全 文 ：中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 44 卷 第 6 期 2013 年 3 月

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HPLC 法同时测定藏茵陈胶囊中 7 种有效成分
田成旺 1, 2，张铁军 2，蒋伶活 1, 3
1. 天津大学药物科学与技术学院，天津 300072
2. 天津药物研究院，天津 300193
3. 江南大学生物工程学院，江苏 无锡 214122
摘 要：目的 建立同时测定藏茵陈胶囊中獐牙菜苦苷、龙胆苦苷、獐牙菜苷、芒果苷、当药醇苷、1-羟基-3, 4, 5-三甲氧基
呫吨酮和齐墩果酸的反相高效液相色谱（RP-HPLC）法。方法 采用 Diamonsil C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），流动相
为甲醇-0.02%磷酸水溶液，梯度洗脱，体积流量 1.0 mL/min，柱温为 30 ℃；獐牙菜苦苷、龙胆苦苷、獐牙菜苷、芒果苷、
当药醇苷和 1-羟基-3, 4, 5-三甲氧基呫吨酮的检测波长为 254 nm，齐墩果酸的检测波长为 210 nm。结果 獐牙菜苦苷、獐牙
菜苷、龙胆苦苷、芒果苷、当药醇苷、1-羟基-3, 4, 5-三甲基呫吨酮和齐墩果酸分别在 2.8～56.0、1.2～24.0、0.6～12.0、2.0～
40.0、1.2～24.0、0.6～12.0、12.0～240.0 μg/mL 与色谱峰面积呈良好线性关系；加样回收率分别为 98.9%、101.2%、96.5%、
98.6%、96.9%、97.8%、99.3%，RSD 依次为 1.14%、1.72%、1.31%、1.25%、1.37%、1.78%、2.23%。结论 该方法简便、
准确，重复性好，为藏茵陈胶囊的质量控制提供实验依据。
关键词：藏茵陈胶囊；有效成分；高效液相色谱法；龙胆苦苷；獐牙菜苷；芒果苷；当药醇苷
中图分类号：R286.02 文献标志码：A 文章编号：0253 - 2670(2013)06 - 0705 - 04
DOI: 10.7501/j.issn.0253-2670.2013.06.014
Simultaneous determination of seven active components
in Zangyinchen Capsule by HPLC
TIAN Cheng-wang1, 2, ZHANG Tie-jun2, JIANG Ling-huo1, 3
1. School of Pharmaceutical Science and Technology, Tianjin University, Tianjin 300072, China
2. Tianjin Institute of Pharmaceutical Research, Tianjin 300193, China
3. School of Biotechnology, Jiangnan University, Wuxi 214122, China
Key words: Zangyinchen Capsule; active components; HPLC; gentiopicroside; sweroside; mangiferin; swertianolin

藏茵陈胶囊收载于卫生部药品标准中药成方制
剂 [WS-10411(ZD-0411)-2002]，具有清热解毒、舒
肝利胆、退黄的功效，临床应用较为广泛。藏茵陈
胶囊现行标准中对藏茵陈胶囊中齐墩果酸进行定量
测定并规定了其量的限度[1]。现代研究表明，藏茵
陈中含有环烯醚萜、呫吨酮、三萜等多种类别的化
学成分[2-4]，其中环烯醚萜类代表成分包括獐牙菜苦
苷、龙胆苦苷、獐牙菜苷等，具有抗炎、促进肝损伤
细胞修复等药理活性[5-6]，呫吨酮类代表成分包括芒
果苷、当药醇苷、1-羟基-3, 4, 5-三甲氧基呫吨酮等，
具有抑制转氨酶升高、抗乙肝病毒等药理活性[7-8]，
这些活性均与藏茵陈胶囊的功效相关。故现行标准
中只对三萜类代表成分齐墩果酸进行定量测定尚不
能有效地控制药品的内在质量。有关藏茵陈药材中
獐芽菜苦苷、龙胆苦苷等多成分的定量测定方法已
有相关报道[9-13]，但关于藏茵陈胶囊中多指标成分
定量测定方法的研究尚未见报道。本实验采用梯度
洗脱法，首次建立了藏茵陈胶囊中獐牙菜苦苷、龙
胆苦苷、獐牙菜苷、芒果苷、当药醇苷、1-羟基-3, 4,
5-三甲氧基呫吨酮、齐墩果酸 7 种指标成分同时测
定的 RP-HPLC 方法；结果表明，该方法简便、快
速、灵敏度高，为该药的质量控制提供了依据。

