全 文 ：中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 46 卷 第 15 期 2015 年 8 月

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藿香正气滴丸 UFLC 指纹图谱研究
张永志 1, 2，佟 玲 2，李东翔 2，孟文婷 2，于治国 1，赵云丽 1*
1. 沈阳药科大学药学院，辽宁 沈阳 110016
2. 天津天士力集团研究院，天津 300402
摘 要：目的 建立藿香正气滴丸（HZDP）的超快速液相色谱（UFLC）指纹图谱，为该制剂的质量控制提供参考依据。
方法 采用 Waters Acquity UPLC BEH C18色谱柱（100 mm×2.1 mm，1.7 μm）；流动相为乙腈-0.2%甲酸水溶液，梯度洗脱：
0～6 min，10%～15%乙腈；6～9 min，15%～20%乙腈；9～14 min，20%～30%乙腈；14～19 min，30%～50%乙腈；19～
21 min，50%～65%乙腈；21～26 min，65%～75%乙腈；26～28 min，75%乙腈；28～30 min，75%～10%乙腈；30～32 min，
10%乙腈；体积流量为 0.4 mL/min；柱温 30 ℃；检测波长 300 nm。采用中药色谱指纹图谱相似度评价系统软件（2004A 版）
分析 11 批 HZDP 样品。结果 建立了 11 批 HZDP 的对照指纹图谱，确定了 18 个共有峰；其中 13 个归属到药材，6、7、9、
10、12 号共有峰来源于白芷，4、5、8 号共有峰来源于陈皮，1、2、11、13 号共有峰来源于厚朴，17 号共有峰来源于苍术，
并通过对照品对照法和超快速液相色谱-离子阱-飞行时间串联质谱仪（UFLC-IT-TOF/MS）鉴定了其化学成分。结论 该方
法操作简便、准确可靠、重复性好，可为 HZDP 的物质基础研究和质量控制提供参考。
关键词：藿香正气滴丸；指纹图谱；相似度；UFLC-IT-TOF/MS；质量控制；白芷；陈皮；厚朴；苍术
中图分类号：R286 文献标志码：A 文章编号：0253 - 2670(2015)15 - 2246 - 05
DOI: 10.7501/j.issn.0253-2670.2015.15.012
UFLC fingerprint of Huoxiang Zhengqi Dripping Pill
ZHANG Yong-zhi1, 2, TONG Ling2, LI Dong-xiang2, MENG Wen-ting2, YU Zhi-guo1, ZHAO Yun-li1
1. School of Pharmacy, Shenyang Pharmaceutical University, Shenyang 110016, China
2. Tasly R&D Institute, Tianjin Tasly Group Co., Ltd., Tianjin 300402, China
Abstract: Objective To establish the ultra-fast liquid chromatographic (UFLC) fingerprint of Huoxiang Zhengqi Dripping Pill
(HZDP) for evaluating the quality of the preparation. Methods The UFLC separation was achieved on an Waters Acquity UPLC BEH
C18 column (100 mm × 2.1 mm, 1.7 μm) with acetonitrile (A)-0.2% formic acid solution (B) as mobile phase at the flow rate of 0.4
mL/min by gradient elution of 0—6 min, 10% →15% A, 6—9 min, 15% →20% A, 9—14 min, 20% →30% A, 14—19 min, 30% →
50% A, 19—21 min, 50% →65% A, 21—26 min, 65% →75% A, 26—28 min, 75% A, 28—30 min, 75% →10% A, 30—32 min, 10%
A. The column temperature was 30 ℃. The UV detection wavelength was 300 nm. The similarity of 11 batches of HZDP was analyzed
with similarity evaluation system for chromatographic fingerprint of tradition Chinese medicine (Version 2004 A). Results
Fingerprints of 11 batches of HZDP were established and 18 common peaks were identified, 13 of which belonged to herbs and were
identified by the reference substance and UFLC-IT-TOF/MS. Among them, five common peaks (peaks 6, 7, 9, 10, and 12) came from
Angelicae Dahuricae Radix, three common peaks (peaks 4, 5, and 8) came from Citri Reticulatae Pericarpium, four common peaks
(peak 1, 2, 11, and13) came from Magnoliae Officmalis Cortex, and one common peak (peak 17) came from Atractlodis Rhizoma.
Conclusion The method is rapid, accurate, reliable, and reproducible. The established fingerprint could provide the references for the
study of substance basis and quality control of HZDP.
