全 文 ：Vol131 , No15
pp1 634 - 639 　May , 2005作 　物 　学 　报ACTA A GRONOM ICA SIN ICA第 31 卷 第 5 期2005 年 5 月 　634～639 页
N6 培养基添加钙和烯效唑对玉米幼胚培养的作用
付凤玲　李晚忱　荣廷昭 3 Ξ
(四川农业大学玉米研究所 ,四川雅安 625014)
摘 　要 : 通过浓度筛选和比较试验 ,将以 N6 培养基为基础的诱导培养基和继代培养基的钙浓度 ,从 1113 mmolΠL 提高
到 5 mmolΠL ,并分别添加 1100 mgΠL 和 0150 mgΠL 烯效唑 (S23307) ,对玉米幼胚胚性愈伤组织的诱导和继代具有促进作
用 ,而不影响胚性愈伤组织的分化再生。在分化培养基中添加低浓度 (0125 mgΠL) S23307 ,能显著提高分化再生率 ,并有
利于壮苗。但增加钙浓度或添加烯效唑并不能使 R15 等难以诱导愈伤组织的自交系产生胚性愈伤组织。钙浓度提高以
后 ,在培养基中再添加钙调蛋白 (CaM)抑制剂盐酸氯丙嗪 (CPZ) ,可抑制 Ca2 + 的促进作用 ,说明该促进作用与 Ca2 + ΠCaM
系统的信息调节有关。本研究改进的 N6 培养基 ,可提高优良玉米自交系的胚性愈伤组织诱导率和继代生长量 ,为转基
因研究提供遗传基础优良的受体系统。
关键词 : 玉米 ;N6 培养基 ;胚性愈伤组织 ;钙 ;烯效唑
中图分类号 : S513
Effect of Ca2 + and Uniconazole Appended in N6 Medium on Immature Embryos
Culture in Maize
FU Feng2Ling ,L I Wan2Chen ,RON G Ting2Zhao 3
( M aize Research Instit ute , Sichuan A gricult ural U niversity , Ya’an 625014 , Sichuan , China)
Abstract : The establishment of transgenic acceptor system with stable genetic characters , effective transgenic ratio and easy
plant regeneration is one of the key techniques in transgenic operation1 Up to now , the most effective measure to establish
transgenic acceptor system in maize is the inducement and culture of embryonic callus from immature embryos1 Inducement ,
subculture , differentiation and regeneration of embryonic callus in maize are much more difficult than in other graminaceous
crops such as rice , and heavily depend on several model inbred lines of tissue culture such as A188 , B73 and their
derivatives1 The comprehensive agronomic characters of these lines do not meet production requirement and transgenic plants
from these lines can be applied to commercial hybrid combination only through a long time of complex backcross breeding
program1 Elite parent inbred lines of disseminated hybrids , however , are much more difficult to induce embryonic callus and
provide enough acceptor for transgenic operation1
Ca2 + was found to promote callus growth , but this promotion effect was reduced chlorpromazine (CPZ) , that
