全 文 ：中草药 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第7期2006年7月·1021·
2．4 标准曲线的制备：精密称取青蒿素对照品
24．12mg置25mL量瓶中，加入甲醇溶解并稀释
至刻度，作为贮备液。精密吸取一定量贮备液，配制
成质量浓度为0．5893、0．9648、1．178、2．3574、
5．8935mg／mL青蒿素对照品溶液，分别进样5
弘L，进行HPLC—ELSD分析。以峰面积(y)的常用对
数为纵坐标，以对照品质量浓度(x)的常用对数为
横坐标，绘制标准曲线。得其回归方程为：lgY一
1．34531gX+6；2238，r一0．989。由此可知青蒿
素在0．5893～5．8935mg,／mL与峰面积具有良好
的线性关系。
2．5精密度试验：精密吸取同一份供试品溶液重复
进样6次，每次进样5弘L，测定青蒿素峰面积，计算
得其RSD为0．70％(卵一6)。
2．6重现性试验：精密称取同一批黄花蒿提取物样
品适量，6份，制备供试品溶液，测定。结果青蒿素的
平均质量分数为15．30％，RSD为0．89％。
2．7稳定性试验：精密吸取同一供试品溶液，每隔
1 h进样测定1次，进样量5肛L，测定峰面积。结果
青蒿素峰面积的RSD为0．86％(咒一9)。结果表明
供试品溶液在8h内稳定性良好。
2．8加样回收率试验：精密称取含青蒿素15．30％
的黄花蒿提取物约0．1g，精密加入7．5210mg／mL
青蒿素对照品溶液2mL，制备供试品溶液，进行测
定，按标准曲线法计算结果。结果平均回收率为
98．71％，RSD为0．42％(卵一6)。
2．9样品测定：精密称取黄花蒿提取物样品10批，
制备供试品溶液，测定。每批样品测定3份，按标准
曲线法计算结果，以3次测定结果的平均值作为测
定值，结果见表1。
表1 黄花蓄提取物中青蓠素的测定结果(n=3)
Table1 DeterminationofartemisinininA．ann口a
extract(聘一3)
批号 青蒿素／％ RSD／％ 批号 青蒿素／％ RSD／％
05042815．45 0．22 0506015．15 0．42
05050915．14 0．56 05060615．25 0．60
05051215．21 0．34 05060715．66 0．59
05051815．84 0．59 05060815．37 0．24
05052015．30 0．82 05061015．28 0．30
3讨论
3．1 蒸发光散射检测器条件的选择：考虑到青蒿素
具有热不稳定性和影响ELSD响应信号的基本参
数为气体体积流量和漂移管温度的因素。因此，本试
验通过不同气体体积流量0．6、0．8、1．0、1．2、1．4、
1．6、1．8、2．0、2．2L／min和不同漂移管温度40、45、
50、55、60。C对青蒿素响应信号强度的影响进行了
最佳检测条件选择。最终确定ELSD最佳检测条件
为气体体积流量为1L／min，漂移管温度为45~C。
3．2流动相比例的确定：在上述色谱条件下，本实
验分别选择了不同流动相比例的甲醇一水、乙腈一水
及磷酸盐缓冲液、醋酸盐缓冲液、三氟醋酸进行试
验。结果证明：流动相选择乙腈一水(69：31，用三氟
醋酸调节pH至3)时，青蒿素与杂质分离效果最好。
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黄连与生地不同配伍比例对黄连丸中小檗碱的影响
夏旋1，杨明炜¨，王文清2，方建国2，汪秋兰2，陆付耳1
(1．华中科技大学同济医学院附属同济医院中西医结合研究所，湖北武汉430030；
2．华中科技大学同济医学院附属同济医院药学部，湖北武汉430030)
黄连丸出自孙思邈《千金要方》，由黄连、生地等
组成。黄连为君，生地为臣，相须为用，共奏滋阴清热
之功效，主治消渴(相当于现代医学之糖尿病)。尽管
原方配伍比例为1：1，但在临床工作发现采用大剂
量的生地配伍黄连能明显增强黄连丸的降糖效应，
与其他学者的报道十分类似‘1|。因此，本研究采用高
收稿日期：2006—02—16
基金项目：湖北省卫生厅2004年度中医药中西医结合课题(2005．1-2006．12)
作者简介：夏旋(1980一)，男，湖北宜昌人，在读研究生，研究方向为中西医结合内分泌专业。
Tel：(027)83663304Fax：( 27)83662148E—mail：xiaxuan2003@sina．com
*通讯作者杨明炜Fax：(027)83662220E—mail；mwyang@tjmu．edu2cn 万方数据
·1022· 中草菊ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第7期2006年7月
效液相色谱法测定了黄连与生地的不同配伍比例对
黄连中的活性成分小檗碱溶出率的影响。
1仪器和试药