Key words: Huoxiang Zhengqi Dripping Pill; fingerprint; similarity; UFLC-IT-TOF/MS; quality control; Angelicae Dahuricae Radix;
Citri Reticulatae Pericarpium; Magnoliae Officmalis Cortex; Atractlodis Rhizoma

藿香正气滴丸（Huoxiang Zhengqi Dripping Pill，
HZDP）由苍术、陈皮、厚朴（姜制）、白芷、茯苓、
大腹皮、生半夏、甘草浸膏、广藿香油和紫苏叶油
10 种药物组成。具有解表化湿、理气和中的功效，
临床用于外感风寒、内伤湿滞、头痛昏重、脘腹胀
痛、呕吐泄泻[1]。临床应用起效快、口感舒适，对

收稿日期：2015-04-08
基金项目：国家“十二五”科技重大专项“重大新药创制”资助（2013zx09402202）
作者简介：张永志（1987—），男，硕士研究生，研究方向为现代药物分析。Tel: (022)26736585 E-mail: yongzhi4620@sina.com
*通信作者 赵云丽，副教授，硕士生导师。Tel: (024)23986295 E-mail: yunli76@163.com
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胃肠道无刺激，疗效较好。中药制剂的疗效是多味
药材多种成分整体作用的结果，临床用药强调整体
性，因此仅对其中的 1 种或几种指标性成分进行定
性、定量分析，无法整体表征中药制剂的化学成分，
也难以用于中药制剂的全面质量控制。指纹图谱技
术作为一种多组分复杂样品的有效控制方法，克服
了依赖部分指标成分鉴定中药制剂质量的局限性，
可以整体反映中药制剂的化学成分，可用于中药制
剂的一致性评价及整体质量控制 [2-6]。目前关于
HZDP 全方的研究报道较少[7]，为全面评价 HZDP
的质量，本实验采用超快速液相色谱（UFLC）法[8]
进行了 HZDP 的指纹图谱研究，并对其共有峰进行
了药材归属和鉴别分析，为 HZDP 的化学物质基础
研究和质量控制提供了参考。
1 仪器与材料
XS105 型电子分析天平，瑞士 Mettler Toledo
公司；KQ-500DE 型数控超声波清洗器，昆山市超
声仪器有限公司；超快速液相色谱-离子阱-飞行时
间串联质谱仪（UFLC-IT-TOF/MS），包括 CBM-20A
系统控制器，SIL-30AC 自动进样器，LC-20AB 二
元泵，CTO-30A 柱温箱，DGU-20A5 在线脱气机，
SPD-M20A PDA 检测器，LC-solution 3.6 色谱工作
站，日本岛津公司；R210 旋转蒸发仪，瑞士 Buchi
公司；Simplicity 超纯水系统，美国 Millipore 公司。
对照品欧前胡素（批号 110826-201214，质量
分数 99.5%）、异欧前胡素（批号 110827-201109，
质量分数 99.6%）、橙皮苷（批号 110721-201115，
质量分数 95.3%）、柚皮苷（批号 111610-201106，
质量分数 94.7%）、和厚朴酚（批号 110730-201313，
质量分数 99.1%）、厚朴酚（批号 110729-200412，
质量分数 100.0%）、苍术素（批号 11924-201303，
质量分数 99.5%）均购自中国食品药品检定研究院。
广霍香油、紫苏叶油、白芷、陈皮、厚朴、苍术、
半夏、茯苓、大腹皮和甘草 10 种药物由天津天士力
现代中药资源有限公司提供，广藿香油为唇形科植
物广藿香Pogostemon cablin (Blanco) Benth. 的干燥
地上部分经水蒸气蒸馏提取的挥发油；紫苏叶油为
唇形科植物紫苏 Perilla frutescens (L.) Britt. 的干燥
叶（或带嫩枝叶）经水蒸气蒸馏提取的挥发油；白
芷是伞形科植物白芷 Angelica dahurica (Fisch. ex
Hoffm.) Benth. et Hook. f. 的干燥根；陈皮为芸香科
植物橘 Citrus reticulata Blanco 的干燥成熟果皮；厚
朴为木兰科植物厚朴 Magnolia officinalis Rehd. et
Wils. 的干燥干皮、根皮及枝皮；苍术为菊科植物
茅苍术 Atractylodes lancea (Thunb.) DC. 的干燥根
茎；半夏为天南科植物半夏 Pinellia ternata (Thunb.)
