全 文 ：作物学报 ACTA AGRONOMICA SINICA 2009, 35(10): 1812−1821 http://www.chinacrops.org/zwxb/
ISSN 0496-3490; CODEN TSHPA9 E-mail: xbzw@chinajournal.net.cn

本研究由国家高技术研究发展计划(863 计划)项目(2006AA100105)，国家重点基础研究发展计划(973 计划)项目(2006CB101708)，教育部高等
学校学科创新引智计划(111计划)项目(B08025)资助。
*
通讯作者(Corresponding author): 郭旺珍, E-mail: moelab@njau.edu.cn
Received(收稿日期): 2009-05-06; Accepted(接受日期): 2009-07-19.
DOI: 10.3724/SP.J.1006.2009.01812
陆地棉产量相关性状的 QTL定位
秦永生 刘任重 梅鸿献 张天真 郭旺珍*
南京农业大学 / 作物遗传与种质创新国家重点实验室, 江苏南京 210095
摘 要: 中棉所 28和湘杂棉 2号分别是以中棉所 12×4133和中棉所 12×8891配制而成的两个陆地棉强优势杂交种。
以其 F2为作图群体, 筛选 6 000多对 SSR引物, 利用两群体间 27个共有多态位点, 通过 JoinMap 3.0软件整合了一张包
含 245个多态位点、全长 1 847.81 cM的遗传图谱。利用 Win QTLCart 2.5复合区间作图法分别对两群体 8个产量相
关性状在 F2和 F2:3中进行 QTL定位, 在中棉所 28群体多环境平均值的联合分析中检测到 16个 QTL, 三环境分离分
析中检测到 43个 QTL; 在湘杂棉 2号群体分别检测到 20个和 66个 QTL。在 A3、D8、D9等染色体上有 QTL成簇
分布现象, 同时在两个群体中发现一些不受环境影响且稳定遗传的 QTL。对考察的 8个性状在两个群体中发现 12对
共有 QTL, 控制果枝数、衣分和籽指的 QTL增效基因位点均来源于共同亲本中棉所 12。综合分析推测中棉所 12的
育种价值主要是通过提高后代的结铃性来实现的。研究结果为棉花产量性状的分子设计育种提供了有用的信息。
关键词: 棉花; 产量性状; QTL定位
QTL Mapping for Yield Traits in Upland Cotton (Gossypium hirsutum L.)
QIN Yong-Sheng, LIU Ren-Zhong, MEI Hong-Xian, ZHANG Tian-Zhen, and GUO Wang-Zhen*
National Key Laboratory of Crop Genetics and Germplasm Enhancement / Nanjing Agricultural University, Nanjing 210095, China
Abstract: As a major source of fiber and the world’s second-most important oil-seed crop after soybean, cotton plays an important
role in the global economy. With the development of textile technology and social demand, it is urgent to breed and plant cotton
varieties with high yield and super fiber quality. If the marker tightly linked with major gene controlling desired traits was identi-
fied, the efficiency of selection for agronomic traits might improve greatly. To date, high-identity genetic linkage map derived
from upland cotton cultivars was lack because of their narrow genetic basis. Increasing the map density and tagging QTLs related
with agronomic traits in Upland cotton will accelerate the process of marker assisted selection (MAS) breeding. CRI28 and XZM
2 are two cotton hybrids with high heterosis, which were bred by crossing CRI12, 4133, and 8891, respectively, with CRI12 as
mutual parent. In this paper, two F2 mapping populations were respectively assembled by using the parents of CRI28 hybrid
(CRI12 and 4133, their corresponding population named as Pop1) and the parents of XZM 2 hybrid (CRI12 and 8891, their cor-
responding population named as Pop2), further, a joinmap linkage map which contained 245 loci and covered 1 847.81 cM was
integrated with 27 mutual polymorphic loci in the two mapping populations by JOINMAP 3.0 software, after screening about
6 000 SSR primers. By the composite interval mapping method (CIM), the QTLs for eight yield-related traits in F2 and F3 popula-
tions were mapped. Of them, 43 QTLs were identified in the three environments by separating analysis and 16 QTLs by the joint
analysis in Pop1; similarly, 66 and 20 QTLs in Pop2 respectively. Some QTLs on chromosome A3, D8, and D9, and some stable
QTLs not influenced by environment were also detected. Twelve QTLs for eight traits could be found simultaneously in the two
populations, and additive QTLs for fruit branches per plant, lint percentage and seed index all were offered by CRI12, suggesting
that the value of CRI12 in breeding is mostly contributed by increasing the offspring’s bolls. These results will provide very im-
portant information in Upland cotton breeding for yield by MAS.