HPll00高效色谱仪(Agilent)；HPll00工作
站；VWD型紫外检测器；水为去离子双蒸水，乙腈
(色谱纯)，磷酸二氢钾、磷酸(分析纯)，盐酸小檗碱
对照品(中国药品生物制品检定所，批号0713—
200305)；饮片黄连与生地由同济医院药学部提供并
鉴定。
2方法与结果
2．I色谱条件：色谱柱：LichrosorbC18(150mm×
4．6mm，5弘m)；流动相：0．02mol／L磷酸二氢钾
(用磷酸调pH值至3．5)一乙腈(65：35)；检测波长：
346nm；温度：40‘C；体积流量：0．9mL／min；进样
量：10弘L。理论塔板数按盐酸小檗碱计算不少于
2 000。
2．2对照品溶液的制备：精密称取五氧化二磷干燥
至恒重的盐酸小檗碱适量，用流动相溶解并制成含
盐酸小檗碱5．0／-g／mL的溶液，作为对照品溶液。
2．3供试品溶液的制备：精密称定60℃干燥至恒
重的黄连300．0g(过12目筛)，加10倍的蒸馏水，
煎煮2次(第一次2h，第二次1h)，合并煎液，加热
浓缩至150mL，冷至常温，即得黄连煎液(含黄连
2．0g／mL)。其他煎液(按黄连与生地比例依次为
1：0、0：1、1：4、1：8)的制备也依上法制得(含生
药2．og／mL)。精密量取上述处理的药液1mL，置
50mL量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，再精密
量取上述溶液0．5mL，置50mL量瓶中，加流动相
稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作供试品溶液。
2．4标准曲线考察：精密称取干燥至恒重的盐酸小
檗碱对照品5．05mg，置100mL量瓶中，用流动相
溶解并稀释至刻度，摇匀。再分别精密量取0．25、
0．5、1．0、2．0、4．0、8．0mL，置10mL量瓶中，用流
动相稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液(分别记为
1～6号溶液)。分别取各供试品溶液10弘L进样，记
录色谱图。以峰面积(A)对质量浓度(C)作线性回
归，得方程：A一61．203C+38．304，r=0．99995。
可见小檗碱在1．2625～40．4弘g／mL时，峰面积与
质量浓度线性关系良好。
2．5精密度试验：取标准曲线考察项下的3号溶液
(5．05btg／mL)，进样lo肛L，连续进样5次，记录色
谱图，计算得峰面积的RSD为1．60％。
2．6重现性试验：选择同一批号样品(配比为1：
1)，供试品溶液6份，分别进样10弘L，记录峰面积。
测得盐酸小檗碱的平均质量分数为18．97mg／g，计
算得其RSD为1．29％。
2．7稳定性试验：选择配比为l：1样品，制备供试
品溶液，于室温(20～25℃)下放置，在不同时间(O、
1、3、6、12、24h)进样，每次进样10弘L，测定盐酸小
檗碱的峰面积，记录色谱图。计算得峰面积的RSD
为2．58％。
2．8加样回收率试验：精密量取已知样品(配比为
1：1，含小檗碱19．7mg／mL)1．0mL，分别加入盐
酸小檗碱对照品溶液(18．45弘g／mL)0．8、1．0、1．2
mL，置10mL量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，
滤过，取续滤液作为供试品溶液，分别取供试品溶液
和对照品溶液各lopL，进样，记录色谱图。按外标
法计算，得平均回收率为100．24％，RSD为3．37％
(竹一9)。
2．9样品的测定：分别精密量取上述供试品溶液和
对照品溶液(5．0btg／mL)各10肛L，注入色谱仪，记
录色谱图，按外标法以峰面积计算，即得各个样品的
质量浓度，见表1与图1。
表1 黄连以及其与生地不同配伍中小檗碱的测定(砣一3)
Table1 DeterminationofberberineinRhizoma
Capticlisanditscompatibilityw th
RadixRehmanannia(n一3)
总生药量／ 黄连量／ 小檗碱／ 黄连中小檗碱
样 品
(． 一1) (g． 一1) ．mL-：)g mL mL(mgL 的溶出度／％· ) g· · 出度
黄连 2．0
生地 2．0
黄连：生地(1；1) 2．0
(1：4) 2．0
(1：8) 2．0
1．00
0．40
O．23
18．97 1．897
7．62 1．905
5．69 2．561
3讨论
尽管黄连丸用治于糖尿病已有千年历史，其疗
效已被广大中医学者所认可，初步实验研究也表明
其有降糖作用[2]。但对黄连与生地的配伍比例至今
却无统一认识，大多凭各自经验而定，笔者与其他学
者均在临床工作中发现采用大剂量的生地配伍黄连
能明显增强黄连丸的降糖效应，但与《千金要方》所
述黄连丸由黄连、生地各等份组成明显不符，应证了
“中医不传之秘在于剂量”之说，因此，十分有必要采
