全 文 ：中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 44 卷 第 23 期 2013 年 12 月

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当归补气活性部位的谱效关系研究
杨英来 1，胡 芳 1，刘小花 1，郭 龙 1，杨 涛 1，李应东 2，封士兰 1*
1. 兰州大学药学院，甘肃 兰州 730000
2. 甘肃中医学院，甘肃 兰州 730000
摘 要：目的 探讨当归补气活性部位 HPLC 特征图谱与其补气功效的相关性。方法 用控食和疲劳的方法建立小鼠气虚
模型；比较当归不同提取部位对气虚小鼠单核巨噬细胞的吞噬功能及免疫器官等的影响，筛选当归补气药效部位。用灰色关
联统计方法将补气作用较佳的各批当归药材 70%乙醇提取部位（醇提物）HPLC 特征图谱各共有峰的峰面积与补气药效数据
相关联，研究谱效相关性。结果 当归醇提物对气虚症状有一定的改善作用；根据关联度大小确定当归醇提物中各成分对补
气作用贡献大小的顺序（按特征峰编号）为 18＞5＞7＞12＞17＞4＞19＞2＞20＞6＞8＞3＞14＞1＞16＞11＞9＞13＞15＞10，
其中 7、10、11、13、17、18 和 20 号峰分别为阿魏酸、洋川芎内酯 I、洋川芎内酯 H、洋川芎内酯 A、藁本内酯、丁烯基苯
酞和欧当归内酯 A。结论 当归醇提物具有较强的补气作用，HPLC 特征图谱与补气作用有一定相关性。
关键词：当归；补气作用；特征图谱；谱效关系；灰关联度
中图分类号：R282.710.5 文献标志码：A 文章编号：0253 - 2670(2013)23 - 3346 - 06
DOI: 10.7501/j.issn.0253-2670.2013.23.016
Spectrum-effect relationship of active fraction from Angelicae Sinensis Radix
with effect of reinforcing Qi
YANG Ying-lai1, HU Fang1, LIU Xiao-hua1, GUO Long1, YANG Tao1, LI Ying-dong2, FENG Shi-lan1
1. College of Pharmacy, Lanzhou University, Lanzhou 730000, China
2. Gansu College of Traditional Chinese Medicine, Lanzhou 730000, China
Abstract: Objective To analyze the correlation between HPLC chromatogram and the effect of different extracted fractions from
Angelicae Sinensis Radix (ASR) on reinforcing Qi. Methods Qi deficiency model of mice was set up by controlling diet and
fatigue. The influences of the different extracted fractions from ASR on phagocytotic ability of mononuclear macrophage and
immune organs of mice with the symptoms of Qi deficiency were compared, and the active fraction of ASR was screened. The part
which was extracted with 70% ethanol (ethanol extract) from ASR has the certain improvement on the Qi deficiency symptoms. The
peak areas of each common peak from HPLC fingerprint were correlated with the pharmacodynamic efficacy, and the grey relation
statistics was used to study the spectrum-effect relationship. Results The contribution of various components in ethanol extract
with the effect of reinforcing Qi was determined by the spectrum-effect relationship, the order was as follows (characteristic peak
number): 18 > 5 > 7 > 12 > 17 > 4 > 19 > 2 > 20 > 6 > 8 > 3 > 14 > 1 > 16 > 11 > 9 > 13 > 15 > 10, peak 7, 10, 11, 13, 17, 18, and
20 are ferulic acid, senkyunolide I, senkyunolide H, senkyunolide A, ligustilide, butylidenephthalide, and levistilide A, respectively.
Conclusion The ethanol extract of ASR has the strong activity of reinforcing Qi, and there is a certain correlation between HPLC
specific chromatogram and the effect.
Key words: Angelicae Sinensis Radix ; reinforcing Qi; specific chromatogram; spectrum-effect relationship; gray relation degree

当归为伞形科植物当归Angelica sinensis (Oliv.)