Keywords: Upland cotton; Yield traits; QTL mapping
棉花是世界上重要的经济作物之一, 有 4 个栽
培种[1]。其中陆地棉(AD)1的产量高, 是世界上最主
要的棉花栽培种, 占世界棉花产量的 95% (National
Cotton Council, USA, http://www.cotton.org/, 2006)。
棉花产量和品质性状属于数量性状, 其表现型是基
因型与环境共同作用的结果; 产量性状、品质性状
第 10期 秦永生等: 陆地棉产量相关性状的 QTL定位 1813


之间存在复杂相关关系, 给棉花产量品质的同步改
良带来了难度, 致使常规育种依据表型选择的效率
受到限制[2]。
近年来, 生物技术的发展为作物性状改良提供
了新的途径, 通过转基因或分子标记辅助选择技术,
可以从分子水平上操作目标基因, 实现对目标性状
的改良[3]。目前, 在棉花中利用分子标记技术已经构
建了多张遗传图谱[4-8], 但是由于陆地棉的遗传基础
狭窄, 品种间的遗传多态性比较低, 构建的陆地棉
种内遗传图谱所含的标记数较少, 覆盖率低, 不能
满足实际育种的需要。为了提高图谱覆盖率, Ulloa
等 [9]将四张陆地棉种内遗传图谱进行整合, 构建了
遗传距离为 1 502.6 cM的整合遗传图谱, 不同实验
室也进行了不同作图群体遗传图谱整合的尝试[10-11]。
目前, 研究人员已检测出许多育种目标性状的
QTL[12-13], 棉花产量和品质的 QTL 定位也有很多报
道 [14-17], 这些研究为棉花育种提供了有用的信息 ,
特别是将不同来源多群体结果整合为目标QTL的定
位和育种利用提供了重要参考。本研究用生产上大
面积推广的两个优异杂交棉组合, 分别构建了 F2作
图群体。利用 JoinMap 3.0[18]整合了一张具有较高覆
盖率的陆地棉品种间的 SSR 标记遗传图谱, 并进行
了产量及相关性状的 QTL定位研究, 为陆地棉产量
性状的分子设计育种研究提供了参考依据。
1 材料与方法
1.1 群体构建与田间种植
本研究选用大面积推广的杂交棉组合中棉所 28
(中棉所12×4133, Pop1)[19]和湘杂棉 2 号[20] (中棉所
12×8891, Pop2)及其 F2、F2:3、三亲本为研究对象。
2006 年夏于南京农业大学江浦实验站(江浦)以中棉
所 12 (CRI12)为母本, 分别与 8891、4133杂交。同
年冬天在海南岛种植 F1, 自交得到 F2种子。2007年
在江浦种植三亲本及 F2单株, 从 Pop1随机选择 234
个、Pop2 选择 252 个 F2单株自交产生 F2:3种子, 并
杂交配制 F1。2008年分别在江浦和山东棉花中心临
清实验站(临清)种植 F1、F2:3和三亲本。
在江浦实验农场采用育苗移栽, 苗龄 30 d移至
大田, 单行区, 行长 5 m, 行距 0.8 m, 每行 12株, 正
常大田管理, 每 20行设一对照。在临清实验站采用
覆膜直播模式, 每穴 2~3粒种子, 其他同上, 大田正
常管理。
1.2 性状调查
2007年于江浦调查 F2群体和三亲本各产量性状,
2008 年分别于江浦和临清调查 F2:3 及亲本的株高
(plant height, PH)、果枝数(fruit branches per plant,
FB)、单株籽棉产量(seed-cotton yield per plant, SY)、
单株皮棉产量(lint yield per plant, LY)、单株铃数
(bolls number per plant, BN)、铃重(boll weight, BS)、
衣分(lint percentage, LP)和籽指(seed index, SI)。
1.3 DNA分子标记检测
提取 DNA采用改进的 CTAB法[21]。筛选 6 000
多对 SSR 引物。引物信息可从 http://www.genome.
clemson.edu/projects/cotton网站获得。标记的命名包
含表示其来源的字母, 随后是引物的号码, 按分子
量大小依次用 a、b、c 表示同一引物产生的不同扩
增位点。SSR的分析流程见张军等[22]。Taq酶、dNTPs
和 PCR用的其他试剂购自北京天为时代公司。
1.4 数据分析
应用 SPSS16.0 软件对性状调查结果进行统计
分析。使用 JoinMap 3.0构建遗传连锁图, 作图函数
为 Kosambi函数[23], 最大遗传距离为 50 cM, LOD≥
3.0。对照本实验室的遗传框架图将连锁群与相应的
染色体对应[8], 将无法定位的连锁群定义为 LGXX,
其中 LG 代表“连锁群”, XX 表示序号。应用 Win
QTLCart 2.5 的复合区间作图法进行单位点 QTL 定
位[24]。LOD 值 3.0 表示显著性 QTL, 将第一类错误
概率(假阳性)限制在 5%[25]。LOD 值 2.0~3.0 表示可
能性 QTL[26]。计算每个 QTL 对相应性状的贡献率
(R2)、加性效应(A)和显性效应(D)。其中, QTL遗传
作用方式用 D/A 绝对值来判断其作用效应, 小于
0.20时该 QTL作用为加性效应, 0.21~0.80为部分显
性效应, 0.81~1.20 为显性效应, 大于 1.20 为超显性
效应[27]。
分别采用单环境资料(分离分析)和多环境平均
值资料(联合分析)进行 QTL定位。QTL的命名采用
水稻上常用的方法, 以字母“q”开头表示 QTL, 后接
性状名称的缩写, 再接染色体或连锁群的编号, 最
后是该染色体上控制此性状的 QTL的数目[28]。参考
Guo 等[8]的遗传图谱标记间的相对位置和 QTL的峰
值区间, 分析鉴定两群体间共有的 QTL。
2 结果与分析
2.1 群体分子标记基因型分析和遗传图谱构建
在 Pop1 中检测到 148 对 SSR 引物在双亲间表
1814 作 物 学 报 第 35卷

现多态, 共得到 161个多态位点。119个位点分布于
29 个连锁群, 覆盖 910.71 cM, 25 个连锁群对应 18
条染色体 [29], 4 个连锁群未能找到对应染色体。在
Pop2中检测到 175对 SSR引物在双亲间具有多态性,
得到 184个多态位点。158个位点分布于 30个连锁
群, 全长 1 367.45 cM, 28个连锁群对应 21条染色体,
其余 2个连锁群未能找到对应染色体。
将两群体共有的 27 个位点作为桥梁标记, 用
JoinMap 3.0整合两张遗传图谱, 得到包含 245个多
态位点、全长 1 847.81 cM的整合图谱(图 1), 约覆
盖棉花全基因组的 52.19%[29], 标记间平均距离为
7.54 cM。图谱分为 44个连锁群, 对应 22条染色体,
2个连锁群没有找到相应染色体, 暂命名为 LG01和
LG02。
2.2 性状表现及遗传分析
2.2.1 产量及相关性状的表现 不同环境下, 各
产量相关性状平均值和方差有较大变化。籽棉产量
和单株铃数变异系数最大, 而各产量构成因素的变
异系数为单株铃数>铃重>衣分。亲本各性状 t 测验
表明, 4133与 CRI12在多环境下, 除株高和籽指外,
其他性状差异不明显。8891 在多环境下, 铃重、衣
