全 文 ：中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 44 卷 第 3 期 2013 年 2 月 ·291·
白芍-甘草药对不同配伍比例提取物中有效成分溶出规律的研究
李 妍，杨燕云，张振秋*，谢剑琳，王 美
辽宁中医药大学药学院，辽宁 大连 116600
摘 要：目的 通过建立 RP-HPLC 法测定白芍-甘草药对中 12 种有效成分，并用此方法探讨有效成分随白芍-甘草配比变化
的溶出规律。方法 采用 Dikma Technologies-C18色谱柱（200 mm×4.6 mm，5 μm），流动相为乙腈（A）-0.1%磷酸水溶液
（B），梯度洗脱：0～5 min，5%～10% A；5～10 min，10%～12% A；10～15 min，12%～14% A；15～20 min，14%～16% A；
20～25 min，16%～18% A；25～30 min，18%～20% A；30～40 min，20%～25% A；40～50 min，25%～40% A；50～62 min，
40%～55% A；62～72 min，55%～70% A；72～85 min，70%～55% A；85～95 min，55%～5% A，体积流量 1.0 mL/min，
检测波长为 267 nm（0～13 min）、258 nm（13～17 min）、230 nm（17～27 min）、276 nm（27～32 min）、230 nm（32～42 min）、
360 nm（42～46 min）、276 nm（46～50 min）、230 nm（50～53 min）、275 nm（53～55 min）、250 nm（55～95 min），柱温
30 ℃。结果 在所观察的白芍-甘草的 9 个配伍比例（0∶1、0.3∶1、0.6∶1、1∶1、2∶1、3∶1、4∶1、5∶1、1∶0）中，
以 1 1∶ 、3 1∶ 组有效成分溶出量最高，另外 0.6 1∶ 组也较高。结论 以现代研究方法证实了张仲景《伤寒论》芍甘汤中配
伍比例 1 1∶ 的科学性，也进一步从有效成分上证实了现代临床经典比例 3 1∶ 配伍的合理性。
关键词：白芍-甘草药对；配伍比例；溶出规律；HPLC；波长切换
中图分类号：R283.1；R286.02 文献标志码：A 文章编号：0253 - 2670(2013)03 - 0291 - 05
DOI: 10.7501/j.issn.0253-2670.2013.03.011
Principle of active component dissolution in extract of different compatibility
proportions of Paeoniae Radix Alba and Glycyrrhizae Radix et Rhizoma
LI Yan, YANG Yan-yun, ZHANG Zhen-qiu, XIE Jian-lin, WANG Mei
Liaoning University of Traditional Chinese Medicine, Dalian 116600, China
Abstract: Objective To establish the RP-HPLC method for the determination of twelve active components in the combination of
Paeoniae Radix Alba (PRA) and Glycyrrhizae Radix et Rhizoma (GRR) and to further analyze the principle of the active component
dissolution with the proportion changing. Methods The separation was performed on a Dikma Technologies-C18 BDS (200 mm × 4.6
mm, 5 μm) column with the gradient elution: 0—5 min, 5%—10% A; 5—10 min, 10%—12% A; 10—15 min, 12%—14% A; 15—20
min, 14%—16% A; 20—25 min, 16%—18% A; 25—30 min, 18%—20% A; 30—40 min, 20%—25% A; 40—50 min, 25%—40% A;
50—62 min, 40%—55% A; 62—72 min, 55%—70% A; 72—85 min, 70%—55% A; 85—95 min, 55%—5% A using acetonitrile
(A)-water of 0.1% phosphoric acid (B) at the flow rate of 1.0 mL/min; Detection wavelength was 267 nm (0—13 min), 258 nm (13—17
min), 230 nm (17—27 min), 276 nm (27—32 min), 230 nm (32—42 min), 360 nm (42—46 min), 276 nm (46—50 min), 230 nm
(50—53 min), 275 nm (53—55 min), and 250 nm (55—95 min); The column temperature was 30 ℃. Results Among the observed
nine compatibility proportions (PRA-GRR as 0 1∶ , 0.3 1∶ , 0.6 1∶ , 1 1∶ , 2 1∶ , 3 1∶ , 4 1∶ , 5 1∶ , and 1 0∶ ), the active component
dissolution amounts in 1∶1 and 3∶1 groups were the highest, and 0.6∶1 group also showed higher dissolution amount. Conclusion
The scientificity of 1∶1 combination of PRA and GRR in Treatise on Cold Damage Diseases by ZHANG Zhong-jing has been
proved using modern research method and also the rationality of the modern classical 3∶1 ratio has been further confirmed in clinic
from the active components aspect.
