全 文 ：中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 43 卷 第 12 期 2012 年 12 月

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• 药理与临床 •
丹参抗成纤维细胞增殖作用的分子机制研究
张楠楠 1，王 倩 2，高 洁 3*，李红艳 4，韩彦琪 3，邹敏杰 4，白 钢 3
1. 天津中医药大学，天津 300193
2. 河南广播电视大学，河南 郑州 450008
3. 南开大学药学院，天津 300071
4. 天津嘉氏堂科技有限公司，天津 300457
摘 要：目的 探讨丹参抗成纤维细胞增殖作用的有效成分及分子作用机制。方法 采用索氏提取法制备丹参多种提取物及萃
取部位；以抗人增生性瘢痕成纤维细胞（HSF）增殖的活性为导向，MTS 法筛选活性部位，流式细胞仪检测细胞周期；
UPLC-Q/TOF 法分析丹参活性成分；通过反向对接预测试药抗细胞增殖的机制，RT-PCR 检测 caspase-3、MAP2K1、MAPK1
增殖相关基因的表达水平。结果 丹参石油醚提取部位有较强的抗 HSF 增殖的活性，能显著增加 G0/G1 期细胞的比例，降低
增殖指数（PI），其主要活性成分为丹参酮类化合物；反向对接预测结果显示，丹参酮类化合物抗 HSF 增殖机制主要与调节
caspase-3 和 MAP2K1 等靶点及其相关通路有关；隐丹参酮能够上调 caspase-3 基因的表达，下调 MAP2K1、MAPK1 基因的表
达，与预测结果相吻合。结论 丹参抗 HSF 增殖作用的机制与丹参酮类成分调节 MAPK、VEGF 等信号通路有关。
关键词：丹参；人增生性瘢痕成纤维细胞；MAPK1；反向对接；丹参酮
中图分类号：R282.710.5 文献标志码：A 文章编号：0253 - 2670(2012)12 - 2440 - 08
Antiproliferative molecular mechanisms of components in roots and rhizomes
of Salvia miltiorrhiza on fibroblasts
ZHANG Nan-nan1, WANG Qian2, GAO Jie3, LI Hong-yan4, HAN Yan-qi3, ZOU Min-jie4, BAI Gang3
1. Tianjin University of Traditional Chinese Medicine, Tianjin 300193, China
2. Henan Radio and Television University, Zhengzhou 450008, China
3. College of Pharmacy, Nankai University, Tianjin 300071, China
4. Tianjin Jiashitang Technology Co., Ltd., Tianjin 300457, China
Abstract: Objective To investigate the active components in the roots and rhizomes of Salvia miltiorrhiza and their antiproliferative
molecular mechanisms on fibroblasts. Methods Different components and extraction fractions from the roots and rhizomes of S.
miltiorrhiza were prepared using Soxhlet extraction method. MTS method was used to screen the active components guided by the
antiproliferative activity on human hypertrophic scar fibroblasts (HSF), flow cytometry was used to detect their influence on cell cycle,
and the active components were analyzed by UPLC-Q/TOF method. The antiproliferative mechanism was predicted by reverse
docking, and the gene expression levels of caspase-3, MAP2K1, and MAPK1 were determined using RT-PCR technology. Results
The petroleum ether extract fraction from the roots and rhizomes of S. miltiorrhiza had higher antiproliferative activity on human HSF,
increased the proportion of cells in G0/G1 phase significantly, and reduced the proliferation index (PI). The main active components
were tanshinones. Results of reverse docking indicated the antiproliferative mechanisms on human HSF, might relate to the regulation
of some target proteins, such as caspase-3 and MAP2K1, and the related pathways. RT-PCR results showed that cryptotanshinone
could upregulate the gene expression of caspase-3 and downregulate the gene expression of MAP2K1 and MAPK1. Conclusion The
antiproliferative mechanisms of the components in the roots and rhizomes of S. miltiorrhiza on human HSF may be related with the
regulation of MAPK and VEGF signaling pathways by tanshinone components.
Key words: roots and rhizomes of Salvia miltiorrhiza Bge.; human hypertrophic scar fibroblasts; MAPK1; reverse docking; tanshinone

