全 文 ：植物科学学报 ２０１６ꎬ ３４(２): ２４６~２５４
Ｐｌａｎｔ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｈｔｔｐ: / / ｗｗｗ.ｐｌａｎｔｓｃｉｅｎｃｅ.ｃｎ
ＤＯＩ:１０ １１９１３ / ＰＳＪ ２０９５￣０８３７ ２０１６ ２０２４６
周文平ꎬ 王怀琴ꎬ 郭晓荣ꎬ 杨新兵ꎬ 化文平ꎬ 曹晓燕. 丹参 ｂＨＬＨ转录因子基因 ＳｍＭＹＣ２ 的克隆和表达分析[ Ｊ] . 植物科学学报ꎬ ２０１６ꎬ ３４
(２): ２４６－２５４
Ｚｈｏｕ ＷＰꎬ Ｗａｎｇ ＨＱꎬ Ｇｕｏ ＸＲꎬ Ｙａｎｇ ＸＢꎬ Ｈｕａ ＷＰꎬ Ｃａｏ ＸＹ. Ｃｌｏｎｉｎｇ ａｎｄ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ＳｍＭＹＣ２ꎬ ａ ｂＨＬＨ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒ
ｇｅｎｅ ｆｒｏｍ Ｓａｌｖｉａ ｍｉｌｔｉｏｒｒｈｉｚａ Ｂｕｎｇｅ[Ｊ] . Ｐｌａｎｔ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｊｏｕｒｎａｌꎬ ２０１６ꎬ ３４(２): ２４６－２５４
丹参 ｂＨＬＨ转录因子基因 ＳｍＭＹＣ２的克隆和表达分析
周文平１ꎬ 王怀琴１ꎬ 郭晓荣１ꎬ 杨新兵１ꎬ 化文平２ꎬ 曹晓燕１∗
(１. 药用资源与天然药物化学教育部重点实验室ꎬ 西北濒危药材资源开发国家工程实验室ꎬ 陕西师范大学ꎬ
西安 ７１００６２ꎻ ２. 陕西学前师范学院生物科学与技术系ꎬ 西安 ７１００６１)
摘 要: ＭＹＣ２是植物茉莉酸类激素响应途径中的核心转录因子ꎬ 在植物防御反应、 次生代谢调控及生长发育过
程中均有重要的调控作用ꎮ 基于丹参转录组和基因组 ｓｕｒｖｅｙ序列ꎬ 本研究克隆了丹参转录因子 ＭＹＣ２ 的基因序
列ꎬ 并命名为 ＳｍＭＹＣ２ (ＧｅｎＢａｎｋ Ｎｏ. ＫＪ９４５６３６)ꎮ ＳｍＭＹＣ２基因的 ｃＤＮＡ序列长度为 １９１０ ｂｐꎬ 开放阅读框
(ＯＲＦ)的长度为 １８０９ ｂｐꎬ 编码 ６０２个氨基酸ꎬ 无内含子ꎻ 该基因编码蛋白与烟草、 番茄等植物的 ＭＹＣ２ 蛋白
具有较高的同源性ꎻ ＳｍＭＹＣ２蛋白无跨膜结构域、 信号肽等结构ꎮ 实时荧光定量 ＰＣＲ检测结果显示ꎬ ＳｍＭＹＣ２
在丹参的根、 茎、 叶、 花中均有表达ꎬ 并且在根和茎中的表达量更高ꎻ 此外ꎬ 该基因表达受茉莉酸甲酯、 光和
机械损伤的诱导ꎬ 但受赤霉素的抑制ꎮ 本实验结果为进一步探讨 ＳｍＭＹＣ２ 基因在丹参中的生物学功能奠定了
基础ꎮ
关键词: 丹参ꎻ ＭＹＣ２ꎻ ｂＨＬＨꎻ 表达模式分析
中图分类号: Ｑ７８ 文献标识码: Ａ 文章编号: ２０９５￣０８３７(２０１６)０２￣０２４６￣０９
收稿日期: ２０１５￣１１￣０５ꎬ 退修日期: ２０１５￣１２￣０３ꎮ
基金项目: 陕西省自然科学基金项目(２０１４ＪＱ３１０７)ꎻ 中央高校基本科研业务费专项资金项目(ＧＫ２０１３０２０４３)ꎻ 陕西学前师范学院
基金(２０１４ＤＳ０１０)ꎮ
Ｔｈｉｓ ｗｏｒｋ ｗａｓ ｓｕｐｐｏｒｔｅｄ ｂｙ ｇｒａｎｔｓ ｆｒｏｍ ｔｈｅ Ｎａｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ ｏｆ Ｓｈａａｎｘｉ Ｐｒｏｖｉｎｃｅ (２０１４ＪＱ３１０７)ꎬ Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ Ｒｅ￣
ｓｅａｒｃｈ Ｆｕｎｄｓ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｃｅｎｔｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｉｅｓ (ＧＫ２０１３０２０４３)ꎬ ａｎｄ Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ ｏｆ Ｓｈａａｎｘｉ Ｘｕｅｑｉａｎ Ｎｏｒｍａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ (２０１４ＤＳ０１０) .
作者简介: 周文平(１９８９－)ꎬ 女ꎬ 硕士研究生ꎬ 研究方向为植物次生代谢调控机理(Ｅ￣ｍａｉｌ: ｚｈｏｕｗｐ１２２６＠１６３ ｃｏｍ)ꎮ
∗通讯作者(Ａｕｔｈｏｒ ｆｏｒ ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｅｎｃｅ Ｅ￣ｍａｉｌ: ｃａｏｘｉａｏｙａｎ＠ｓｎｎｕ ｅｄｕ ｃｎ)ꎮ
Ｃｌｏｎｉｎｇ ａｎｄ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ＳｍＭＹＣ２ꎬ ａ ｂＨＬＨ
Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ Ｆａｃｔｏｒ Ｇｅｎｅ ｆｒｏｍ Ｓａｌｖｉａ ｍｉｌｔｉｏｒｒｈｉｚａ Ｂｕｎｇｅ
ＺＨＯＵ Ｗｅｎ￣Ｐｉｎｇ１ꎬ ＷＡＮＧ Ｈｕａｉ￣Ｑｉｎ１ꎬ ＧＵＯ Ｘｉａｏ￣Ｒｏｎｇ１ꎬ
ＹＡＮＧ Ｘｉｎ￣Ｂｉｎｇ１ꎬ ＨＵＡ Ｗｅｎ￣Ｐｉｎｇ２ꎬ ＣＡＯ Ｘｉａｏ￣Ｙａｎ１∗
(１. Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ ｔｈｅ Ｍｉｎｉｓｔｒｙ ｏｆ Ｅｄｕｃａｔｉｏｎ ｆｏｒ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ ａｎｄ Ｎａｔｕｒａｌ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙꎬ Ｎａｔｉｏｎａｌ
Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｆｏｒ Ｒｅｓｏｕｒｃｅ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ Ｅｎｄａｎｇｅｒｅｄ Ｃｒｕｄｅ Ｄｒｕｇｓ ｉｎ Ｎｏｒｔｈｗｅｓｔ ｏｆ Ｃｈｉｎａꎬ Ｓｈａａｎｘｉ
Ｎｏｒｍａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙꎬ Ｘｉ’ａｎ ７１００６２ꎬ Ｃｈｉｎａꎻ ２. Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙꎬ
Ｓｈａａｎｘｉ Ｘｕｅｑｉａｎ Ｎｏｒｍａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙꎬ Ｘｉ’ａｎ ７１００６１ꎬ Ｃｈｉｎａ)
Ａｂｓｔｒａｃｔ: ＭＹＣ２ ｉｓ ａ ｃｏｒｅ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒ ｉｎ ｔｈｅ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｐｒｏｃｅｄｕｒｅ ｏｆ ｊａｓｍｏｎｉｃ ａｃｉｄ
ｈｏｒｍｏｎｅｓ. Ｉｔ ｐｌａｙｓ ａｎ ｉｍｐｏｒｔａｎｔ ｒｏｌｅ ｉｎ ｒｅｇｕｌａｔｉｎｇ ｐｌａｎｔ ｄｅｆｅｎｓｅ ｒｅｓｐｏｎｓｅｓꎬ ｓｅｃｏｎｄａｒｙ
ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ ａｎｄ ｇｒｏｗｔｈ ａｎｄ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｐｒｏｃｅｓｓｅｓ. Ｂａｓｅｄ ｏｎ Ｓａｌｖｉａ ｍｉｌｔｉｏｒｒｈｉｚａ Ｂｕｎｇｅ
ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｏｍｅｓ ａｎｄ ｇｅｎｏｍｅ ｓｕｒｖｅｙ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓꎬ ｔｈｅ ＭＹＣ２ ｇｅｎｅ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒ ｉｎ Ｓ.