Key words: compatibility of Paeoniae Radix Alba and Glycyrrhizae Radix et Rhizoma; compatibility proportion; principle of
dissolution; HPLC; wavelength switching
收稿日期：2012-06-28
基金项目：辽宁省教育厅课题“中药材品质评价体系研究”（2008S145）
作者简介：李 妍（1987—），女，辽宁葫芦岛人，硕士研究生，研究方向为药物分析。
Tel: (0411)87586110 15698857821 E-mail: 136974196@qq.com
*通信作者 张振秋 Tel: (0411)87586058 E-mail: zhangzhenqiu@sina.com
网络出版时间：2012-11-27 网络出版地址：http://www.cnki.net/kcms/detail/12.1108.R.20121127.0954.006.html
中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 44 卷 第 3 期 2013 年 2 月 ·292·
中药复方配伍是中医药文化的精髓，白芍常与
甘草配伍，在许多古方及中成药制剂中都有应用，
如小建中汤、桂枝汤、真人养脏汤等。其中以张仲
景《伤寒论》的芍甘汤为代表，方中药虽两味，但
结构严谨，配伍精当，后世医家极为推崇。大量文
献报道显示[1-5]，其主要有效成分为白芍总苷（芍药
苷、芍药内酯苷、苯甲酰芍药苷）、甘草总苷（甘草
苷、异甘草苷、芹糖甘草苷、芹糖异甘草苷）、甘草
酸、异甘草素等；此外，白芍所含酚类成分（1, 2, 3,
4, 6-五没食子酰葡萄糖）具有抗病毒、抗肿瘤等药
理活性[6]。在《伤寒论》中所载白芍-甘草药对的最
小配比为 0.6∶1，张仲景“芍药甘草汤”的配比 1∶
1，现代临床常用配比 3∶1，以此为基础本实验设
计了 9 个配伍比例，对 9 个拟定比例（0∶1、0.3∶
1、0.6∶1、1∶1、2∶1、3∶1、4∶1、5∶1、1∶0）
中上述主要药理活性成分进行了测定。以考察不同
比例配伍的白芍-甘草药对中有效成分的溶出规律，
建立化学成分与药效间的相关性，为后续的药效学
研究提供数据参考。
1 仪器与材料
Agilent 1100 型高效液相色谱仪（仪器编号
20041191 DE43607375），配置四元梯度泵、在线脱
气机、VWD 检测器；AS3120A 超声提取器（天津
奥特赛恩斯仪器有限公司）；2140 型电子分析天平
（上海奥豪斯公司）、Mettler AB135—S 十万分之一
电子天平（瑞士梅特勒-托利多集团公司）；U—3010
型紫外/可见分光光度计（日立公司）。
对照品：甘草苷（批号 111610-200604）购于
中国食品药品检定研究院，异甘草素（批号
20100603）、苯甲酰芍药苷（批号 20100513）均购
于天津一方科技有限公司，芹糖基异甘草苷（批号
20101108）、异甘草苷（批号 20100915）均购于上
海永恒生物科技有限公司，甘草酸（批号
20100730）、芍药苷（批号 20100821）均购于上海
融禾科技有限公司，甘草次酸（批号 20100524）、
芍药内酯苷（批号 20100325）、1, 2, 3, 4, 6-五没食
子酰葡萄糖（批号 20100706）均购于深圳美荷生物
科技有限公司，苯甲酸（批号 20100819）、没食子
酸（批号 20100924）购于鼎瑞化工有限公司，质量
分数均为 98%。本研究所用的白芍饮片、炙甘草饮
片均购于河北安国，经辽宁中医药大学李峰教授鉴
定分别为芍药科芍药属植物芍药 Paeonia lactiflora
Pall. 的干燥根、豆科甘草属植物甘草 Glycyrrhiza
uralensis Fisch. 的干燥根及根茎的蜜炙品。
乙腈、甲醇为色谱纯（山东禹王化学试剂公司），
水为重蒸馏水，磷酸、氯仿为分析纯。