分、株高均显著高于 CRI12; 籽棉产量也表现出一定
的正向差异; 籽指表现出负向差异, 在两环境下差
异显著。
除在 Pop1 中籽指在两环境下表现出超低亲分
离外, 其余各性状在 F2和 F2:3群体中均表现出双向
超亲分离, 基本符合正态分布。表明产量及产量构
成因素性状为多基因控制的数量性状。与 F2 比较,
F2:3 虽然也呈现出双向超亲分离, 但变异系数变小,
性状表型趋于中间类型, 这与 F2:3 基因型趋向纯合
一致。同时也表明 F2群体的遗传组成较为丰富, 为
进一步深入研究提供了比较完整的遗传信息。
2.2.2 产量及其构成因素性状相关分析 单株籽
棉产量与株高、果枝数、单株铃数和铃重呈极显著
正相关(表 1), 尤与铃数的相关系数最大(>0.8)。各产
量构成因素之间：铃数与株高和果枝数极显著正相
关, 铃重与株高极显著正相关; 衣分与籽指表现出
显著的负相关。各产量构成因素与籽棉产量的相关
系数依次为单株铃数>果枝数>株高>铃重>衣分。表
明高产陆地棉的选育重点应该放在生长旺盛、结铃
性强、株型高大的品系上。
2.2.3 产量及其构成因素的回归、通径分析 显
著性测验揭示各环境下的回归模型均达到极显著水
平(表 2)。Pop1三环境平均单株铃数每增加 1个, 单
株籽棉产量增加 4.45 g; 铃重每增加 1 g, 籽棉产量
增加 8.33 g。Pop2 平均单株铃数每增加一个, 单株
籽棉产量增加 4.88 g; 铃重每增加 1 g, 籽棉产量增
加 12.58 g。偏回归系数表示各构成因素对产量的效
应, 因其单位和自变数变异度不同, 不能相互比较。
通径系数是对偏回归系数的标准化(表 3)。对
Pop1 三环境平均值分析, 单株铃数每增加 1 个标准
差单位, 单株籽棉产量增加 0.848个标准差单位; 铃
重每增加 1个标准差单位, 籽棉产量增加 0.276个标
准差单位。在 Pop2中单株铃数每增加 1个标准差单
位, 籽棉产量增加 0.793个标准差单位; 铃重每增加
1 个标准差单位, 籽棉产量增加 0.337 个标准差单
位。以上结果表明, 不同群体、不同世代、不同环
境下通径系数差异较小, 趋势相同, 即增加相同单
位的标准差量, 铃数的增产作用远远大于铃重。
2.3 产量相关性状 QTL定位及分析
以多环境平均值的联合分析, 在 Pop1检测到 16
个 QTL。在三环境分离分析中检测到 43个 QTL, 其
中有 11 个在联合分析中被检测到, 5 个同时在两环
境下被检测到(表 4)。在 Pop2中检测到 20个 QTL。
在分离分析中检测到 66个 QTL, 其中有 9个在联合
分析中被检测到, 3个在两环境下被检测到(表 5)。
2.3.1 株高 在 Pop1检测到 3个 QTL, Pop2检测
到 11个 QTL, 可解释 3.58%~8.45%的表型方差。其
中 qPH-D9-2能在 Pop2两环境和联合分析中同时被
检测到, 是一稳定遗传的 QTL, 其增效基因来自于
8891。qPH-A5-1能在两群体同一环境下相同位点被
检测到 , 其加性效应方向相同 , 均来自父本 , 因此
在 A5该区域存在控制株高的一个 QTL。
2.3.2 果枝数 在 Pop1 检测到 7 个 QTL, Pop2
检测到 9 个 QTL, 可解释 3.45%~17.47%的表型变
异。在 D2 染色体 BNL2495~NAU3291 区间检测到
一个由中棉所 12起增效作用的两群体共有QTL; 在
D8 上 NAU3455 附近也检出一个共有 QTL, 但加性
效应方向不同, 因此认为在该区域也存在一个与果
枝数有关的 QTL位点。
2.3.3 铃数 在 Pop1 和 Pop2 分别检测到 7 个
QTL, 可解释 3.44%~22.74%的表型变异。A3 上
NAU4983附近和 D8上 NAU3499a附近, 在 Pop1和
Pop2 中都同时检测到 QTL, 但加性效应相反, 增效
基因分别来自中棉所 12和 8891; 其中 qBN-D8-1分
别能在两群体多环境下被检测到, 是一个较为稳定
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图 1 共有 QTL定位结果
Fig. 1 Mutual QTLs mapping result in the joinmap
空心图标表示 Pop1中定位结果，实心表示 Pop2中定位结果。
The blank and black marks mean QTLs detected in Pop1 and Pop2, respectively.
PH: plant height; FB: fruit branches per plant; BP: bolls per plant; SY: seed-yield; BW: boll weight; LP: lint percentage;
SI: seed index; LY: link yield.
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表 1 产量及产量构成因素相关分析(三环境平均)
Table 1 Correlation analyses between yield and yield-component traits measured on means of three environments
性状
Trait
株高
Plant height
果枝数
Fruit branches
per plant
铃数
Bolls per plant
籽棉重
Seed-yield
铃重
Boll weight
衣分
Lint per-
centage
籽指
Seed index
株高 Plant height 1 –0.031 0.396** 0.426** 0.274** 0.199** 0.086
果枝数 Fruit branches per plant 0.128* 1 0.320** 0.238** –0.127 –0.071 0.096
铃数 Bolls per plant 0.315** 0.335** 1 0.812** 0.100 0.065 0.032
单株籽棉重 Seed-yield 0.338** 0.357** 0.827** 1 0.416** 0.229** 0.139*
铃重 Boll size 0.227** 0.032 –0.075 0.212** 1 0.351** 0.139*
衣分 Lint percentage 0.048 0.106 –0.008 0.018 –0.027 1 –0.171*
籽指 Seed index 0.076 0.071 –0.038 0.057 0.301** –0.401** 1
下三角和上三角分别为 Pop1和 Pop2的各性状相关系数。*和**分别表示在 0.05和 0.01水平的相关显著性。
The correlation coefficients under and above diagonal are for Pop1 and Pop2, respectively. * and ** mean significantly different at the
0.05 and 0.01 probability levels, respectively.
