免费文献传递   相关文献

Effects of Yueanjian by different compatibility on extraction rate of salvianolic acid B

月安煎不同配伍对丹酚酸B提取率的影响



全 文 :中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 43 卷 第 5 期 2012 年 5 月

·926·
月安煎不同配伍对丹酚酸 B 提取率的影响
李雪梅 1,尤献民 2,梁茂新 1*
1. 辽宁中医药大学,辽宁 沈阳 110032
2. 辽宁省中医药研究院,辽宁 沈阳 110034
摘 要:目的 采用 HPLC 法测定月安煎不同配伍组方中丹酚酸 B 的量,比较月安煎不同配伍对丹参中丹酚酸 B 提取率的
影响。方法 色谱柱为 Synergi Polar-RP 80A(250 mm×4.6 mm,5 μm),流动相为甲醇-乙腈-甲酸-水(30∶10∶59∶1),
体积流量 1.0 mL/min,检测波长 286 nm,柱温 30 ℃。利用均匀设计法设计月安煎中丹参的不同配伍组合,利用建立的 HPLC
法测定各组合中丹酚酸 B 的提取率,利用逐步回归法分析各配伍方药对丹酚酸 B 提取率的影响。结果 丹酚酸 B 在 0.72~
5.76 μg 呈良好线性关系(r=0.999 8),平均回收率为 95.66%,RSD 为 1.1%。丹参中丹酚酸 B 的提取率与香附、石菖蒲、
丹参药量呈正比,与白术药量呈反比,而与菟丝子无关。结论 复方月安煎中丹参与不同方药配伍对丹酚酸 B 的提取率具
有一定影响,最佳配比值得深入研究。
关键词:月安煎;丹参;香附;丹酚酸 B;配伍
中图分类号:R286.02 文献标志码:A 文章编号:0253 - 2670(2012)05 - 0926 - 03
Effects of Yueanjian by different compatibility on extraction rate
of salvianolic acid B
LI Xue-mei1, YOU Xian-min2, LIANG Mao-xin1
1. Liaoning University of Traditional Chinese Medicine, Shenyang 110032, China
2. Liaoning Institute of Chinese Medicine & Pharmaceutical Science, Shenyang 110034, China
Key words: Yueanjian; Salviae Miltiorrhizae Radix et Rhizoma; Cyperi Rhizoma; salvianolic acid B; compatibility

月安煎系利用本课题组前期建立的“《普济方》
数据库管理系统”[1]并结合临床经验,筛选出来拟
用于治疗经前期综合征肝郁脾虚证的中药复方制
剂,由香附、丹参、白术、菟丝子、石菖蒲 5 味中
药组成。方中丹参为主药,可治疗月经不调、痛经、
经闭等疾病。为了研究不同配伍对丹参提取率的影
响,本研究选择丹参中代表性水溶性成分丹酚酸 B
作为定量测定的指标[2-4],利用均匀设计法设计丹参
的不同配伍组,对影响丹参提取的因素进行考察。
1 仪器与材料
Agilent 1100 系列高效液相色谱仪、DAD 检测
器(美国 Agilent 科技有限公司);XS105 电子天平
(瑞士 Mettler Toledo 公司);恒温水浴锅(型号
HHS21926,上海锦屏仪器有限公司)。
丹酚酸 B 对照品(批号 111562-200908,中国
药品生物制品检定所);月安煎制备样品(K)、月
安煎不同配伍(A~J)提取液及缺丹参空白样品(辽
宁省中医药研究院药学实验室自制);乙腈、甲醇为
色谱纯,其他试剂均为分析纯,水为娃哈哈纯净水。
2 方法与结果
2.1 丹参不同配伍供试品的制备
本研究参考均匀设计法,选取表 U11(115) 为试
验用表[5],设计 11 个丹参不同配伍组。各组药物剂
量见表 1。11 组药材均加 8 倍量水浸泡 30 min,煎
煮 2 次,每次 1 h,合并 3 次药液,浓缩至适当质量
浓度,减压干燥后即得。
2.2 丹酚酸 B 定量测定方法的建立
2.2.1 色谱条件[6] 色谱柱为 Synergi Polar-RP 80A
(250 mm×4.6 mm,5 μm),流动相为甲醇-乙腈-甲
酸-水(30∶10∶59∶1),体积流量 1.0 mL/min,检
测波长 286 nm,柱温 30 ℃,进样量 5 μL,理论塔
板数按丹酚酸 B 峰计大于 3 000。