combined with calcium regulation proteins ( CaM) and blocked information transmission of Ca2 + ΠCaM system1
Uniconazole with low concentration was reported to have significant improvement on callus inducement and plant
regeneration1 Multi2effect trizole was found to have inhibitory effect on callus inducement from immature embryo1
Through concentration screening and comparative experiment , Ca2 + concentration of inducement and subculture media
based on N6 medium was increased from 1113 to 5 mmolΠL1 Uniconazole ( S23307) of 1100 and 0150 mgΠL was
separately added to inducement and subculture media1 The two improvements of medium components showed a promotion
effect on inducement and subculture growth of embryonic callus from immature embryos in maize , without harmful influence
to differentiation and regeneration of embryonic calli1 Addition of S23307 with low concentration ( 0125 mgΠL ) to
differentiation medium was showed to have significant promotion effect on differentiation and growth of regenerated plants1
However , the inducement of embryonic calli from the inbred lines with low callus inducement rate , such as R15 , was notΞ基金项目 : 国家自然科学基金项目 (30070476)资助。
作者简介 : 付凤玲 (1962 - ) ,女 ,陕西蒲城人 ,硕士 ,副研究员 ,主要从事玉米生物技术研究。E2mail :ffl @sicau1edu1cn 3 通讯作者 :荣廷昭。
Received(收稿日期) :2004203204 , Accepted(接受日期) :20042082151

improved by the addition of Ca2 + and S233071 The promotion effect of calcium increased could be inhibited by
chlorpromazine (CPZ) , CaM inhibitor , that was added to the medium with 5 mmolΠL Ca2 + 1 This result indicted that the
promotion effect of calcium increased on inducement and subculture growth of embryonic calli was related with information
regulation of Ca2 + ΠCaM system1 These improvements to N6 medium were suggested to be used to increase inducement rate
and subculture growth of embryonic calli from elite maize inbred lines and provide acceptor system with elite genetic
