全 文 ：中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 47卷 第 14期 2016年 7月

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HPLC-MS/MS法同时测定参乌健脑胶囊中 8种成分
张 毅 1，周 慧 2*
1. 天津市环湖医院 药剂科，天津 300060
2. 天津市临床药物关键技术重点实验室，天津医科大学药学院，天津 300070
摘 要：目的 建立高效液相色谱-串联质谱（HPLC-MS/MS）同时测定参乌健脑胶囊（SJC）中 8种成分（葛根素、丹参酮
IIA、二苯乙烯苷、芍药苷、人参皂苷 Re、人参皂苷 Rg1、毛蕊异黄酮苷、黄芩苷）的定量方法。方法 选用 YMC-Triart C18
色谱柱，以甲醇-0.2%甲酸水溶液为流动相，梯度洗脱，体积流量为 0.6 mL/min，柱温 40 ℃。质谱条件：ESI源，采用多反
应监测模式（MRM），以定量离子对峰面积进行定量。结果 SJC 中葛根素、丹参酮 IIA、二苯乙烯苷、芍药苷、人参皂苷
Re、人参皂苷 Rg1、毛蕊异黄酮苷、黄芩苷分别在 20.31～20 310、25.66～25 660、20.45～20 450、50.79～50 790、50.57～
50 570、50.38～50 380、10.32～10 320、25.74～25 740 ng/mL内线性关系良好（r≥0.999 0）；精密度良好，重复性良好，RSD
均小于 2.0%；在室温条件下 24 h内稳定；加样回收率为 97.98%～102.48%，RSD小于 1.6%。所测 8种成分在 6批样品中的
质量分数依次为葛根素 1.843～1.860 mg/g、丹参酮 IIA 1.618～1.629 mg/g、二苯乙烯苷 2.116～2.129 mg/g、芍药苷 2.537～2.547
mg/g、人参皂苷 Re 0.034～0.041 mg/g、人参皂苷 Rg1 0.048～0.055 mg/g、毛蕊异黄酮苷 0.551～0.564 mg/g和黄芩苷 2.333～
2.346 mg/g。结论 该方法快速、简便、重复性好，可用于同时测定 SJC中多种成分。
关键词：参乌健脑胶囊；HPLC-MS/MS；多反应监测模式；葛根素；丹参酮 IIA；二苯乙烯苷；芍药苷；人参皂苷 Re；人参
皂苷 Rg1；毛蕊异黄酮苷；黄芩苷
中图分类号：R286.02 文献标志码：A 文章编号：0253 - 2670(2016)14 - 2470- 05
DOI: 10.7501/j.issn.0253-2670.2016.14.013
Simultaneous determination of eight components in Shenwu Jiannao Capsules by
HPLC-MS/MS
ZHANG Yi1, ZHOU Hui2
1. Department of Pharmacy, Tianjin Huanhu Hospital, Tianjin 300060, China
2. Tianjin Key Laboratory of Clinical Medicine, School of Pharmacy, Tianjin Medical Unversity, Tianjin 300070, China
Abstract: Objective To develop a high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry (HPLC-MS/MS) method for
the simultaneous determination of eight components (puerarin, tanshinone IIA, stibene glucoside, paeoniflorin, ginsenoside Re,
ginsenoside Rg1, calycosin-7-glucoside, and baicalin) in Shenwu Jiannao Capsules (SJC). Methods Chromatographic column:
YMC-Triart C18, mobile phase: methanol-water (including 0.2% formic acid), and gradient elution, flow rate: 0.6 mL/min, column
temperature: 40 ℃. MS condition: electrospray ionization (ESI) and multiple reaction monitoring (MRM) were adopted, the detected
peak areas of ion pairs were used for quantitative determination. Results There was a good linearity between the absorption peak area
and the concentration for puerarin, tanshinone IIA, stibene glucoside, paeoniflorin, ginsenoside Re, ginsenoside Rg1, calycosin-7-
glucoside, and baicalin in the ranges of 20.31—20 310, 25.66—25 660, 20.45—20 450, 50.79—50 790, 50.57—50 570, 50.38—50 380,
10.32—10 320, and 25.74—25 740 ng/mL, respectively (r ≥ 0.999 0). The precision was good and RSD was less than 2.0%. The
repeatability was good and RSD was less than 2.0%. The stability was good in 24 h. The average recoveries were ranged from 97.98%
to 102.48% (RSD ≤ 1.6%). The contents of puerarin, tanshinone IIA, stibene glucoside, paeoniflorin, ginsenoside Re, ginsenoside Rg1,
calycosin-7-glucoside, and baicalin in six batches of samples were in the ranges of 1.843—1.860, 1.618—1.629, 2.116—2.129, 2.537—
2.547, 0.034—0.041, 0.048—0.055, 0.551—0.564, and 2.333—2.346 mg/g, respectively. Conclusion The method is rapid, simple,
repeatable, and can be used to determine the multi components in different batches of SJC simultaneously.