ｍｉｌｔｉｏｒｒｈｉｚａ ｗａｓ ｃｌｏｎｅｄ ａｎｄ ｎａｍｅｄ ＳｍＭＹＣ２ (ＧｅｎＢａｎｋ ａｃｃｅｓｓｉｏｎ ｎｕｍｂｅｒ: ＫＪ９４５６３６) . Ｔｈｅ
ｃＤＮＡ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｌｅｎｇｔｈ ｏｆ ＳｍＭＹＣ２ ｗａｓ １９１０ ｂｐ ｗｉｔｈ ｎｏ ｉｎｔｒｏｎｓꎬ ａｎｄ ｔｈｅ ｏｐｅｎ ｒｅａｄｉｎｇ ｆｒａｍｅ
(ＯＲＦ ) ｗａｓ １８０９ ｂｐꎬ ｅｎｃｏｄｉｎｇ ６０２ ａｍｉｎｏ ａｃｉｄｓ. Ｍｏｒｅｏｖｅｒꎬ ＳｍＭＹＣ２ ｃｏｎｔａｉｎｅｄ ｎｏ
ｍｅｍｂｒａｎｅ￣ｓｐａｎｎｉｎｇ ｄｏｍａｉｎｓ ｏｒ ｓｉｇｎａｌ ｐｅｐｔｉｄｅｓꎬ ａｎｄ ｈａｄ ｈｉｇｈ ｈｏｍｏｌｏｇｙ ｗｉｔｈ ＭＹＣ２ ｏｆ
ｔｏｂａｃｃｏ ａｎｄ ｔｏｍａｔｏ. Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ｒｅａｌ￣ｔｉｍｅ ＰＣＲ ａｎａｌｙｓｉｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ＳｍＭＹＣ２ ｗａｓ ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ
ｉｎ ｔｈｅ ｒｏｏｔｓꎬ ｓｔｅｍｓꎬ ｌｅａｖｅｓ ａｎｄ ｆｌｏｗｅｒｓ ｏｆ Ｓ. ｍｉｌｔｉｏｒｒｈｉｚａꎬ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｈｉｇｈｅｓｔ ｌｅｖｅｌｓ ｏｆ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ
ｏｂｓｅｒｖｅｄ ｉｎ ｔｈｅ ｒｏｏｔｓ ａｎｄ ｓｔｅｍｓ. Ｉｎ ａｄｄｉｔｉｏｎꎬ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＳｍＭＹＣ２ ｃｏｕｌｄ ｂｅ ｉｎｄｕｃｅｄ ｂｙ
ｍｅｔｈｙｌ ｊａｓｍｏｎａｔｅꎬ ｌｉｇｈｔ ａｎｄ ｗｏｕｎｄｉｎｇꎬ ｂｕｔ ｃｏｕｌｄ ｂｅ ｒｅｐｒｅｓｓｅｄ ｂｙ ｇｉｂｂｅｒｅｌｌｉｎ. Ｔｈｅ ｐｒｅｓｅｎｔ
ｓｔｕｄｙ ｗｉｌｌ ｂｅ ｈｅｌｐｆｕｌ ｆｏｒ ｆｕｒｔｈｅｒ ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｒｅｓｅａｒｃｈ ｏｆ ＳｍＭＹＣ２ ｉｎ Ｓ. ｍｉｌｔｉｏｒｒｈｉｚａ.
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ: Ｓａｌｖｉａ ｍｉｌｔｉｏｒｒｈｉｚａ Ｂｕｎｇｅꎻ ＭＹＣ２ꎻ ｂＨＬＨꎻ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｐａｔｔｅｒｎ ａｎａｌｙｓｉｓ
丹参 ( Ｓａｌｖｉａ ｍｉｌｔｉｏｒｒｈｉｚａ Ｂｕｎｇｅ) 为唇形科
(Ｌａｂｉａｔａｅ)多年生草本植物ꎬ 首载于«神农本草
经»ꎬ 其干燥的根及根茎是我国著名的常用大宗药
材ꎬ 具有祛瘀止痛、 养血安神之效[１－３]ꎮ 丹参的有
效成分主要分脂溶性(包括多种菲醌类物质)和水
溶性(多为多聚酚酸类成分)两类[４]ꎬ 具有保护血
管内皮细胞、 抗心律失常、 抗动脉粥样硬化、 改善
微循环、 保护心肌、 抑制和解除血小板聚集、 增加
冠脉流量、 提高机体耐缺氧能力、 抑制胶原纤维的
产生和促进纤维蛋白的降解、 清除自由基、 抗炎以
及保护肝细胞等作用[５]ꎬ 被认为是中药研究的理
想模式生物[６]ꎮ
ｂＨＬＨ蛋白质因具有保守的碱性螺旋￣环￣螺旋
(ｂａｓｉｃ Ｈｅｌｉｘ￣Ｌｏｏｐ￣Ｈｅｌｉｘꎬ ｂＨＬＨ)结构域而得名ꎬ
是一类含有众多成员的转录因子家族ꎻ 广泛存在于
各种生物中[７]ꎬ 并且在植物表皮分化、 响应环境
胁迫或次生代谢调控过程中发挥着重要作用[８－１０]ꎮ
利用生物信息学以及基因组学等方法ꎬ 对一些重要
物种(包括大部分模式植物)进行研究发现ꎬ 烟草
(Ｎｉｃｏｔｉａｎａ ｔａｂａｃｕｍ Ｌ.)、 水稻(Ｏｒｙｚａ ｓａｔｉｖａ Ｌ.)、
拟南芥(Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ ｔｈａｌｉａｎａ Ｌ.)和葡萄(Ｖｉｔｉｓ ｖｉｎ￣
ｆｅｒａ Ｌ.) 中分别含有 １９０、 １８０、 １６４、 １９１ 个
ｂＨＬＨ 转录因子[１１]ꎻ 继丹参中 ＳｍｂＨＬＨ１[１２] 和
ＳｍｂＨＬＨ９３[１３]两条 ｂＨＬＨ 类转录因子基因相继被
克隆后ꎬ Ｚｈａｎｇ等[１４]基于全基因组测序和分析从
丹参中鉴定出 １２７条 ｂＨＬＨ转录因子基因ꎮ
基于作者所在课题组建立的丹参转录组数据库
和基因组 Ｓｕｒｖｅｙ 数据库ꎬ 本研究从丹参中克隆了
１条 ｂＨＬＨ 类转录因子基因 ＳｍＭＹＣ２ꎻ 生物信息
学分析结果显示ꎬ 该基因编码的蛋白质与烟草、 番
茄(Ｓｏｌａｎｕｍ ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｕｍ Ｍｉｌｌ.)等植物的 ＭＹＣ２
蛋白具有较高的同源性ꎻ 通过比较发现ꎬ Ｚｈａｎｇ
等[１４]鉴定的 １２７条 ｂＨＬＨ 转录因子基因不包含本
实验克隆的 ＳｍＭＹＣ２ꎬ 即该基因的克隆是对丹参
中 ｂＨＬＨ 类转录因子基本信息的补充和完善ꎮ
ＳｍＭＹＣ２ 作为一条新的 ｂＨＬＨ 家族基因ꎬ 其生
物学功能未知ꎬ 但生物信息学分析结果显示ꎬ
ＳｍＭＹＣ２编码的氨基酸序列与长春花(Ｃａｔｈａｒａｎ￣
ｔｈｕｓ ｒｏｓｅｕｓ Ｌ.)、 烟草中具有次生代谢调控功能的
ＭＹＣ２具有较高同源性ꎬ 故我们推测 ＳｍＭＹＣ２ 参
与丹参的次生代谢调控ꎮ 本研究拟对 ＳｍＭＹＣ２ 进
行克隆和生物信息学分析ꎬ 并利用实时荧光定量
ＰＣＲ 技术检测该基因在丹参不同器官以及不同处
理条件下的表达模式ꎬ 为进一步深入研究
ＳｍＭＹＣ２的生物学功能提供参考ꎮ
１ 材料与方法
１ １ 实验材料
丹参(Ｓａｌｖｉａ ｍｉｌｔｉｏｒｒｈｉｚａ Ｂｕｎｇｅ)种子于 ２０１３
年 １０月采自陕西商洛丹参药材种植基地ꎮ
丹参实生苗的培育: 丹参种子的萌发处理及培
养条件参照周宏骏等[１３]的方法ꎬ 其中人工气候箱
(宁波ꎬ ＲＸＺ 型￣５００Ｄ)的培养条件: 温度为(２５ ±
２)℃ꎬ 光周期为 １６ ｈ 光照 / ８ ｈ 黑暗ꎬ 光照强度
２０００ ｌｘꎬ 湿度约 ８０％ꎻ 然后将培养 ６０ ｄ的丹参幼
苗进行以下 ４ 种胁迫处理: ５００ μｍｏｌ / Ｌ 茉莉酸甲
酯(ｍｅｔｈｙｌ ｊａｓｍｏｎａｔｅꎬ ＭｅＪＡ)、 黑暗处理 ３ ｄ 后
进行持续光照(光照强度为 ４０００ ｌｘ)、 ５０ μｍｏｌ / Ｌ
赤霉素(Ｇｉｂｂｅｒｅｌｌｉｎꎬ ＧＡ３)和机械伤害处理ꎬ 培养
条件不变ꎮ 取 ２ 年生丹参(盛花期)的根、 茎、 叶
和花ꎬ 并经液氮速冻后－８０℃保存、 备用ꎮ
１ ２ 主要试剂
ＤＮＡ提取试剂盒购自北京天根生化科技有限
公司ꎻ 质粒、 ＲＮＡ 提取和凝胶回收试剂盒购自
ＯＭＥＧＡ 公司ꎻ ｐＭＤ１９￣Ｔ ｓｉｍｐｌｅ ｖｅｃｔｏｒ、 ＬＡ Ｔａｑ
酶、 ＳＹＢＲ Ｇｒｅｅｎ Ⅱ Ｐｒｅｍｉｘ Ｅｘ Ｔａｑ和反转录试剂
盒购自宝生物工程(大连)有限公司ꎮ 引物合成及
测序由北京奥科鼎盛生物科技有限公司完成ꎮ 大肠
杆菌 ＤＨ５α为作者所在课题组保存ꎮ
１ ３ 实验方法
１ ３ １ ＳｍＭＹＣ２基因的克隆
提取丹参幼苗(培养 ６０ ｄ)的 ＤＮＡ 和 ＲＮＡꎬ
７４２ 第 ２期 周文平等: 丹参 ｂＨＬＨ转录因子基因 ＳｍＭＹＣ２的克隆和表达分析
并按照反转录试剂盒 ＰｒｉｍｅＳｃｒｉｐｔ® ＲＴ ｒｅａｇｅｎｔ Ｋｉｔ
说明书将 ＲＮＡ 反 转 录 为 ｃＤＮＡꎮ 根据丹参基因
组 ｓｕｒｖｅｙ 数据库中 ｓｃａｆｆｏｌｄ２７２４ 基因序列ꎬ 采用
Ｐｒｉｍｅｒ Ｐｒｅｍｉｅｒ ５０软件设计引物(ＳｍＭＹＣ２￣Ｆ: ５′￣
ＡＴＧＧＡＡＴＧＡＴＴＧＡＴＴＡＣＣＧＣＡＣ￣３′和 ＳｍＭＹＣ２￣Ｒ:
５′￣ＧＧＡＧＧＡＡＡＣＴＡＧＡＣＡＣＡＡＡＡＴＡＣＡＣＣ￣３′)ꎬ
并在 ＤＮＡ 和 ｃＤＮＡ 水平上进行 ＰＣＲ 扩增ꎮ ＰＣＲ
反应程序为: ９５℃预变性 ３ ｍｉｎꎻ ９５℃变性 ３０ ｓꎬ
５８℃退火 ４５ ｓꎬ ７２℃延伸 １３０ ｓꎬ ３３ 个循环ꎻ