foundation for transgenic research1
Key words :Maize ;N6 medium ; Embryonic callus ;Ca2 + ;Uniconazole
　　建立遗传性稳定、转化效率高、易于再生的受体
系统 ,是转基因研究的关键技术之一。迄今为止 ,建
立玉米转基因受体系统最为有效的方法 ,是用未成
熟胚诱导培养胚性愈伤组织。与水稻、小麦等禾本
科作物相比 ,玉米胚性愈伤组织的诱导、继代和分化
再生更为困难 ,严重依赖于“A188”、“B73”等少数几
个自交系及其衍生系。然而 ,这些自交系的综合农
艺性状不能满足生产需要 ,由此建立受体系统进而
得到的转基因植株 ,还需经过较长时间的回交转育 ,
才能育成实用品种。而现行推广杂交种的优良亲本
自交系 ,胚性愈伤组织的诱导率又不高 ,难以为转基
因研究提供足够的受体[ 1～5 ] 。
Ca2 + 与钙调蛋白 (CaM) 结合 ,能提高植物对逆
境的抵抗能力。植物细胞 Ca2 + 浓度的微小变化 ,都
将引起一系列生理生化反应[6 ] 。汪良驹等研究认为 ,
一定含量的钙对无花果愈伤组织生长有促进作用[7 ] 。
安调过等 ( 1997) 、冯英等 ( 2001) 、赵成章等
(1990)分别将植物生长延缓剂烯效唑 ( S23307) 和多
效唑 ( PP333)用于水稻、小麦的花药和幼胚培养 ,认
为低浓度 ( ≤1 mgΠL) 烯效唑能明显提高花药愈伤
组织诱导率和分化再生率 ,且能明显控制苗高 ,提高
移栽成活率 ;而多效唑对幼胚愈伤组织的诱导有抑
制作用[ 8～10 ] 。
本研究拟通过筛选试验 ,调整 N6 培养基的
Ca2 + 浓度 ,并添加不同浓度的烯效唑和多效唑 ,探讨
钙、烯效唑和多效唑在玉米未成熟胚培养中 ,对胚性
愈伤组织的诱导、继代、分化和壮苗的效应 ,以期改
进用玉米未成熟胚诱导培养胚性愈伤组织的技术 ,
建立优良玉米自交系的转基因受体系统。
1 　材料和方法
111 　胚性愈伤组织的诱导培养
　　取生产上大面积推广优良玉米杂交种的 8 个亲
本自交系“S37”、“4822”、“182599 (白 )”、182599
(红) 、“478”、“P22”、“R08”、“R09”和“5022”,授粉
13 d 左右 ,长 115～215 mm 的幼胚作外植体 ,接种于
诱导培养基[3 ] ,27 ℃暗培养 ,及时切去幼芽及根状体。
形成愈伤组织后 ,按 Armstrong (1985) 介绍的鉴别标
准[1 ] ,挑选胚性 (Ⅱ型) 愈伤组织 ,转入继代培养基[3 ] ,
14 ℃暗培养。分化和壮苗培养在 27 ℃和 2 000 lx 光
照 (每天 12 h)下进行 ,培养基配方参见文献[3 ]。
112 　Ca2 + 浓度筛选
将上述继代培养基中的 Ca2 + 浓度分别提高到
2、3、4、5、6、7、8、9、10 mmolΠL ,并以 Ca2 + 浓度 1113
mmolΠL (原 N6 培养基钙浓度) 的继代培养基为对
照。每处理转接 21 支试管 ,每管 10 块继代时间相
同、质地相当的愈伤组织。愈伤组织净重为接种后
的试管重量 (包括外质体和培养基)减去接种前试管
和培养基的重量。转接后 27 ℃暗培养 ,20 d 后调查
愈伤组织生长状况 ,以愈伤组织相对生长量 [ (培养
后重 - 培养前重)Π培养前重 ]为指标 ,确定继代培养
基最佳 Ca2 + 浓度。
根据继代培养基最佳 Ca2 + 浓度 ,将诱导培养基
Ca2 + 浓度分别提高到 4、5、6 mmolΠL ,调节 p H 值至
518 ,以 Ca2 + 浓度为 1113 mmolΠL 的诱导培养基为
对照 ,每处理接种 7 支试管 ,每试管 10 个外植体 ,
27 ℃暗培养 ,40 d 后调查愈伤组织 (包括 Ⅰ和 Ⅱ型)
诱导率 (发生愈伤组织的外植体数Π接种外植体总
数) ,确定诱导培养基最佳 Ca2 + 浓度。
113 　用盐酸氯丙嗪抑制 Ca2 + 的促进作用
在上述试验筛选出的最佳 Ca2 + 浓度 (5 mmolΠ
L)和对照 Ca2 + 浓度 (1113 mmolΠL) 继代培养基中 ,
添加 013 μmolΠL 钙调蛋白抑制剂盐酸氯丙嗪
(CPZ) ,20 d 后调查愈伤组织相对生长量与未添加
CPZ对照的差异。
114 　烯效唑和多效唑浓度筛选
在诱导培养基中分别添加 0125、0150、1100、
2100、5100 mgΠL 浓度的烯效唑 ( S23307) 和多效唑
(PP333 ) ,以未添加 S23307 和 PP333 的诱导培养基为