用现代实验研究的方法对其进行科学论证。
大量临床与实验研究已证明黄连具有明显的降
血糖作用，其活性成分为小檗碱[3“]，因此，本实验采
用高效液相色谱法重点观察了黄连与生地的不同配
伍比例对黄连活性成分小檗碱溶出率的影响。实验
的结果表明：在所观察的黄连与生地的3个配伍比
万方数据
中草115ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第7期2006年7月·1023·
C
0 2 4 6 8 10 120 2 4 6 8 10 120 2 4 6 8 10 12
t|min
*一小檗碱
*一berberine
图1 盐酸小檗碱(A)、黄连(B)、生地(C)，合煎剂l：1、
1：4、1：8比例(D、E、F)的HPLC图
Fig．1HPLCChromatogramsfberberine(A)，
RhizomaCoptidis(B)，driedRadixRehmannia
(C)，andtheirdifferentcompatibilityrat o
of1：1，1：4，1：8(D，E，F)
例中，黄连与生地以1：8配伍组，其小檗碱溶出率
明显高于1：1、1：4配伍组，说明临床工作发现的
大剂量生地配伍黄连能明显增强黄连丸的降糖效应
确有其物质基础。至于大剂量生地能增加小檗碱溶
’
出率的化学基础可能与生地含有大量的脂肪酸、磷
酸有关，后者可以降低pH值，而小檗碱等生物碱的
溶出率会随着pH值的降低而升高。此外，黄连丸中
生地的活性成分梓醇在不同配伍比例中的变化，有
待进一步研究。
References：
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HPLC法测定清肌瘤胶囊中栊牛JLiIB
何秀英，章建民，何娟
(浙江省立同德医院，浙江杭州310007)
清肌瘤胶囊是由水蛭、莪术、三七、蜈蚣等8味
中药组成的复方制剂，具有活血破瘀、祛痰通络、消
积化瘕之功效，主要用于瘀痰互结胞宫、子宫肌瘤、
月经延期、经量较少、小腹疼痛。为控制该制剂质量，
本实验对其中莪术的栊牛儿酮进行测定，为该药的
质量控制提供了定量评价方法。
1仪器与试药
LC一10AT型高效液相色谱仪，SPD一10A型
紫外检测器(日本岛津)。栊牛儿酮对照品(中国药品
生物制品检定所，批号111665—200401)；乙腈为色
谱纯，水为超纯水，其他试剂均为分析纯。清肌瘤胶
囊与缺栊牛儿酮的阴性对照均由本院制剂室提供。
2方法与结果
2．1色谱条件：HypersilCN(250mm×4．6mm，
5肛m)；流动相：乙腈一水(40：60)；体积流量：1．0
mL／min；检测波长：210mm；进样量：20弘L。理论板
数按栊牛儿酮峰计算应不低于5000。
2．2对照品溶液的制备：精密称取栊牛儿酮对照品
19．0mg，置25mL量瓶中，用乙醇溶解并稀释至刻
度，摇匀，作为对照品贮备液(栊牛儿酮质量浓度为
760}tg／mL)。精密吸取贮备液1mL，置50mL量瓶
中，加流动相稀释至刻度，即得(栊牛儿酮的质量浓
度为15．2／19／mL)。
2．3供试品溶液的制备：取本品内容物3g，精密称
定，置50mL锥形瓶中，精密加入乙醇50mL，密
塞，称定质量，浸泡过夜，超声提取30min，取出，放
冷，用流动相补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤
液，即得。
2．4 阴性对照溶液的制备：缺莪术的阴性对照，按
供试品溶液的制备方法制备阴性对照溶液。
2．5 干扰试验：照上述色谱条件，精密吸取供试品
溶液、对照品溶液、阴性对照溶液各20肛L分别注入
液相色谱仪。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的
位置上，有相同保留时间的色谱峰，而阴性对照液在
收稿日期：2005—09—15 。
作者简介：何秀英(1960一)，女，浙江杭州人，副主任药师，主要从事医院药学工作。Tel：(0571)88082214—3507 万方数据
黄连与生地不同配伍比例对黄连丸中小檗碱的影响
作者： 夏旋， 杨明炜， 王文清， 方建国， 汪秋兰， 陆付耳
作者单位： 夏旋,杨明炜,陆付耳(华中科技大学同济医学院附属同济医院中西医结合研究所,湖北,武汉
,430030)， 王文清,方建国,汪秋兰(华中科技大学同济医学院附属同济医院药学部,湖北,武
汉,430030)
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2006,37(7)
参考文献(4条)
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本文链接：http://d.wanfangdata.com.cn/Periodical_zcy200607024.aspx