７２℃延伸 １０ ｍｉｎꎮ
１ ３ ２ ＳｍＭＹＣ２蛋白的生物信息学分析
利用生物信息学在线分析软件 ＰｒｏｔＰａｒａｍ
(ｈｔｔｐ: / / ｗｅｂ.ｅｘｐａｓｙ.ｏｒｇ/ ｐｒｏｔｐａｒａｍ/ )预测 ＳｍＭＹＣ２
蛋白的理化性质ꎻ ＴＭＨＭＭ２０ Ｓｅｒｖｅｒ ( ｈｔｔｐ: / /
ｗｗｗ.￣ｃｂｓ. ｄｔｕ. ｄｋ / ｓｅｒｖｉｃｅｓ / ＴＭＨＭＭ / )预测该蛋
白的跨膜结构ꎻＳｉｇｎａｌＰ(ｈｔｔｐ: / / ｗｗｗ.ｃｂｓ.ｄｔｕ.ｄｋ /
ｓｅｒｖｉｃｅｓ / ＳｉｇｎａｌＰ / )预测该蛋白的信号肽ꎻＳＯＰＭＡ
(ｈｔｔｐ: / / ｎｈｊｙ.ｈｚａｕ.ｅｄｕ.ｃｎ / ｋｅｃｈ / ｓｗｘｘｘ / ｊａｋｊ / ｄｉａｎ￣
ｚｉ / Ｂｉｏｉｎｆ７/ Ｅｘｐａｓｙ / Ｅｘｐａｓｙ８.ｈｔｍ)及 ＳＷＩＳＳ￣ＭＯＤＥＬ
( ｈｔｔｐ: / / ｓｗｉｓｓｍｏｄｅｌ. ｅｘｐａｓｙ. ｏｒｇ / ｉｎｔｅｒａｃｔｉｖｅ ) 对
ＳｍＭＹＣ２蛋白的二级结构和三维结构进行分析ꎻ
ＰＲＯＳＣＡＮ 进行功能位点的查找 ( ｈｔｔｐ: / / ｎｐｓａ￣
ｐｂｉｌ. ｉｂｃｐ. ｆｒ / ｃｇｉ￣ｂｉｎ / ｎｐｓａ ＿ａｕｔｏ￣ｍａｔ. ｐｌ? ｐａｇｅ ＝ /
ＮＰＳＡ / ｎｐｓａ＿ｐｒｏｓｃａｎ.ｈｔｍｌ)ꎻ Ｃｌｕｓｔａｌ Ｗ 在线工具
对 ＳｍＭＹＣ２ 氨基酸序列进行比对ꎮ 采用 ＭＥＧＡ
５ ２ 软件构建不同植物物种ＭＹＣ２蛋白序列的分子
进化树ꎮ
１ ３ ３ ＳｍＭＹＣ２基因的表达分析
分别提取 ２年生丹参的根、 茎、 叶、 花以及不
同胁迫处理的丹参幼苗 ＲＮＡꎬ 并按照反转录试剂
盒 ＰｒｉｍｅＳｃｒｉｐｔ® ＲＴ ｒｅａｇｅｎｔ Ｋｉｔ 说明书将 ＲＮＡ 反
转录为 ｃＤＮＡꎬ 再以稀释 ５０ 倍的 ｃＤＮＡ 为模板进
行实时定量 ＰＣＲ 反应ꎮ 以丹参持家基因 Ｕｂｉｑｕｉｔｉｎ
为内 参 ( ＳｍＵｂｉｑｕｉｔｉｎ￣Ｆ: ５′￣ＡＣＣＣＴＣＡＣＧＧＧＧ￣
ＡＡＧＡＣＣＡＴＣ￣３′和 ＳｍＵｂｉｑｕｉｔｉｎ￣Ｒ: ５′￣ＡＣＣＡＣＧ￣
ＧＡＧＡＣＧＧＡＧＧＡＣＡＡＧ￣３′)ꎬ 对 ＳｍＭＹＣ２基因表
达量进行分析ꎮ 运用 Ｐｒｅｍｅｒ Ｐｒｅｍｉｅｒ ５ ０ 软件设
计实时定量 ＰＣＲ 扩增引物 ( ＳｍＭＹＣ２￣Ｆ: ５′￣
ＧＡＧＡＡＧＣＧＡＴＧＴＡＧＴＴＧＴＧＧ￣３′和 ＳｍＭＹＣ２￣Ｒ:
５′￣ＧＧＧＴＴＣＡＣＧＡＣＴＣＴＧＣＴＡＣＴ￣３′)ꎮ 实时定量
ＲＴ￣ＰＣＲ 反应程序: ９５℃变性 ３ ｍｉｎꎻ ９５℃变性
１０ ｓꎬ ６０℃退火延伸 ２５ ｓꎬ ４５ 个循环ꎬ 并收集荧
光信号ꎮ 每个样品至少设置 ３ 次技术重复ꎻ 运用
“比较 Ｃｔ 法的相对定量”法分析数据ꎬ 并用软件
ＳＰＳＳ１７０分析基因表达量的显著性差异ꎮ
２ 结果与分析
２ １ ＳｍＭＹＣ２基因克隆及 ｃＤＮＡ序列分析
由图 １可见ꎬ ＤＮＡ 和 ｃＤＮＡ 水平上的扩增片
段长度一致ꎮ 将扩增产物连入 ｐＭＤ１９￣Ｔ ｓｉｍｐｌｅ 载
体后ꎬ 测序结果显示: ＳｍＭＹＣ２ 基因 ｃＤＮＡ 全长
为 １９１０ ｂｐꎻ 经 ＤＮＡｓｔａｒ 对开放阅读框 ( ｏｐｅｎ
ｒｅａｄｉｎｇ ｆｒａｍｅꎬ ＯＲＦ ) 进行查找和翻译ꎬ 发现
ＳｍＭＹＣ２的 ＯＲＦ长度为 １８０９ ｂｐꎬ 编码 ６０２个氨
基酸残基ꎬ 无内含子ꎮ 将 ＳｍＭＹＣ２ 序列提交至
ＧｅｎＢａｎｋ数据库ꎬ 其注册号为 ＫＪ９４５６３６ꎮ
M 1 2
2
1
0.75
kb
Ｍ: ＤＬ２０００ ｍａｒｋｅｒꎻ １. ＰＣＲ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ＤＮＡ ｆｒａｇｍｅｎｔꎻ
２. ＰＣＲ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｃＤＮＡ ｆｒａｇｍｅｎｔ.
图 １ 丹参 ＳｍＭＹＣ２扩增产物的凝胶电泳检测
Ｆｉｇ １ Ａｇａｒｏｓｅ ｇｅｌ ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｔｉｃ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ＰＣＲ
ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｐｒｏｄｕｃｔｓ ｏｆ ＳｍＭＹＣ２
２ ２ ＳｍＭＹＣ２蛋白的生物信息学分析及预测
２ ２ １ ＳｍＭＹＣ２ 编码蛋白的同源性对比及系统
发育分析
Ｂｌａｓｔ Ｘ 序列同源对比结果显示ꎬ ＳｍＭＹＣ２
编码蛋白与其他植物中 ＭＹＣ２ 具有较高的同源
性ꎬ 例如ꎬ 与白花丹参 ( Ｓ ｍｉｌｔｉｏｒｒｈｉｚａ ｆ ａｌｂａꎬ
ＧｅｎＢａｎｋ Ｎｏ ＡＨＮ６３２１１１)、 芝麻(Ｓｅｓａｍｕｍ ｉｎ￣
ｄｉｃｕｍꎬ ＸＰ＿０１１０８２３６５１)、 烟草(Ｎｉｃｏｔｉａｎａ ｔａｂａ￣
ｃｕｍꎬ ＡＤＨ０４２６８１)、 葡萄(Ｖｉｔｉｓ ｖｉｎｉｆｅｒａꎬ ＸＰ＿００２￣
２８０２５３１)、 番茄 (Ｓｏｌａｎｕｍ ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｕｍꎬ ＸＰ＿００４￣
２４５８９５ ２ )、 咖 啡 ( Ｃｏｆｆｅａ ｃａｎｅｐｈｏｒａꎬ ＣＤＰ￣
１３０２８ １)等物种中 ＭＹＣ２ 的氨基酸序列一致性分
别为 ９５％、 ６９％、 ５９％、 ６０％、 ５９％、 ５９％ꎮ 分析
ＳｍＭＹＣ２的氨基酸序列保守结构域发现ꎬ 第 ７２ ~
８４２ 植 物 科 学 学 报 第 ３４卷
２５１ ａａ 处为 ＭＹＣ 转录因子的 Ｎ 端区ꎬ 第 ４３５ ~
４８６ ａａ处具有典型的与 ＤＮＡ结合的 ＨＬＨ结构域ꎮ
采用 Ｃｌｕｓｔａｌ Ｗ 及在线工具 ＰＲＯＳＣＡＮ 对
ＭＹＣ２蛋白进行多序列比对分析和功能位点的查
找ꎬ 发现不同物种间的 ＭＹＣ２ 蛋白具有较高的保
守性ꎬ 其功能域的氨基酸组成也高度相似(图 ２)ꎮ
在序列比对的基础上ꎬ 参考植物 ｂＨＬＨ 分类[７]ꎬ
因 ＳｍＭＹＣ２蛋白具有保守的ｍｏｔｉｆ ７结构域ꎬ 我们
将其划分为 ｂＨＬＨ 家族 ２６ 个亚族的Ⅲ(ｄ ＋ ｅ)类
成员ꎮ
Nicotiana attenuata
Solanum tuberosum
Salvia miltiorrhiza
Vitis vinifera
Catharanthus roseus
Arabidopsis thaliana
Consensus
（ ）
（ ）
（ ）
（ ）
（ ）
（ ）
AGL98100.1
XP_006352856.1
AIO09733.1
XP_002280253.1
AAQ14332.1
NP_174541.1
Nicotiana attenuata
Solanum tuberosum
Salvia miltiorrhiza
Vitis vinifera
Catharanthus roseus
Arabidopsis thaliana
Consensus
（ ）
（ ）
（ ）
（ ）
（ ）
（ ）
AGL98100.1
XP_006352856.1
AIO09733.1
XP_002280253.1
AAQ14332.1
NP_174541.1
Nicotiana attenuata
Solanum tuberosum
Salvia miltiorrhiza
Vitis vinifera
Catharanthus roseus
Arabidopsis thaliana
Consensus
（ ）
（ ）
（ ）
（ ）
（ ）
（ ）
AGL98100.1
XP_006352856.1
AIO09733.1
XP_002280253.1
AAQ14332.1
NP_174541.1
Nicotiana attenuata
Solanum tuberosum
Salvia miltiorrhiza
Vitis vinifera
Catharanthus roseus
Arabidopsis thaliana
Consensus
（ ）
（ ）
（ ）
（ ）
（ ）
（ ）
AGL98100.1
XP_006352856.1
AIO09733.1
XP_002280253.1
AAQ14332.1
NP_174541.1
Nicotiana attenuata
Solanum tuberosum
Salvia miltiorrhiza