收稿日期：2015-11-25
作者简介：张 毅，男，副主任药师，主要研究神经内科用药的合理使用。Tel: 13920398707 E-mail: 103841540@qq.com
*通信作者 周 慧。E-mail: zhouhui@tmu.edu.cn
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Key words: Shenwu Jiannao Capsules; HPLC-MS/MS; multiple reaction monitoring; puerarin; tanshinone IIA; stibene glucoside;
paeoniflorin; ginsenoside Re; ginsenoside Rg1; calycosin-7-glucoside; baicalin

参乌健脑胶囊（SJC）是由人参、制何首乌、
白芍、丹参等 22味药材提取制成的复方制剂，又名
抗脑衰胶囊，收载于《中国药典》2015年版，具有
补肾填精、益气养血、强身健脑等功能，用于肾气
不足、肝气血虚所引致的精神疲惫、失眠多梦、头
晕目眩、体乏无力、记忆力减退[1]。其可显著对抗
人 β 淀粉样蛋白（Aβ25-35）对神经元的神经毒性作
用，提高细胞存活率[2]。临床上可用于治疗老年慢
性失眠[3]。《中国药典》2015 年版以葛根素和二苯
乙烯苷为指标对其进行定量测定。文献中多以葛根
素[4-6]为指标测定其量，此外还以二苯乙烯苷[6]、丹
参酮 IIA[7]、芍药苷、黄芩苷[8]、人参皂苷[9]、大黄
素[10]为指标进行测定，王凤玲等[11-12]通过 HPLC指
纹图谱的方法对其进行质量控制。本研究采用高效
液相色谱-串联质谱（HPLC-MS/MS）法同时测定
SJC中的葛根素、丹参酮 IIA、二苯乙烯苷、芍药苷、
人参皂苷 Re、人参皂苷 Rg1、毛蕊异黄酮苷和黄芩
苷 8种有效成分的质量分数，此法专属性好、灵敏
度高、快速高效，优于传统的 HPLC法，为 SJC的
质量控制提供了一定参考。
1 仪器与材料
LCQ液相色谱质谱联用仪：配有电喷雾离子源
（ESI）及 Xcalibur1.2数据处理系统，美国 Finnigan
公司；岛津 AUW-D 型电子分析天平，日本岛津公
司；KQ5200E智能超声波清洗器，昆山市超声仪器
有限公司。对照品葛根素（批号 110752-201514，
质量分数 95.5%）、丹参酮 IIA（批号 110766-201520，
质量分数 98.9%）、芍药苷（批号 110736-201438，
质量分数 96.4%）、二苯乙烯苷（批号 110844-
200003，质量分数 96.4%）、人参皂苷 Re（批号
110754-201525，质量分数 92.3%）、毛蕊异黄酮苷
（批号 111530-201309，质量分数 92.9%）、人参皂苷
Rg1（批号 110703-201529，质量分数 95.0%）、黄芩
苷（批号 110715-201318，质量分数 93.3%）均购于
中国食品药品检定研究院；SJC（规格：每粒胶囊
质量 0.3 g），吉林天药本草堂制药有限公司，批号
20150302、 20150303、 20150304、 20150407、
20150408、20150409；河北百善药业有限公司，批
号 20160111、20160112、20160113。
甲醇为色谱纯，天津康科德科技有限公司。其
余溶剂均为分析纯，水为超纯水。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱为 YMC-Triart C18 柱（250 mm×4.6
mm，5 μm）；柱温 40 ℃；流动相为甲醇-0.2%甲酸
水溶液，梯度洗脱：0～5 min，10%甲醇；5～15 min，
10%～40%甲醇；15～35 min，40%～70%甲醇；35～
40 min，70%～90%甲醇；40～50 min，90%～10%
甲醇；体积流量 0.6 mL/min；进样量 10 μL。
2.2 质谱条件
LCQ型离子阱质谱仪，电喷雾电离源（ESI）；
多反应离子监测（MRM）模式，正负离子切换扫描。
鞘气（N2）体积流量 0.75 L/min；辅助气（N2）体
积流量 0.15 L/min；源电压 4.5 kV；毛细管温度
280 ℃；毛细管电压 25 V。各成分的部分质谱分析
参数见表 1，提取离子色谱图和二级质谱图见图 1。