收稿日期：2012-07-03
基金项目：国家自然科学基金资助项目（81173638，81102835，81001682）
作者简介：张楠楠（1986—），女，硕士研究生，研究方向为中药药理研究。Tel: (022)23504933 E-mail: zhangnannan1225@163.com
*通讯作者 高 洁 Tel: (022)23504933 E-mail: gaojie@nankai.edu.cn
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增生性瘢痕是临床上常见的病理性瘢痕，其病
理本质是以人增生性瘢痕成纤维细胞（HSF）为主
的细胞过度增殖和以胶原为主的细胞外基质过度沉
积的结果。肝、肺、肾等内脏纤维化疾病在病理上
也表现为胶原等细胞外基质过多无序地沉积，这与
皮肤病理性瘢痕产生的机制类似[1]。近年来纤维化
疾病的分子机制研究取得了较大进展，目前已确定
转化生长因子 β（TGF-β）、白细胞介素、早期生长
应答蛋白 1（EGR-1）、血管内皮生长因子（VEGF）、
血小板源性生长因子（PDGF）、过氧化物酶体增生
物激活受体（PPARs）、血清淀粉样蛋白 P（SAP）、
半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶（caspases）以及肾素-血
管紧张素-醛固酮系统（血管紧张素 II）等的调控均
与器官和组织的纤维化有关，但由于纤维化病理机
制的多环节性和复杂性，临床上仍然缺乏有效的抗
纤维化药物[2-4]。
中药具有多成分与多靶点作用的特点，对纤维
化疾病可发挥综合治疗优势[5-6]。丹参为唇形科植物
丹参 Salvia miltiorrhiza Bge. 的根及根茎，具有活血
化瘀、通经止痛的功效[7]，具有较好的抑制纤维化
的作用[8-10]。但丹参抑制 HSF 增殖的确切机制尚未
完全明了。本实验研究丹参不同提取部位抗 HSF 增
殖的作用及其有效成分，旨在探讨丹参抗 HSF 增殖
作用的药效物质基础和分子机制，为病理性瘢痕和
器官纤维化的治疗提供理论依据。
1 材料
1.1 药材与试剂
丹参，购自天津中医药大学第一附属医院，经
天津药物研究院张铁军研究员鉴定为唇形科植物丹
参 Salvia miltiorrhiza Bge. 的干燥根及根茎；氢化可
的松注射液（批号 0910354），天津药业焦作有限公
司。隐丹参酮（质量分数 98%），天津一方科技有限
公司）；DMEM 高糖培养基，美国 Hyclone 公司；特
级胎牛血清（FBS），以色列 Biological Industries 公
司；胰蛋白酶，美国 Gibco 公司；MTS，美国 Promega
公司；乳酸脱氢酶（LDH）试剂盒，南京建成生物
工程研究所；碘化丙啶（PI）、RNase A，美国 Sigma
公司；HE 染色试剂盒，上海碧云天生物技术有限公
司；High-Capacity cDNA Reverse Transcription 试剂
盒，美国 ABI 公司；LightCycler® FastStart DNA
Master SYBR Green I 试剂盒，瑞士 Roche 公司。
1.2 细胞
HSF，上海拜力生物技术有限公司。
1.3 仪器
Waters UPLC-Q-TOF primer 串联质谱仪、
Masslynx 工作站，Waters 公司；BD FACS Calibur
流式细胞仪，BD 公司；Light Cycler Real Time PCR
扩增仪，Roche 公司；生物安全柜，ESCO 公司；
HF151UV 二氧化碳细胞培养箱，Heal Force 公司；
倒置生物相差显微镜，重庆奥特光学仪器公司。
2 方法
2.1 提取物制备
取丹参 20 g，粉碎，依次用 10 倍量的石油醚、
氯仿、醋酸乙酯、正丁醇和水索氏提取 5 h，提取液
分别回收溶剂至膏状，真空干燥，得石油醚部位 0.63