Vitis vinifera
Catharanthus roseus
Arabidopsis thaliana
Consensus
（ ）
（ ）
（ ）
（ ）
（ ）
（ ）
AGL98100.1
XP_006352856.1
AIO09733.1
XP_002280253.1
AAQ14332.1
NP_174541.1
Nicotiana attenuata
Solanum tuberosum
Salvia miltiorrhiza
Vitis vinifera
Catharanthus roseus
Arabidopsis thaliana
Consensus
（ ）
（ ）
（ ）
（ ）
（ ）
（ ）
AGL98100.1
XP_006352856.1
AIO09733.1
XP_002280253.1
AAQ14332.1
NP_174541.1
Nicotiana attenuata
Solanum tuberosum
Salvia miltiorrhiza
Vitis vinifera
Catharanthus roseus
Arabidopsis thaliana
Consensus
（ ）
（ ）
（ ）
（ ）
（ ）
（ ）
AGL98100.1
XP_006352856.1
AIO09733.1
XP_002280253.1
AAQ14332.1
NP_174541.1
Nicotiana attenuata
Solanum tuberosum
Salvia miltiorrhiza
Vitis vinifera
Catharanthus roseus
Arabidopsis thaliana
Consensus
（ ）
（ ）
（ ）
（ ）
（ ）
（ ）
AGL98100.1
XP_006352856.1
AIO09733.1
XP_002280253.1
AAQ14332.1
NP_174541.1
Nicotiana attenuata
Solanum tuberosum
Salvia miltiorrhiza
Vitis vinifera
Catharanthus roseus
Arabidopsis thaliana
Consensus
（ ）
（ ）
（ ）
（ ）
（ ）
（ ）
AGL98100.1
XP_006352856.1
AIO09733.1
XP_002280253.1
AAQ14332.1
NP_174541.1
45
66
54
43
59
46
122
150
120
114
136
115
205
232
198
193
217
199
290
311
282
277
296
283
344
385
333
350
380
354
426
464
383
422
455
412
508
547
460
505
540
476
583
625
529
590
621
553
656
702
602
663
698
623
motif 7
bHLH domain
图 ２ 丹参 ＳｍＭＹＣ２与不同植物中 ＭＹＣ２蛋白的氨基酸序列比对
Ｆｉｇ ２ Ｍｕｌｔｉｐｌｅ ａｌｉｇｎｍｅｎｔ ｏｆ ＳｍＭＹＣ２ ａｍｉｎｏ ａｃｉｄ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｆｒｏｍ Ｓａｌｖｉａ ｍｉｌｔｉｏｒｒｈｉｚａ
ｗｉｔｈ ｔｈｏｓｅ ｏｆ ＭＹＣ２ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｆｒｏｍ ｏｔｈｅｒ ｐｌａｎｔｓ
９４２ 第 ２期 周文平等: 丹参 ｂＨＬＨ转录因子基因 ＳｍＭＹＣ２的克隆和表达分析
利用 ＭＥＧＡ ５２软件并选取 Ｎｅｉｇｈｂｏｒ￣Ｊｏｉｎｉｎｇ
方法ꎬ 构建了不同物种的 ＭＹＣ２ 及 ｂＨＬＨ 家族蛋
白的分子进化树 (图 ３ )ꎮ 结 果 显 示ꎬ 丹 参
ＳｍＭＹＣ２与其变种白花丹参中 ＭＹＣ２ 的亲缘关系
最近ꎬ 其次与长春花、 番茄、 马铃薯和烟草的
ＭＹＣ２亲缘关系较近ꎮ
２ ２ ２ ＳｍＭＹＣ２编码蛋白的理化性质分析
利用 ＰｒｏｔＰａｒａｍ 软件预测 ＳｍＭＹＣ２ 蛋白质的
理化性质ꎬ 结果显示该蛋白属于不稳定的酸性亲水
蛋白ꎬ 其相对分子质量为 ６５９３ ｋＤꎬ 理论等电点
为 ５４６ꎬ 不稳定系数为 ５２２９ꎮ 通过 ＳＯＰＭＡ 程序
预测的 ＳｍＭＹＣ２ 氨基酸序列的二级结构中ꎬ α￣螺
旋占 ３６２１％ꎬ β￣转角占 ５１５％ꎬ 不规则卷曲占
４１０３％ꎬ 延伸链占 １９６１％ꎮ ＴａｒｇｅｔＰ １１ Ｓｅｒｖｅｒ 分
析结果显示ꎬ ＳｍＭＹＣ２编码蛋白无剪切位点ꎮ 利用
ＴＭＨＭＭ ２０ Ｓｅｒｖｅｒ对 ＳｍＭＹＣ２蛋白的跨膜结构域
进行预测ꎬ 发现该蛋白没有跨膜区段ꎻ ＳｉｇｎａｌＰ ３０
Ｓｅｒｖｅｒ预测也显示ꎬ ＳｍＭＹＣ２蛋白没有信号肽ꎬ 故
推测 ＳｍＭＹＣ２为非分泌、 非跨膜类蛋白ꎮ
２ ３ ＳｍＭＹＣ２基因在丹参不同器官中的表达分析
以 ２年生丹参(盛花期)的根、 茎、 叶、 花为材
料ꎬ 选取 Ｕｂｉｑｕｉｔｉｎ 作为内参基因ꎬ 对 ＳｍＭＹＣ２ 在
丹参不同器官中的表达水平进行实时荧光定量 ＰＣＲ
检测ꎮ 结果显示(图 ４)ꎬ ＳｍＭＹＣ２主要在丹参根和
茎中表达ꎬ 而在叶和花中的表达量相对较少ꎬ 表明
该基因可能在丹参根和茎中发挥着重要作用ꎮ
100
100
100
100
100
99
88
99
73
73
89 62
99
90
72
47
28
77
SlMYC AGZ94899.1( )
StMYC2-like XP 006352856.1( _ )
NaMYC2 AGL98100.1( )
CrMYC2 AAQ14332.1( )
SmMYC2 KJ945636( )★
!"#$ ( )MYC2 AHN63211.1
GmMYC2-like XP 003516794.1( _ )
CsMYC2-like XP 004148475.1( _ )
VvMYC2-like XP 002280253.1( _ )
PmMYC2 XP 008238247.1( _ )
AtMYC2 NP 174541.1( _ )
BnMYC2 XP 013735805.1( _ )
AaMYC2 AK062850.1( )
TfbHLH1 AGL98426.1( )
GbMYC1 BAJ17663.1( )
DpbHLH BAJ33516.1( )
GhMYC1 CAA07615.1( )
IbbHLH1 AFV33951.1( )
TfbHLH BAN17386.1( )
PsbHLH AIU98518.1( )
PabHLH33 AJB28483.1( )
分支上的数字代表自展值.
Ｎｕｍｂｅｒｓ ｏｎ ｂｒａｎｃｈｅｓ ｏｆ ｔｈｅ ｅｖｏｌｕｔｉｏｎａｒｙ ｔｒｅｅ ｒｅｐｒｅｓｅｎｔ ｂｏｏｔｓｔｒａｐ ｖａｌｕｅｓ. ＧｅｎＢａｎｋ Ｎｏ. ｉｓ ｉｎ ｐａｒｅｎｔｈｅｓｅｓ. ＳｌＭＹＣ:
Ｓｏｌａｎｕｍ ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｕｍꎻ ＳｔＭＹＣ２￣ｌｉｋｅ: Ｓ. ｔｕｂｅｒｏｓｕｍꎻ ＮａＭＹＣ２: Ｎｉｃｏｔｉａｎａ ａｔｔｅｎｕａｔａꎻ ＣｒＭＹＣ２: Ｃａｔｈａｒａｎｔｈｕｓ ｒｏ￣
ｓｅｕｓꎻ ＳｍＭＹＣ２: Ｓａｌｖｉａ ｍｉｌｔｉｏｒｒｈｉｚａꎻ ＧｍＭＹＣ２￣ｌｉｋｅ: Ｇｌｙｃｉｎｅ ｍａｘꎻ ＣｓＭＹＣ２￣ｌｉｋｅ: Ｃｕｃｕｍｉｓ ｓａｔｉｖｕｓꎻ ＶｖＭＹＣ２￣ｌｉｋｅ: Ｖｉ￣
ｔｉｓ ｖｉｎｉｆｅｒａꎻ ＰｍＭＹＣ２: Ｐｒｕｎｕｓ ｍｕｍｅꎻ ＡｔＭＹＣ２: Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ ｔｈａｌｉａｎａꎻ ＢｎＭＹＣ２: Ｂｒａｓｓｉｃａ ｎａｐｕｓꎻ ＡａＭＹＣ２: Ａｒｔｅｍｉ￣
ｓｉａ ａｎｎｕａꎻ ＴｆｂＨＬＨ１: Ｔｕｌｉｐａ ｆｏｓｔｅｒｉａｎａꎻ ＧｂＭＹＣ１: Ｇｙｎｕｒａ ｂｉｃｏｌｏｒꎻ ＤｐｂＨＬＨ: Ｄａｈｌｉａ ｐｉｎｎａｔａꎻ ＧｈＭＹＣ１: Ｇｅｒｂｅｒａ
ｈｙｂｒｉｄ ｃｕｌｔｉｖａｒꎻ ＩｂｂＨＬＨ１: Ｉｐｏｍｏｅａ ｂａｔａｔａｓꎻ ＴｆｂＨＬＨ: Ｔｏｒｅｎｉａ ｆｏｕｒｎｉｅｒｉꎻ ＰｓｂＨＬＨ: Ｐａｅｏｎｉａ ｓｕｆｆｒｕｔｉｃｏｓａꎻ
ＰａｂＨＬＨ３３: Ｐｒｕｎｕｓ ａｖｉｕｍ.
