全 文 ：中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 45 卷 第 1 期 2014 年 1 月

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散结镇痛胶囊中酚酸类成分的指纹图谱研究和多指标成分定量测定
秦建平 1, 2，吴建雄 1, 2，李家春 1, 2，毕宇安 1, 2，王振中 1, 2，萧 伟 1, 2*
1. 江苏康缘药业股份有限公司，江苏 连云港 222001
2. 中药制药过程新技术国家重点实验室，江苏 连云港 222001
摘 要：目的 建立散结镇痛胶囊中酚酸类成分的 UPLC 指纹图谱，并进行多成分定量分析，为评价散结镇痛胶囊提供依
据。方法 采用 UPLC 法，色谱柱为 Phenomenex Kinetex 2.6 μm C18 100 A 柱，乙腈-水梯度洗脱，体积流量为 1.7 mL/min，
柱温 40 ℃，检测波长为 280、325 nm。结果 得到分离度、重现性均较好的散结镇痛胶囊酚酸类成分 UPLC 指纹图谱，标
示出 15 个共有峰，各批次样品相似度均在 0.96 以上；通过对照品比对，确定了 5 个成分，分别为白藜芦醇、7, 4′-二羟基黄
酮、龙血素 A、龙血素 B 和紫檀茋，并对其进行定量分析。结论 同时对散结镇痛胶囊中酚酸类成分进行 UPLC 指纹图谱
和 5 个指标成分分析，方法快速、简便、准确，可作为全面评价该制剂质量的有效方法之一。
关键词：散结镇痛胶囊；指纹图谱；白藜芦醇；7, 4′-二羟基黄酮；龙血素 A；龙血素 B；紫檀茋；UPLC
中图分类号：R286.02 文献标志码：A 文章编号：0253 - 2670(2014)01 - 0059 - 05
DOI: 10.7501/j.issn.0253-2670.2014.01.012
Fingerprint of phenolic constituents in Sanjie Zhentong Capsule
and quantitative determination of multi-components
QIN Jian-ping1, 2, WU Jian-xiong1, 2, LI Jia-chun1, 2, BI Yu-an1, 2, WANG Zhen-zhong1, 2, XIAO Wei1, 2
1. Jiangsu Kanion Pharmaceutical Co., Ltd., Lianyungang 222001, China
2. State Key Laboratory of Pharmaceutical Process New-tech for Chinese Medicine, Lianyungang 222001, China
Abstract: Objective To establish the UPLC fingerprint for the phenolic constituents in Sanjie Zhentong Capsule (SZC) and to perform
the quantitative determination of multi-components. so as to provide a scientific basis for the quality control of SZC. Methods The
Phenomenex Kinetex 2.6 μm C18 100 A column was used in the gradient elution with a mobile phase of acetonitrile-water, the flow rate
was 1.7 mL/min, the column temperature was 40 ℃, and the detection wavelengths were at 280 and 325 nm. Results The reproducible
fingerprint of SZC was established and 15 common peaks were found. The fingerprints showed the good similarity in 10 batches of
SZC was above 0.96. Based on the retention time and UV absorption spectra of reference substances, five constituents including
loureirin A, loureirin B, 7, 4-dihydroxy flavone, resveratrol, and pterostilbene were identified and quantitatively analyzed. Conclusion
The method is rapid, simple, and accurate, which could be used for the quality control of SZC.
Key words: Sanjie Zhentong Capsule; fingerprint; resveratrol; 7, 4′-dihydroxy flavone; loureirin A; loureirin B; pterostilbene; UPLC

散结镇痛胶囊（Sanjie Zhentong Capsule，SZC）
是由三七、龙血竭、浙贝母和薏苡仁组成的成方制
剂，软坚散结、化瘀定痛，用于痰瘀互结兼气滞所
致的继发性痛经、月经不调、盆腔包块、不孕，子
宫内膜异位症等，在临床使用中对子宫内膜异位症
有良好的疗效[1-2]。散结镇痛胶囊中的主要成分有皂
苷类、酚酸类、生物碱类及油脂类成分。为了更好
地控制产品质量，保证临床疗效，需建立全面评价
该制剂质量的方法。文献中关于散结镇痛胶囊的质
量控制方法主要有皂苷类成分的定量测定[3]和指纹
图谱研究[4]、黄酮类成分的指纹图谱研究[5]，文献
报道的这些质量控制手段还不能全面的控制散结镇