收稿日期：2012-11-07
基金项目：国家自然科学基金资助项目（81001627）；天津市科技支撑计划项目（11ZCKFSY01200）
作者简介：田成旺，男，副研究员，主要从事中药新药的基础及开发研究。Tel: (022)23006843 E-mail: tiancw@tjipr.com
*通信作者 张铁军，男，研究员。Tel: (022)23006848 E-mail: zhangtj@tjipr.com
网络出版时间：2013-01-09 网络出版地址：http://www.cnki.net/kcms/detail/12.1108.R.20130109.1532.011.html
中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 44 卷 第 6 期 2013 年 3 月

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1 仪器与试药
Dionex 高效液相系统（美国戴安公司），配有
DAD 检测器和 Chromeleon 色谱工作站；Sartovius
电子天平（十万分之一）；AS3120 超声仪（美国
Autoscience 公司）。
獐牙菜苦苷、獐牙菜苷、龙胆苦苷、芒果苷、
1-羟基-3, 4, 5-三甲氧基-呫吨酮、齐墩果酸对照品均
购自中国食品药品检定研究院，批号依次为 0785-
200203、111742-200501、110770-200712、111607-
200301、111744-200501、110709-200505；当药醇
苷，自制，经熔点法和 HPLC-DAD 检测质量分数
在 98%以上。甲醇为色谱纯，流动相用水为双蒸水
（自制），其余试剂均为分析纯。藏茵陈胶囊购自天
津协和药店，青海大地药业有限公司生产，批号分
别为 20111101、20111201、20120101。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
Diamonsil C18（200 mm×4.6 mm，5 μm）色谱
柱；流动相为甲醇-0.02%磷酸水溶液，梯度洗脱：0～
15 min，32%甲醇；15～40 min，32%～70%甲醇；
40～42 min，70%～95%甲醇；42～50 min，95%甲
醇；50～52 min，95%～32%甲醇；52～60 min，32%
甲醇；体积流量 1.0 mL/min，柱温 30 ℃；测定獐
芽菜苦苷、龙胆苦苷、獐牙菜苷和芒果苷、当药醇
苷和 1-羟基-3, 4, 5-三甲基呫吨酮的采集时间为 0～
40 min，检测波长 254 nm；测定齐墩果酸的采集时
间为 42～50 min，检测波长 210 nm。理论板数以獐
芽菜苦苷和齐墩果酸色谱峰计算均不低于 9 000，供
试品色谱图中，其他杂质色谱峰与待测物质色谱峰
的分离度应符合要求。
2.2 对照品溶液制备
取对照品獐芽菜苦苷、獐芽菜苷、龙胆苦苷、
芒果苷、当药醇苷、1-羟基-3, 4, 5-三甲氧基呫吨酮、
齐墩果酸适量，精密称定，用甲醇配制成含獐芽菜
苦苷 70 μg/mL、獐芽菜苷 15 μg/mL、龙胆苦苷 30
μg/mL、芒果苷 50 μg/mL、当药醇苷 30 μg/mL、1-
羟基-3, 4, 5-三甲氧基-呫吨酮 15 μg/mL 和齐墩果酸
300 μg/mL 的混合对照品溶液，即得。
2.3 供试品溶液制备
取藏茵陈胶囊内容物 0.5 g，精密称定，置 50 mL
量瓶中，加入甲醇约 45 mL，超声（100 W，40 kHz）
处理 30 min，放冷，用甲醇定容至刻度，摇匀，经
0.22 μm 微孔滤膜滤过，即得。
2.4 空白对照溶液制备
根据藏茵陈胶囊标准，由相关辅料制得藏茵陈
阴性胶囊，按照供试品溶液的制备方法制得阴性空
白对照溶液。
2.5 方法学考察
2.5.1 专属性考察 按照“2.1”～“2.4”项方法进
行试验，结果供试品中各待测成分色谱峰的分离度
均大于 1.5，其他杂质峰及空白对照溶液对待测成分
均无干扰。见图 1。




1-獐芽菜苦苷 2-龙胆苦苷 3-獐芽菜苷 4-芒果苷 5-当药醇苷 6-1-羟基-3, 4, 5-三甲基呫吨酮 7-齐墩果酸
1-swertiamarin 2-gentiopicroside 3-sweroside 4-mangiferin 5-swertianolin 6-1-hydroxy-3, 4, 5-trimethoxy xanthone 7-oleanolic acid