对照。接种外植体后培养 10 d ,测量计算平均胚芽
536　第 5 期 付凤玲等 :N6 培养基添加钙和烯效唑对玉米幼胚培养的作用 　　　

长度。20 d 调查胚性愈伤组织 ( Ⅱ型)诱导率。
115 　烯效唑和多效唑对继代和分化再生的影响
将添加 1100 mgΠL S23307 和 PP333 诱导培养基
上诱导的胚性及非胚性愈伤组织 ,分别转接到添加
0150 mgΠL S23307 和 PP333 的继代培养基上继代培
养 ,以未添加 S23307 和 PP333的继代培养基为对照 ,
每处理接种 7 支试管 ,每试管 10 块愈伤组织 ,观察
其对相对生长量和胚性的影响。
将添加与未添加 S23307 和 PP333培养基上继代
的胚性愈伤组织 ,转接到未添加的分化培养基上培
养 30 d ,每处理接种 21 支试管 ,每试管 3 块愈伤组
织 ,以苗高 1 cm 以上的再生苗为标准调查再生率。
然后转接到生根壮苗培养基 ,20 d 后测量计算平均
苗高。
2 　结果与分析
211 　继代培养基 Ca2 + 浓度的筛选
　　将诱导产生的胚性愈伤组织转接到不同 Ca2 +
浓度的继代培养基上 ,20 d 后调查愈伤组织的相对
生长量 (表 1) 。虽然各自交系胚性愈伤组织继代生
长最快的 Ca2 + 浓度不尽相同 ,但都集中在 5 mmolΠL
左右 ,相对生长量平均比对照增加 018 倍。从表 1
看出 ,除 4822、478、5022 外 ,多数自交系在钙含量为
5 mmolΠL 时 ,愈伤组织相对生长量显著高于其他处
理。因此认为 ,继代培养基的最佳 Ca2 + 浓度为 5
mmolΠL 。在此浓度下继代培养的愈伤组织 ,颗粒疏
散 ,色泽鲜黄 ,更符合 Armstrong (1985) 介绍的胚性
愈伤组织鉴别标准[ 1 ] 。
表 1 不同 Ca2 + 浓度继代培养基上的愈伤组织相对生长量
Table 1 Growth rate at subculture media with different Ca2 + content
自交系
Inbred line
Ca2 + 　浓度 Ca2 + content (mmolΠL)
1113 (CK) 2 3 4 5 6 7 8 9 10
S37 2121 2164 3113 4175 5143 3 5155 3 4182 4117 3188 3180
4822 2101 2134 3132 3145 4181 4123 4120 3149 2157 2141
182599 (白) (182599W) 3162 4114 4158 6164 3 7134 3 3 5198 5151 5108 4133 4176
478 3171 3160 3179 4189 4156 4170 3168 3101 2197 2184
P22 3151 4138 5102 5138 6184 3 5163 5101 4146 4101 3172
R08 2163 3109 3171 4156 3 4170 3 4171 3 3162 3149 3141 2181
R09 2158 3116 3135 4124 5102 3 4169 3 3120 3130 3127 3134
5022 3131 2183 3115 3176 4131 4127 3136 2151 2135 2105
　　注 : 3 表示 F测验在 0105 水平上显著 , 3 3 表示在 0101 水平显著。Notes : 3 and 3 3 mean significant at 0105 and 0101 level respectively based on F test1
212 　诱导培养基 Ca2 + 浓度提高的作用
根据继代培养基 Ca2 + 浓度的筛选结果 ,将优良
玉米自交系“182599 (白)”、“P22”、“R09”的幼胚接
种于 Ca2 + 浓度分别为 4、5、6 mmolΠL 的诱导培养基
上 ,40 d 后调查愈伤组织诱导率。表 2 所列结果表
明 ,在 Ca2 + 浓度为 5 mmolΠL 的诱导培养基上 ,3 个
自交系的愈伤组织诱导率和每个外植体幼胚诱导出
的愈伤组织块数 ,均比 Ca2 + 浓度约为 1113 mmolΠL 的
对照诱导培养基高 ,尤以愈伤组织诱导率的提高更为
明显 ,达显著或极显著水平。试验中发现 ,当钙浓度
表 2 不同 Ca2 + 浓度诱导培养基对自交系 182599、P22 和 R09 的愈伤组织诱导率
Table 2 Callus inducement rate of 182599 , P22 and R09 at inducement media with different Ca2 + content