表 2 籽棉产量依铃数和铃重的回归分析
Table 2 Regression analyses of yield-component traits to seed-yield
X1 X2 环境
Environment
回归方程
Regression equations Range Range
F值
F-value
Pop1
2008江浦 2008 Jiangpu Y = –15.40+3.00 X1+4.56 X2 3.00–30.00 3.35–6.72 114.57**
2008临清 2008 Linqing Y = –31.40+4.18 X1+11.47 X2 4.00–18.70 4.19–6.74 190.63**
2007江浦 2007 Jiangpu Y = –56.53+4.75 X1+11.94 X2 7.60–22.00 3.63–7.44 3049.08**
3年平均 Average Y = –34.80+4.45 X1+8.33 X2 4.90–23.60 3.72–6.97 364.35**
Pop2
2008江浦 2008 Jiangpu Y = –6.31+3.00 X1+4.63 X2 5.00–31.00 3.50–8.10 110.85**
2008临清 2008 Linqing Y = –19.65+4.67 X1+8.95 X2 6.40–31.00 4.94–7.90 198.27**
2007江浦 2007 Jiangpu Y = –74.26+5.70 X1+13.05 X2 6.60–23.00 4.27–8.29 4269.56**
3年平均 Average Y = –61.88+4.88 X1+12.58 X2 6.00–24.30 4.24–8.10 495.80**
Y：单株籽棉产量; X1：铃数; X2：铃重。**表示在 0.01水平的差异显著性。
Y: seed-cotton yield; X1: bolls per plant; X2: boll weight. ** means significantly different at the 0.01 probability level.

表 3 铃数和铃重对籽棉产量的通径分析
Table 3 Path analyses of yield-component traits to seed-yield
通径系数 Path coefficients 环境
Environment Px1→y Px2→y
F值
F-value
Pop1
2008江浦 2008 Jiangpu 0.681** 0.214* 114.57**
2008临清 2008 Linqing 0.681** 0.412** 190.63**
2007江浦 2007 Jiangpu 1.003** 0.362** 3049.08**
3年平均 Average 0.848** 0.276** 364.35**
Pop2
2008江浦 2008 Jiangpu 0.669** 0.166 110.85**
2008临清 2008 Linqing 0.760** 0.243* 198.27**
2007江浦 2007 Jiangpu 0.941** 0.318** 4269.56**
3年平均 Average 0.793** 0.377** 495.80**
y：单株籽棉产量(g); x1：铃数; x2：铃重。*和**分别表示在 0.05和 0.01水平的差异显著性。
y: seed-cotton yield; x1: bolls/plant; x2: boll weight. * and ** mean significantly different at the 0.05 and 0.01 probability levels, respectively.



表 4 中棉所 12×4133群体中检测到的显著性 QTL和至少两次检测到的可能性 QTL
Table 4 Significant QTLs and putative QTLs detected at least twice in separate analysis of the CRI12×4133 population
性状
Trait
QTL
环境
Environ
位置
Position (cM)
标记区间
Flanking markers
LOD
加性效应
A
显性效应
D
贡献率
R2
D/A
方向
Direction

qPH-D2-1 cd 3.51 NAU2929–BNL3492 2.26 –2.2319 0.0755 0.0516 0.03 CRI12 株高
Plant height qPH-A5-1† b 5.51 NAU3899–CIR126 2.79 2.2982 0.7876 0.0540 0.34 4133
qFN-D8-1† c 47.56 NAU3769–NAU3455 2.76 –0.2907 0.1694 0.0768 0.58 CRI12 果枝数
Fruit branches per plant qFN-D12-1† c 11.01 BNL2495–NAU3291 2.11 –0.2216 –0.0096 0.0376 0.04 CRI12
qBN-A3-1† c 0.01 NAU3639–NAU6129 3.47 –0.1677 –1.2946 0.0633 7.72 CRI12
qBN-D7-2 a 62.30 JESPR292–NAU5152 3.44 –1.5085 –1.4511 0.0750 0.96 CRI12
铃数
Bolls per plant
qBN-D8-1† abd 22.45 NAU1505–NAU3769 2.46 –0.9741 0.6403 0.0711 0.66 CRI12
qSY-D7-2 a 62.30 JESPR292–NAU5152 3.99 –8.7049 –5.3525 0.0858 0.61 CRI12 单株籽棉重
Seed-cotton yield per plant qSY-D8-1† ad 49.56 NAU3769–NAU3455 2.72 –7.3600 –7.8848 0.1071 1.07 CRI12
qBS-A3-2† a 54.89 NAU3995–NAU3839 2.04 0.1555 0.0244 0.0356 0.16 4133 铃重
Boll weight qBS-A2-1 ad 0.01 BNL193–NAU2265 3.04 0.1992 –0.0739 0.0607 0.37 4133
qLP-A3-1 abd 22.90 NAU6129–NAU998 7.37 1.3118 –0.3714 0.1748 0.28 4133
qLP-A3-2 ac 46.16 CIR332–NAU1167 3.89 1.2787 0.1935 0.1090 0.15 4133
衣分
Lint percentage
qLP-A11-1† cd 14.60 NAU3695–NAU3784 3.68 –0.4398 –0.6659 0.0668 1.51 CRI12
qSI-A3-1† abd 30.90 NAU6129–NAU998 3.10 –0.1914 –0.0254 0.0440 0.13 CRI12
qSI-LG01-1 bd 41.64 NAU1477–NAU3879 2.33 0.3033 –0.2314 0.0544 0.76 4133
qSI-A1-1 ad 0.01 NAU4045–NAU4044 3.10 0.1661 –0.0408 0.0516 0.25 4133
qSI-A11-1 d 0.01 NAU3267–NAU6859 3.49 –0.0119 –0.3167 0.0812 26.65 CRI12
qSI-A11-2 d 13.10 NAU6859–NAU3695 4.15 –0.2779 –0.1202 0.0948 0.43 CRI12
qSI-D8-1† bcd 16.95 NAU1505–NAU3769 5.57 0.2874 0.0003 0.1306 0.00 4133
qSI-D9-1† c 0.01 NAU848–NAU6835 2.04 –0.1902 0.0124 0.0366 0.07 CRI12
籽指
Seed index
qSI-LG03-1 c 24.01 NAU3609–NAU6169 3.06 –0.3464 0.1554 0.1213 0.45 CRI12
qLY-D7-2 b 62.30 JESPR292–NAU5152 3.58 –2.9229 –1.9892 0.0781 0.68 CRI12 单株皮棉重
Lint yield per plant qLY-D8-1† bd 50.56 NAU3769–NAU3455 2.14 –2.4065 –1.7612 0.0707 0.73 CRI12
a、b、c分别表示 2007年江浦，2008年江浦，2008年临清; d表示同时在联合分析中检测到; † 表示在另一群体中也能检测到。
a, b, c: the QTL was detected in Jiangpu in 2007, Jiangpu in 2008 and Linqing in 2008 respectively; d: the QTL was detected in joint analysis simultaneously. †: the QTL could be detected in the
next population.