图 1 混合对照品 (A)、藏茵陈胶囊样品 (B) 和阴性样品 (C) 的 HPLC 图谱
Fig. 1 HPLC chromatograms of mixture reference substance (A), Zangyinchen Capsule sample (B), and negative sample (C)

2.5.2 线性关系考察 精密吸取按“2.2”项下方法
制备的混合对照品储备液 1.0、2.5、5.0、7.5、10.0、
15.0、17.5、20.0 mL，分别置 25 mL 量瓶中，以甲
醇定容，摇匀，即得系列质量浓度的混合对照品溶
液。分别吸取上述系列混合对照品溶液各 10 μL，
注入液相色谱仪，记录色谱图。以峰面积积分值（Y）
对质量浓度（X）进行线性回归，得回归方程，见
表 1。取混合对照品储备液不断稀释后进样分析，
以 3 倍信噪比确定检测限，结果见表 1。
2.5.3 精密度试验 精密吸取“2.5.2”项下中间质
量浓度梯度点的混合对照品溶液 10 μL，连续进样 6
次，按上述色谱条件测定峰面积值。求得日内精密
1
2
3
4 5
6 7
1
2
3
4 5
6
7
C A B
0 20 40 60 0 20 40 60 0 20 40 60
t / min
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度 RSD；连续分析 4 d，每天进样 1 次，求得日间
精密度 RSD，结果见表 2。
2.5.4 稳定性试验 取同一份供试品溶液（批号
20111101），分别于 0、2、4、6、8、12 h，按上述
色谱条件测定峰面积。结果供试品溶液在 12 h 内色
谱峰面积无明显变化，獐牙菜苦苷、龙胆苦苷、獐
牙菜苷、芒果苷、当药醇苷、1-羟基-3, 4, 5-三甲氧
基呫吨酮和齐墩果酸的 RSD 分别为 1.33%、1.46%、
1.28%、1.16%、1.05%、1.67%、1.98%，表明供试
品溶液在制备后 12 h 内保持稳定。

表 1 7 种成分的线性回归方程及检测限
Table 1 Linear regression equations and detection limits of seven components
成 分 回归方程 线性范围 / (μg·mL−1) r 检测限 / (μg·mL−1)
獐芽菜苦苷 Y＝481.58 X＋67.11 2.8～56.0 0.999 5 0.18
龙胆苦苷 Y＝447.43 X＋88.26 1.2～24.0 0.999 8 0.08
獐芽菜苷 Y＝418.09 X＋39.79 0.6～12.0 0.999 3 0.05
芒果苷 Y＝598.22 X＋125.32 2.0～40.0 0.999 9 0.08
当药醇苷 Y＝556.78 X＋101.35 1.2～24.0 0.999 7 0.08
1-羟基-3, 4, 5-三甲氧基呫吨酮 Y＝433.26 X＋68.92 0.6～12.0 0.999 6 0.06
齐墩果酸 Y＝25.46 X＋152.35 12.0～240.0 0.999 1 1.00

表 2 7 种成分的日内及日间精密度结果
Table 2 Intra-day and inter-day precisions
of seven components
日内 RSD / % 日间 RSD / %
成 分
峰面积 保留时间 峰面积 保留时间
獐芽菜苦苷 1.23 0.67 1.56 0.55
龙胆苦苷 1.11 0.85 1.75 0.76
獐芽菜苷 1.52 0.59 2.01 0.89
芒果苷 0.67 1.01 1.16 0.94
当药醇苷 0.98 1.22 1.35 1.12
1-羟基-3, 4, 5-三
甲氧基呫吨酮
1.25 1.16 1.87 1.28
齐墩果酸 1.34 0.97 1.78 1.01

