全 文 ：中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 44 卷 第 2 期 2013 年 1 月

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UPLC 法同时测定金欣口服液中 8 种指标成分
单进军 1，杜丽娜 1，徐建亚 1，徐 珊 1，狄留庆 2，汪受传 1*
1. 南京中医药大学第一临床医学院，江苏 南京 210046
2. 南京中医药大学药学院，江苏 南京 210046
摘 要：目的 建立 UPLC 法同时测定金欣口服液中芥子碱硫氰酸盐、虎杖苷、野黄芩苷、白藜芦醇、黄芩苷、大黄素-8-O-β-
葡萄糖苷、黄芩素、汉黄芩素 8 种指标成分的量。方法 采用 UPLC 法，Acquity UPLC BEH C18色谱柱（100 mm×2.1 mm，
1.7 μm），乙腈-0.1%甲酸水溶液为流动相，体积流量 0.4 mL/min，梯度洗脱，检测波长 280 nm，柱温 35 ℃；分别对线性关
系、精密度、重复性、稳定性及加样回收率进行考察。结果 被测定的 8 种指标成分分别在选定的范围内线性关系良好，平
均加样回收率 99%～102%，RSD 均小于 3.1%。结论 本方法操作简便，测定结果准确可靠，可用于金欣口服液的质量控制。
关键词：金欣口服液；多指标成分；UPLC；白藜芦醇；黄芩苷；虎杖苷
中图分类号：R286.02 文献标志码：A 文章编号：0253 - 2670(2013)02 - 0183 - 03
DOI: 10.7501/j.issn.0253-2670.2013.02.013
Simultaneous determination of eight components in Jinxin Oral Liquid by UPLC
SHAN Jin-jun1, DU Li-na1, XU Jian-ya1, XU Shan1, DI Liu-qing2, WANG Shou-chuan1
1. The First Medicine College, Nanjing University of Chinese Medicine, Nanjing 210046, China
2. College of Pharmacy, Nanjing University of Chinese Medicine, Nanjing 210046, China
Key words: Jinxin Oral Liquid; multi-index composition; UPLC; resveratrol; baicalin; polydatin

金欣口服液（原名清肺口服液）是由黄芩、虎
杖、杏仁、葶苈子等药物组成，根据儿科用药特殊
性研制而成的中药 6.1 类新药（已完成临床研究），
具有宣肺开闭、清热解毒、化痰止咳之功效。临床
和实验研究均证实金欣口服液治疗小儿病毒性肺炎
疗效肯定，具有抗病毒、调整免疫功能、抗炎、解
热、止咳、化痰、平喘等作用[1-3]。
为进一步提高该制剂的质量标准，本实验采用
梯度洗脱超高效液相色谱法（UPLC）同时测定金
欣口服液中芥子碱硫氰酸盐、虎杖苷、野黄芩苷、
白藜芦醇、黄芩苷、大黄素-8-O-β-葡萄糖苷、黄芩
素、汉黄芩素 8 种指标成分的量。实验结果表明，
本法简便、快捷、灵敏、准确，可用于该制剂的质
量控制。
1 仪器与材料
超高液相色谱系统（Acquity UPLC，Waters，
包括二元梯度泵、真空脱气机、自动进样器、柱温
箱、二极管阵列检测器、Empower2 工作站）；Anke
TGL—16G 高速离心机（上海安亭科学仪器厂）；
BP211D 型电子分析天平（德国 Satrorius 公司）。对
照品芥子碱硫氰酸盐（111702-200501）、黄芩苷
（110842-200605）、汉黄芩素（111514-200403）购
于中国食品药品检定研究院，对照品黄芩素、野黄
芩苷、虎杖苷、白藜芦醇、大黄素-8-O-β-葡萄糖苷
均购自四川省维克奇生物科技有限公司，HPLC 检
测质量分数均大于 98%；金欣口服液，按照新药制
备工艺自制[4]（批号 20110318、20110615、20110929）；
乙腈、甲酸（色谱纯），甲醇（分析纯），水（超纯水）。

收稿日期：2012-05-04
基金项目：国家自然科学基金资助项目（81072840）；高等学校博士学科点专项科研基金（20093237110006）；江苏省自然科学基金（BK2010560）；
江苏省中医药科技项目（LZ11183）
作者简介：单进军（1979—），男，江苏大丰人，博士，助理研究员，研究方向为中医临床有效方药的应用开发及基础研究。
Tel: (025)85811146 E-mail: shanjinjun@njutcm.edu.cn
*通信作者 汪受传 Tel: (025)86798182 E-mail: wscnj@126.com
网络出版时间：2012-12-18 网络出版地址：http://www.cnki.net/kcms/detail/12.1108.R.20121218.1304.009.html
中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 44 卷 第 2 期 2013 年 1 月

