全 文 ：中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 42 卷 第 1 期 2011 年 1 月 • 127 •
血水草生物碱致钉螺肝脏损伤机制研究
彭 玲，袁仕善，杨盛清，彭 飞，刘年猛，黄琼瑶*
湖南师范大学医学院，湖南 长沙 410006
摘 要：目的 分析血水草生物碱（ECA）对钉螺肝脏蛋白质和糖原水平、酶活性变化及脂质过氧化的影响，探讨血水草杀
灭钉螺机制。方法 10 mg/L ECA 药液浸泡钉螺 36 h，解剖活钉螺，分离肝脏，测定总蛋白质和糖原、丙二醛（MDA）水
平及丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天冬氨酸氨基转移酶（AST）、酸性磷酸酶（ACP）、碱性磷酸酶（AKP）和乳酸脱氢酶（LDH）
的活性。结果 ECA 浸泡后钉螺肝脏总蛋白质和糖原的量均显著降低，AKP、ALT、AST、LDH 酶活性明显下降，与清水
对照组相比，均存在显著差异（P＜0.05、0.01）；而 ACP 及 MDA 水平差异不显著。结论 ECA 抑制钉螺肝脏 AKP、ALT、
AST、LDH 酶活性，影响钉螺肝脏糖及蛋白质代谢，破坏代谢平衡，导致肝功能紊乱，从而引起钉螺死亡。
关键词：血水草；生物碱；钉螺；糖原；脂质过氧化
中图分类号：R285.5 文献标志码：A 文章编号：0253 - 2670(2011)01 - 0127 - 03
Injury mechanism of Eomecon chionantha alkaloids in liver of Oncomelania
hupensis
PENG Ling, YUAN Shi-shan, YANG Sheng-qing, PENG Fei, LIU Nian-meng, HUANG Qiong-yao
Medical College of Hunan Normal University, Changsha 410006, China
Key words: Eomecon chionantha Hance; alkaloid; Oncomelania hupensis Gredler; glycogen; lipid peroxidation

血水草 Eomecon chionantha Hance 为罂粟科白
屈菜族血水草属植物，是我国独属、独种特有物种，
广泛分布于长江流域、华南、华东和西南地区，西
北秦岭也有分布，资源丰富，具有多种药理作用。
生物碱类化合物是血水草的主要成分，包括白屈菜
红碱、血根碱、原阿托品碱、别隐品碱、氧化血根
碱、白屈菜红默碱[1]。本课题组研究发现，血水草
根及根茎中提取的生物碱具有良好杀灭钉螺作用，
经质谱鉴定证实血水草生物碱（Eomecon chionantha
alkaloid，ECA）浸泡钉螺，钉螺的肝脏蛋白质表达
发生改变[2]。为探讨 ECA 杀螺的作用机制，本实验
研究 ECA 对钉螺肝脏相关酶活性、糖原与蛋白质水
平、脂质过氧化水平的影响。
1 材料与方法
1.1 仪器与试剂
Hitachi—7180 全自动生化分析仪(日本)，K30H
高速冷冻自动平衡离心机（美国 Sigma），SHP—250
型生化培养箱为上海精宏实验设备有限公司产品。
考马斯亮蓝 G-250 系美国 Amresco 产品，蒽酮系国
药集团化学试剂有限公司产品。丙氨酸氨基转移酶
（ALT）、天冬氨酸氨基转移酶（AST）、酸性磷酸酶
（ACP）、碱性磷酸酶（AKP）和乳酸脱氢酶（LDH）
测定试剂盒均为日立自动生化分析仪配套试剂。丙
二醛（MDA）试剂盒购自南京建成生物工程研究所。
其他试剂均为国产分析纯。
1.2 ECA 的制备
血水草采自湖南省桃江县人形山，经湖南中医
学院周天达教授鉴定为血水草 Eomecon chionantha