Diels 的根，入肝、心、脾经，药性甘、辛、温，具
有补气活血、调经止痛的功效，主产于我国甘肃岷
县和宕昌县[1-2]。有关当归与其他中药材配伍使用
对动物气虚症状影响的研究较多[3-4]，而有关当归
单味药材对气虚症状影响的研究鲜见报道。本实验
根据“控食少气、疲劳耗气”的中医理论，通过控
制饮食和力竭游泳实验制备气虚小鼠模型[5]，研究

收稿日期：2013-03-21
基金项目：“十二五”国家科技支撑计划课题（2011BAI05B02）
作者简介：杨英来（1987—），女，新疆阿克苏人，兰州大学药学院药物分析硕士研究生。Tel: 13919844537 E-mail: yangyingl11@126.com
*通信作者 封士兰 Tel: 13993162172 E-mail: fengshl@Lzu.edu.cn
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当归不同提取物对气虚小鼠免疫功能的影响，筛选
当归补气药效部位，建立补气作用较强的提取部位
的高效液相色谱（HPLC）特征图谱，并采用灰关联
度法研究特征图谱与补气作用之间的关联性，为当
归功效的深入研究提供实验依据。
1 材料
1.1 药材与试剂
当归药材，产地甘肃定西、陇南、云南鹤庆，
兰州佛慈制药股份有限公司提供，经兰州佛慈制药
股份有限公司柴国林高级工程师鉴定为伞形科植物
当归 Angelica sinensis (Oliv.) Diels，产地见表 1；阿
魏酸（批号 100834-200701）、藁本内酯（批号 110756-
200110）、欧当归内酯 A（批号 200175-200409），
中国食品药品检定研究所，经 HPLC 法测定质量分
数均≥98%；丁烯基苯酞（批号 YL2013020907）、
洋川芎内酯 A（批号 YL2013021705）、洋川芎内酯
H（批号 YL2013020301）、洋川芎内酯 I（批号
YL2013021501），上海一林生物科技有限公司，经
HPLC 法测定质量分数均≥98%；纯净水，兰州大
学第一医院；以及醋酸、色谱醇甲醇、95%乙醇、
印度墨汁、生理盐水等。
表 1 当归药材来源
Table 1 Sources of ASR
编号 产地 编号 产地
1 榆中马坡乡 6 宕县
2 漳县大草滩乡 7 定西岷县 1
3 漳县金钟 8 武都
4 定西渭源 9 云南鹤庆
5 文县 10 定西岷县 2

1.2 动物
昆明种小鼠，18～22 g，雌雄兼用，由兰州大
学动物实验中心提供，许可证号：SCXK（甘）
2009-0004。
1.3 仪器
Waters alliance 2695 高效液相色谱仪（包括
Waters 2996 型 PDA 检测器、Millenium 32 色谱工作
站）；色谱柱为 Diamonsil ODS-C18柱（250 mm×4.60
mm，5 μm）；1.0 中药色谱特征图谱计算机辅助相
似性评价系统软件，中南大学；KQ—400DB 超声
仪，昆山市超声仪器有限公司；Sartorius BP211D
型十万分之一天平、Sartorius BS224S 型万分之一天
平，德国 Sartorius 公司；UV—1700 型紫外仪，日
本岛津公司。
2 方法与结果
2.1 当归提取物的制备
取当归药材 100 g，加 7 倍量水，按《中国药典》
2010 年版方法[1]，连续蒸馏 8 h，收集油层，油层
用乙醚萃取 3 次，合并萃取液，除去乙醚即得挥发
油（部位 1，提取率为 0.4%）。水提取液滤过后浓
缩至含生药 1 g/mL，加 95%乙醇至乙醇体积分数为
80%，沉淀，静置 24 h[6]。滤过后得沉淀和上清液，
沉淀加水溶解，浓缩至浸膏，得当归粗多糖（部位
2，提取率为 30%）；上清液浓缩，得水提醇沉部位
（部位 3，提取率为 24%）。
另取当归药材 100 g，分别加入 10、8、6 倍量
70%乙醇，分别提取 60、45、45 min，提取液离心
后合并、浓缩，得醇提物（部位 4，提取率为 60%）。
10 批当归药材用同法处理，其中挥发油加 0.3%聚
山梨酯-80 制成混悬液，其他各提取物加水溶解，
质量浓度为 0.24 g/mL（按生药量计算）。
2.2 当归不同提取部位对气虚小鼠的影响[7-9]
60 只小鼠，雌雄各半，随机分为对照组，模型
组，部位 1、2、3、4 组，每组 10 只。对照组常规
饲养，自由饮食；其他各组控制饮食，并进行力竭
游泳，游泳水温 30 ℃，不能以尾巴撑桶边休息，
每日游泳 1 次，连续 2 周。第 15 天开始 ig 给予当
归（10 号药材）各提取部位（生药 2.4 g/kg），每天
给药 1 次，连续给药 10 d，对照组和模型组给予等
量生理盐水。于末次给药后 30 min，小鼠尾 iv 20%