表 5 中棉所 12×8891群体中检测到的显著性 QTL和至少两次检测到的可能性 QTL
Table 5 Significant QTLs and putative QTLs detected at least twice in separate analysis of the CRI12×8891 population
性状
Trait
QTL 环境
Environ
位置
Position (cM)
标记区间
Flanking markers
LOD 加性效应
A
显性效应
D
贡献率
R2
D/A 方向
Direction

qPH-D6-1 a 0.01 CIR407–NAU1233 3.04 1.2212 –5.0839 0.0603 4.16 CRI12
qPH-D10-1 cd 33.88 TML05–BNL3948 2.08 –2.3388 –0.2760 0.0373 0.12 8891
qPH-A5-1† b 9.65 NAU3828–NAU879 4.71 –3.5088 –0.6238 0.0805 0.18 8891
株高
Plant height
qPH-D9-2 bcd 92.74 CIR194–JESPR114 3.32 –3.0925 –0.8182 0.0679 0.26 8891
qFN-D12-1† d 0.01 BNL2495–NAU3291 2.11 0.0954 –0.5390 0.0345 5.65 CRI12 果枝数
Fruit branches per plant qFN-D8-1† d 100.01 NAU3675–NAU3455 2.12 –0.4051 –0.0930 0.0380 0.23 8891
qBN-A3-1† a 40.83 NAU4983–NAU998b 2.30 –1.5743 –0.4775 0.0463 0.30 8891
qBN-A7-1 ad 0.01 NAU1043–NAU3654 2.77 0.5444 –0.7280 0.0464 1.34 CRI12
铃数
Bolls per plant
qBN-D8-1† ad 0.01 NAU3499a–NAU2169 2.09 –0.7678 –1.5690 0.0344 2.04 8891
qSY-D10-2 c 90.54 NAU4957–NAU4873 3.33 –7.0574 –4.5595 0.0586 0.65 8891 单株籽棉重
Seed-cotton yield per plant qSY-D8-1† d 4.01 NAU3499a–NAU2169 2.97 –4.3776 –5.5751 0.0644 1.27 8891
铃重 Boll weight qBS-A3-1† c 59.14 NAU998b–NAU997 4.36 –0.3380 0.1353 0.0856 0.40 8891
qLP-D6-1 c 19.18 NAU905–NAU2238 8.70 0.7746 –0.1902 0.1337 0.25 CRI12
qLP-D9-1 b 65.91 JESPR110–BNL1414 4.87 –0.8091 –0.1022 0.0893 0.13 8891
qLP-D7-1 c 10.44 NAU6430–NAU6468 3.23 0.3831 0.3813 0.0462 1.00 CRI12
qLP-A11-1† c 44.66 NAU980–NAU3008 2.71 0.4032 –0.2335 0.0437 0.58 CRI12
qLP-D2-1 c 14.12 CIR381a–NAU5467 6.76 0.7513 –0.0136 0.1128 0.02 CRI12
qLP-D2-2 c 26.51 NAU5467–NAU3393 5.58 0.7055 0.2223 0.1121 0.32 CRI12
衣分
Lint percentage
qLP-A1-1 ad 43.28 NAU6251–NAU4073 2.52 0.5966 0.1602 0.0644 0.27 CRI12
qSI-A3-1† c 63.89 NAU998a–CIR332 2.21 –0.1599 0.0530 0.0338 0.33 8891
qSI-A5-1 c 0.01 NAU5351–NAU4031 3.67 0.2304 –0.0291 0.0706 0.13 CRI12
qSI-A5-2 ad 60.47 NAU3273–NAU4057 2.19 0.1376 –0.0300 0.0398 0.22 CRI12
qSI-A5-3 cd 8.34 NAU2217–NAU3828 4.31 –0.2132 0.0994 0.0671 0.47 8891
qSI-A11-1 bcd 23.51 NAU470–NAU5428 3.75 –0.2355 –0.1092 0.0735 0.46 8891
qSI-D8-2 ad 60.27 NAU3499b–NAU5263 2.58 –0.0400 –0.2538 0.0768 6.34 8891
qSI-D9-1† b 64.91 JESPR110–BNL1414 2.37 0.1430 0.1121 0.0371 0.78 CRI12
籽指
Seed index
qSI-D13-1 b 7.01 NAU3948–NAU3398b 4.23 –0.2058 –0.2164 0.1018 1.05 8891
qLY-D6-1 ab 13.8 NAU1233–NAU5373 2.73 –3.8827 –2.0242 0.0463 0.52 8891
qLY-D6-2 a 19.18 NAU905–NAU2238 3.13 3.1255 –0.2584 0.0562 0.08 CRI12
qLY-D10-2 a 90.54 NAU4957–NAU4873 3.32 –3.1941 –1.8139 0.0582 0.57 8891
单株皮棉重
Lint yield per plant
qLY-D8-1† d 3.51 NAU3499a–NAU2169 2.40 –1.6412 –2.3521 0.0519 1.43 8891
a、b和 c分别表示 2007年江浦、2008年江浦和 2008年临清; d表示同时在联合分析中检测到; † 表示在另一群体中也能检测到。
a, b, c: the QTL was detected in Jiangpu in 2007, Jiangpu in 2008, and Linqing in 2008 respectively; d: the QTL was detected in joint analysis simultaneously. †: The QTL could be detected in the
first population.