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2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱为 Acquity UPLC BEH C18柱（100 mm×
2.1 mm，1.7 μm）；流动相为乙腈（A）-0.1%甲酸水
溶液（B），梯度洗脱：0～0.5 min，95% B；0.5～
8.5 min，89%～70% B；8.5～9 min，70%～60% B；
9～10.5 min，60%～50% B；10.5～12 min，50%～
20% B；体积流量 0.4 mL/min；检测波长 280 nm；
柱温 35 ℃；进样量 2 μL。
2.2 溶液的制备
2.2.1 混合对照品溶液的制备 精密称取芥子碱硫
氰酸盐 4.00 mg、虎杖苷 2.95 mg、野黄芩苷 3.48 mg、
白藜芦醇 4.85 mg、黄芩苷 5.64 mg、大黄素-8-O-β-
葡萄糖苷 2.00 mg、黄芩素 3.10 mg、汉黄芩素 2.08
mg 适量，分别置 5 mL 量瓶中，加甲醇溶解并稀释
至刻度，得各个对照品储备液，备用。再精密吸取
各对照品储备液适量置 10 mL 量瓶中，流动相稀释
至刻度，得含芥子碱硫氰酸盐 80.0 mg/L、虎杖苷
59.0 mg/L、野黄芩苷 69.6 mg/L、白藜芦醇 48.5
mg/L、黄芩苷 112.8 mg/L、大黄素-8-O-β-葡萄糖苷
20.0 mg/L、黄芩素 31.0 mg/L、汉黄芩素 10.4 mg/L
的混合对照品储备液，备用。
2.2.2 供试品溶液的制备 精密吸取金欣口服液
1 mL，置 25 mL 量瓶中，加蒸馏水稀释至刻度，摇
匀，微孔滤膜（0.22 μm）滤过，备用。
2.3 系统适用性试验
取供试品溶液，在“2.1”项下色谱条件进样，
结果 8 种被测定成分均能达到基线分离，与相邻色谱
峰的分离度均大于 1.5，以各成分色谱峰计算理论塔
板数均超过 60 000，峰形较好。UPLC 色谱图见图 1。




1-芥子碱硫氰酸盐 2-虎杖苷 3-野黄芩苷 4-白藜芦醇 5-黄芩苷 6-大黄素-8-O-β-葡萄糖苷 7-黄芩素 8-汉黄芩素
1-sinapine thiocyanate 2-polydatin 3-scutellarin 4-resveratrol 5-baicalin 6-emodin-8-O-β-glucoside 7-baicalein 8-wogonin

图 1 8 种混合对照品 (A) 与金欣口服液 (B) 的 UPLC 图
Fig. 1 UPLC chromatograms of eight mixed reference substances (A) and Jinxin Oral Liquid (B)