收稿日期:2011-12-22
作者简介:李雪梅(1974—),女,博士研究生,研究方向为中药小复方优化研究。Tel: (024)31207370 E-mail: lixm@cde.org.cn
*通讯作者 梁茂新 Tel: (024)31207370 E-mail: lmxin@126.com
中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 43 卷 第 5 期 2012 年 5 月

·927·
表 1 各配伍组药物组成及剂量
Table 1 Components and dosages in each group
药物剂量 / g 组 别
香附 白术 菟丝子 丹参 石菖蒲
月安煎 A 0.00 8.70 17.39 34.78 39.13
月安煎 B 6.33 15.19 25.32 45.57 7.59
月安煎 C 9.90 19.80 31.68 11.88 26.73
月安煎 D 16.67 31.11 0.00 35.56 16.67
月安煎 E 25.32 45.57 15.19 10.13 3.80
月安煎 F 24.75 0.00 23.76 27.72 23.76
月安煎 G 33.33 8.89 40.00 4.44 13.33
月安煎 H 44.30 20.25 5.06 30.38 0.00
月安煎 I 39.60 23.76 15.84 0.00 20.79
月安煎 J 33.58 23.88 20.90 14.93 6.72
月安煎 K 25.00 20.00 20.00 20.00 15.00
2.2.2 对照品储备液的制备 精密称取丹酚酸B对
照品适量,加水制成 0.72 mg/mL 对照品储备液。
2.2.3 供试品溶液的制备 丹参不同配伍供试品研
细后取 2 g,精密称定,置 50 mL 圆底烧瓶中,精
密加入 75%甲醇 25 mL,称定质量,加热回流 1 h,
放冷,再称定质量,用 75%甲醇补足减失质量,摇
匀,过 0.45 μm 滤膜,即得。
2.2.4 空白对照溶液的制备 按处方中药味的比例
及工艺,制成不含丹参的阴性样品,按供试品溶液
制备方法制成空白对照溶液,测定,阴性样品在与
对照品色谱峰相应的位置上无干扰,表明供试品溶
液中的其他成分对测定结果无影响。色谱图见图 1。
2.2.5 线性关系考察 分别精密吸取丹酚酸B对照
品储备液 1、2、4、6、8 mL 置 10 mL 量瓶中,加水
稀释至刻度,分别进样 10 μL,记录色谱图,以进样




*丹酚酸 B
*salvianolic acid B

图 1 丹酚酸 B 对照品 (A)、供试品 (B) 和空白对照 (C) 的 HPLC 色谱图
Fig. 1 HPLC chromatograms of salvianolic acid B reference substance (A), sample (B), and blank control (C)

量为横坐标,峰面积为纵坐标进行线性回归,得回
归方程为 Y=748.31 X-64.623,r=0.999 8,可见
丹酚酸 B 在 0.72~5.76 μg 线性关系良好。
2.2.6 精密度试验 取月安煎样品(批号 111101),
按“2.2.3”项下制备供试品溶液,精密吸取供试品
溶液 5 μL,重复进样 6 次,丹酚酸 B 峰面积的 RSD
为 1.43%。
2.2.7 稳定性试验 取“2.2.6”项下的供试品溶液,
分别于 0、2、4、8、12 h 进样,测定峰面积,测得
丹酚酸 B 峰面积的 RSD 为 1.97%,表明供试品溶液
在 12 h 内稳定。
2.2.8 重复性试验 取月安煎样品(批号 111101)
6 份,按“2.2.3”项下制备供试品溶液,分别精密
吸取对照品溶液及供试品溶液各 5 μL 进样,测定峰
面积,计算供试品中丹酚酸 B 质量分数的 RSD 为
1.91%。
2.2.9 加样回收率试验 取已测定的月安煎样品
(批号 111101,丹酚酸 B 为 5.70 mg/g)1 g,精密称
定,平行 6 份,分别精密加入丹酚酸 B 对照品溶液
适量,按“2.2.3”项下制备供试品溶液,分别精密
吸取对照品溶液及供试品溶液各 5 μL 进样,测定峰
面积,计算回收率,结果平均回收率为 96.36%,RSD
为 1.13%。
2.3 不同样品中丹酚酸 B 的提取率
由于月安煎 J 组内不含有丹参药材,所以本研
究对该配伍组样品没有测定,其他 10 组样品中丹酚
酸 B 的提取率见表 2。
提取率=丹酚酸 B 质量 / 丹参药材质量
2.4 统计分析
本研究使用 SPSS 13.0 软件,利用逐步线性回
归方法分析不同方药配伍对丹参中丹酚酸B提取率
的影响,以各药材质量(X)为横坐标,以提取率
A B C
*
0 4 8 12 16 20 0 4 8 12 16 20 0 4 8 12 16 20
t / min
*
中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 43 卷 第 5 期 2012 年 5 月