2 方法与结果
2.1 药对提取物制备
按上述 9 个比例分别取白芍、炙甘草中粉共计
100 g，8 倍量水煎煮 2 次，每次 60 min，滤过，合
并滤液浓缩，于 70 ℃减压干燥至恒定质量，即得。
2.2 混合对照品溶液的制备
精密称取 11 种对照品适量，分别加甲醇制成含
没食子酸 2.296 mg/mL、芍药内酯苷 1.705 mg/mL、
芍药苷 1.760 mg/mL、甘草苷 1.266 mg/mL、苯甲酸
935.0 μg/mL、1, 2, 3, 4, 6-五没食子酰葡萄糖 961.0
μg/mL、芹糖异甘草苷 2.107 mg/mL、异甘草苷 951.8
μg/mL、苯甲酰芍药苷 659.0 μg/mL、异甘草素 489.0
μg/mL、甘草次酸 936.5 μg/mL 的单一对照品储备
液，备用。依次精密量取上述 11 种对照品储备液
1.00、1.50、4.50、2.50、0.10、0.50、1.50、1.00、
1.00、0.10、1.00 mL，置同一 25 mL 量瓶中，加入
甘草酸对照品粉末 10.26 mg，加甲醇稀释至刻度，
制成含没食子酸 91.84 μg/mL、芍药内酯苷 102.3
μg/mL、芍药苷 316.8 μg/mL、甘草苷 126.6 μg/mL、
苯甲酸 3.740 μg/mL、1, 2, 3, 4, 6-五没食子酰葡萄糖
19.22 μg/mL、芹糖异甘草苷 126.4 μg/mL、异甘草
苷 38.07 μg/mL、苯甲酰芍药苷 26.36 μg/mL、甘草
酸 410.4 μg/mL、异甘草素 1.956 μg/mL、甘草次酸
37.44 μg/mL 的混合对照品溶液，即得。
2.3 供试品溶液的制备
取上述 9个比例药对提取物各 0.1 g，精密称定，
分别置 50 mL 具塞锥形瓶中，各精密加入水 25 mL，
密塞，称定质量，超声处理（功率 250 W，频率 40
kHz）30 min，放冷，再称定质量，用水补足损失的
质量，摇匀；精密移取续滤液 10 mL 于分液漏斗中，
加入乙腈 20 mL，氯仿 20 mL，静置分层，将水层
全部取出至 10 mL 量瓶中，加水至刻度线，摇匀；
0.45 μm 微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。
2.4 色谱条件
色谱柱为 Dikma Technologies-C18柱（200 mm×
4.6 mm，5 μm）；流动相为乙腈（A）-0.1%磷酸水
溶液（B），梯度洗脱：0～5 min，5%～10% A；5～
10 min，10%～12% A；10～15 min，12%～14% A；
15～20 min，14%～16% A；20～25 min，16%～18%
A；25～30 min，18%～20% A；30～40 min，20%～
中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 44 卷 第 3 期 2013 年 2 月 ·293·
25% A；40～50 min，25%～40% A；50～62 min，
40%～55% A；62～72 min，55%～70% A；72～85
min，70%～55% A；85～95 min，55%～5% A，体
积流量 1.0 mL/min，检测波长为 267 nm（0～13
min）、258 nm（13～17 min）、230 nm（17～27 min）、
276 nm（27～42 min）、230 nm（32～42 min）、360
nm（42～46 min）、276 nm（46～50 min）、230 nm
（50～53 min）、275 nm（53～55 min）、250 nm（55～
95 min）；柱温 30 ℃；进样量 20 μL。在上述色谱
条件下进行检测，以甘草酸计算理论塔板数大于
300 000，分离度大于 1.5。对照品、样品以及 2 种
药材的阴性对照色谱图见图 1。
2.5 线性关系考察