图 ３ 丹参 ＳｍＭＹＣ２与其他物种 ｂＨＬＨ类蛋白的系统进化树
Ｆｉｇ ３ Ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ＳｍＭＹＣ２ ｆｒｏｍ Ｓａｌｖｉａ ｍｉｌｔｉｏｒｒｈｉｚａ ａｎｄ ｂＨＬＨ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｆｒｏｍ ｏｔｈｅｒ ｐｌａｎｔｓ
０５２ 植 物 科 学 学 报 第 ３４卷
1.4
1.2
1.0
0.8
0.6
0.4
0.2
0.0
a a
b
c
! Root " Stem # Leave $ Flower
%
&
(
)
*
+
G
en
e
re
la
tiv
e
ex
pr
es
si
on
le
ve
l
不同小写字母表示基因相对表达量在 Ｐ < ００５ 水平上
差异显著ꎮ 下同ꎮ
Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｎｏｒｍａｌ ｌｅｔｔｅｒｓ ｉｎｄｉｃａｔｅ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ
ａｍｏｎｇ ｇｅｎｅ ｒｅｌａｔｉｖｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｌｅｖｅｌｓ ａｔ ｔｈｅ Ｐ < ００５
ｌｅｖｅｌ. Ｓａｍｅ ｂｅｌｏｗ.
图 ４ ＳｍＭＹＣ２在丹参不同器官中的表达水平
Ｆｉｇ ４ Ｇｅｎｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｌｅｖｅｌ ｏｆ ＳｍＭＹＣ２ ｉｎ
ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｏｒｇａｎｓ ｏｆ Ｓａｌｖｉａ ｍｉｌｔｉｏｒｒｈｉｚａ
２ ４ 不同胁迫条件下 ＳｍＭＹＣ２的表达模式
茉莉酸类物质是一类内源性植物激素ꎬ 具有重
要的生理功能ꎬ 如可以诱导多种植物次生代谢物质
的合成[１５]ꎮ 实时荧光定量 ＲＴ￣ＰＣＲ 检测结果显示
(图 ５)ꎬ 茉莉酸甲酯(ＭｅＪＡ)、 光、 机械损伤能促
进 ＳｍＭＹＣ２ 基因表达ꎬ 赤霉素抑制该基因的表
达ꎮ ５００ μｍｏｌ / Ｌ ＭｅＪＡ 处理丹参幼苗 １ ｈ 时ꎬ
ＳｍＭＹＣ２ 基因表达量显著升高ꎻ 在处理 ２ ｈ 时略
有下降ꎬ 但之后 ＳｍＭＹＣ２ 表达量回升ꎬ 且在处
理 ８ ｈ时达到最大值(图 ５: Ａ)ꎮ 光处理可诱导
ＳｍＭＹＣ２ 基因的表达(图 ５: Ｂ)ꎬ 但在 ４０００ ｌｘ
强光处理 ２ ｈ时该基因的表达量与对照无明显变
化ꎻ 光处理 ４ ｈ 后 ＳｍＭＹＣ２ 基因表达量迅速上
升ꎬ 并在处理 １０ ｈ 时达到最高值(约为对照的
２ ５ 倍)ꎻ 强光处理 １２ ｈ 后该基因表达量又逐渐
降低ꎮ ５０ μｍｏｌ / Ｌ 赤霉素处理 ６ ｈ 内ꎬ ＳｍＭＹＣ２
基因表达量整体呈下降趋势(图 ５: Ｃ)ꎮ 由图 ５:
Ｄ可见ꎬ 机械伤害处理 ０５ ｈ 内ꎬ ＳｍＭＹＣ２ 基因
表达量显著升高ꎬ 但之后呈下降趋势ꎻ 与对照相
比ꎬ 机械伤害处理后该基因的整体表达水平呈升
高趋势ꎮ
0
0.1
0.2
0.3
0.4
0.5
0.6
0.7
0.8
0.9
0 1 2 4 6 8 24 48
!"#$ ( )h
Treatment time
!"#$ ( )h
Treatment time
!"#$ ( )h
Treatment time
A
0
0.5
1
1.5
2
2.5
3
2
2
0
0
4
4
6
6
8 10
10
12
12
24
24
48
48
72
0 0.5 1 12 4872
96
!"#$ ( )h
Treatment time
B
C
D
2
1
0
3
4
5
6
7
8
9
1
0.9
0.8
0.7
0.6
0.5
0.4
0.3
0.2
0.1
0
%
&
(
)
*
+
G
en
e
re
la
tiv
e
ex
pr
es
si
on
le
ve
l
%
&
(
)
*
+
G
en
e
re
la
tiv
e
ex
pr
es
si
on
le
ve
l
%
&
(
)
*
+
G
en
e
re
la
tiv
e
ex
pr
es
si
on
le
ve
l
%
&
(
)
*
+
G
en
e
re
la
tiv
e
ex
pr
es
si
on
le
ve
l
e
c
f
e
b
a
e
d e
de
f
a
b
a a
d
cd
a
c
a
e
c
b
cd
d
cd
e e
c
a
b
bc
c
Ａ: ５００ μｍｏｌ / Ｌ茉莉酸甲酯ꎻ Ｂ: 光照ꎻ Ｃ: ５０ μｍｏｌ / Ｌ赤霉素ꎻ Ｄ: 机械伤害ꎮ
Ａ: ５００ μｍｏｌ / Ｌ ｍｅｔｈｙｌ ｊａｓｍｏｎａｔｅꎻ Ｂ: Ｌｉｇｈｔꎻ Ｃ: ５０ μｍｏｌ / Ｌ ｇｉｂｂｅｒｅｌｌｉｎꎻ Ｄ: Ｗｏｕｎｄｉｎｇ.
图 ５ 不同胁迫条件下丹参 ＳｍＭＹＣ２的表达水平变化
Ｆｉｇ ５ Ｃｈａｎｇｅｓ ｉｎ ｇｅｎｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｌｅｖｅｌ ｏｆ ＳｍＭＹＣ２ ｆｒｏｍ Ｓａｌｖｉａ ｍｉｌｔｉｏｒｒｈｉｚａ ｕｎｄｅｒ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ
１５２ 第 ２期 周文平等: 丹参 ｂＨＬＨ转录因子基因 ＳｍＭＹＣ２的克隆和表达分析
３ 讨论
茉莉酸(ＪＡ)在调控植物机械伤害、 昆虫取食
及病原菌的防御反应中占有主导地位[１６ꎬ１７]ꎬ 目前
在拟南芥中对 ＪＡｓ信号转导途径的研究较为清楚ꎬ
并认为 ＣＯＩ１￣ＪＡＺｓ￣ＭＹＣ２ 复合体模型是其信号转
导途径的一个核心调控模型[１８ꎬ１９]ꎮ 许多研究报
道[２０－２２]ꎬ 在植物正常生长状态下 ＪＡＺ(Ｊａｓｍｏｎａｔｅ
ＺＩＭ￣ｄｏｍａｉｎ)蛋白通过结合 ＭＹＣ２ 而抑制其转录
活性ꎬ 导致茉莉酸信号途径处于关闭状态ꎻ 而在昆
虫或病原菌侵害情况下ꎬ 植物会在短时内合成大量
有活性的茉莉酸物质ꎬ 促使 ＣＯＩ１(Ｃｏｒｏｎａｔｉｎｅ Ｉｎ￣
ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ １)和 ＪＡＺ蛋白相互作用并将 ＪＡＺ 蛋白降
解ꎬ 从而释放出 ＭＹＣ２ꎮ ＭＹＣ２可诱导一些相关的
抗性基因表达ꎬ 在 ＪＡｓ 信号转导途径的整个调控
过程中ꎬ 转录因子 ＭＹＣ２扮演着非常重要的角色ꎮ
ＭＹＣ２因含有高度保守的 ｂＨＬＨ结构域而属于
ｂＨＬＨ类转录因子家族ꎮ ＭＹＣ２ 是茉莉酸信号转导
途径中的核心转录因子ꎬ 在植物防御反应、 次生代
谢调控及生长发育过程中均有重要的调控作用[２３]ꎮ
近年来ꎬ 在拟南芥[２４ꎬ２５]、 番茄[２６]、 烟草[２７ꎬ２８]、 长
春花[２９]等多种植物中克隆了 ＭＹＣ２ 基因ꎬ 并对其
与次生代谢产物合成的关系以及激素应答的相关代
谢途径进行了研究ꎮ 例如ꎬ 拟南芥 ＭＹＣ２ 能正调
控许多受 ＪＡ诱导的抗虫基因ꎬ 从而增强植物对虫
害的抵御能力[３０]ꎻ 可结合在病原防御基因 ＰＤＦ１２
的启动子上ꎬ 负调控其表达ꎬ 从而调节植物防御反
应[２２ꎬ３１ꎬ３２]ꎻ 还可以通过正调控 ＭＹＢ７５、 ＥＧＬ３ 等
基因的表达影响黄酮类的生物合成[３２]ꎮ 烟草中尼
古丁的生物合成也需要 ＮｔＭＹＣ２ 的参与[３３]ꎻ 长春
花 ＭＹＣ２干涉株系中ꎬ 长春花碱及水苷草碱的含
量均明显下降[３４]ꎮ 本研究报道的 ＳｍＭＹＣ２为一个
新的 ｂＨＬＨ 类转录因子基因ꎬ 其编码蛋白与长春
花和烟草中 ＭＹＣ２ 具有较高的同源性ꎬ 故推测
ＳｍＭＹＣ２与丹参的次生代谢调控相关ꎮ
Ｂｏｔｅｒ等[２１]利用 Ｎｏｒｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ 方法检测到番
茄 ＪＡＭＹＣ２ 在 ＪＡ 以及机械伤害处理 ３０ ｍｉｎ 后ꎬ
其基因表达量明显升高ꎬ 说明 ＪＡＭＹＣ２ 表达受 ＪＡ
和机械伤害的早期诱导ꎮ 本实验对不同胁迫条件下
丹参 ＳｍＭＹＣ２ 的表达水平变化进行了实时定量
ＰＣＲ检测分析ꎬ 结果表明 ＳｍＭＹＣ２受 ＭｅＪＡ 以及
机械伤害的早期诱导ꎬ 与番茄 ＪＡＭＹＣ２ 的基因表
达模式一致ꎮ ＭｅＪＡ 在植物应激反应和次生代谢
调控中起着重要作用ꎬ 其作为外源诱导子可促进
植物次生代谢物的过量积累ꎮ ＳｍＭＹＣ２ 是否具有
调控丹参脂溶性或水溶性次生代谢成分的含量有
待进一步的实验验证ꎮ 作者所在课题组已构建了
ＳｍＭＹＣ２ 过表达载体和干涉载体ꎬ 以期获得
ＳｍＭＹＣ２过表达或干涉的丹参转基因植株ꎬ 进一
步研究 ＳｍＭＹＣ２在丹参中的生物学功能ꎮ
参考文献:
[ １ ] 陈磊ꎬ 陆茵ꎬ 郑仕中. 丹参药理活性成分的整合效应[Ｊ] . 中
草药ꎬ ２００９ꎬ ４０(３): ４７６－４７９.