收稿日期：2013-08-19
基金项目：国家科技部“重大新药创制”项目名称：子宫内膜异位症首选用药——散结镇痛胶囊大品种技术改造（2011ZX09201-201-20）
作者简介：秦建平（1979—），女，工程师，研究方向为中药质量标准研究。Tel: (0518)85521932 E-mail: jianpingqin@gmail.com
*通信作者 萧 伟（1959—），研究员级高级工程师，博士，研究方向为中药制剂和创新中药的研究与开发。
Tel: (0518)81152367 Fax: (0518)81152327 E-mail: kanionlunwen@163.com
网络出版时间：2013-12-24 网络出版地址：http://www.cnki.net/kcms/doi/散结镇痛胶囊中酚酸类成分的指纹图谱研究和多指标成分.html
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痛胶囊的质量。散结镇痛胶囊中酚酸类成分主要来
自龙血竭药材，本实验以制剂中酚酸类成分为主要
分析对象，参考相关文献报道[5-12]，采用 UPLC 法
同时对散结镇痛胶囊中酚酸类成分进行了指纹图谱
研究和 5 个指标成分的定量测定，可作为全面控制
散结镇痛胶囊质量的有效方法之一。
1 仪器与材料
Agilent 1290 超高压液相色谱仪，DAD 紫外检
测器（美国安捷伦公司）；Mettler AE240 电子分析
天平（德国梅特勒公司）；BP211D 型电子分析天平
（德国赛多利斯公司）；Centrifuge 5415D 高速离心机
（德国 Eppendorf 公司）；Milli—Q Academic 纯水机
（美国密理博公司）；KQ—250DB 型超声波清洗仪
（昆山超声仪器有限公司）。
散结镇痛胶囊（江苏康缘药业股份有限公司生
产，批号为 110504、110901、110902、110903、110904、
110905、100607、100102、100103 和 100107）；对
照品龙血素 A（批号 111660-200402，质量分数
99.7%）、龙血素 B（批号 111558-200303，质量分
数 99.0%）、7, 4′-二羟基黄酮（批号 111787-201002，
质量分数 98.6%），均购自中国食品药品检定研究
院；紫檀茋（批号 20110723，质量分数＞99%，购
自杭州广林生物医药科技有限公司），白藜芦醇（质
量分数＞99%，购自陕西永健制药有限公司）；乙腈
（色谱纯，美国天地公司），水为超纯水，其余试剂
均为分析纯。
2 方法
2.1 色谱条件
色谱柱为 Phenomenex Kinetex 2.6 μm C18 100A
柱（100 mm×4.6 mm，2.6 μm）；流动相为乙腈-水，
梯度洗脱，线性洗脱程序为 0～12 min，13%～18%
乙腈，12～22 min，18%～28%乙腈，22～35 min，
28%～40%乙腈，35～45 min，40%乙腈；体积流量
为 1.7 mL/min；检测波长为 280 nm（指纹图谱，龙
血素 A 和龙血素 B 定量测定）和 325 nm（白藜芦
醇、7, 4′-二羟基黄酮和紫檀茋定量测定）；柱温为
40 ℃；进样量为 5 μL；理论板数按龙血素 B 峰计
算不低于 100 000。色谱图见图 1。





1-白藜芦醇 2-7, 4′-二羟基黄酮 11-龙血素 A 12-龙血素 B 15-紫檀茋
1-resveratrol 2-7, 4′-dihydroxy flavone 11-loureirin A 12-loureirin B 15-pterostilbene

