected.
犓犲狔狑狅狉犱狊:Whiteclover;Semilethaldoses;Radiationwith60Coγrays;Embryogeniccalus
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(1988),á,ÆÇuµ§,ÌÍñ,ÌÍÖ_]4_D³*T,Email:yangliyg@126.com: :6x×Authorforcor
respondence,Email:yuanqinghua@hotmail.com
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Note:SHistheabbreviationofSchenkandHildebrandt.MSistheabbreviationofMurashigeandSkoog.2,4D,6BAandKTaretheab
breviationof(2,4dichlorophenoxy)aceticacid,6Benzylaminopurineandkinetin,respectively.
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9 0.00Ca 52.91Ba 20.88Ca
12 45.04BCa 11.11Ca 33.73Ca
15 8.75Ca 0.00Ca 18.79Ca
20 96.49Aa 0.00Cb 33.21Cab
30 39.88BCa 0.00Ca 33.33Ca
40 34.45Ca 0.00Ca 0.00Ca
50 30.80Ca 0.00Ca 20.88Ca
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(犘<0.01),
Note:Differentcapitallettersinthesamecolumnshowsignifi
cantdifferencebetweenradiationdoses(犘<0.01),anddifferent
smallettersinthesamerowshowsignificantdifferencebetweenva
rieties(犘<0.01).Thesameasbelow
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Table3 Effectofradiationonthedifferentiation
rateofcalusinwhiteclover
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Radiation
dosages/Gy
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Differentiationrateofcalus/%
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0 100.00Aa 100.00Aa 100.00Aa
3 59.28Aa 77.34Aa 62.55Ba
6 42.36ABCDa 40.77BCDa 55.64BCa
9 62.75Aa 66.07ABa 49.37BCDa
12 34.30ABCDa 42.78BCDa 37.41BCDEa
15 51.79ABCa 27.43CDEFa 58.40BCa
20 51.61ABCa 49.73ABCa 24.70DEFa
30 55.33ABa 42.70BCDa 29.17CDEFa
40 60.83Aa 27.97CDEFab 15.95EFb
50 7.24Da 4.46Fa 7.34EFa
60 20.48BCDa 25.72CDEFa 16.92EFa
70 10.76Dab 33.67CDEa 19.88DEFa
80 28.66ABCDa 5.68EFa 7.13EFa
90 15.20CDa 20.22DEFa 0.00Fb
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Fig.1 Correlationanalysisbetweenradiationdoseandthe
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Fig.2 Correlationanalysisbetweenradiationdoseandthe
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犚2=0.7717,犉=15.34,犘=0.0012。e狔=50,
狓=4.38,c‘T4’»`Ix)"_4.38Gy。
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Fig.3 Correlationanalysisbetweenradiationdoseandthe
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E:‘³’rà6;F:‘T4’rà6
Note:A:0GyirradiationplantofPropvariety;B:9GyirradiationplantofPropvariety;C:20GyirradiationplantofPropvariety;
D:IrradiationplantofRivendelvariety;E:IrradiationplantofHaifavariety;F:IrradiationplantofPropvariety
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[J].8¸]4,1999(2):3437
735
! " # $ !23"
[2] [,Òêç,3},.60Coγrs
[J].]4.¸,2013,21(1):147151
[3] ùʽ,<®Ô,èd¶,.rs<
Ã=2`ræQ
ñ·IÕÖ
[J].±`®÷-.,2009,37(6):123125
[4] KÕü,A|.60CoγrsfÑYM+bjrÚIÖ
[J].8¸]4.¸,2009,31(4):5356
[5] c²f,0ëe.60Coγrs
,2001,92(4):2225
[6] §Ó¶,Y2Ø,üG,.60Coγs¶<>s¹`rIr
s>
[J].]4.¸,2007,15(2):187189
[7] InJaS,HongGyuK,JiYeonK,犲狋犪犾.Breedingoffourleaf
whiteclover(犜狉犻犳狅犾犻狌犿狉犲狆犲狀狊L.)through60Cogammaray
irradiation[J].PlantBiotechnologyReport,2009,3(3):191
197
[8] ¬µ,g,LÐ,.rs<=2`ræQ6ñ·
IÕÖ
[J].]֦)*,2013(6):1113
[9] §.7L%«"
rsÌÍQãäRÌÍ[D].9
kH
:
®÷à.
,2007:2122
[10]N~,cìö,®Ã,.60CoγrsJBJç])"ºpQ
+bRÌÍ
[J].]4.¸,2014,22(4):828833
[11](ç,8t,Lä{,.60γs¶<à;rs¢Úñ
=RIÌÍQ¤
[J].>T®÷-.,1997(1):68
[12]3Ö,êg,ì².¸@ê|®»`‘}|E2U’Ip
;QO`
[J].x& ¯,2011(5):128129
[13]Ð,O,~´º,.60CorsÑYMñ=RÌÍ
[J].]÷.¸,2005,14(4):6571
[14]ShuC,MingliangC,YufangJ,犲狋犪犾.Invitroselectionofsalt
tolerantvariantsfolowing60Cogammairradiationoflongterm
calusculturesof犣狅狔狊犻犪犿犪狋狉犲犾犾犪 [L.] Merr.[J].Plant
Cel,TissueandOrganCulture,2011,107(3):493500
[15]î²,´,.³,.£¤ùÇjSSR{ÁJK«T_
;oÂÆû»`Iãä·ù
[J].ZT®÷à..¸:_ö-
.Á
,2010,36(6):613619
[16]Wî,3e.60Coγs¶rsá7ïNIeÚ>f¸
[J].ÆÇ®÷-,2008(7):1314
[17]3eï,¬ÏJ,tÂ.Þ(ñ¥CjE<à;ers
>IÕÖ
[J].0T®÷à..¸,1996,18(5):476480
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835