Ｃｈｅｎ Ｌꎬ Ｌｕ Ｙꎬ Ｚｈｅｎｇ ＳＺ. Ｉｎｔｅｇｒａｔｉｏｎ ｅｆｆｅｃｔ ｏｎ ｐｈａｒｍａｃｏ￣
ｌｏｇｉｃａｌ ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ ｉｎ Ｓａｌｖｉａ ｍｉｌｔｉｏｒｒｈｉｚａ[Ｊ] . Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｔｒａｄｉ￣
ｔｉｏｎａｌ ａｎｄ Ｈｅｒｂａｌ Ｄｒｕｇｓꎬ ２００９ꎬ ４０(３): ４７６－４７９.
[ ２ ] 葛茜ꎬ 邝静ꎬ 武玉翠ꎬ 张媛ꎬ 肖娅萍ꎬ 王喆之. 丹参肉桂醇脱
氢酶基因(ＳｍＣＡＤ)的克隆及表达分析[Ｊ] . 植物科学学报ꎬ
２０１３ꎬ ３１(３): ２６１－２６８.
Ｇｅ Ｑꎬ Ｋｕａｎｇ Ｊꎬ Ｗｕ ＹＣꎬ Ｚｈａｎｇ Ｙꎬ Ｘｉａｏ ＹＰꎬ Ｗａｎｇ ＺＺ.
Ｃｌｏｎｉｎｇ ａｎｄ ｅｘｐｒｅｅｓｉｏｎ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｃｉｎｎａｍｙｌ ａｌｃｏｈｏｌ ｄｅｈｙ￣
ｄｒｏｇｅｎａｓｅ ( ＳｍＣＡＤ) ｇｅｎｅ ｉｎ Ｓａｌｖｉａ ｍｉｌｔｉｏｒｒｈｉｚａ Ｂｕｎｇｅ
[Ｊ] . Ｐｌａｎｔ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｊｏｕｒｎａｌꎬ ２０１３ꎬ ３１(３): ２６１－２６８.
[ ３ ] 张鑫ꎬ 李昆伟ꎬ 陈康健ꎬ 梁健ꎬ 崔浪军. 镉胁迫对丹参生长及
有效成分积累的影响研究[ Ｊ] . 植物科学学报ꎬ ２０１３ꎬ ３１
(６): ５８３－５８９.
Ｚｈａｎｇ Ｘꎬ Ｌｉ ＫＷꎬ Ｃｈｅｎ ＫＪꎬ Ｌｉａｎｇ Ｊꎬ Ｃｕｉ ＬＪ. Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ
ｃａｄｍｉｕｍ ｓｔｒｅｓｓ ｏｎ ｓｅｅｄｌｉｎｇｓ ｇｒｏｗｔｈ ａｎｄ ａｃｔｉｖｅ ｉｎｇｒｅｄｉｅ￣
ｎｔｓ ｉｎ Ｓａｌｖｉａ ｍｉｌｔｉｏｒｒｈｉｚａ[Ｊ] . Ｐｌａｎｔ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｊｏｕｒｎａｌꎬ ２０１３ꎬ
３１(６): ５８３－５８９.
[ ４ ] 赵娜ꎬ 郭治昕ꎬ 赵雪ꎬ 赵利斌. 丹参的化学成分与药理作用
[Ｊ] . 国外药物: 植物药分册ꎬ ２００７ꎬ ２２(４): １５５－１６０.
Ｚｈａｏ Ｎꎬ Ｇｕｏ ＺＸꎬ Ｚｈａｏ Ｘꎬ Ｚｈａｏ ＬＢ. Ｃｈｅｍｉｃａｌ ｃｏｍｐｏｓｉ￣
ｔｉｏｎ ａｎｄ ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ Ｓａｌｖｉａ ｍｉｌｔｉｏｒｒｈｉｚａ[ Ｊ] .
Ｗｏｒｌｄ Ｐｈｙｔｏｍｅｄｉｃｉｎｅｓꎬ ２００７ꎬ ２２(４) : １５５－１６０.
[ ５ ] Ｚｈｏｕ ＬＭꎬ Ｚｕｏ Ｚꎬ ＭＳＳ Ｃｈｏｗ. Ｄａｎｓｈｅｎ: Ａｎ ｏｖｅｒｖｉｅｗ ｏｆ
ｉｔｓ ｃｈｅｍｉｓｔｒｙꎬ ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙꎬ ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓꎬ ａｎｄ ｃｌｉｎｉ￣
ｃａｌ ｕｓｅ [ Ｊ] . Ｊ Ｃｌｉｎ Ｐｈａｒｍａｃｏｌꎬ ２００５ꎬ ４５ ( １２): １３４５ －
１３５９.
[ ６ ] 王庆浩ꎬ 陈爱华ꎬ 张伯礼. 丹参: 一种中药研究的模式生物
[Ｊ] . 中医药学报ꎬ ２００９ꎬ ３７(４): １－４.
Ｗａｎｇ ＱＨꎬ Ｃｈｅｎ ＡＨꎬ Ｚｈａｎｇ ＢＬ. Ｓａｌｖｉａ ｍｉｌｔｉｏｒｒｈｉｚａ: ａ
ｍｏｄｅｌ ｏｒｇａｎｉｓｍ ｆｏｒ Ｃｈｉｎｅｓｅ ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ ｍｅｄｉｃｉｎｅ ｇｅｎｏｍｉｃ
ｓｔｕｄｉｅｓ[ Ｊ] . Ａｃｔａ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ａｎｄ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙꎬ
２００９ꎬ ３７(４): １－４.
[ ７ ] Ｐｉｒｅｓ Ｎꎬ Ｄｏｌａｎ Ｌ. Ｏｒｉｇｉｎ ａｎｄ ｄｉｖｅｒｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｂａｓｉｃ￣ｈｅｌｉｘ￣
ｌｏｏｐ￣ｈｅｌｉｘ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｉｎ ｐｌａｎｔｓ[Ｊ] . Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ Ｅｖｏｌꎬ ２０１０ꎬ ２７
(４): ８６２－８７４.
[ ８ ] Ａｍｏｕｔｚｉａｓ ＧＤꎬ Ｒｏｂｅｒｔｓｏｎ ＤＬꎬ Ｏｌｉｖｅｒ ＳＧꎬ Ｂｏｒｎｂｅｒｇ￣
２５２ 植 物 科 学 学 报 第 ３４卷
Ｂａｕｅｒ Ｅ. Ｃｏｎｖｅｒｇｅｎｔ ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ ｏｆ ｇｅｎｅ ｎｅｔｗｏｒｋｓ ｂｙ ｓｉｎｇｌｅ￣
ｇｅｎｅ ｄｕｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｉｎ ｈｉｇｈｅｒ ｅｕｋａｒｙｏｔｅｓ [ Ｊ] . ＥＭＢＯ Ｒｅｐꎬ
２００４ꎬ ５(３): ２７４－２７９.
[ ９ ] Ｓｔｅｖｅｎｓ ＪＤꎬ Ｒｏａｌｓｏｎ ＥＨꎬ Ｓｋｉｎｎｅｒ ＭＫ. Ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃ ａｎｄ
ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｔｈｅ ｂａｓｉｃ ｈｅｌｉｘ￣ｌｏｏｐ￣ｈｅｌｉｘ ｔｒａｎｓｃｒｉｐ￣
ｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒ ｇｅｎｅ ｆａｍｉｌｙ: ｇｅｎｏｍｉｃ ａｐｐｒｏａｃｈ ｔｏ ｃｅｌｌｕｌａｒ ｄｉｆ￣
ｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ[Ｊ] . Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎꎬ ２００８ꎬ ７６(９): １００６－１０２２.
[１０] Ｃａｓｔｉｌｌｏｎ Ａꎬ Ｓｈｅｎ Ｈꎬ Ｈｕｑ Ｅ. Ｐｈｙｔｏｃｈｒｏｍｅ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｎｇ ｆａｃ￣
ｔｏｒｓ: Ｃｅｎｔｒａｌ ｐｌａｙｅｒｓ ｉｎ ｐｈｙｔｏｃｈｒｏｍｅ￣ｍｅｄｉａｔｅｄ ｌｉｇｈｔ ｓｉｇｎａ￣
ｌｉｎｇ ｎｅｔｗｏｒｋｓ[Ｊ] . Ｔｒｅｎｄｓ Ｐｌａｎｔ Ｓｃｉꎬ ２００７ꎬ １２(１１): ５１４－
５２１.
[１１] Ｘｉｏｎｇ Ｙꎬ Ｌｉｕ Ｔꎬ Ｔｉａｎ Ｃꎬ Ｓｕｎ Ｓꎬ Ｌｉ Ｊꎬ Ｃｈｅｎ Ｍ. Ｔｒａｎｓｃｒｉｐ￣
ｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒｓ ｉｎ ｒｉｃｅ: ａ ｇｅｎｏｍｅ￣ｗｉｄｅ ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ ａｎａｌｙｓｉｓ
ｂｅｔｗｅｅｎ ｍｏｎｏｃｏｔｓ ａｎｄ ｅｕｄｉｃｏｔｓ [ Ｊ ] . Ｐｌａｎｔ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌꎬ
２００５ꎬ ５９(１): １９１－２０３.