g、氯仿部位 0.81 g、醋酸乙酯部位 0.79 g、正丁醇
部位 0.64 g 以及水提取部位 5.42 g。
2.2 MTS 法检测细胞增殖
对数生长期 HSF 用 0.25%胰蛋白酶消化，悬于
DMEM 高糖培养基（含 10% FBS、1%青霉素和链
霉素），调整细胞密度为 5×104/mL，接种于 96 孔
培养板，每孔 100 μL，于 5% CO2、37 ℃培养 12 h
后，细胞分为对照组（含 1% FBS 的 DMEM 高糖培
养基），氢化可的松阳性对照组（200 μg/mL＋与对
照组相同培养基），丹参各提取部位（25 μg/mL＋与
对照组相同培养基）组（本课题组对 HSF 细胞的预
试验结果表明，丹参各溶剂浸膏给药质量浓度小于
50 μg/mL 时对 HSF 细胞增殖有较高的抑制率且对
细胞无毒性，故本实验选用 25 μg/mL 作为给药质量
浓度），各组给予相应物质培养 24 h 后，每孔加入
120 μL MTS溶液（用DMEM高糖培养基1∶5稀释），
5% CO2、37 ℃继续培养 4 h，取上清，酶标仪测 490
nm 处吸光度（A）值，计算细胞增殖抑制率。
细胞增殖抑制率＝（1－A 给药 / A 对照）
2.3 酶标法检测 LDH 活性[11]
取“2.2”项中的培养基，按 LDH 试剂盒（酶
标法）说明书操作，测 450 nm 处 A 值，计算 LDH
的活力，以评价试药的细胞毒活性。
2.4 流式细胞仪分析细胞周期
细胞处理与给药同“2.2”项。细胞分为对照组
（含 1% FBS 的 DMEM 高糖培养基），氢化可的松阳
性对照组（200 μg/mL＋与对照组相同培养基），丹
参石油醚提取部位组（25 μg/mL＋与对照组相同培
养基），加药后继续培养 24 h，收集各组细胞，PBS
冲洗 2 次，加 70%乙醇于−20 ℃固定过夜，PBS 洗
涤，离心去上清，加入 10 mg/mL RNaseA 2.5 μL、10
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mg/mL PI 染液 2.5 μL，轻轻吹匀，37 ℃孵育 30 min
后用于流式细胞仪检测，计算各细胞周期细胞百分率
及增殖指数（PI）。
PI ＝（S＋G2/M）/（G0/G1＋S＋G2/M）
2.5 抗 HSF 增殖有效成分的 UPLC-Q/TOF 分析
上述细胞增殖实验、LDH 检测和流式细胞术检
测结果表明，丹参石油醚提取部位有较强的抑制
HSF 增殖的作用，故选取该部位进行 UPLC-Q/TOF
分析。取丹参石油醚提取物以甲醇溶解，经 0.22 μm
微孔滤膜滤过，按以下 UPLC 色谱条件和质谱条件
进行 UPLC/Q-TOF 检测，按时间收集流出液置于深
孔板中，真空干燥后，按照“2.2”项下方法进行抗
增殖作用实验。
UPLC 色谱条件：Waters UPLC 超高效液相色
谱仪；Waters Acquity UPLC BEH C18 色谱柱（100
mm×2.1 mm，1.7 μm）；流动相水（A）-乙腈（B），
线性梯度洗脱：0～15 min，2%～100% B，15～17
min，100% B，17～19 min，100%～2% B；体积流
量 0.4 mL/min；进样量 5 μL；柱温 35 ℃；检测波
长 270 nm。
质谱条件：Waters UPLC/Q-TOF 串联质谱仪，
扫描方式正离子，扫描范围为 m/z 50～2 000；毛细
管电压为 3 kV（负模式）；锥孔电压 30 V；脱溶剂
气为氮气，脱溶剂温度 300 ℃，脱溶剂气体积流量
600 L/h；锥孔气流 50 L/h，源温 100 ℃；Q-TOF
扫描率 0.1 s，内扫描延时 0.02 s；数据采集工作站
为 MassLynx 4.1。
2.6 活性成分的反向对接与靶点预测
将“2.5”项鉴定的药效成分立体结构投入
PharmMapper server 网站进行反向对接，预测其可