2.4 线性关系考察
精密量取混合对照品溶液 0.10、0.25、0.5、1.0、
2.5 mL 于 10 mL 量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇
匀，与混合对照品储备液一起得系列混合对照品溶
液。分别吸取上述溶液各 2 μL，在“2.1”项色谱条
件下进样，记录色谱峰峰面积，以峰面积为纵坐标
（Y），对照品质量浓度为横坐标（X）进行线性回归，
得回归方程：芥子碱硫氰酸盐 Y＝3 328.2 X－
978.14，r＝0.999 1，线性范围 0.8～80.0 mg/L；虎
杖苷 Y＝7 706.1 X－895.1，r＝0.999 2，线性范围
0.59～59.0 mg/L；野黄芩苷 Y＝2 121.2 X－334.78，
r＝0.999 9，线性范围 0.696～69.6 mg/L；白藜芦醇
Y＝20 810 X－10 787，r＝0.999 1，线性范围 0.485～
48.5 mg/L；黄芩苷 Y＝21 308 X－6 088.4，r＝0.999 9，
线性范围 1.128～112.8 mg/L；大黄素-8-O-β-葡萄糖
苷 Y＝15 258 X－703.6，r＝0.999 9，线性范围 0.2～
20.0 mg/L；黄芩素 Y＝23 223 X－9 421.4，r＝0.999 4，
线性范围 0.31～31.0 mg/L；汉黄芩素 Y＝30 587 X－
1 625.6，r＝0.999 9，线性范围 0.104～10.4 mg/L。
2.5 精密度试验
取一定质量浓度的混合对照品溶液（含芥子碱
硫氰酸盐 8.0 mg/L、虎杖苷 5.9 mg/L、野黄芩苷 6.96
mg/L、白藜芦醇 4.85 mg/L、黄芩苷 11.28 mg/L、大
黄素-8-O-β-葡萄糖苷 2.0 mg/L、黄芩素 3.1 mg/L、
汉黄芩素 1.04 mg/L），在“2.1”项色谱条件下连续
进样 6 次，记录色谱峰面积，计算芥子碱硫氰酸盐、
虎杖苷、野黄芩苷、白藜芦醇、黄芩苷、大黄素-8-
O-β-葡萄糖苷、黄芩素、汉黄芩素峰面积的 RSD 分
别为 1.21%、0.89%、2.03%、1.84%、1.67%、2.84%、
2.81%、2.11%，表明精密度良好。
1 1
2
3
4
5
6
7 8
2
3
4
5
6
7
8
A B
0 2 4 6 8 10 12 0 2 4 6 8 10 12
t / min
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2.6 稳定性试验
取同一份供试品溶液，分别在 0、2、4、8、12、
24 h 按“2.1”色谱条件测定，记录色谱峰面积。结
果芥子碱硫氰酸盐、虎杖苷、野黄芩苷、白藜芦醇、
黄芩苷、大黄素-8-O-β-葡萄糖苷、黄芩素、汉黄芩素
峰面积的 RSD 分别为 1.12%、2.45%、1.74%、1.93%、
2.81%、2.02%、1.51%、2.62%，说明供试品溶液中
的 8 种指标成分在室温条件下 24 h 内稳定。
2.7 重复性试验
取同一批（批号 20110615）样品 6 份，按“2.2.2”
项下方法操作，平行制备供试品溶液 6 份，在“2.1”
项色谱条件下进样，记录色谱峰面积，结果芥子碱
硫氰酸盐、虎杖苷、野黄芩苷、白藜芦醇、黄芩苷、
大黄素-8-O-β-葡萄糖苷、黄芩素、汉黄芩素质量浓
度的 RSD 分别为 2.81%、0.40%、1.14%、1.27%、
0.53%、0.82%、1.68%、0.52%。
2.8 加样回收率试验
取同一批号已测定的金欣口服液 6 份（批号
20110615），每份约 0.5 mL，精密吸取，分别精密
加入对照品溶液适量，按“2.2.2”项下方法制备供
试品溶液，在“2.1”项色谱条件下进样，记录色谱
峰峰面积，计算回收率。结果芥子碱硫氰酸盐、虎
杖苷、野黄芩苷、白藜芦醇、黄芩苷、大黄素-8-O-β-
葡萄糖苷、黄芩素、汉黄芩素的平均回收率分别为
100.03%、100.58%、101.12%、99.70%、101.49%、
101.26%、100.59%、100.22%，RSD 分别为 1.80%、
1.57%、1.98%、2.33%、1.68%、1.63%、2.71%、3.03%。
2.9 样品测定
取 3 批金欣口服液，按“2.2.2”项下方法制备
供试品溶液，每批平行 3 份，在“2.1”项色谱条件
下进样，记录色谱峰面积，每份进样 2 次，计算每
批样品中 8 种指标成分的质量浓度，结果见表 1。

表 1 金欣口服液中 8 种指标成分的测定结果 (n＝3)
Table 1 Determination of eight index components in Jinxin Oral Liquid (n＝3)
质量浓度 / (mg·L−1) 批 号
芥子碱硫氰酸盐 虎杖苷 野黄芩苷 白藜芦醇 黄芩苷 大黄素-8-O-β-葡萄糖苷 黄芩素 汉黄芩素
20110318 247.8 1 193.3 1 201.2 22.8 2 560.2 488.0 51.2 46.2
20110615 245.4 1 192.3 1 197.8 22.8 2 551.2 485.3 51.5 46.1
20110929 235.3 1 188.7 1 176.4 23.1 2 572.4 493.0 50.4 46.2

3 讨论
本实验建立了 UPLC 法同时测定金欣口服液中
8 种指标成分的方法，由于采用 1.7 μm 的 C18 填料
色谱柱，因此具有较高的通量，而且也具有良好的
准确度、精密度和可靠性，方法简便，分析时间短，
尤其适用于中药复方多指标成分的定量检测[5]。
应用同一测定方法检测多个指标成分时，分析
方法研究过程中检测波长的选择以及流动相的确定
非常关键。本实验分别对 8 种指标成分进行紫外全
波长扫描，确定了各成分的最大吸收波长，芥子碱
硫氰酸盐326 nm，虎杖苷306 nm，野黄芩苷335 nm，
白藜芦醇、黄芩苷、黄芩素和汉黄芩素 280 nm，大
黄素-8-O-β-葡萄糖苷 420 nm。经过多次实验，发现
在 280 nm 检测波长下，8 种指标成分灵敏度较高，
峰形较好。在此基础上，考察了甲醇-水、乙腈-水、
甲醇-0.1%甲酸水溶液、乙腈-0.1%甲酸水溶液、乙
腈-0.1%磷酸水溶液等流动相系统，结果显示，采用
乙腈-0.1%甲酸水溶液系统为流动相时，色谱图基线
平稳，金欣口服液中 8 种指标成分分离效果较好。
参考文献
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