自交系
Inbred lines
Ca2 + 浓度
Ca2 + content
(mmolΠL) 接种外植体数Explant numberinoculated 产生愈伤组织外植体数Explant number withcallus induced 愈伤组织诱导率Callus inducementrate ( %) 愈伤组织数Π外植体Callus numberper explant
182599 (白)
182599W 1113 (CK) 70 54 7711 3164 70 54 7711 3195 70 59 8413 3 3 411
6 70 57 8114 3 316
P22
1113 (CK) 70 36 5114 211
4 60 31 5117 213
5 70 38 5413 3 213
6 70 35 5010 211
R09
1113 (CK) 60 27 4510 117
4 70 29 4114 213
5 70 33 4711 3 213
6 70 31 4413 117
　　注 : 3 表示 F测验在 0105 水平上显著 , 3 3 表示在 0101 水平显著 1 3 and 3 3 mean significant at 0105 and 0101 level respectively based on F test1
636 　　　　作 　　物 　　学 　　报 第 31 卷 　

提高到 6 mmolΠL 以上时 ,培养基质地变脆弱 ,弹性
降低 ,p H 值变异加大 ,对胚性愈伤组织诱导和继代
不利。而且 ,对于用 Ca2 + 浓度约为 1113 mmolΠL 的
对照诱导培养基不能诱导出愈伤组织的基因型 ,即
使提高钙浓度 ,也不能诱导胚性愈伤组织产生。可
见 ,适当提高 Ca2 + 浓度 ,只是改善了培养条件 ,使之
更适于胚性愈伤组织产生和继代生长 ,从而提高诱
导率和继代生长量。
在 5 mmolΠL Ca2 + 浓度继代培养基上继代的
“182599 (白)”、“P22”和“R09”胚性愈伤组织 ,转至
分化培养基后 ,分化成苗率分别达 6713 %、5113 %
和 5215 % ,比在 Ca2 + 浓度约为 1113 mmolΠL 的对照 培养基上 (6114 %、4711 %和 4519 %)提高了 610 %、410 %和 615 %。213 　盐酸氯丙嗪对 Ca2 + 促进作用的抑制由表 3 可知 ,在 Ca2 + 浓度为 5 mmolΠL 的继代培养基中添加 CPZ ,愈伤组织相对生长量显著降低 ;而在 Ca2 + 浓度 1113 mmolΠL 的继代培养基中添加CPZ ,愈伤组织相对生长量降低较少 ,3 个自交系的表现趋势一致。观察发现 ,CPZ 不但明显抑制 Ca2 +的促进作用 ,还使胚性愈伤组织色泽暗淡、质地干燥、胚性发育不良。由此说明 ,增加培养基 Ca2 + 浓度对胚性愈伤组织诱导和继代的促进作用 , 与Ca2 + ΠCaM 系统的信息调节有关。
表 3 盐酸氯丙嗪( CPZ)对愈伤组织相对生长量的影响
Table 3 Effect of chlorpromazine ( CPZ) on callus relative growth rate
CPZ浓度
CPZ content
(μmolΠL) Ca2 + 浓度 Ca2 + content (mmolΠL)1113 (CK)182599W P22 R09 5100182599 P22 R09
0 3137 3146 2151 7151 6165 5124
3 3121 3124 2127 3165 2193 2141
214 　烯效唑和多效唑对玉米幼胚培养胚性愈伤组
织诱导的效应
　　在玉米幼胚培养中 ,接种 5～7 d 后及时去掉幼
芽 ,有利于盾片脱分化形成愈伤组织 ,否则幼芽发育
将抑制愈伤组织发生 ,造成外植体褐化死亡。表 4
表明 ,在 Ca2 + 浓度 5 mmolΠL 的诱导培养基中添加
植物生长延缓剂 S23307 或 PP333 ,明显抑制幼芽生
长。随着抑制作用的持续 ,幼芽解体 ,被不断生长的
愈伤组织吸收。因此 ,无需采取去芽措施。
表 4 烯效唑( S2337)和多效唑( PP333)对胚芽生长和愈伤组织诱导的影响
Table 4 Effect of uniconazole ( S23307) and multi2effect triazole ( PP333 ) on embryonic bud growth and callus inducement