第 10期 秦永生等: 陆地棉产量相关性状的 QTL定位 1819


的 QTL。
2.3.4 单株籽棉重 在 Pop1 检测到 3 个 QTL,
Pop2检测到 10个 QTL, 可解释 3.81%~10.71%的表
型变异。Pop1 中 qSY-D8-1 能在分离分析和联合分
析中同时被检测到, 可解释 10.71%的表型变异, 增
效位点来源于中棉所 12, 该位点也能在 Pop2大致相
同位置检出, 但由 8891起增效作用。
2.3.5 单株皮棉重 在 Pop1和 Pop2分别检测到
5个和 12个QTL, 可解释 3.87%~7.81%的表型变异。
Pop1中来源于中棉所 12的 qLY-D8-1能在分离分析
和联合分析中同时被检测到, 可解释 7.07%的表型
变异, 并能在 Pop2中被检出。Pop2中不同的环境下,
在 D6、D13相同位置分别检测到两个 QTL, 但不同
环境下得到的遗传模式和加性效应方向都不相同 ,
推测为环境引起的表达差异或与环境的互作结果。
2.3.6 铃重 在 Pop1检测到 6个 QTL, Pop2检测
到 5个 QTL, 可解释 3.56%~8.56%的表型变异。Pop1
中 qBS-A2-1能在分离分析和联合分析中同时被检测
到 , 可解释 6.07%的表型变异 , 增效位点来源于
4133, 为部分显性遗传。Pop1和 Pop2在 A3相邻区间
可同时检测到 qBS-A3-2, 增效位点分别来自两父本。
2.3.7 衣分 在 Pop1检测到 6个 QTL, Pop2检测
到 10 个 QTL, 可解释 3.68%~17.48%的表型变异。
Pop1 中 qLP-A3-1 能在两环境和联合分析中同时被
检测到, LOD 值最高为 7.37, 可解释最大表型变异
的 17.48%, 增效基因来自 4133, 它是一个不受环境
影响的稳定 QTL; 来自 4133 的 qLP-A3-2 也能在两
环境下被检测到, 可解释 10.9%的表型变异。Pop2
中 LOD值大于 4的 QTL有 4个, 3个来源于中棉所
12, 其中 qLP-D6-1 LOD值最大(8.70), 可解释 13.37%
的表型变异, 表现为部分显性。由中棉所 12起增效
作用的 qLP-A11-1为两群体共有 QTL。
2.3.8 籽指 在 Pop1检测到 11个 QTL, Pop2检
测到 13个QTL, 可解释的表型变异为 3.38%~13.06%。
qSI-A3-1、qSI-D8-1 能在 Pop1 两环境和联合分析中
同时被检测到, 也能在 Pop2 中被检测到, 但群体间
加性方向相反。由中棉所 12基因位点起增效作用的
qSI-D9-1 能在两群体中被检出。Pop2 中 qSI-A11-1
在两环境和联合分析中同时被检测到, LOD 值最大
为 5.93, 可解释最大表型变异的 14.76%。
综合两群体 QTL分析结果, 发现 8个产量相关
性状的 12对 QTL中(表 4、表 5和图 1)控制果枝数、
衣分和籽指的 3 个 QTL 由共同母本中棉所 12 起增
效作用; 与株高和铃重有关的 2对 QTL在两群体中
分别来自两个父本。qSI-D8-1 在 Pop1 和 Pop2 中分
别由 4133 和中棉所 12 起增效, 其他 6 对 QTL 在
Pop1中均来源于中棉所 12, 而在 Pop2中来自 8891。
3 讨论
目前比较饱和的棉花遗传图谱多是基于种间群
体的, 这些图谱对育种实践意义不大。但是由于陆
地棉的遗传基础狭窄, 种内遗传图谱所含的标记数
较少, 覆盖率低, 不能满足实际育种的需要。创造不
同作图群体、开发足够多的分子标记以及采用新的
作图手段成为研究者迫切需要解决的问题。秦鸿德[30]
创造了陆地棉四交作图群体, 国内外学者进行了不
同作图群体遗传图谱的整合[10-11], 为构建基因组覆
盖率较高的陆地棉种内遗传图谱奠定了基础。本研
究利用具有共同亲本的两个组合为作图群体 , 以
SSR 标记构建了一张整合连锁图, 并对连锁群进行
了染色体定位, 通过综合分析 QTL 定位结果, 可发
现共有 QTL及分析骨干亲本的贡献。
在 Pop1 中 D8 染色体 NAU3455 附近检测到控
制果枝数、衣分、籽棉产量和皮棉产量等性状的 QTL,
A3 和 D7 上也有 QTL 成簇分布现象; 同样在 Pop2
中 D6、D13、D9以及 A5上均有类似现象。棉花农
艺性状相关的 QTL成簇分布现象在棉花上已有报道,
并认为在棉花基因组中可能存在高度重组的基因富
集区[14,17]。He等[31]在海陆杂交群体中发现, A3、A8
和 D9 是棉花重要经济性状 QTL 的成簇分布区 ;
Ulloa 等[32]发现 92 个控制农艺性状和纤维品质性状
的 QTL 大约 49%都集中分布在第 3(A3)和 26(D12)
号染色体上。尽管不同的研究结果可能与研究者使
用的作图群体(亲本)或图谱密度大小不同相关, 但
许多研究结果得出的产量相关QTL成簇分布可部分
地解释有关性状间的表型相关。多 QTL成簇分布是
基因连锁还是一因多效尚需进一步查明。
从检出的 QTL 数量和解释的表型方差来讲 ,
Pop1中与果枝数、铃数、单株籽棉产量和皮棉产量
相关的QTL主要由中棉所 12基因型起增效作用, 控