2.5.5 重复性试验 取同一批样品（批号 20111101）
6 份，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，依法测
定各物质的量。结果獐牙菜苦苷、龙胆苦苷、獐牙
菜苷、芒果苷、当药醇苷、1-羟基-3, 4, 5-三甲氧基
呫吨酮和齐墩果酸的平均质量分数分别为 5.13、
1.52、1.14、7.31、3.82、0.85、22.01 mg/g，RSD
分别为 1.02%、1.13%、1.45%、0.97%、1.14%、1.49%、
1.77%。
2.5.6 加样回收率试验 取已测定的藏茵陈胶囊内
容物（批号 20111101）6 份，每份约 0.25 g，精密
称定，置 50 mL 量瓶中，每份中分别精密加入獐牙
菜苦苷（1.28 mg/mL）、龙胆苦苷（0.38 mg/mL）、
獐牙菜苷（0.28 mg/mL）、芒果苷（1.83 mg/mL）、
当药醇苷（0.95 mg/mL）和 1-羟基-3, 4, 5-三甲氧基
呫吨酮（0.21 mg/mL）6 种对照品溶液各 1.0 mL 以
及齐墩果酸对照品溶液（2.75 mg/mL）2.0 mL，按
“2.3”项下方法制备供试品溶液，进样测定，计算
回收率。结果獐牙菜苦苷、龙胆苦苷、獐牙菜苷、
芒果苷、当药醇苷、1-羟基-3, 4, 5-三甲氧基呫吨酮
和齐墩果酸的平均回收率分别为 98.9%、101.2%、
96.5%、98.6%、96.9%、97.8%、99.3%，RSD 依次
为 1.14%、1.72%、1.31%、1.25%、1.37%、1.78%、
2.23%。
2.6 样品测定
取 3 批藏茵陈胶囊，按“2.3”项下方法制备供
试品溶液，按上述色谱条件进样测定，采用外标法
计算，结果见表 3。
3 讨论
用甲醇溶液分别配制獐牙菜苦苷、龙胆苦苷、
獐牙菜苷、芒果苷、当药醇苷、1-羟基-3, 4, 5-三甲
氧基-呫吨酮和齐墩果酸对照品溶液，进行紫外扫
描，根据紫外扫描可知，獐牙菜苦苷、龙胆苦苷、
獐牙菜苷在 237 nm 处有最大吸收，而芒果苷、当
药醇苷、1-羟基-3, 4, 5-三甲氧基呫吨酮的最大吸收
峰在 254 nm 处，齐墩果酸的最大吸收峰在 210 nm
处，同时参考相关文献[10-13]，确定本实验中齐墩果
酸的检测波长为 210 nm，其余 6 个成分的检测波长
为 254 nm。
根据指标性成分的理化性质和色谱行为，比较
了以甲醇、乙腈与水、甲酸-水、磷酸-水构成的洗
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表 3 藏茵陈胶囊中 7 种成分的测定结果 (n＝3)
Table 3 Determination of seven components in Zangyinchen Capsule (n＝3)
质量分数 / (mg·g−1) 批 号
獐芽菜苦苷 龙胆苦苷 獐芽菜苷 芒果苷 当药醇苷 1-羟基-3, 4, 5-三甲氧基呫吨酮 齐墩果酸
20111101 5.13 1.52 1.14 7.31 3.82 0.85 22.01
20111201 3.78 0.89 1.35 5.45 3.12 0.65 20.67
20120101 6.24 1.22 0.45 6.27 1.06 0.65 21.34
RSD / % 批 号
獐芽菜苦苷 龙胆苦苷 獐芽菜苷 芒果苷 当药醇苷 1-羟基-3, 4, 5-三甲氧基呫吨酮 齐墩果酸
20111101 1.02 1.23 1.14 0.89 0.65 1.32 1.57
20111201 0.87 1.01 1.21 0.92 0.57 1.25 1.33
20120101 1.11 1.03 1.17 0.75 0.98 1.42 1.78

脱系统。结果表明，以乙腈-水（或酸水）为系统各
成分的分离效果不理想，甲醇-水（或甲酸水）系统
色谱峰的对称性不好，经优化后的甲醇-磷酸水系统
各成分的分离效果较好，各色谱峰的分离度和理论
塔板数均符合要求。
有关 HPLC 法分别测定獐牙菜苦苷、龙胆苦苷、
獐牙菜苷、芒果苷、当药醇苷、1-羟基-3, 4, 5-三甲
氧基-呫吨酮、齐墩果酸的方法已有报道[10-13]，但尚
未见同时检测以上 7 种成分的方法。本实验采用梯
度洗脱的方法，使得藏茵陈胶囊中獐牙菜苦苷、龙
胆苦苷、獐牙菜苷、芒果苷、当药醇苷、1-羟基-3, 4,
5-三甲氧基呫吨酮和齐墩果酸 7 种成分在同一张色
谱图上得到有效分离，为该方建立了一种快速的质
量控制方法。
本实验测定了藏茵陈胶囊不同批次样品中獐牙
菜苦苷、龙胆苦苷、獐牙菜苷、芒果苷、当药醇苷、
1-羟基-3, 4, 5-三甲氧基呫吨酮、齐墩果酸的量，结
果表明齐墩果酸的量均满足标准要求[1]，且较为稳
定，但其他 6 种成分不同批次之间差异较大，这些
成分量的差异与临床用药安全、有效的关联性规律，
还需以后进一步开展深入的研究工作。
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