图 1 混合对照品 (A)、供试品 (B) 和不含龙血竭的阴性样品 (C) UPLC 色谱图
Fig. 1 UPLC chromatograms of mixed reference substance (A), sample (B), and negative sample without Draconis Resina (C)
1
1
2
2
3
4
5
6
7
8 9
1 2
1 2
11
12
15
11
10
12
13 14
15
15
15
A
B
C
280 nm
325 nm A
B
C
0 5 10 15 20 25 30 35 40 45
t / min
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2.2 对照品溶液的制备
取对照品白藜芦醇、7, 4′-二羟基黄酮、龙血素
A、龙血素 B 和紫檀茋适量，精密称定，加甲醇制
成含白藜芦醇 30 μg/mL、7, 4′-二羟基黄酮 30
μg/mL、龙血素 A 30 μg/mL、龙血素 B 40 μg/mL、
紫檀茋 100 μg/mL 的混合对照品溶液，即得。
2.3 供试品溶液的制备
取本品内容物，混匀，研细，取约 1 g，精密称
定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇 25 mL，称定
质量，超声（250 W，40 kHz）提取 30 min，放冷，
再称定质量，用甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，
取续滤液过 0.22 μm 滤膜，即得。
2.4 阴性样品溶液的制备
按散结镇痛胶囊工艺制备不含龙血竭的阴性样
品，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，即得。
2.5 线性关系的考察
精密称取白藜芦醇、7, 4′-二羟基黄酮、龙血素
A、龙血素 B 和紫檀茋适量，加 70%乙醇制成含白
藜芦醇 496.8 μg/mL、7, 4′-二羟基黄酮 438 μg/mL、
龙血素 A 368 μg/mL、龙血素 B 645.2 μg/mL、紫檀
茋 1 517.2 μg/mL 的混合对照品溶液，将其作为母液
用 70%乙醇逐倍稀释，分别精密吸取 5 μL，注入液
相色谱仪，测定，以进样质量浓度为横坐标（X），
峰面积为纵坐标（Y）进行线性回归，得回归方程
分别为 Y＝16.906 X－3.701，r＝0.999 9；Y＝15.722
X＋0.452 2，r＝1.000 0；Y＝10.217 X－1.162，r＝
1.000 0；Y＝8.106 X－2.452，r＝1.000 0 和 Y＝14.575
X－2.681，r＝0.999 8。白藜芦醇、7, 4′-二羟基黄酮、
龙血素 A、龙血素 B 和紫檀茋分别在 7.76～248.4
μg/mL、6.84～219 μg/mL、5.75～184 μg/mL、10.08～
322.6 μg/mL 和 23.71～758.6 μg/mL 呈良好的线性
关系。
2.6 精密度试验
取同一供试品（批号 110504）溶液连续进样 6
针，以峰面积计算各指标成分 RSD，分别为白藜芦
醇 1.21%、7, 4′-二羟基黄酮 0.31%、龙血素 A 0.26%、
龙血素 B 1.34%和紫檀茋 1.08%。以龙血素 B 为参
照峰，计算各个共有峰相对保留时间 RSD 均小于
0.20%，占总峰面积 5%以上的共有峰相对峰面积
RSD 均小于 1.50%。
2.7 稳定性试验
取同一对照品溶液，精密吸取 5 μL，分别于 0、
3、6、10、16、20、24 h 注入高效液相色谱仪，以
峰面积计算各指标成分 RSD，分别为白藜芦醇
0.32%、7, 4′-二羟基黄酮 0.75%、龙血素 A 0.26%、
龙血素 B 0.26%和紫檀茋 1.19%。取同一供试品（批
号 110504）内容物，研细，取约 1 g，精密称定，
按上述供试品溶液的制备方法制备供试品溶液，精
密吸取 5 μL，分别于 0、2、6、9、14、18、24 h
注入液相色谱仪，以峰面积计算各指标成分 RSD，
分别为白藜芦醇 2.44%、7, 4′-二羟基黄酮 1.40%、
龙血素 A 0.86%、龙血素 B 0.82%和紫檀茋 2.76%。
以龙血素 B 为参照峰，计算各个共有峰相对保留时
间 RSD 均小于 1.10%，占总峰面积 5%以上的共有
峰相对峰面积 RSD 均小于 1.97%。结果表明对照品
溶液和供试品溶液放置 24 h 稳定性良好。
2.8 重复性试验
取同一供试品（批号 110504）内容物，研细，
取约 1 g，精密称定，按上述供试品溶液的制备方法
制备供试品溶液，平行制备 6 份，测定，计算质量
分数。结果白藜芦醇、7, 4′-二羟基黄酮、龙血素 A、
龙血素 B 和紫檀茋的平均质量分数分别为 0.82、
0.85、0.92、0.95、2.57 mg/g，RSD 分别为 1.11%、
0.79%、0.72%、0.70%、0.67%。以龙血素 B 为参照
峰，计算各个共有峰相对保留时间 RSD 均小于
0.80%，占总峰面积 5%以上的共有峰相对峰面积
RSD 均小于 1.50%。结果表明本方法重复性良好。
2.9 回收率试验
取同一供试品（批号 110504）内容物，研细，
取约 0.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，分别精密
加入混合对照品溶液（含白藜芦醇 425.5 μg/mL、7,
4′-二羟基黄酮 460.5 μg/mL、龙血素 A 458 μg/mL、
龙血素 B 490 μg/mL、紫檀茋 1 267.5 μg/mL）1 mL，
再精密加入甲醇 24 mL，超声提取（250 W，40 kHz）
30 min，放冷，滤过，取续滤液过 0.22 μm 滤膜，
注入高效液相色谱仪，计算回收率。结果白藜芦醇、
7, 4′-二羟基黄酮、龙血素 A、龙血素 B 和紫檀茋的
平均回收率分别为 99.51%、101.21%、98.50%、
100.45%、101.54%，RSD 分别为 1.80%、0.95%、
1.82%、1.76%、1.94%。
2.10 样品测定结果
取 10 批次散结镇痛胶囊，按“2.3”项下方法
制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件进样分析，
分别计算 5 种成分的质量分数，结果见表 1。结果
表明，不同批次散结镇痛胶囊中 5 种成分的质量分
数差异较小。
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表 1 样品测定 (n＝2)
Table 1 Determination of samples (n＝2)
质量分数 / (mg·g−1)
批号 白藜芦醇 7, 4′-二羟
基黄酮
龙血素 A 龙血素 B 紫檀茋
110504 0.82 0.85 0.92 0.95 2.57
110902 0.88 0.75 0.70 1.10 3.10
110904 0.80 0.70 0.63 1.10 3.35
110903 0.90 0.75 0.78 1.13 3.45
110901 0.95 0.73 0.60 1.15 2.38
110905 0.93 0.75 0.63 1.18 2.38
100607 0.87 0.75 0.83 1.05 2.48
100102 0.73 0.80 0.65 1.00 2.38
100103 0.68 0.75 0.69 1.10 2.30
100107 0.73 0.78 0.68 1.05 2.33
2.11 指纹图谱的建立
根据 10 批散结镇痛胶囊检测所得到的图谱，
标定出 15 个共有峰，采用国家药典委员会颁布的
《中药色谱指纹图谱相似度评价系统 A 版》进行
分析，经数据匹配，以中位数法建立对照指纹图
谱，结果见图 2。10 批所测供试品色谱图与对照
指纹图谱相似度分别为 0.969、0.989、0.990、0.991、
0.992、0.991、0.989、0.980、0.987 和 0.988，均
大于 0.96。
2.12 指纹图谱中共有峰的归属
将龙血竭药材、不含龙血竭药材的胶囊分别按
“2.3”项下方法制备供试品溶液，按“2.1”项下色
谱条件进样分析，通过保留时间和 DAD 扫描分析，
指纹图谱中标定的 15 个共有峰均来自龙血竭，色谱
图见图 3。