表 1 8种成分的部分质谱分析参数
Table 1 MS parameters of eight components
成分 分子式 t/min 离子对 (m/z)
碰撞能
量/V
葛根素 C21H20O9 6.11 417.0＞381.1 8
毛蕊异黄酮苷 C22H22O10 9.54 446.8＞285.0 8
二苯乙烯苷 C20H22O9 11.58 407.2＞228.2 8
芍药苷 C23H28O11 15.33 503.4＞381.1 9
丹参酮 IIA C19H18O3 19.68 295.2＞249.2 10
人参皂苷 Rg1 C42H72O14 24.98 799.6＞637.5 7
人参皂苷 Re C48H82O18 29.40 945.8＞475.6 9
黄芩苷 C21H18O11 34.83 447.3＞271.1 6

2.3 供试品溶液的制备
取质量差异下的本品内容物，研细，取约 0.1 g，
精密称定，置 25 mL量瓶中，加 50%甲醇 20 mL，
超声处理（功率 160 W，频率 40 kHz）15 min，放
冷，加 50%甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，
即得。
2.4 混合对照品溶液的制备
精密称取葛根素、丹参酮 IIA、二苯乙烯苷、芍
药苷、人参皂苷 Re、人参皂苷 Rg1、毛蕊异黄酮苷
和黄芩苷对照品适量，置于 10 mL量瓶中，用 50%
甲醇定容至刻度，制得各成分质量浓度分别 20.31、
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图 1 8种成分的提取离子色谱图 (A) 和质谱图 (B)
Fig. 1 Extracting ion chromatograms (A) and MS (B) of eight components

25.66、20.45、50.79、50.57、50.38、10.32、25.74 μg/mL
的混合对照品溶液，备用。
2.5 阴性对照溶液的制备
按SJC处方比例和工艺，分别制备缺少何首乌
和人参药材的阴性对照样品，并按“2.3”项下方法
分别制备各阴性对照溶液。
2.6 线性关系与定量限
分别精密量取“2.4”项下混合对照品溶液适量，
置于 10 mL量瓶中，用 50%甲醇稀释成系列质量浓
度的混合对照品溶液，按照“2.1”“2.2”项下条件
进样 10 μL 测定。以各成分的质量浓度为横坐标
（X），以各成分的峰面积均值为纵坐标（Y）进行线
性回归，得各成分的回归方程、相关系数、线性范
围及定量限，结果分别为葛根素 Y＝346.3 X－
762.1，r＝0.999 5，线性范围 20.31～20 310 ng/mL，
定量限 6.8 ng/mL；毛蕊异黄酮苷 Y＝7.452 X－
739.7，r＝0.999 2，线性范围 10.32～10 320 ng/mL，
定量限 3.4 ng/mL；二苯乙烯苷 Y＝23.76 X＋3 472.5，
r＝0.999 6，线性范围 20.45～20 450 ng/mL，定量限
5.1 ng/mL；芍药苷 Y＝28.233 X－32.75，r＝0.999 6，
线性范围 50.79～50 790 ng/mL，定量限 8.5 ng/mL；
丹参酮 IIA Y＝2.794 X＋72.99，r＝0.999 7，线性范
围 25.66～25 660 ng/mL，定量限 6.4 ng/mL；人参
皂苷 Rg1 Y＝68.44 X＋856.88，r＝0.999 1，线性范
围 50.57～50 570 ng/mL，定量限 16.9 ng/mL；人参
皂苷 Re Y＝122.7 X－6.758，r＝0.999 0，线性范围
50.38～50 380 ng/mL，定量限 16.8 ng/mL；黄芩苷
Y＝568.5 X－734.8，r＝0.999 5，线性范围 25.74～
25 740 ng/mL，定量限 4.3 ng/mL。结果表明，各成
分在各自的线性范围内具有良好的线性关系。
2.7 精密度试验
取供试品（批号 20150302）溶液，重复进样 6
次，依法测定。结果显示，葛根素、丹参酮 IIA、二
苯乙烯苷、芍药苷、人参皂苷 Re、人参皂苷 Rg1、毛
蕊异黄酮苷和黄芩苷峰面积的RSD值分别为1.33%、
0.75%、0.86%、0.91%、1.34%、1.22%、0.60%、1.02%，
结果表明该方法的精密度良好。
2.8 重复性试验
按“2.3”项方法制备供试品溶液 6份，按“2.1”
“2.2”项下条件进样分析，测得葛根素、丹参酮 IIA、
二苯乙烯苷、芍药苷、人参皂苷 Re、人参皂苷 Rg1、
毛蕊异黄酮苷和黄芩苷平均质量分数分别为 1.846、
0 10 20 30 40 50
t/min
200 400 600 800 1 000
m/z
0 10 20 30 40 50
t/min
200 400 600 800 1 000
m/z
葛根素 A B B A 毛蕊异黄酮苷
二苯乙烯苷 芍药苷
丹参酮 IIA 人参皂苷 Rg1
人参皂苷 Re 黄芩苷
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1.621、2.116、2.543、0.039、0.048、0.564、2.333 mg/g，
RSD值分别为 1.11%、0.81%、1.08%、0.73%、1.21%、
1.31%、0.66%、0.84%，表明该方法重复性良好。
2.9 稳定性试验
取供试品（批号 20150302）溶液，分别于 0、2、
4、6、8、10、12、24 h进样测定，测得葛根素、丹
参酮 IIA、二苯乙烯苷、芍药苷、人参皂苷 Re、人
参皂苷 Rg1、毛蕊异黄酮苷和黄芩苷峰面积的 RSD
值分别为 0.67%、0.65%、0.43%、0.38%、0.62%、
0.39%、0.52%、0.64%，结果表明供试品溶液在 24 h
内稳定。
2.10 加样回收率试验
精密吸取已测定的供试品（批号 20150302）溶
液 9等份，每 3份为 1组，分别精密加入供试品中
相应成分 150%、100%、50% 3个水平的混合对照
品溶液后，按“2.3”项下方法制备供试品溶液进行
测定。计算各成分的回收率，结果葛根素、丹参酮
IIA、二苯乙烯苷、芍药苷、人参皂苷 Re、人参皂
苷 Rg1、毛蕊异黄酮苷和黄芩苷平均回收率依次为
98.87%、100.37%、99.30%、102.48%、97.98%、
99.82%、100.93%、98.11%，RSD 依次为 0.64%、
0.93%、0.61%、1.27%、1.32%、1.55%、0.74%、1.38%。
2.11 样品测定
取 9个批号的 SJC，按照“2.3”项下方法处理，
按照“2.1”项下色谱条件进行测定，结果见表 2，
相关图谱见图 2。