Breit. 的干燥块茎；茯苓为多孔菌科真菌茯苓 Poria
cocos (Schw.) Wolf 的干燥菌核；大腹皮为棕榈科植
物槟榔 Areca catechu L. 的干燥果皮；甘草为豆科
植物甘草Glycyrrhiza uralensis Fisch. 的干燥根和根
茎；均由沈阳药科大学药学院于治国教授鉴定为正
品。11 批 HZDP（编号 S1～S11），批号分别为
2014C08、131128、131201、131202、131203、131204、
131205、131206、131207、131208、131209，由天
津天士力制药股份有限公司提供。
甲醇、乙腈，色谱级，Merck 公司；甲酸、冰
乙酸、磷酸，色谱纯，天津康科德有限公司；水为
纯化水。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱为 Acquity UPLC BEH C18 色谱柱（100
mm×2.1 mm，1.7 μm）；流动相为乙腈-0.2%甲酸水
溶液，梯度洗脱：0～6 min，10%～15%乙腈；6～9
min，15%～20%乙腈；9～14 min，20%～30%乙腈；
14～19 min，30%～50%乙腈；19～21 min，50%～
65%乙腈；21～26 min，65%～75%乙腈；26～28
min，75%乙腈；28～30 min，75%～10%乙腈；30～
32 min，10%乙腈；体积流量为 0.4 mL/min；检测
波长 300 nm；柱温 30 ℃；进样量 2 μL。
2.2 质谱条件
电喷雾电离源（ESI+和 ESI−），雾化气（N2）
体积流量 1.5 L/min；干燥气压力 0.1 MPa；毛细管
电压：正离子模式 4.5 kV、负离子模式 3.5 kV；曲
形脱溶剂管（CDL）温度：200 ℃；加热模块温度：
200 ℃；检测器电压：1.65 kV；IT 真空度：0.018 Pa；
TOF 真空度：0.19 mPa；离子累计时间 30 ms；扫
描质量范围 m/z 100～1 000；三氟醋酸钠溶液为内
标矫正。
2.3 溶液制备
2.3.1 混合对照品溶液的制备 分别精密称取欧前
胡素、异欧前胡素、橙皮苷、柚皮苷、和厚朴酚、
厚朴酚、苍术素对照品适量，将其转移至 20 mL 量
瓶中，用甲醇溶解并定量稀释，制成质量浓度分别
为 21.5、6.0、158.0、103.0、106.0、77.0、11.5 μg/mL
混合对照品溶液，过 0.22 μm 微孔滤膜，取续滤液
作为混合对照品溶液。
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2.3.2 供试品溶液的制备 取 HZDP 约 1.0 g，精密
称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇 20 mL，称
定质量，超声（500 W，40 kHz）处理 20 min，放
至室温后，用甲醇补足减失的质量，0.22 μm 微孔
滤膜滤过，取续滤液，即得指纹图谱供试品溶液。
滤液置−20 ℃冰箱内冷冻 12 h 后，析出滴丸辅料聚
乙二醇（PEG），10 000 r/min 离心 10 min，上清液
使用 Microcon YM-3 离心超滤管 10 000 r/min 离心
30 min，超滤除去辅料 PEG，取超滤液，即得质谱
鉴定供试品溶液。
2.3.3 各药材供试品溶液的制备 取苍术、陈皮、
厚朴、白芷、茯苓、大腹皮、生半夏、甘草药材粉
末及广藿香油、紫苏叶油各约 1.0 g，精密称定，置
具塞锥形瓶中，精密加入甲醇 20 mL，称定质量，
超声（500 W，40 kHz）处理 20 min，放至室温后，
用甲醇补足减失的质量，0.22 μm 微孔滤膜滤过，
取续滤液，即得药材供试品溶液。
2.4 方法学考察
2.4.1 精密度试验 精密称定 HZDP（批号
2014C08）约 1.0 g，按“2.3.2”项下方法制备供试
品溶液，按“2.1”项下色谱条件连续进样 5 次，记
录色谱图，以 5 号峰（橙皮苷）为参照峰，考察各
共有峰的相对保留时间和相对峰面积的 RSD。结果
各共有峰相对保留时间的 RSD 均小于 0.90%，相对
峰面积的 RSD 均小于 4.0%，表明仪器精密度良好。
2.4.2 重复性试验 精密称定 HZDP（批号
2014C08）约 1.0 g，按“2.3.2”项下方法制备供试
品溶液 5 份，按“2.1”项下色谱条件进样分析，以
5 号峰（橙皮苷）为参照峰，考察各共有峰的相对
保留时间和相对峰面积的 RSD。结果各共有峰相对