图 2 10 批散结镇痛胶囊酚酸类成分 UPLC 指纹图谱
Fig. 2 UPLC fingerprints for phenolic constituents in 10 batches of SZC




图 3 散结镇痛胶囊酚酸类成分 UPLC 指纹图谱中各共有峰归属色谱图
Fig. 3 UPLC fingerprints of each common peak attribution of phenolic constituents in SZC
1
2
3 4
5
6
7
8 9
10
11
13
12
14
15
R
S10
S9
S8
S7
S6
S5
S4
S3
S2
S1
0 6.52 13.04 19.57 26.09 32.61 39.13 45.65
t / min
0 5 10 15 20 25 30 35 40 45
t / min
散结镇痛胶囊
龙血竭
不含龙血竭的胶囊
1
2
3
4
5
6
7 8
9
10
11
12
13 14
15
1
2
3
4
5
6
7
8 9
10
11
1213 14
15
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3 讨论
通过 DAD 检测器在 190～400 nm 全扫描，结
果 280 nm 下反映的信息较全面，色谱峰较多且各
色谱峰分离较好，因此选择 280 nm 作为指纹图谱
的检测波长；根据白藜芦醇、7, 4′-二羟基黄酮、龙
血素 A、龙血素 B 和紫檀茋的最大吸收波长及吸收
曲线，选择 280 nm 测定龙血素 A 和龙血素 B 的量，
325 nm 测定白藜芦醇、7, 4′-二羟基黄酮和紫檀茋的
量，并且对 5 个指标成分进行了峰纯度验证，结果
表明在本实验所确定的检测条件下样品中所测定的
5 个成分不含其他干扰成分。
通过考察不同品牌色谱柱，结果表明色谱柱
Phenomenex Kinetex 2.6 μm C18 100 A 能使各色谱
峰分离较好，且缩短了分析时间。对供试品溶液的
制备方法、不同流动相系统、柱温、体积流量及不
同仪器均进行了考察，结果表明本实验所采用的检
测方法耐用性良好。
10 批散结镇痛胶囊定量测定结果和指纹图谱
显示，该制剂中酚酸类成分质量较稳定，不同批次
间整体质量差异较小。本实验根据散结镇痛胶囊处
方中四味药材特性，建立了酚酸类成分的质量控制
方法，在后续的研究中将继续对其他类成分进行考
察，并建立质量控制方法，为全面控制散结镇痛胶
囊质量提供依据。
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