处理
Treatment
浓度
Content
(mgΠL) 182599 (白) (182599W)平均胚芽长Average ofembryo budlength
(mm)
未去芽诱导率
Inducement rate
without bud
removing
( %)
去芽诱导率
Inducement rate
with bud
removing
( %)
R09
平均胚芽长
Average of
embryo bud
length
(mm)
未去芽诱导率
Inducement rate
without bud
removing
( %)
去芽诱导率
Inducement rate
with bud
removing
( %)
S23307
PP333
0125 5188 4810 4312 7104 5813 5313
0150 5164 7813 6215 6119 7816 7513
1100 5123 9217 8019 6113 8114 7615
2100 4154 6316 5517 5179 5413 5112
5100 4145 3110 2011 5137 2318 2213
t = 51519 3 3 t = 51496 3 3
0125 6117 8313 7117 3189 4313 4117
0150 7118 7111 7017 5109 5718 4617
1100 7113 8214 8017 7153 4616 4517
2100 8187 7513 7316 7112 3114 3314
5100 10124 6513 6314 9176 1719 1213
t = 11686 t = 11518
CK 17113 2310 8011 18159 1618 5013
　　S23307 对幼芽生长的抑制作用大于 PP333 , S2
3307 的作用随浓度增加而增强 ,PP333的作用随浓度
增加而减弱。添加 S23307 对提高愈伤组织诱导率 的作用 ,高于添加 PP333 ,这种差异对愈伤组织诱导率较低的自交系“R09”更为明显。添加 S23307 的最佳浓度为 1100 mgΠL ,而添加不同浓度 PP333对愈伤
736　第 5 期 付凤玲等 :N6 培养基添加钙和烯效唑对玉米幼胚培养的作用 　　　

组织诱导率的作用趋势不明显。添加生长延缓剂
后 ,不去除幼芽处理的愈伤组织诱导率 ,高于去除幼
芽的处理 ,可能是去除幼芽时对外植体的创伤造成
褐化所致。成对 t2测验表明 ,添加 S23307 的处理与
对照之间的差异达极显著水平。
表 5 烯效唑( S23307)和多效唑( PP333)对愈伤组织继代的影响
Table 5 Effect of uniconazole ( S23307) and multi2effect triazole ( PP333 ) on callus subculture
处理
Treatment
接种愈伤组织胚性
Embryogenesis
182599 白 (182599W)
相对生长量
Relative growth rate
( %)
胚性愈伤发生率
Rate of embryonic
callus ( %)
4822
相对生长量
Relative growth rate
( %)
胚性愈伤发生率
Rate of embryonic
callus ( %)
S23307 胚性 Embryonic非胚性 Non2embryonic 61444121 99144414 3 3 41052198 96185313 3 3
PP333
胚性 Embryonic
非胚性 Non2embryonic 41973102 94163618 3 3 31121169 96175010 3 3
CK 胚性 Embryonic非胚性 Non2embryonic 51274100 9013619 31852109 8717019
　　注 : 3 3 表示 F 测验在 0101 水平显著。Note : 3 3 signification at 0101 level1
215 　烯效唑和多效唑对愈伤组织继代培养和分化
的影响
　　为了获得充足的转基因受体 ,诱导获得的愈伤
组织还需多次继代培养 ,并进一步挑选以稳定其胚
性。由表 5 知 ,在继代培养基中添加 0150 mgΠL S2
3307 和 PP333 ,对胚性愈伤组织的生长和继代没有
不良影响 ,相对生长量与对照无显著差异。但非胚
性愈伤组织继代时 ,添加 S23307 和 PP333 能显著提
高胚性愈伤组织的发生率 ,这可能是烯效唑和多效
唑能延缓组织衰老 ,促进细胞分裂所致。