印度墨汁 0.01 mL/g，于注射后 2、10 min，分别从
眼静脉丛取血 20 μL，溶于 0.1% NaHCO3 溶液 2 mL
中，摇匀，分光光度计测定波长 600 nm 处吸光度
（A）。之后将小鼠脱臼处死，分别称肝、脾和胸腺
质量，计算各脏器指数；计算未校正的吞噬指数（K）
及校正吞噬指数（α）。
K＝(lgA1－lgA2) / (t2－t1)
α＝［体质量 / (肝质量＋脾质量)×K］1/3
脏器指数＝脏器湿质量 / 体质量×100
A1、A2分别为注射后 2、10 min 的 A 值，t2=10，t1=2
数据以 ±x s 表示，采用 SPSS 18.0 统计软件进
行分析，用方差分析中均数的两两比较法比较各部
位间补气作用的差异。
结果显示，模型组小鼠 K 值、脏器指数均低于
对照组（P＜0.05），表明小鼠气虚模型制备成功。
与模型组比较，当归各提取部位组小鼠的 K 值、脏
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器指数不同程度地提高，表明这些提取部位对气虚
症状有一定的改善作用，其中醇提物（部位 4）的
作用最显著（P＜0.05、0.01）。结果见表 2、3。因
此，对 10 批当归药材的醇提物（部位 4）进行特征
图谱和药效间的灰关联度分析。
2.3 当归醇提物（部位 4）对气虚小鼠的影响
取小鼠 120 只，雌雄各半，随机分为对照组、
模型组、各批当归药材醇提物组，每组 10 只。各组
给药方式、血样采集及处理过程同“2.2”项。结果
显示，各给药组气虚小鼠各项指标均有一定的改善，
其中 4、7、10 号当归醇提物的效果较好，表明定西
产当归的醇提物对小鼠气虚症状有较好的缓解作
用。结果见表 4、5。
表 2 当归不同提取部位对气虚小鼠 K 和 α值的影响
( ± = 10x s , n )
Table 2 Effects of different extracted fractions from ASR
on K and α values in mice with Qi deficiency
symptoms ( ± = 10x s , n )
组 别 剂量 /
(g·kg−1)
K 值 α值
对照 － 0.028 9±0.003 3 0.847 5±0.050 2
模型 － 0.200 3±0.005 0.715 2±0.041 8*
部位 1 2.4 0.224 3±0.004 3 0.752 3±0.061 6
部位 2 2.4 0.243 5±0.002 1 0.785 2±0.020 9▲
部位 3 2.4 0.252 5±0.003 8 0.776 2±0.027 4▲
部位 4 2.4 0.263 5±0.004 7 0.796 5±0.031 5▲▲
与对照组比较：*P＜0.05；与模型组比较：▲P＜0.05 ▲▲P＜0.01
*P < 0.05 vs control group; ▲P < 0.05 ▲▲P < 0.01 vs model group
表 3 当归不同提取部位对气虚小鼠体质量、胸腺和脾脏指数的影响 ( ± = 10x s , n )
Table 3 Effects of different extracted fractions from ASR on body weight, thymus and spleen indexes
of mice with Qi deficiency symptoms ( ± = 10x s , n )
组别 剂量 / (g·kg−1) 给药后体质量增加值 / g 脾脏指数 胸腺指数
对照 － 1.13±2.94 0.40±0.07 0.31±0.02
模型 － 6.80±1.12** 0.32±0.02** 0.24±0.02***
部位 1 2.4 11.33±3.45▲▲ 0.34±0.08 0.27±0.02▲
部位 2 2.4 11.48±1.22▲▲▲ 0.35±0.02▲ 0.28±0.04▲
部位 3 2.4 12.11±3.95▲▲ 0.37±0.05▲ 0.30±0.05▲
部位 4 2.4 12.01±1.89▲▲▲ 0.35±0.01▲▲ 0.30±0.03▲▲▲
与对照组比较：*P＜0.05 **P＜0.01 ***P＜0.001；与模型组比较：▲P＜0.05 ▲▲P＜0.01 ▲▲▲P＜0.001，下表同
*P < 0.05 **P < 0.01 ***P < 0.001 vs control group; ▲P < 0.05 ▲▲P < 0.01 ▲▲▲P < 0.001 vs model group, same as below
表4 当归醇提物对气虚小鼠K和α值的影响 ( ± = 10x s , n )
Table 4 Effects of ethanol extract from ASR on K and α