分别精密量取上述混合对照品溶液 2、5、10、
15、20 μL 注入 HPLC 色谱仪，测定。以进样量为
横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，计算回
1-没食子酸 2-芍药内酯苷 3-芍药苷 4-甘草苷 5-苯甲酸 6-1, 2, 3, 4, 6-五没食子酰葡萄糖 7-芹糖异甘草苷 8-异甘草苷
9-苯甲酰芍药苷 10-甘草酸 11-异甘草素 12-甘草次酸
1-gallic acid 2-albiflorinstd 3-peoniflorin 4-liquiritin 5-benzoic acid 6-1, 2, 3, 4, 6-pentgalloyl glucose 7-isoliquiritin apioside
8-isoliquiritin 9-benzoylpaeoniflorin 10-glycyrrhizic acid 11-isoliquiritigenin 12-glycyrrhetic acid
图 1 混合对照品 (A)、样品 (B)、白芍阴性对照液 (C)、炙甘草阴性对照液 (D) 的 HPLC 色谱图
Fig. 1 HPLC chromatograms of mixed reference substances (A), sample (B), negative solution of PRA (C),
and negative solution of GRR (D)
归方程，结果见表 1。
2.6 方法学考察
本实验按“2.2”项下色谱条件，以白芍-甘草 1∶
1 药对提取物进行了精密度、重复性、稳定性及加
样回收率考察。精密度试验中色谱峰 1～12 峰面积
的 RSD 分别为 1.8%、2.0%、2.6%、1.6%、2.7%、
1.6%、1.9%、1.4%、2.8%、1.8%、2.0%、1.4%（n＝
5），表明仪器精密度较好。重复性试验中成分 1～
12 平均质量分数分别为 6.847、8.755、33.82、13.95、
0.277 0、1.258、8.005、1.766、2.344、51.40、0.135 4、
3.278 mg/g；RSD 分别为 1.5%、2.2%、2.4%、1.2%、
2.6%、1.5%、2.1%、1.6%、2.7%、2.0%、1.7%、1.7%
（n＝6），表明本方法重复性良好。稳定性试验结果
表明，成分 1～12 在 24 h 内稳定，RSD 分别为 1.4%、
2.0%、2.6%、1.6%、2.4%、1.7%、1.9%、1.1%、2.3%、
1.9%、1.7%、1.6%（n＝7）。进行加样回收率试验，
成分 1～12 的平均回收率分别为 93.29%、98.5%、
表 1 12 个成分的标准曲线方程、相关系数和线性范围
Table 1 Standard curve equations, correlation coefficients,
and linear ranges of twelve components
化合物 标准曲线方程 r 线性范围 / ng
没食子酸 Y＝1 972 X－4.163 0.999 1 183.7～1 837.0
芍药内酯苷 Y＝4 231 X＋15.22 0.999 5 204.6～2 046.0
芍药苷 Y＝601.9 X－4.560 0.999 6 633.6～6 336.0
甘草苷 Y＝5 314 X＋3.66 0.999 9 253.2～2 532.0
苯甲酸 Y＝3 091 X＋5.374 0.999 2 7.480～74.80
1, 2, 3, 4, 6-五没
食子酰葡萄糖
Y＝1 196 X－21.87 0.999 5 38.44～384.4
芹糖异甘草苷 Y＝2 331 X＋8.768 0.999 5 252.8～2 528.0
异甘草苷 Y＝7 202 X－5.87 0.999 0 76.14～761.4
苯甲酰芍药苷 Y＝5 655 X＋16.09 0.999 3 52.72～527.2