表 6 数据表明 ,在继代培养基中添加 S23307 和
PP333 ,对胚性愈伤组织的分化再生没有不良影响 ,
分化再生率与对照相当 ( F 测验差异不显著) ,苗高
比对照稍有降低。
表 6 添加烯效唑( S23307)和多效唑( PP333)继代的胚性愈伤组织的分化再生
Table 6 Regeneration rate of embryonic callus subculture with S23307 and PP333
继代培养基处理
Treatment of
subculture medium
182599 白 (182599W)
接种愈伤块数
Callus number
inoculated
再生率
Regeneration
rate ( %)
平均苗高
Plant height
(cm)
4822
接种愈伤块数
Callus number
inoculated
再生率
Regeneration
rate ( %)
平均苗高
Plant height
(cm)
S23307 63 6715 612 63 5618 513
PP333 63 5816 611 63 6211 615
CK 63 6619 718 63 6014 612
　　图 1 表明 ,将未添加 S23307 的继代培养基上继
代培养的愈伤组织 ,转接到添加 0125 mgΠL S23307
分化培养基上 ,能显著提高其分化再生率 (分化苗数Π愈伤块数) ,并有降低苗高的壮幼苗作用。
3 　讨论
张东向等 (2000) 发现 ,玉米叶片胚性愈伤组织
诱导率 ,与内源 ABA 活性正相关[ 11 ] 。而钙又在
ABA 基因诱导表达中起重要作用[ 12 ] 。本试验将 N6
培养基的 Ca2 + 浓度由 1113 mmolΠL 提高到 5 mmolΠ
L ,不仅提高了胚性愈伤组织的诱导率 ,而且愈伤组
织的质地也得以改善 ,可能就是高浓度 Ca2 + 诱导
ABA 基因表达的结果。
图 1 S23307 对分化再生率和苗高的影响
Fig. 1 Effect of S23307 on regeneration and plant height
836 　　　　作 　　物 　　学 　　报 第 31 卷 　

在汪良驹等 (1999) 的试验中 ,促进无花果愈伤
组织继代生长的 Ca2 + 浓度可达 40 mmolΠL [ 7 ] 。而本
试验结果表明 ,Ca2 + 浓度以 5 mmolΠL 对玉米幼胚胚
性愈伤组织的诱导和继代具有最好的促进作用 ,超
过 10 mmolΠL 其促进作用下降甚至消失。这可能与
培养的物种、外植体组织 ,以及培养基配方不同有
关。
安调过等[ 8 ] 、冯英等[ 9 ] 、赵成章等[ 10 ] 在小麦幼
胚和水稻花药培养中发现 ,低浓度烯效唑 ( ≤110
mgΠL)对愈伤组织诱导和分化再生具有促进作用 ,
但多效唑有抑制作用。本试验只发现了烯效唑对玉
米幼胚培养的显著促进作用 ,但多效唑的促进和抑
制作用均不显著。
Izumi 等 (1985) 通过对笋瓜细胞系的研究认
为 ,S23307 抑制贝壳彬烯到贝壳彬烯酸的 3 个氧化
脱甲基反应 ,从而阻断赤霉素 ( GA3 ) 的合成[ 13 ] 。王
熹等 (1997) 发现 ,除阻断内源 GA3 合成外 , S23307
还可降低水稻幼苗内源 IAA 的活性 ,这可能是延缓
植物生长的另一个原因[ 14 ] 。廖利民等 (1990) 用 S2
3307 和 PP333 处理小麦种子 ,发现胚芽鞘内源 ABA
活性升高[ 15 ] 。由此看来 ,生长延缓剂对植物内源激
素的影响是多方面的。S23307 和 PP333 对胚性愈伤
组织诱导和继代生长的促进作用 ,可能是打破内源
细胞分裂素和生长素平衡的结果。
综上所述 ,在以 N6 培养基为基础的诱导培养
基和继代培养基中添加 5 mmolΠL Ca2 + ,在诱导培
养基和继代培养基中分别添加 1100 mgΠL 和 0150
mgΠL S23307 ,可提高胚性愈伤组织的诱导率和生长
量 ,而不影响胚性愈伤组织的分化再生。分化培养
基添加 0125 mgΠL S23307 ,可显著提高分化再生率。
综合运用上述几方面的改进 ,可利用 N6 培养基诱
导培养生产上大面积推广的优良玉米杂交种的亲本
自交系产生胚性愈伤组织 ,并分化再生 ,为转基因研
究提供良好的受体系统。
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936　第 5 期 付凤玲等 :N6 培养基添加钙和烯效唑对玉米幼胚培养的作用