values in mice with Qi deficiency symptoms
( ± = 10x s , n )
组 别
剂量 /
(g·kg−1)
K 值 α值
对照 － 0.026 4±0.006 9 0.822 3±0.085 8
模型 － 0.016 7±0.006 2* 0.681 3±0.084 4**
样品 1 2.4 0.024 1±0.005 3▲ 0.801 4±0.071 0▲▲
样品 2 2.4 0.019 7±0.009 9 0.790 0±0.106 1▲
样品 3 2.4 0.023 9±0.005 2▲ 0.783 5±0.061 4▲
样品 4 2.4 0.023 4±0.003 2▲ 0.781 7±0.036 4▲▲
样品 5 2.4 0.025 6±0.005 2▲▲ 0.787 3±0.102 5▲
样品 6 2.4 0.024 3±0.004 8▲ 0.770 0±0.068 4▲
样品 7 2.4 0.025 9±0.004 2▲▲ 0.768 7±0.052 4▲
样品 8 2.4 0.025 0±0.004 5▲ 0.785 0±0.050 3▲
样品 9 2.4 0.023 2±0.004 5 0.782 0±0.033 1▲
样品 10 2.4 0.027 0±0.003 3▲▲ 0.783 1±0.067 9▲
2.4 不同产地当归醇提物HPLC特征图谱的建立[11]
2.4.1 色谱条件 色谱柱为 Diamonsil ODS-C18 柱
（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相为甲醇（A）-1%
醋酸（B），梯度洗脱（0～20 min，5%～20% A；20～
35 min，20%～50% A；35～45 min，50%～70% A；
45～60 min，70%～80% A；60～75 min，80%～
100%A；75～85 min，100% A；85～86 min，100%～
5% A；86～95 min，5% A）；体积流量 1.0 mL/min；
柱温 30 ℃；检测波长 254 nm；进样量 20 μL。
2.4.2 供试品溶液制备 取当归醇提物 0.2 g，精密
称定，置于 10 mL 量瓶中，加甲醇溶解，定容至刻
度，摇匀，即得供试品溶液，过 0.45 μm 微孔滤膜，
备用。
2.4.3 对照品溶液的制备 分别称取阿魏酸、洋川
芎内酯 I、洋川芎内酯 H、洋川芎内酯 A、藁本内
酯、丁烯基苯酞和欧当归内酯 A 对照品适量，加甲
醇，制成质量浓度分别为 0.212、0.380、0.326、0.780、
0.788、0.102、0.636 mg/mL 的对照品溶液。
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表 5 10 批当归醇提物对气虚小鼠体质量、胸腺和脾脏指数的影响 ( ± = 10x s , n )
Table 5 Effects of ethanol extract from 10 batches of ASR on body weight, thymus and spleen
indexes of mice with Qi deficiency symptoms ( ± = 10x s , n )
组 别 剂量 / (g·kg−1) 给药后体质量增加值 / g 胸腺指数 脾脏指数
对照 － 0.31±4.10 0.22±0.05 0.40±0.06
模型 － 6.81±1.49*** 0.15±0.03** 0.34±0.09*
样品 1 2.4 10.96±1.79▲▲▲ 0.21±0.06▲ 0.38±0.07▲
样品 2 2.4 9.69±1.91▲▲ 0.19±0.04▲ 0.36±0.05
样品 3 2.4 9.26±3.82 0.18±0.02▲ 0.38±0.04▲▲
样品 4 2.4 10.94±2.05▲▲▲ 0.18±0.03▲ 0.38±0.03▲▲
样品 5 2.4 10.84±3.25▲▲ 0.20±0.04▲ 0.36±0.03▲
样品 6 2.4 11.66±4.60▲ 0.21±0.05▲▲ 0.36±0.03▲
样品 7 2.4 9.41±2.21▲ 0.19±0.03▲ 0.38±0.03▲▲
样品 8 2.4 10.49±1.62▲▲▲ 0.19±0.07▲ 0.395±0.05▲▲
样品 9 2.4 9.80±2.08▲▲ 0.16±0.02 0.39±0.04▲▲
样品 10 2.4 9.90±1.47▲▲▲ 0.19±0.02▲▲ 0.38±0.04▲▲

2.4.4 方法学考察 对实验方法进行精密度、稳定
性、重复性、回收率考察，结果指纹图谱相似度的