甘草酸 Y＝339.8 X＋5.069 0.999 4 820.8～8 208.0
异甘草素 Y＝9 843 X＋24.84 0.999 5 3.912～39.12
甘草次酸 Y＝2 528 X－2.535 0.999 8 74.88～748.8
1
2
3
4
5 6
7
8
9
10
11
12
10
11 12
1
2
4
3
5 6
7
8 9
A B
C D
4
7
8
10
11 12
1
2
3
5 6 9
0 30 60 90 0 30 60 90
t / min
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103.4%、102.7%、94.0%、98.2%、96.4%、96.3%、
102.7%、102.6%、96.4%、106.0%；RSD 分别为 1.2%、
2.5%、2.0%、1.1%、2.0%、2.3%、1.3%、1.4%、2.0%、
1.7%、1.2%、2.4%（n＝5）。
2.7 数据处理与结果
取 9 个拟定比例白芍、炙甘草的提取物 0.1 g，
精密称定。按“2.3”项下方法制备供试品溶液，在
上述色谱条件下进样测定，精密吸取供试品溶液 20
μL，分别注入液相色谱仪，记录色谱图并以外标法
计算样品中 12 个指标成分的量。以该量计算各成分
在各药材中的溶出率（单一成分溶出率＝该成分在
提取物中的量×提取物取样量/提取物中相当于生
药材的取样量），结果见图 2、3，表 2、3。图 2 显
示随着药对中甘草比例的降低，没食子酸、苯甲酸
的溶出率随之增加；图 3 显示随着药对中甘草比例
的减少，甘草酸和甘草次酸的溶出率均呈无规律变
化。表 2 和表 3 的结果提示，芍药苷、甘草苷、甘
草酸这 3 个成分在 0.6∶1、1∶1、3∶1 这 3 个配伍
比例中的溶出率均高于其他比例组，苯甲酰芍药苷
在 1∶1、3∶1 组中溶出率高于其他比例组。表 2
和表 3 的结果还显示，上述 4 个成分（芍药苷、苯
甲酰芍药苷、甘草苷、甘草酸）在上面提到的 3 个
配伍比例中溶出率高于白芍（1∶0）、甘草（0∶1）
单味药材。
图 2 白芍中 6 种成分溶出率 (n＝3)
Fig. 2 Dissolution rate of six components in PRA (n＝3)
图 3 甘草中 6 种成分溶出率 (n＝3)
Fig. 3 Dissolution rate of six components in GRR (n＝3)
表 2 白芍中 6 种成分溶出率 (n＝3)
Table 2 Dissolution rate of six components in PRA (n＝3)
溶出率 / (mg·g−1) 白芍-甘草配伍比例
没食子酸 芍药苷内酯 芍药苷 苯甲酸 1, 2, 3, 4, 6-五没食子酰葡萄糖 苯甲酰芍药苷
0∶1 0 0 0 0 0 0
0.3∶1 13.68 13.70 55.55 0.507 9 2.954 4.538
0.6∶1 13.35 18.71 66.36 0.552 2 2.943 4.078
1∶1 13.69 17.51 67.62 0.553 9 2.516 4.687
2∶1 13.82 15.81 53.49 0.560 7 2.609 4.369
3∶1 14.31 18.48 71.12 0.592 2 2.678 4.526
4∶1 15.19 17.57 56.15 0.602 3 2.769 4.453
5∶1 15.49 17.38 56.11 0.605 5 2.738 3.995
1∶0 20.46 23.47 53.33 0.742 2 2.753 3.104
没食子酸
芍药内酯苷
芍药苷
苯甲酸
苯甲酰芍药苷
1, 2, 3, 4, 6-五没食子酰葡萄糖
80
60
40
20
0
质
量
分
数
/
(m
g·
g−
1 )
0∶1 0.3∶1 0.6∶1 1∶1 2∶1 3∶1 4∶1 5∶1 1∶0
白芍-甘草
甘草苷
芹糖异甘草苷
异甘草苷
甘草酸
异甘草素
甘草次酸
120