保留时间的 RSD 均小于 0.62%，相对峰面积的 RSD
均小于 4.4%，表明方法的重复性良好。
2.4.3 稳定性试验 精密称定 HZDP（批号
2014C08）约 1.0 g，按“2.3.2”项下方法制备供试
品溶液，分别于 0、2、4、8、12、24 h 进样，以 5
号峰（橙皮苷）为参照峰，考察各共有峰的相对保
留时间和相对峰面积的 RSD。结果各共有峰相对保
留时间的 RSD 均小于 2.0%，相对峰面积的 RSD 均
小于 4.8%，表明 HZDP 供试品溶液在 24 h 内稳定。
2.5 指纹图谱的建立与共有峰的确定
按“2.3.2”项下方法分别制备 11 批 HZDP 指
纹图谱供试品溶液，按“2.1”项色谱条件测定，记
录色谱图。根据 11 批 HZDP UFLC 指纹图谱的检测
结果，采用中药色谱指纹图谱相似度评价系统软件
（2004A 版），以批号为 2014C08 的图谱作为参照图
谱，采用中位数法，时间窗宽度 0.10，多点校正生
成 HZDP 共有模式的对照指纹图谱，见图 1。分析
比较 11 批 HZDP UFLC 色谱图，共标定了 18 个共
有峰，共有峰的选取原则为分离度好、峰形明显、
重复性稳定性好。5 号峰（橙皮苷）与相邻峰分离
较好、其量高且相对稳定，因此将 5 号峰作为参照
峰（S 峰）。
2.6 指纹图谱的相似度评价
采用中药色谱指纹图谱相似度评价系统软件
（2004A 版），计算 11 批 HZDP 指纹图谱与对照指
纹图谱的相似度，结果 S1～S11 的相似度分别为
0.981、0.998、0.998、0.999、1.000、0.999、0.999、
1.000、0.994、0.999、1.000。结果表明 11 批 HZDP
的相似度均大于 0.98，相似度良好，说明 HZDP 不
同批次之间化学成分稳定，质量一致性较好。
2.7 指纹图谱共有峰归属
分别精密吸取供试品溶液及单味药材溶液，注
入高效液相色谱仪，按“2.1”项色谱条件测定，记
录色谱图。根据色谱峰的保留时间、紫外光谱信息，
对指纹图谱的特征峰进行药材归属。通过 HZDP 全
方与单味药材对比分析，结果表明在 18 个特征峰中
13 个归属到药材，峰 6、7、9、10、12 来自白芷；
峰 4、5、8 来自陈皮；峰 1、2、11、13 来自厚朴；
峰 17 来自苍术，结果见图 2。
2.8 共有峰的鉴定
2.8.1 对照品对照鉴定 利用对照品对各共有峰的
成分进行指认，分别精密吸取供试品溶液、混合对
照品溶液各 2 μL，注入 UFLC，记录色谱图，见图
1。通过保留时间和紫外光谱信息的比较，对各共有
峰进行指认。共指认了 7 个色谱峰，分别为 4 号峰
（柚皮苷）、5 号峰（橙皮苷）、9 号峰（欧前胡素）、
11 号峰（和厚朴酚）、12 号峰（异欧前胡素）、13
号峰（厚朴酚）、17 号峰（苍术素）。
2.8.2 UFLC-IT-TOF/MS 鉴定 为进一步阐明
HZDP 的化学物质成分，采用 UFLC-IT-TOF/MS 技
术对各共有峰进行指认。采用正、负离子模式同时
扫描，通过质谱一级扫描得到的精确相对分子质量
和二级质谱碎片信息，结合紫外光谱信息以及相关
文献报道[9-15]，鉴定了 HZDP 指纹图谱中 6 个色谱
峰的化学成分，结果见表 1。综合上述对照品的指
认结果，18 个共有峰中 13 个峰已确定了成分。
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4-柚皮苷 5-橙皮苷 9-欧前胡素 11-和厚朴酚 12-异欧前胡素 13-厚朴酚 17-苍术素
4-naringin 5-hesperidin 9-imperatorin 11-honokiol 12-isoimperatorin 13-magnolol 17-atrctylodine

图 1 混合对照品 (A) 和 11 批 HZDP (B) 的 UFLC 指纹图谱以及对照指纹图谱 (R)
Fig. 1 UFLC fingerprints of mixture reference substances (A), 11 batches of HZDP (B), and reference fingerprint (R)



图 2 HZDP 与各单味药材 UFLC 图
Fig. 2 UFLC of HZDP and its single herb medicines

3 讨论
3.1 提取条件的优化
提取溶剂考察了甲醇、50%甲醇、水、乙醇、
50%乙醇，结果甲醇为溶剂提取效率最高；提取方
式分别考察了超声和回流，2 种方式提取率相近，