[１２] 汪琬宜ꎬ 蒋喜红ꎬ 张利华ꎬ 陈平ꎬ 申业ꎬ 黄璐琦. 丹参转录因
子 ＳｍｂＨＬＨ１基因的克隆和表达分析[ Ｊ] . 中国中药杂志ꎬ
２０１１ꎬ ３６(２４): ３４１６－３４２０.
Ｗａｎｇ ＷＹꎬ Ｊｉａｎｇ ＸＨꎬ Ｚｈａｎｇ ＬＨꎬ Ｃｈｅｎ Ｐꎬ Ｓｈｅｎ Ｙꎬ
Ｈｕａｎｇ ＬＱ. Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ａｎｄ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃ ｏｆ ＳｍｂＨＬＨ１ ｇｅｎｅ
ｉｎ Ｓａｌｖｉａ ｍｉｌｔｉｏｒｒｈｉｚａ[Ｊ] . Ｃｈｉｎａ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｍａｔｅｒｉａ
Ｍｅｄｉｃａꎬ ２０１１ꎬ ３６(２４): ３４１６－３４２０.
[１３] 周宏骏ꎬ 武玉翠ꎬ 晋鑫鑫ꎬ 饶丽华ꎬ 王喆之. 丹参转录因子
ＳｍｂＨＬＨ９３的克隆及表达模式分析[Ｊ] . 中草药ꎬ ２０１４ꎬ ４５
(２３): ３４４９－３４５５.
Ｚｈｏｕ ＨＪꎬ Ｗｕ ＹＣꎬ Ｊｉｎ ＸＸꎬ Ｒａｏ ＬＨꎬ Ｗａｎｇ ＺＺ. Ｃｌｏｎｉｎｇ ａｎｄ
ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｐａｔｔｅｒｎ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒ ＳｍｂＨＬＨ９３
ｆｒｏｍ Ｓａｌｖｉａ ｍｉｌｔｉｏｒｒｈｉｚａ[Ｊ] . Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ ａｎｄ Ｈｅｒｂａｌ
Ｄｒｕｇｓꎬ ２０１４ꎬ ４５(２３): ３４４９－３４５５.
[１４] Ｚｈａｎｇ Ｘꎬ Ｌｕｏ Ｈꎬ Ｘｕ Ｚꎬ Ｚｈｕ Ｙꎬ Ｊｉ Ａꎬ Ｓｏｎｇ Ｊꎬ Ｃｈｅｎ Ｓ.
Ｇｅｎｏｍｅ￣ｗｉｄｅ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓａｔｉｏｎ ａｎｄ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｂＨＬＨ ｔｒａｎ￣
ｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒｓ ｒｅｌａｔｅｄ ｔｏ ｔａｎｓｈｉｎｏｎｅ ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｉｎ Ｓａｌｖｉａ
ｍｉｌｔｉｏｒｒｈｉｚａ[Ｊ] . Ｓｃｉ Ｒｅｐꎬ ２０１５ꎬ ５: １１２４４.
[１５] 张艳霞ꎬ 史玲玲ꎬ 戴向辰ꎬ 刘玉军. 茉莉酸及其衍生物: 一
类重要的植物次生代谢诱导子[Ｊ] . 海南师范大学学报: 自
然科学版ꎬ ２００８ꎬ ２１(３): ３２３－３２７.
Ｚｈａｎｇ ＹＸꎬ Ｓｈｉ ＬＬꎬ Ｄａｉ ＸＣꎬ Ｎｅｏ ＣＭꎬ Ｌｉｕ ＹＪ. Ｊａｓｍｏｎｉｃ
ａｃｉｄ ａｎｄ ｉｔｓ ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ: ａ ｔｙｐｅ ｏｆ ｅｌｉｃｉｔｏｒｓ ｆｏｒ ｐｌａｎｔ ｓｅ￣
ｃｏｎｄａｒｙ ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍｓ[ Ｊ] . Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｈａｉｎａｎ Ｎｏｒｍａｌ Ｕｎｉ￣
ｖｅｒｓｉｔｙ: Ｎａｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅꎬ ２００８ꎬ ２１(３): ３２３－３２７.
[１６] Ｍｏｈａｍｅｄ ＥＯꎬ Ｔａｈａ Ａｂｄ ＥＲꎬ Ｌｕｃｉａｎｏ Ｒꎬ Ａｂｄｅｌｂａｓｓｅｔ
ＥＨꎬ Ｍａｒｉａ Ｃｅｃｉｌｉａ Ｒꎬ Ｆｏｕａｄ Ｄꎬ Ａｄｒｉａｎ Ｖꎬ Ｋａｍａｌ Ｂ. Ｂｏｔｒｙ￣
ｔｉｓ ｃｉｎｅｒｅａ ｍａｎｉｐｕｌａｔｅｓ ｔｈｅ ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｉｃ ｅｆｆｅｃｔｓ ｂｅｔｗｅｅｎ
ｉｍｍｕｎｅ ｐａｔｈｗａｙｓ ｔｏ ｐｒｏｍｏｔｅ ｄｉｓｅａｓｅ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｉｎ ｔｏ￣
ｍａｔｏ[Ｊ] . Ｐｌａｎｔ Ｃｅｌｌꎬ ２０１１ꎬ ２３(６): ２４０５－２４２１.
[１７] Ｈｏｗｅ ＧＡꎬ Ｊａｎｄｅｒ Ｇ. Ｐｌａｎｔ ｉｍｍｕｎｉｔｙ ｔｏ ｉｎｓｅｃｔ ｈｅｒｂｉｖｏｒｅｓ
[Ｊ] . Ａｎｎｕ Ｒｅｖ Ｐｌａｎｔ Ｂｉｏｌꎬ ２００８ꎬ ５９(１): ４１－６６.
[１８] Ｃｈｉｃｏ ＪＭꎬ Ｃｈｉｎｉ Ａꎬ Ｆｏｎｓｅｃａ Ｓꎬ Ｓｏｌａｎｏ Ｒ. ＪＡＺ ｒｅｐｒｅｓｓｏｒｓ
ｓｅｔ ｔｈｅ ｒｈｙｔｈｍ ｉｎ ｊａｓｍｏｎａｔｅ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ[Ｊ] . Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｐｌａｎｔ
Ｂｉｏｌꎬ ２００８ꎬ １１(５): ４８６－４９４.
[１９] Ｃｈｉｎｉ Ａꎬ Ｂｏｔｅｒ Ｍꎬ Ｓｏｌａｎｏ Ｒ. Ｐｌａｎｔ ｏｘｙｌｉｐｉｎｓ: ＣＯＩ１ / ＪＡＺｓ /
ＭＹＣ２ ａｓ ｔｈｅ ｃｏｒｅ ｊａｓｍｏｎｉｃ ａｃｉｄ￣ｓｉｇｎａｌｌｉｎｇ ｍｏｄｕｌｅ [ Ｊ] .
Ｆｅｂｓ Ｊꎬ ２００９ꎬ ２７６(１７): ４６８２－４６９２.
[２０] Ｍｅｍｅｌｉｎｋ Ｊ. Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｇｅｎｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｂｙ ｊａｓｍｏｎａｔｅ
ｈｏｒｍｏｎｅｓ[ Ｊ] . Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙꎬ ２００９ꎬ ７０ ( １３): １５６０ －
１５７０.
[２１] Ｂｏｔｅｒ Ｍꎬ Ｒｕíｚ￣Ｒｉｖｅｒｏ Ｏꎬ Ａｂｄｅｅｎ Ａꎬ Ｐｒａｔ Ｓ. Ｃｏｎｓｅｒｖｅｄ
ＭＹＣ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒｓ ｐｌａｙ ａ ｋｅｙ ｒｏｌｅ ｉｎ ｊａｓｍｏｎａｔｅ ｓｉｇ￣
ｎａｌｉｎｇ ｂｏｔｈ ｉｎ ｔｏｍａｔｏ ａｎｄ Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ [ Ｊ] . Ｇｅｎｅ Ｄｅｖꎬ
２００４ꎬ １８(１３): １５７７－１５９１.
[２２] Ｌｏｒｅｎｚｏ Ｏꎬ Ｃｈｉｃｏ ＪＭꎬ Ｓáｎｃｈｅｚ￣Ｓｅｒｒａｎｏ ＪＪꎬ Ｓｏｌａｎｏ Ｒ.
ＪＡＳＭＯＮＡＴＥ￣ＩＮＳＥＮＳＩＴＩＶＥ１ ｅｎｃｏｄｅｓ ａ ＭＹＣ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ
ｆａｃｔｏｒ ｅｓｓｅｎｔｉａｌ ｔｏ ｄｉｓｃｒｉｍｉｎａｔｅ ｂｅｔｗｅｅｎ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｊａｓ￣
ｍｏｎａｔｅ￣ｒｅｇｕｌａｔｅｄ ｄｅｆｅｎｓｅ ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ ｉｎ Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ [ Ｊ] .
Ｐｌａｎｔ Ｃｅｌｌꎬ ２００４ꎬ １６(７): １９３８－１９５０.
[２３] 沈乾ꎬ 陆续ꎬ 张凌ꎬ 高尔娣ꎬ 唐克轩. 植物中 ＭＹＣ２ 转录因
子功能研究进展[ Ｊ] . 上海交通大学学报: 农业科学版ꎬ
２０１２ꎬ ３０(６): ５１－５７.
Ｓｈｅｎ Ｑꎬ Ｌｕ Ｘꎬ Ｚｈａｎｇ Ｌꎬ Ｇａｏ ＥＤꎬ Ｔａｎｇ ＫＸ. Ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ
ｔｈｅ ｓｔｕｄｉｅｓ ｏｆ ＭＹＣ２ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒ ｉｎ ｐｌａｎｔｓ[Ｊ] . Ｊｏｕｒ￣
ｎａｌ ｏｆ Ｓｈａｎｇｈａｉ Ｊｉａｏｔｏｎｇ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ: Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅꎬ
２０１２ꎬ ３０(６): ５１－５７.
[２４] Ｇｕｏ Ｊꎬ Ｐａｎｇ ＱＹꎬ Ｗａｎｇ ＬＨꎬ Ｙｕ Ｐꎬ Ｌｉ Ｎꎬ Ｙａｎ ＸＦ. Ｐｒｏ￣
ｔｅｏｍｉｃ ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ＭＹＣ２￣ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｊａｓｍｏｎａｔｅ￣ｒｅｇｕ￣
ｌａｔｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｉｎ Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ ｔｈａｌｉａｎａ[ Ｊ] . Ｐｒｏｔｅｏｍｅ Ｓｃｉꎬ
２０１２ꎬ １０(１): １－１３.