·928·
表 2 各配伍组样品中丹酚酸 B 的提取率
Table 2 Extraction rate of salvianolic acid B
in different groups
组别 提取率 / % 组别 提取率 / %
月安煎 A 5.97 月安煎 F 6.23
月安煎 B 6.61 月安煎 G 0.55
月安煎 C 1.46 月安煎 H 5.71
月安煎 D 6.64 月安煎 J 2.28
月安煎 E 2.07 月安煎 K 2.68

(Y)为纵坐标,得到回归方程:Y=0.085 X1-0.206
X2+0.01 X3+0.068 X4(X1、X2、X3、X4 分别为组方
中香附、白术、丹参、石菖蒲质量),提取率与菟
丝子无关。统计结果表明丹参中丹酚酸 B 的提取
率与香附、石菖蒲、丹参药量呈正比,与白术药量
呈反比。
3 讨论
《中国药典》2010 年版一部丹参药材项下定量
测定了丹酚酸 B 和丹参酮 IIA[7],对于制备工艺中采
用了水提取的本复方制剂,测定水溶性的丹酚酸类
化合物比测定脂溶性的丹参酮类化合物更为合理。
本实验参考《中国药典》2010 年版丹参中丹酚酸 B
定量测定方法测定月安煎中丹酚酸 B 的量,取得良
好效果,能有效控制月安煎中丹酚酸 B 的量。
由于丹酚酸B是由三分子丹参素和一分子咖啡
酸通过酯键缩合而成的二元有机弱酸,酯键的存在
决定了其在水溶液中不稳定,羧基的存在决定了其
分子状态会随溶液的 pH 值变化而变化,因而,丹
酚酸 B 在其水溶液中很不稳定,易降解和被氧化[8]。
因此丹酚酸B对照品溶液应临用前现配,避光保存。
本研究结果说明不同配伍对月安煎中丹酚酸 B
的提取率有一定影响,为月安煎复方合理性的深入
研究提供了参考。本课题的目的是利用药效学指标
筛选中药小复方月安煎药物最佳配伍的组成及剂
量,相关研究正在进行。
参考文献
[1] 宫 俊, 董俊龙, 梁茂新, 等. 基于关联规则的广义药
对最适合病证的挖掘方法 [J]. 东北大学学报: 自然科
学版, 2011, 32(8): 1097-1100.
[2] 许廷生, 梁秀兰. 丹参的临床应用综述 [J]. 中国社区
医师: 医学专业, 2004, 6(9): 8-9.
[3] 倪春艳, 郑仕中, 陆 茵, 等. 以瘦素为靶点中药单体
成分防治肝纤维化研究策略及进展 [J]. 中草药, 2011,
42(9): 1837-1841.
[4] 戈升荣, 俞一心, 谢更新. 丹酚酸的药理作用研究进展
[J]. 中药材, 2002, 25(9): 683-687.
[5] 梁茂新, 李东安. 均匀设计在中药小复方精选中的改
良应用 [J]. 世界科学技术: 中医药现代化, 2006, 8(2):
53-56.
[6] 贾桂艳, 马 莉, 韩 锋, 等. HPLC 法测定脑通颗粒
中丹酚酸 B [J]. 现代药物与临床, 2011, 26(2): 142-144.
[7] 中国药典 [S]. 一部. 2010.
[8] 朱金墙, 闫 晨, 康立源. 丹酚酸 B 的稳定性及其降解
机理研究进展 [J]. 中国中医药信息杂志, 2010, 17(12):
113-115.