表 2 SJC中 8种化学成分定量测定结果 (n = 3)
Table 2 Quantitative determination of eight constituents in in SJC (n = 3)
批号
质量分数/(mg·g−1)
葛根素 丹参酮 IIA 二苯乙烯苷 芍药苷 人参皂苷 Re 人参皂苷 Rg1 毛蕊异黄酮苷 黄芩苷
20150302 1.846 1.621 2.116 2.543 0.039 0.048 0.564 2.333
20150303 1.856 1.625 2.121 2.541 0.034 0.053 0.554 2.342
20150304 1.852 1.618 2.124 2.537 0.041 0.049 0.561 2.337
20150407 1.843 1.629 2.128 2.539 0.037 0.055 0.558 2.346
20150408 1.860 1.622 2.120 2.547 0.040 0.052 0.551 2.340
20150409 1.847 1.627 2.129 2.545 0.038 0.051 0.555 2.338
20160111 1.895 1.654 2.115 2.532 0.044 0.058 0.561 2.358
20160112 1.888 1.651 2.130 2.565 0.035 0.063 0.575 2.348
20160113 1.876 1.669 2.141 2.521 0.048 0.049 0.577 2.330




1-葛根素 2-丹参酮 IIA 3-二苯乙烯苷 4-芍药苷 5-人参皂苷 Re 6-人参皂苷 Rg1 7-毛蕊异黄酮苷 8-黄芩苷
1-puerarin 2-tanshinone IIA 3-stibene glucoside 4-paeoniflorin 5-ginsenoside Re 6-ginsenoside Rg1 7-calycosin-7-glucoside 8-baicalin

图 2 混合对照品 (A)、SJC样品 (B)、缺少何首乌阴性对照 (C)、缺少人参阴性对照 (D) 溶液的总离子流 (TIC) 色谱图
Fig. 2 TIC of mixed references substances (A), SJC (B), negative reference substance without Polygoni Multiflori Radix (C),
negative reference substance with Ginseng Radix (D)
0 10 20 30 40 50 0 10 20 30 40 50
t/min
1 2 3 4 5
6 7 8 1
A B
C D
2
3
4
5 6 7
8
1
2
4
5 6 7
8
1
2
3
4
5
8
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3 讨论
关于 SJC定量测定的文献报道很多，但基本以
液相色谱法为主要测定方法，但是液质联用的方法
对其进行定量却未见报道。本实验首次建立了
HPLC-MS/MS同时测定 SJC中 8种成分的方法，对
于 SJC的质量控制具有参考意义。
本实验考察了乙腈-水、甲醇-水、乙腈-甲酸水、
甲醇-甲酸水、乙腈-乙酸水、甲醇-乙酸水多个流动
相体系，综合考虑各成分分离度，质谱响应等因素，
最后确定甲醇-甲酸水体系更有利于各个成分的测
定。在质谱离子模式的选择上，采用正负离子切换
扫描的方式，对于负离子响应好的成分采用负离子
扫描，如人参皂苷 Re与人参皂苷 Rg1，其他成分采
用正离子扫描的模式。从样品的测定结果看，各批
样品中 8个成分的量基本质量分数差异较小，本方
法可用于该中成药的质量控制。
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