能的作用靶点[12]，并利用 Kyoto Encyclopedia of
Genes and Genomes（KEGG）通路数据库进行通路
分析，预测抗成纤维细胞增殖的分子机制。
2.7 隐丹参酮抗 HSF 增殖机制验证
2.7.1 隐丹参酮对 HSF 增殖的影响 设对照组（含
1% FBS 的 DMEM 高糖培养基）、氢化可的松（200
μg/mL＋与对照组相同培养基）组、丹参石油醚提
取部位（25 μg/mL＋与对照组相同培养基）组，隐
丹参酮高、中、低质量浓度（100、50、25 μg/mL＋
与对照组相同培养基）组，其他处理按“2.2”项下
方法进行，MTS 法检测各组 HSF 增殖抑制率。
2.7.2 HE 染色法观察隐丹参酮对 HSF 形态学的影
响 分组与处理同“2.7.1”项。细胞培养结束后，
按 HE 染色试剂盒说明书对各组细胞进行染色，于
显微镜下观察（×100）细胞形态的变化。
2.7.3 隐丹参酮对信号通路相关基因表达的影响
分组与处理同“2.7.1”项。细胞培养结束后，采用
醇沉法提取总 RNA，按试剂盒说明进行 RT-PCR 实
验，以 β-actin 为内参，检测隐丹参酮对 caspase-3、
MAP2K1、丝裂原活化蛋白激酶 1（MAPK1）基因
表达的影响。引物序列见表 1。参照 High-Capacity
cDNA Reverse Transcription 试剂盒条件进行逆转录，
反应程序：25 ℃、10 min，37 ℃、120 min，85 ℃、
5 min。参照 Light Cycler Real Time PCR 扩增仪和
LightCycler® FastStart DNA Master SYBR Green I 试
剂盒说明设置荧光定量 PCR 反应条件，反应体系为
20 μL，反应程序：预变性 95 ℃，10 min，1 个循环；
PCR 反应 95 ℃、10 s，55 ℃、10 s，72 ℃、15 s，
45 个循环；熔解曲线分析 95 ℃、0 s，65 ℃、15 s，
95 ℃、0 s。以 2−∆∆Ct法计算 mRNA 相对表达量。
2.8 统计学分析
应用 SPSS 13.0 软件进行统计学处理，多组数
表 1 基因引物序列及片段长度
Table 1 Sequences and fragment length of primers
基因 引物序列 产物片段 / bp 退火温度 / ℃
caspase-3 正向：ATCACAGCAAAAGGAGCAGTTT 214 60.3
反向：ACACCACTGTCTGTCTCAATGC 60.2
MAP2K1 正向：GGAGAACTGAAGGATGACGACT 225 59.7
反向：GCTGTAGAACGCACCATAGAAG 59.1
MAPK1 正向：TCCCCATCACAAGAAGACCT 115 59.5
反向：AGTCAGCATTTGGGAACAGC 60.3
β-actin 正向：GACAGGATGCAGAAGGAGAT 149 60.1
反向：TGCTTGCTGATCCACATCTG 60.0
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据比较采用单因素方差分析。
3 结果
3.1 丹参各提取部位对 HSF 增殖的影响
在各组 HSF 培养基中 LDH 活性无显著差异的
条件下，丹参石油醚、氯仿、醋酸乙酯和水提取部
位均能抑制 HSF 增殖，其中石油醚部位作用最强，
与对照组相比差异显著（P＜0.01）。结果见图 1。
3.2 石油醚提取部位对 HSF 细胞周期的影响
流式细胞仪分析显示，与对照组相比，氢化
可的松组和丹参石油醚提取部位组 HSF 处于
G0/G1 期的细胞比例均显著增加（P＜0.01），S 期
和 G2/M 期细胞比例显著降低（P＜0.01），丹参石
油醚提取物还能明显降低 HSF 的 PI（P＜0.01）。
结果见图 2。