Hance。取完全干燥的血水草根及根状茎粉碎，按
文献方法提取 ECA[3]。ECA 得率为 1.009%。
1.3 药物浸泡钉螺实验
湖北钉螺 Oncomelania hupensis Gredler 由湖
南省血吸虫病防治研究所提供，置实验室饲养 1～
2 d，选择活力强、无感染、7～8 旋的成螺进行实
验。设 10.0 mg/L ECA 药物组和清水对照组，每
500 mL ECA 药液或清水中投放装有 50 只活螺的

收稿日期：2010-05-14
基金项目：国家自然科学基金资助项目（307718720）；长沙市科技局项目（K070733-31）；湖南师范大学校青年基金项目（医 080626）
作者简介： 彭 玲（1983—），女，湖南岳阳人，硕士，现工作单位为中南大学湘雅医院肾内科。Tel: (0731)89753255 E-mail: pengling39@163.com
*通讯作者 黄琼瑶 Tel: (0731)88912429 E-mail: hqycs@yahoo.com.cn
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尼龙袋 1 只，25 ℃光照培养箱中分别浸泡 36 h 后，
各组钉螺均用清水洗净，水养法检测存活情况后，
选活螺解剖[4]，快速分离肝脏，待测或−80 ℃冻存
备用。
1.4 蛋白质水平测定
取钉螺肝脏，冷冻干燥，研碎成粉末。称取干
粉 10 mg，加生理盐水 1 mL，充分混合，并匀浆，
10 000 r/min 离心 15 min，收集上清液。采用考马斯
亮蓝染色法，以牛血清白蛋白为标准，测定各组蛋
白质的量。
1.5 糖原测定
按蛋白质定量测定方法制备钉螺肝脏干粉。称
取干粉 10 mg，加 30%KOH 溶液 2 mL，置沸水浴
20 min，冷却后加入 95%乙醇 10 mL，离心，沉淀
物即为糖原。采用蒽酮显色法，以葡萄糖为标准，
在 620 nm 处测定吸光度值，测定各组糖原水平。
1.6 丙二醛（MDA）测定
30 个钉螺肝脏为一个样本，每个样本称质量，
每 0.1 g 钉螺肝脏加入 10%三氯乙酸 0.4 mL，冰浴
匀浆，6 500 r/min，离心 15 min，收集上清液。考
马斯亮蓝法测定蛋白质浓度后，按照试剂盒说明测
定肝脏中 MDA 水平。
1.7 酶活性测定
30 个钉螺肝脏为一个样本，每只钉螺肝脏加入
预冷 PBS 溶液（pH 7.2）50 μL，冰浴匀浆，6 500 r/min
离心 15 min，离心 3 次，收集上清液。酶活性测定
均在 Hitachi—7180 型全自动生化分析仪上完成。
1.8 统计学分析
采用 SPSS 17.0 软件进行数据分析，结果用
sx ± 表示，采用独立样本 t 检验进行组间统计。
2 结果
ECA 对钉螺肝脏总蛋白质、糖原、MDA 水平
及 ALT、AST、ACP、AKP、LDH 活性的影响结果
见表 1。ECA 浸泡后钉螺肝脏总蛋白质和糖原水平
均显著降低（P＜0.05、0.01），AKP、ALT、AST、
LDH 酶活性明显下降，与清水对照组相比，均存在
显著差异（P＜0.05）；而 ACP 及 MDA 水平差异不
显著。
表 1 ECA 对钉螺肝脏蛋白质、糖原、MDA 水平及相关酶活性的影响( 30=± n , sx )
Table 1 Effect of ECA on protein, glycogen, MDA level, and relative enzymatic activity in liver of O. hupensis ( 30=± n , sx )
组 别 总蛋白/(mg·g−1) 糖原/(mg·g−1) MDA/(nmol·mg−1) ALT/U