RSD 分别为 0.15%、0.56%、1.40%、2.3%，符合分
析要求。
2.4.5 特征图谱的建立 分别吸取供试品溶液和对
照品溶液 20 μL，进样，按“2.4.1”项下色谱条件
进行测定，记录 60 min 色谱图。图谱中有 20 个峰
是各供试品所共有的，因此确定它们为共有峰，并
指认其中 7、10、11、13、17、18、20 号峰分别为
阿魏酸、洋川芎内酯 I、洋川芎内酯 H、洋川芎内
酯 A、藁本内酯、丁烯基苯酞和欧当归内酯 A。结
果见图 1。
2.5 当归醇提物特征图谱与药效的灰关联度及关
联序[12]
根据灰关联度分析法，将原始数据进行标准化
转换后，计算关联系数和关联度。表 6 列出 10 批当
归药材醇提物的共有峰峰面积及其与补气药效值
（R）的关联度。结果显示，特征图谱中各峰所代表
的成分与醇提物的补气作用有一定的关联（关联
度＞0.77），其中 5、7、12、18 号峰所代表的化学

7-阿魏酸 10-洋川芎内酯 I 11-洋川芎内酯 H 13-洋川芎内酯 A 17-藁本内酯 18-丁烯基苯酞 20-欧当归内酯 A
7-ferulic acid 10-senkyunolide I 11-senkyunolide H 13-senkyunolide A 17-ligustilide 18-butylidenephthalide 20-levistilide A
图 1 10 批当归醇提物 HPLC 特征图谱
Fig. 1 HPLC specific chromatograms of ethanol extract from 10 batches of ASR

0 10 20 30 40 50 60
1 2 3 4 5 6
7
8 9
10
11 12 13
14
15
16
17
18
19 20
t / min
样品 10

样品 1
↑
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表 6 10 批当归醇提物 HPLC-DAD 共有峰峰面积与药效值 R 的关联度
Table 6 Correlation among HPLC-DAD peak areas in common peaks of ethanol extract
from 10 batches of ASR and their R values
峰面积 样品
峰 1 峰 2 峰 3 峰 4 峰 5 峰 6 峰 7 峰 8 峰 9 峰 10 R
1 201 180 233 608 279 869 541 369 287 710 176 506 176 506 229 737 285 447 959 513 0.801 4
2 441 428 100 548 46 929 530 052 148 464 66 006 2 270 996 270 760 229 752 4 150 709 0.790 0
3 167 941 314 467 219 902 1 165 342 194 462 237 463 2 533 006 352 255 1 099 342 623 479 0.783 5
4 265 643 265 643 129 092 679 808 204 302 172 695 2 225 822 323 463 704 703 870 240 0.781 7
5 391 009 423 488 190 332 560 671 264 770 279 005 3 879 670 158 215 178 088 613 135 0.787 3
6 175 211 189 173 214 118 782 034 178 147 238 470 2 604 570 74 509 110 574 591 284 0.770 0
7 215 358 215 358 141 550 209 679 251 921 56 991 1 634 668 90 624 75 304 1 634 123 0.768 7
8 752 621 313 538 68 200 296 009 204 533 111 175 2 437 143 240 081 273 715 2 967 393 0.785 0
9 878 981 504 956 32 784 369 771 147 196 76 291 2 404 357 173 237 126 805 3 414 845 0.782 0
10 80 195 125 887 278 943 522 676 256 474 150 538 2 653 267 53 831 83 926 434 072 0.783 1
关联度 0.807 9 0.870 4 0.830 8 0.882 0 0.924 0 0.851 9 0.991 7 0.843 4 0.778 4 0.772 5
峰面积 样品