制株高、铃重、衣分和籽指的 QTL增效基因主要来
源于 4133; Pop2中控制果枝数、铃数和衣分的 QTL
主要来源于中棉所 12。中棉所 12 虽然产量表现不
理想, 但本研究检出的与铃数有关的 QTL, 其增效
等位基因在两群体中均主要来自中棉所 12, 由前述
遗传分析, 单株产量与铃数的关系最大, 因此推测
1820 作 物 学 报 第 35卷

中棉所12具有较强的遗传率、配合力和遗传稳定性[19],
主要是通过控制铃数的增效基因位点, 提高后代的
结铃性。
研究表明, 不同组合、不同环境下检测出 QTL
的结果具有很大变化。本研究中发现一些前人没有
报道过的 QTL, 但也存在一些 QTL不受环境和研究
材料的影响 , 能够在不同分析条件下被检测到。
Pop1 中 qFN-D8-1 与秦鸿德[30]报道的位置和效应大
致相同; Pop2中 qFN-A5-1、qSY-A5-1、qLY-D9-1、
qLP-A1-1等与汪保华[33]用不同作图群体得到的结果
吻合。本研究中两群体间发现了 12对共有 QTL, 并
且 3对来源相同, 即由共同亲本中棉所 12基因起增
效作用。这些结果为棉花产量性状的分子设计育种
提供了很好的依据, 可在育种实践中应用。
4 结论
构建了一张包含 245个多态位点、全长 1 847.81
cM的陆地棉遗传图谱。对于产量构成因子, 中棉所
28群体中, 通过多环境平均值的联合分析检测到 16
个 QTL, 通过三环境分离分析检测到 43个 QTL, 其
中有 20 个集中分布在 A3、D7 和 D8 染色体上; 利
用湘杂棉 2号群体, 通过联合分析检测到 20个QTL,
分离分析检测到 66个QTL, 其中有 35个聚集在A5、
D6、D9和 D13上。对于考察的 8个性状, 在两个群
体中有 12对共同 QTL, 控制果枝数、衣分和籽指的
QTL均来源于共同亲本中棉所 12。认为中棉所 12具
有较高的一般配合力主要是通过提高后代的结铃性
实现的; 多环境重复检测到的 QTL可以作为标记辅
助选择的依据, 以邻近分子标记进行跟踪利用。
References
[1] Fryxell P A. A revised taxonomic interpretion of Gossypium L.
(Malvaceae). Rheedea, 1992, 2: 108–165
[2] Zhang P-T(张培通), Guo W-Z(郭旺珍), Zhu X-F(朱协飞), Yu
J-Z(俞敬忠), Zhang T-Z(张天真). Molecular tagging of QTLs for
yield and its components of G. hirsutum cv. Simian 3. Acta Agron
Sin (作物学报), 2006, 32(8): 1197–1203 (in Chinese with Eng-
lish abstract)
[3] Du C-F(杜春芳), Li P-B(李朋波), Li R-Z(李润植). Research
advances in molecular basis of the variations and QTL cloning of
quantitative plant traits. Acta Bot Boreali-Occident Sin (西北植
物学报), 2005, 25(12): 2575–2580 (in Chinese with English ab-
stract)
[4] Rong J K, Abbey C, Bowers J E, Brubaker C L, Chang C, Chee P
W, Delmonte T A, Ding X L, Garza J J, Marler B S, Park C H,
Pierce G J, Rainey K M, Rastogi V K, Schulze S R, Trolinder N
L, Wendel J F, Wilkins T A, Williams-Coplin T D, Wing R A,
Wright R J, Zhao X P, Zhu L H, Paterson A H. A 3347-locus ge-
netic recombination map of sequence-tagged sites reveals fea-
tures of genome organization, transmission and evolution of cot-
ton (Gossypium). Genetics, 2004, 166: 389–417
[5] Yu J, Park Y H, Lazo G, Kohel R. Molecular mapping of the cot-
ton genome: QTL analysis of fiber quality properties. In: Pro-
ceedings of Beltwide cotton conferences, San Diego, 5–9 January
1998. p 485
[6] Lacape J M, Nguyen T B, Thibivilliers S, Bojinov B, Courtois B.