清水对照 168.11±12.21 22.61±0.35 6.08±0.29 81.50±7.78
ECA 70.60±10.21** 10.72±0.06* 5.40±0.69 60.33±3.21*
组 别 AST/U ACP/U AKP/U LDH/U
清水对照 771.00±33.94 129.23±25.29 635.50±40.30 5.33±1.53
ECA 612.33±49.01* 119.50±16.02 396.00±53.74* 2.67±0.58*
与清水对照组比较：*P＜0.05 **P＜0.01
*P<0.05 **P<0.01 vs water control group
3 讨论
植物杀螺剂因具有可就地取材、易生物降解、
对环境污染小、资源分布广泛等优点而成为药物灭
螺研究的重要内容。本课题组在进行植物杀螺剂的
研究中，发现并证实了从我国特有物种罂粟科血水
草属植物血水草的根及根茎中提取的 ECA 具有很
好的杀灭钉螺作用，可能是一种具有发展潜力的植
物灭螺剂，值得对其灭螺机制进行进一步研究。
糖是生物机体重要的能源物质，蛋白质是生物
机体细胞重要的结构和功能成分，二者在维持生物
机体正常的生命活动中起着非常重要的作用。Tiwari
等[5]发现绿玉树乳胶抽提物引起椎实螺糖和蛋白质
明显减少，并呈剂量依赖性，国内也有学者观察到
植物杀螺剂引起湖北钉螺糖原降低[6-7]。王宏等[8]认
为，植物提取物使钉螺软体糖原减少的原因可能有：
①影响钉螺的肝功能，直接影响糖原合成；②激活
或钝化糖原代谢过程中的某些酶；③影响消化道功
能，细胞摄取葡萄糖减少，糖原合成下降。糖原是
动物机体的重要能源储备，其量的下降将会对机体
的生理机能产生影响，于是引起钉螺整体活性的降
低。同时，药物处理螺类后，由于应激条件下需要
大量能量以解除毒性和克服应激，在消耗有限糖的
同时使蛋白质分解以提供能量，从而导致蛋白质减
少[5]。ECA 处理后钉螺肝脏糖原和蛋白质的量均明
显降低，说明在 ECA 作用下肝脏的糖代谢和蛋白质
代谢发生变化，证明肝脏功能受到损害。
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植物杀螺剂对酶活性的影响与剂量和作用时间
有关。ALT、AST 是钉螺体内两种最重要的转氨酶，
是联系蛋白质合成和糖代谢的桥梁，是反映肝损伤
的一个很灵敏的指标。据报道[9]，植物杀螺剂对钉
螺肝脏转氨酶影响明显，并且药物浓度越高，转氨
酶活性升高越明显，然而当钉螺肝功能严重受损甚
至肝细胞坏死时，转氨酶活性明显下降。本实验结
果观察到 ALT、AST 两种转氨酶活性均下降，推测
药物在 10 mg/L 的质量浓度下作用 36 h 后，钉螺肝
脏已遭到严重实质损害。AKP 是细胞膜标志酶，在
钉螺体内，AKP 主要分布在钉螺的消化系统和头足
部上皮，ECA 处理后 AKP 酶活性的降低，可能阻
碍钉螺吸收和运输营养物质。陈盛霞等[6]在研究银
杏外种皮对钉螺的杀灭机制时也发现用药组的
AKP 酶活性明显受到抑制。尹蔚琳等[10]在探讨珙桐
科植物喜树灭螺机制时，也认为 AKP 是钉螺对外
界反应最为强烈的酶之一。LDH 在钉螺体内广泛分
布，它是无氧酵解途径的重要酶之一。关于植物杀
螺剂对 LDH 的影响，目前有两种结论：第一种认
为植物杀螺剂作用于螺类的无氧酵解途径，明显抑
制 LDH 酶的活性[11-12]；第二种认为无氧酵解不是
植物杀螺剂的作用位点，LDH 酶活性变化不大[6]。
本研究结果与第二种结论吻合。
综上所述，本研究结果提示，ECA 抑制钉螺肝
脏 AKP、ALT、AST、LDH 酶活性，影响钉螺肝脏
糖及蛋白质代谢，破坏代谢平衡，导致肝功能紊乱
是钉螺死亡的重要原因之一。

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