[２５] Ｓｏｎｇ ＳＳꎬ Ｈｕａｎｇ Ｈꎬ Ｇａｏ Ｈꎬ Ｗａｎｇ ＪＪꎬ Ｗｕ ＤＷꎬ Ｌｉｕ ＸＬꎬ
Ｙａｎｇ ＳＨꎬ Ｚｈａｉ ＱＺꎬ Ｌｉ ＣＹꎬ Ｑｉ ＴＣꎬ Ｘｉｅ ＤＸ. Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ ｂｅ￣
ｔｗｅｅｎ ＭＹＣ２ ａｎｄ ＥＴＨＹＬＥＮＥ ＩＮＳＥＮＳＩＴＩＶＥ３ ｍｏｄｕｌａｔｅｓ ａｎ￣
ｔａｇｏｎｉｓｍ ｂｅｔｗｅｅｎ ｊａｓｍｏｎａｔｅ ａｎｄ ｅｔｈｙｌｅｎｅ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｉｎ
Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ[Ｊ] . Ｐｌａｎｔ Ｃｅｌｌꎬ ２０１４ꎬ ２６(１): ２６３－２７９.
[２６] Ｇｕｐｔａ Ｎꎬ Ｐｒａｓａｄ ＶＢＲꎬ Ｃｈａｔｔｏｐａｄｈｙａｙ Ｓ. ＬｅＭＹＣ２ ａｃｔｓ
ａｓ ａ ｎｅｇａｔｉｖｅ ｒｅｇｕｌａｔｏｒ ｏｆ ｂｌｕｅ ｌｉｇｈｔ ｍｅｄｉａｔｅｄ ｐｈｏｔｏｍｏｒ￣
ｐｈｏｇｅｎｉｃ ｇｒｏｗｔｈꎬ ａｎｄ ｐｒｏｍｏｔｅｓ ｔｈｅ ｇｒｏｗｔｈ ｏｆ ａｄｕｌｔ ｔｏｍａ￣
ｔｏ ｐｌａｎｔｓ[Ｊ] . ＢＭＣ Ｐｌａｎｔ Ｂｉｏｌꎬ ２０１４ꎬ １４(１): １－１４.
[２７] Ｗｏｌｄｅｍａｒｉａｍ ＭＧꎬ Ｄｉｎｈ ＳＴꎬ Ｏｈ Ｙꎬ Ｇａｑｕｅｒｅｌ Ｅꎬ ＢａｌｄｗｉｎＩ
ＩＴꎬ Ｇａｌｉｓ Ｉ. ＮａＭＹＣ２ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒ ｒｅｇｕｌａｔｅｓ ａ ｓｕｂｓｅｔ
ｏｆ ｐｌａｎｔ ｄｅｆｅｎｓｅ ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ ｉｎ Ｎｉｃｏｔｉａｎａ ａｔｔｅｎｕａｔａ [ Ｊ ] .
ＢＭＣ Ｐｌａｎｔ Ｂｉｏｌꎬ ２０１３ꎬ １３: ７３.
[２８] Ｓｈｏｊｉ Ｔꎬ Ｈａｓｈｉｍｏｔｏ Ｔ. Ｔｏｂａｃｃｏ ＭＹＣ２ ｒｅｇｕｌａｔｅｓ ｊａｓ￣
ｍｏｎａｔｅ￣ｉｎｄｕｃｉｂｌｅ ｎｉｃｏｔｉｎｅ ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｇｅｎｅｓ ｄｉｒｅｃｔｌｙ ａｎｄ
ｂｙ ｗａｙ ｏｆ ｔｈｅ ＮＩＣ２￣ｌｏｃｕｓ ＥＲＦ ｇｅｎｅｓ [ Ｊ ] . Ｐｌａｎｔ Ｃｅｌｌ
Ｐｈｙｓｉｏｌꎬ ２０１１ꎬ ５２(６): １１１７－１１３０.
[２９] Ｈｅｄｈｉｌｉ Ｓꎬ Ｍａｔｔｅｉ ＭＶＤꎬ Ｃｏｕｄｅｒｔ Ｙꎬ Ｂｏｕｒｒｉé Ｉꎬ Ｂｉｇｏｔ Ｙꎬ
Ｇａｎｔｅｔ Ｐ. Ｔｈｒｅｅ ｎｏｎ￣ａｕｔｏｎｏｍｏｕｓ ｓｉｇｎａｌｓ ｃｏｌｌａｂｏｒａｔｅ ｆｏｒ
ｎｕｃｌｅａｒ ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ｏｆ ＣｒＭＹＣ２ꎬ ａ Ｃａｔｈａｒａｎｔｈｕｓ ｒｏｓｅｕｓ
ｂＨＬＨ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒ[ Ｊ] . ＢＭＣ Ｒｅｓ Ｎｏｔｅｓꎬ ２０１０ꎬ ３
(１): ３０１.
[３０] Ｐｏｚｏ ＭＪꎬ Ｓｊｏｅｒｄ ＶＤＥꎬ Ｌｏｏｎ ＬＣＶꎬ Ｐｉｅｔｅｒｓｅ ＣＭＪ. Ｔｒａｎ￣
ｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒ ＭＹＣ２ ｉｓ ｉｎｖｏｌｖｅｄ ｉｎ ｐｒｉｍｉｎｇ ｆｏｒ ｅｎｈａｎｃｅｄ
３５２ 第 ２期 周文平等: 丹参 ｂＨＬＨ转录因子基因 ＳｍＭＹＣ２的克隆和表达分析
ｄｅｆｅｎｓｅ ｄｕｒｉｎｇ ｒｈｉｚｏｂａｃｔｅｒｉａ￣ｉｎｄｕｃｅｄ ｓｙｓｔｅｍｉｃ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ
ｉｎ Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ ｔｈａｌｉａｎａ[ Ｊ] . Ｎｅｗ Ｐｈｙｔｏｌꎬ ２００８ꎬ １８０(２):
５１１－５２３.
[３１] Ｚａｎｄｅｒ Ｍꎬ Ｃａｍｅｒａ ＳＬꎬ Ｌａｍｏｔｔｅ Ｏꎬ Ｍéｔｒａｕｘ ＪＰꎬ Ｇａｔｚ Ｃ.
Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ ｔｈａｌｉａｎａ ｃｌａｓｓ￣Ⅱ ＴＧＡ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒｓ ａｒｅ
ｅｓｓｅｎｔｉａｌ ａｃｔｉｖａｔｏｒｓ ｏｆ ｊａｓｍｏｎｉｃ ａｃｉｄ / ｅｔｈｙｌｅｎｅ￣ｉｎｄｕｃｅｄ ｄｅ￣
ｆｅｎｓｅ ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ[Ｊ] . Ｐｌａｎｔ Ｊꎬ ２００９ꎬ ６１(２): ２００－２１０.
[３２] Ｄｏｍｂｒｅｃｈｔ Ｂꎬ Ｘｕｅ ＧＰꎬ Ｓｐｒａｇｕｅ ＳＪꎬ Ｋｉｒｋｅｇａａｒｄ ＪＡꎬ
Ｒｏｓｓ ＪＪꎬ Ｒｅｉｄ ＪＢꎬ Ｆｉｔｔ ＧＰꎬ Ｓｅｗｅｌａｍ Ｎꎬ Ｓｃｈｅｎｋ ＰＭꎬ
Ｍａｎｎｅｒｓ ＪＭꎬ Ｋａｚａｎａ Ｋ. ＭＹＣ２ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｙ ｍｏｄｕｌａｔｅｓ ｄｉ￣
ｖｅｒｓｅ ｊａｓｍｏｎａｔｅ￣ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ ｉｎ Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ[ Ｊ] .
Ｐｌａｎｔ Ｃｅｌｌꎬ ２００７ꎬ １９(７): ２２２５－２２４５.
[３３] Ｚｈａｎｇ ＨＢꎬ Ｂｏｋｏｗｉｅｃ ＭＴꎬ Ｒｕｓｈｔｏｎ ＰＪꎬ Ｈａｎ ＳＣꎬ Ｔｉｍｋｏ
ＭＰ. Ｔｏｂａｃｃｏ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒｓ ＮｔＭＹＣ２ａ ａｎｄ ＮｔＭＹＣ２ｂ
ｆｏｒｍ ｎｕｃｌｅａｒ ｃｏｍｐｌｅｘｅｓ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ＮｔＪＡＺ１ ｒｅｐｒｅｓｓｏｒ ａｎｄ
ｒｅｇｕｌａｔｅ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｊａｓｍｏｎａｔｅ￣ｉｎｄｕｃｉｂｌｅ ｓｔｅｐｓ ｉｎ ｎｉｃｏｔｉｎｅ ｂｉｏ￣
ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ[Ｊ] . Ｍｏｌ Ｐｌａｎｔꎬ ２０１２ꎬ ５(１): ７３－８４.
[３４] Ｚｈａｎｇ ＨＴꎬ Ｈｅｄｈｉｌｉ Ｓꎬ Ｍｏｎｔｉｅｌ Ｇꎬ Ｚｈａｎｇ ＹＸꎬ Ｃｈａｔｅｌ Ｇꎬ
Ｐｒé Ｍꎬ Ｇａｎｔｅｔ Ｐꎬ Ｍｅｍｅｌｉｎｋ Ｊ. Ｔｈｅ ｂａｓｉｃ ｈｅｌｉｘ￣ｌｏｏｐ￣ｈｅｌｉｘ
ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒ ＣｒＭＹＣ２ ｃｏｎｔｒｏｌｓ ｔｈｅ ｊａｓｍｏｎａｔｅ￣ｒｅ￣
ｓｐｏｎｓｉｖｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ＯＲＣＡ ｇｅｎｅｓ ｔｈａｔ ｒｅｇｕｌａｔｅ ａｌ￣
ｋａｌｏｉｄ ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｉｎ Ｃａｔｈａｒａｎｔｈｕｓ ｒｏｓｅｕｓ [ Ｊ] . Ｐｌａｎｔ Ｊꎬ
２０１１ꎬ ６７(１): ６１－７１.
(责任编辑: 刘艳玲)
４５２ 植 物 科 学 学 报 第 ３４卷