A combined RFLP-SSR-AFLP map of tetraploid cotton based on
a Gossypium hirsutum × Gossypium barbadense backcross popu-
lation. Genome, 2003, 46: 612–626
[7] Zhang J, Guo W Z, Zhang T Z. Molecular linkage map of al-
lotetraploid cotton (Gossypium hirsutum L. × Gossypium bar-
badense L.) with a haploid population. Theor Appl Genet, 2002,
105: 1166–1174
[8] Guo W Z, Cai C P, Wang C B, Han Z G, Song X L, Wang K, Niu
X W, Wang C, Lu K, Shi B, Zhang T Z. A microsatellite-based,
gene-rich linkage map reveals genome structure, function, and
evolution in Gossypium. Genetics, 2007, 176: 527–541
[9] Ulloa M, Meredith W R, Shappley Z W, Kahler A L. RFLP ge-
netic linkage maps from four F2:3 populations and a joinmap of
Gossypium hirsutum L. Theor Appl Genet, 2002, 104: 200–208
[10] Sang Z-Q(桑志勤 ). QTL Mapping for Elite Fiber Quality
Properties in Upland Cotton. MS Dissertation of Nanjing Agri-
cultural University, 2008. pp 44–46 (in Chinese with English ab-
stract)
[11] Rong J K, Bowers J E, Schulze S R, Waghmare V N, Rogers C J,
Pierce G J, Zhang H, Estill J C, Paterson A H. Comparative ge-
nomics of Gossypium and Arabidopsis: Unraveling the conse-
quences of both ancient and recent polyploidy. Genome Res,
2005, 15: 1198–1210
[12] Kearsey M J, Farquhar A G L. QTL analysis in plants: Where are
we now? Heredity, 1998, 80: 137–142
[13] Asins M J. Present and future of quantitative trait locus analysis
in plant breeding. Plant Breed, 2002, 121: 281–291
[14] Ulloa M, Cantrell R G S, Oercy R, Lu Z, Zeiger E. QTL analysis
of stomatal conductance and relationship to lint yield in
intraspecific cotton. J Cotton Sci, 2000, 4: 10–18
[15] Yin J-M(殷剑美), Wu Y-T(武耀廷), Zhang J(张军), Zhang
T-Z(张天真), Guo W-Z(郭旺珍), Zhu X-F(朱协飞). Tagging and
mapping of QTLs controlling lint yield and yield components in
upland cotton (Gossypium hirsutum L.) using SSR and RAPD
markers. Chin J Biotechnol (生物工程学报 ), 2002, 18(2):
162–166 (in Chinese with English abstract)
[16] Shen X L, Guo W Z, Zhu X F, Yuan Y L, Yu J Z, Kohel R J,
Zhang T Z. Molecular mapping of QTLs for fiber qualities in
three diverse lines in upland cotton using SSR markers. Mol
Breed, 2005, 15: 169–181
[17] Wang P-Z(王沛政), Qin L(秦利), Su L(苏丽), Hu B-M(胡保民),
第 10期 秦永生等: 陆地棉产量相关性状的 QTL定位 1821


Zhang T-Z(张天真 ). QTL mapping of the partial yield
components of main upland cotton cultivars planted in Xinjiang.
Sci Agric Sin (中国农业科学), 2008, 41(10): 2947–2956 (in
Chinese with English abstract)
[18] Van Ooijen J W, Voorrips R E. JoinMapR Version 3.0: Software
for the calculation of genetic linkage maps. CPRO-DLO,
Wageningen, 2001
[19] Jing S-R(靖深蓉), Xing C-Z(邢朝柱), Yuan Y-L(袁有禄), Liu
S-L(刘少林), Wang H-L(王海林). Breeding and application of
Zhongza 028. China Cotton (中国棉花), 1995, 22(12): 22–23 (in
Chinese)
[20] Li Y-Q(李育强), Zeng Z-Y(曾昭云), Jin L(金林), Yang F-Q(杨
芳荃 ), Wan Y-L(万益林 ). Breeding and application of
Xiangzamian 2. Crop Res (作物研究), 1997, (4): 27–29 (in
Chinese)
[21] Paterson A H, Brubaker C L, Wendel J F. A rapid method for ex-
traction of cotton (Gossypium spp.) genomic DNA suitable for
RFLP or PCR analysis. Plant Mol Biol Rep, 1993, 11: 122–127
[22] Zhang J(张军), Wu Y-T(武耀廷), Guo W-Z(郭旺珍), Zhang
T-Z(张天真). Fast screening of miscrosatellite markers in cotton
with PAGE/silver staining. Acta Gossypii Sin (棉花学报), 2000,
12(5): 267–269 (in Chinese with English abstract)
[23] Kosambi D D. The estimation of map distance from
recombination values. Ann Eugen, 1944, 12: 172–175
[24] Zeng Z B. Precision mapping of quantitative trait loci. Genetics,
1994, 136: 1457–1468
[25] Jiang C X, Wright R J, El-Zik K M, Paterson A H. Polyploid
formation created unique avenues for response to selection in
Gossypium (cotton). Proc Natl Acad Sci USA, 1998, 95: 4419–
4424
[26] Lander E S, Kruglyak L. Genetic dissection of complex traits
guidelines for interpreting and reporting linkage results. Nat
Genet, 1995, 11: 241–247
[27] Stuber C W, Edwards M D, Wendel J F. Molecular marker fa-
cilitated investigations of quantitative trait loci in maize: II.
Factors influencing yield and its component traits. Crop Sci, 1987,
27: 639–648
[28] McCouch S R, Cho Y G, Yano M, Paul E, Blinstrub M,
Morishima H, Kinoshita T. Report on QTL nomenclature. Rice
Genet Newsl, 1997, 14: 11–13
[29] Guo W Z, Cai C P, Wang C B, Zhao L, Wang L, Zhang T Z. A
preliminary analysis of genome structure and composition in
Gossypium hirsutum. BMC Genomics, 2008, 9: 314
[30] Qin H-D(秦鸿德). QTL Mapping of Yield and Fiber Quality
Traits in Gossypium hirsutum L. and Recurrent Selection with
MAS. PhD Dissertation of Nanjing Agricultural University, 2007
(in Chinese with English abstract)
[31] He D H, Lin Z X, Zhang X L, Nie Y C, Guo X P, Zhang Y X, Li
W. QTL mapping for economic traits based on a dense genetic
map of cotton with PCR-based markers using the interspecific
cross of Gossypium hirsutum × Gossypium barbadense.
Euphytica, 2007, 153: 181–197
[32] Ulloa M, Saha S, Jenkins J N, Meredith W R, McCarty J C, Stelly
D M. Chromosomal assignment of AFLP linkage groups harbor-
ing important QTLs on an intraspecific cotton (Gossypium hirsu-
tum L.) joinmap. J Heredity, 2005, 96: 132–144
[33] Wang B-H(汪保华). Genetic Dissection on the Basis of Heterosis
in an Elite Cotton Hybrid Xiangzamian 2. PhD Dissertation of
Nanjing Agricultural University, 2006. pp 40–41 (in Chinese
with English abstract)



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