选用提取简便的超声提取方式；加甲醇超声提取 1
次 HZDP 就能够溶解，因此未考察提取次数；同时
对甲醇溶液用量 10、20、40 mL 以及超声时间 10、
20、30、40 min 进行考察，最终确定采用 20 mL 甲
醇超声 20 min 作为提取条件。
3.2 色谱条件的优化
分别考察了甲醇-水、乙腈-水 2 种流动相系统，
1 2 3
4
5
6
7
8
9
10 12
11 13
1415
16
17
18 R
S11
S10
S9
S8
S7
S6
S5
S4
S3
S2
S1
4
5
9
11 13
12
17
A
B
0 4.35 8.70 13.05 17.39 21.74 26.09 30.44
t/min
4 1 2 3
5
6 7 8 910
11
12
13
14151617 18
5
4
6 7
9 11
13
1012
17
1
甘草
苍术
茯苓
半夏
大腹皮
陈皮
厚朴
白芷
紫苏叶油
广藿香油
HZDP
0 5 10 15 20 25 30
t/min
8
2
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表 1 HZDP 指纹图谱化学成分质谱归属
Table 1 MS attribution of chemical components in UFLC fingerprint of HZDP
峰号 t/min 分子式 选定离子 实际值 (m/z) 理论值 (m/z) 误差 鉴定化合物
1 5.41 C19H23NO4 [M＋H]+ 330.169 0 330.170 0 −3.0×10−6 牛心果碱
2 5.91 C29H36O15 [M－H]− 623.198 0 623.198 1 −0.2×10−6 毛蕊花糖苷
6 12.94 C16H16O6 [M＋H]+ 305.101 5 305.102 0 −1.6×10−6 水合氧化前胡内酯
7 13.54 C17H16O6 [M＋H]+ 317.101 2 317.102 0 −2.5×10−6 白当归脑
8 14.03 C28H34O14 [M＋H]+ 595.203 0 595.202 1 1.5×10−6 枸橘苷
10 20.94 C12H8O5 [M＋H]+ 233.043 3 233.044 4 −4.7×10−6 8-甲氧基异欧前胡内酯

乙腈-水系统色谱分离效果较好；进一步考察甲酸、
乙酸和磷酸对峰形的影响，发现加入 0.2%甲酸后，
峰形较好，分离良好。由于 HZDP 所含成分复杂，
极性相差较大，采用梯度洗脱获得较理想的分离效
果。采用 PDA 检测器对样品在 200～400 nm 波长
范围内扫描，综合比较发现，在 300 nm 波长下检
测出峰多，大部分色谱峰达到基线分离，且各主要
特征峰峰吸收强度较大，故选定 300 nm 作为检测
波长。
实验中考察了 3 种不同型号的色谱柱：
Phenomenex kinetex C18 色谱柱（100 mm×2.1 mm，
1.7 μm）、Dikma Endeavorsil C18 色谱柱（150 mm×
2.1 mm，1.8 μm）和 Acquity UPLC BEH C18 色谱柱
（100 mm×2.1 mm，1.7 μm），结果表明 Acquity
UPLC BEH C18 色谱柱的柱效较高，色谱峰峰形对
称，分离效果好，因此选用该色谱柱。
实验分别考察了 25、30、35 ℃不同柱温对分
离效果的影响，结果表明柱温对峰的分离效果影响
不大，但随柱温升高，出峰保留时间稍微提前。为
方便常规实验条件，选用 30 ℃柱温。
3.3 共有峰归属
HZDP 的生产工艺中，苍术、陈皮、厚朴、白
芷以醇提液的形式进入复方，茯苓、生半夏、大腹
皮以水提液的形式进入复方，甘草浸膏、广藿香油
和紫苏叶油则是直接入药。本实验以甲醇为提取溶
剂，对比分析了 HZDP 全方与单味药材的紫外吸收
图，18 个共有峰中 13 个归属到以醇提液形式进入
复方的苍术、陈皮、厚朴、白芷药材；而其中的 3、
14、15、16、18 号 5 个共有峰，既没有归属到药材，
也没有鉴定出成分，需结合生产工艺进一步研究。
3.4 小结
本实验采用 UFLC 法建立了 HZDP 的指纹图
谱，标定了 18 个共有色谱峰，其中 13 个归属到药
材，并明确了其化学成分。通过相似度分析评价了
11 批次的 HZDP 的相似度，结果均在 0.98 以上，
表明 HZDP 生产工艺稳定，质量一致性较好。
参考文献
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