100
80
60
40
20
0
质
量
分
数
/
(m
g·
g−
1 )
0∶1 0.3∶1 0.6∶1 1∶1 2∶1 3∶1 4∶1 5∶1 1∶0
白芍-甘草
中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 44 卷 第 3 期 2013 年 2 月 ·295·
表 3 甘草中 6 种成分溶出率 (n＝3)
Table 3 Dissolution rate of six components in GRR (n＝3)
溶出率 / (mg·g−1) 白芍-甘草配伍比例 甘草苷 芹糖异甘草苷 异甘草苷 甘草酸 异甘草素 甘草次酸
0∶1 20.99 27.74 6.462 85.64 0.439 3 3.034
0.3∶1 22.93 27.38 6.486 61.23 0.336 8 2.865
0.6∶1 25.31 16.97 3.746 92.98 0.384 6 2.336
1∶1 27.89 16.01 3.532 102.77 0.270 7 6.555
2∶1 23.56 15.08 3.526 65.59 0.233 6 5.462
3∶1 30.01 28.11 4.623 106.24 0.261 6 16.233
4∶1 24.19 19.62 5.877 73.66 0.293 1 12.087
5∶1 22.81 22.03 5.530 72.97 0.341 3 35.407
1∶0 0 0 0 0 0 0
3 讨论
随着药对中甘草比例的降低，没食子酸、苯甲
酸的溶出率却随之增加，分析可能是甘草中的酸性
成分，如甘草酸和甘草次酸通过对煎煮液 pH 值的
影响，抑制了白芍中这两种酸性成分的溶出；随着
药对中甘草比例的减少，甘草酸和甘草次酸的溶出
率均呈无规律变化，推测可能是在煎煮过程中一定
的溶液环境促进了甘草酸和甘草次酸的相互转化。
研究表明白芍中的芍药苷、苯甲酰芍药苷，甘
草中的甘草苷、甘草酸为芍甘汤的主要药理活性成
分[1,3-5]。上述 4 个成分除苯甲酰芍药苷在 0.6∶1 组
中溶出率较低外，其他各成分在 0.6∶1、1∶1、3∶
1 这 3 个配伍比例中的溶出率均高于其他比例组。
可能是白芍与炙甘草以上述 3 个比例配伍，更有利
于药对中成分的溶出，具体机制尚不明确，有待进
一步探讨及深入研究。质量比 1∶1 是张仲景“芍甘
汤”的经典配伍比例，由此看来古方的经典配比确
实包含着内在的科学道理。现代研究则认为，质量
比 3∶1 的镇痛作用也较优[7-8]，本实验结果在有效
成分方面进一步证实了这一说法的合理性。另外质
量比 0.6∶1 各有效成分溶出率也较高，这也是伤寒
论中芍甘药对的最小配伍比例，而对该比例的研究
却未见文献报道，可做进一步探讨研究。上述 4 个
成分在上面提到的 3 个配伍比例中的溶出率高于白
芍（1∶0）、甘草（0∶1）单味药材。从有效成分方
面证实了临床经典配比和古方经典配比确实比单味
用药合理，可见中医讲究组方配伍极具科学性。
本次实验对方法的精密度、重复性、稳定性以
及线性范围和回收率均做了考察，结果表明精密度、
重复性、稳定性及线性范围均符合方法学要求。没
食子酸和苯甲酸的回收率低于 95%，可能是由于甘
草中的酸性成分对其溶出的抑制所致，这与表 2 中，
它在各比例药对中的溶出率低于白芍单味药材的结
果也是吻合的。甘草次酸的回收率高于 105%，结
合图 3，这与它在各比例溶出率结果中显示出的无
规律、不稳定的特点也是符合的。可能是煎煮的溶
液环境导致了甘草酸向甘草次酸的转化，干扰了其
结果的测定。以上3种物质的回收率分别为93.29%、
94.0%、106.0%，虽稍稍偏离了回收率规定范围的
95%～105%，但由于本次测定成分较多，物质间相
互作用复杂，所以认为本实验采用的方法是可行的，
可以用来探讨不同配伍比例对白芍炙甘草药对提取
物溶出率的影响。
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