峰 11 峰 12 峰 13 峰 14 峰 15 峰 16 峰 17 峰 18 峰 19 峰 20 R
1 220 688 594 213 162 067 187 405 72 967 1 964 597 24 261 169 6 538 814 641 162 1 803 794 0.801 4
2 899 369 246 815 152 694 389 815 148 627 432 207 10 987 229 9 590 196 234 757 987 879 0.790 0
3 195 883 335 025 247 896 216 578 528 908 787 984 17 209 120 7 857 564 304 462 782 200 0.783 5
4 236 113 265 563 2 308 157 182 070 340 252 501 515 8 017 518 7 751 982 184 865 417 730 0.781 7
5 207 655 418 841 127 038 102 981 27 464 3 807 032 16 214 842 7 777 276 634 844 1 359 325 0.787 3
6 171 337 327 963 270 942 174 176 231 517 742 989 15 759 147 5 727 524 350 355 819 643 0.770 0
7 355 004 492 981 213 269 296 134 72 414 660 402 9 288 481 5 831 576 697 343 2 169 933 0.768 7
8 706 713 343 843 337 597 538 777 12 855 994 534 15 362 873 7 342 768 459 168 1 627 677 0.785 0
9 744 032 256 767 468 001 562 024 156 596 424 702 8 813 767 6 972 611 504 280 2 133 310 0.782 0
10 130 599 392 268 33 158 84 859 65 557 858 954 18 253 272 4 926 048 354 929 897 211 0.783 1
关联度 0.792 6 0.910 6 0.773 3 0.822 7 0.775 5 0.805 6 0.891 8 0.942 5 0.870 9 0.853 3

成分与补气作用的关联度较高（P＞0.9）。根据关联
度大小，各成分对补气作用贡献大小依次为 18＞5＞
7＞12＞17＞4＞19＞2＞20＞6＞8＞3＞14＞1＞
16＞11＞9＞13＞15＞10，其中 7、10、11、13、17、
18、20 号峰依次为阿魏酸、洋川芎内酯 I、洋川芎
内酯 H、洋川芎内酯 A、藁本内酯、丁烯基苯酞和
欧当归内酯 A。
3 讨论
中医认为气是构成人体和维持人体生命活动的
最基本物质之一，气虚是气的生成与来源不足或消
耗过度致气亏虚，不能正常发挥作用，以致人体脏
腑功能活动减退所形成的病理变化。根据这一理论，
本实验采用控食和疲劳的方法制备小鼠气虚模型。
随着造模时间的延长，模型组小鼠出现精神萎靡、
睁眼困难、毛稀疏蓬松、尾巴和爪子颜色淡白、弓
背趴地、少活动以及反应迟钝等症状，K 值、胸腺
和脾脏指数均低于对照组。当归醇提物各组的上述
指数均得到不同程度地改善，表明其对小鼠气虚症
状具有改善作用，这与文献报道一致[12-13]。由于造
模过程中小鼠免疫力下降，对周围环境的变化很敏
感，所以在实验过程中要注意温度和洁净度。
当归醇提物化学成分复杂，单一的流动相很难
达到理想的分离效果[14]。本实验考察了不同溶剂、
不同比例的流动相及不同洗脱梯度的分离效果，最
终优选出分离效果最佳的流动相及梯度洗脱程序。
结果在确定的色谱条件下，各色谱峰的分离效果较
中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 44 卷 第 23 期 2013 年 12 月

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好，且基线平稳。
用灰关联度分析方法研究特征图谱和药效之间
的关系，结果表明特征图谱中各共有峰所代表化学
成分与补气作用有一定关联性（关联度＞0.77），说
明当归醇提物的补气作用是其化学成分群共同作用
的结果。但由于当归中化学成分复杂且相对不稳定，
因此只确定了其中的阿魏酸、洋川芎内酯 I、洋川
芎内酯 H、洋川芎内酯 A、藁本内酯、丁烯基苯酞
和欧当归内酯 A。其他成分有待进一步研究。
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