与对照组比较：*P＜0.05 **P＜0.01，下同
*P < 0.05 **P < 0.01 vs control group, same as below
图 1 丹参各提取部位对 HSF 增殖和 LDH 活性的影响 ( 6=± n , sx )
Fig. 1 Effects of various solvent extract fractions from roots and rhizomes of S. miltiorrhiza
on human HSF proliferation and LDH activity ( 6=± n , sx )

图 2 丹参石油醚提取部位对 HSF 细胞周期的影响 ( 3=± n , sx )
Fig. 2 Effect of petroleum ether extract fraction from roots and rhizomes of S. miltiorrhiza on cell cycle of human HSF ( 3=± n , sx )

对照 氢化可的松 石油醚部位 氯仿部位 醋酸乙酯部位 正丁醇部位 水部位
30
20
10
0
100
80
60
40
20
0
HSF 增殖抑制率
LDH 活性
H
SF
增
殖
抑
制
率
/
%
LD
H
活
性
/ (U
·L
−1)
**
**
* * *




对照
350
280
210
140
70
0
350
280
210
140
70
0
400
320
240
160
80
0
氢化可的松 石油醚提取部位
细
胞
数

细
胞
数

细
胞
数

0 40 80 120 160 200 0 40 80 120 160 200 0 40 80 120 160 200
DNA 量 (FL2-A)
80
60
40
20
0
细
胞
比
例
/
%

G0/G1 S G2/M PI
细胞周期
对照
氢化可的松
丹参石油醚 **
**
**
**
** **
**
*
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3.3 抗 HSF 增殖有效成分的 UPLC-Q/TOF 分析
抗 HSF 增殖成分的 UPLC-Q/TOF 分析显示，
保留时间为 9～12 min 的成分有较好的抗细胞增殖
作用（图 3-A～C）。依据文献报道的精确相对分子
质量以及离子碎片信息[13-19]，丹参石油醚提取部位
主要含邻醌型丹参酮类二萜二氢丹参酮 I、隐丹参
酮、次甲丹参醌和丹参酮 IIA 以及对酯型罗列酮类
二萜丹参新醌 B 等 5 种活性成分，均属丹参酮类（表
2）。因它们的结构类似（图 3-D），已知药理活性也
相似[20]，因此选用其中的隐丹参酮进行后续细胞水
平的验证实验。
3.4 活性成分的反向靶点对接及作用通路分析
根据反向对接结果，推测上述 5 种丹参酮类成
分与 caspase-3、MAP2K1、MAPK14、hPDK1 等蛋
白可能有较强的结合能力，提示其通过与相应蛋白
结合，调节 MAPK、VEGF、黏着斑（Focal adhesion）
等信号通路发挥抗细胞增殖作用。结果见图 4。
3.5 隐丹参酮对 HSF 抑制作用及机制分析
MTS 检测结果显示，隐丹参酮各质量浓度组均能
明显抑制 HSF 的增殖，与对照组相比差异显著（P＜
0.01）（图 5）。HE 染色后，显微镜观察可见，对照
组细胞形态规则，胞核呈椭圆形或圆形，胞体呈梭

图 3 丹参石油醚提取物 UPLC-Q/TOF 图 (A)、总离子流图 (B)、对 HSF 细胞的抗增殖作用 (C) 及其活性成分结构 (D)
Fig. 3 UPLC-Q/TOF chromatograms (A) , total ion current (B), antiproliferative effect on human HSF cells (C), and structures
of active components (D) in petroleum ether extract fraction from roots and rhizomes of S. miltiorrhiza
表 2 丹参石油醚提取物中抗增殖成分的 UPLC-Q/TOF 分析
Table 2 UPLC-Q/TOF analysis on antiproliferative components in petroleum ether extract fraction
from roots and rhizomes of S. miltiorrhiza
峰号 化合物 分子式 tR / min
实验值 m/z
[M＋H]+
理论值
m/z
MS/MS 偏差
1 二氢丹参酮 I C18H14O3 9.089 279.103 1 278.049 3 261 [M＋H－H2O]+, 233 [M＋H－H2O－CO]+, 205 [M＋H－
H2O－CO－CO]+, 190 [M＋H－H2O－CO－CO－CH3]+
3.58
2 丹参新醌 B C18H16O3 9.430 281.119 0 280.109 9 281 [M＋H]+, 263 [M＋H－H2O]+, 235 [M＋H－H2O－CO]+ 4.27
3 隐丹参酮 C19H20O3 10.228 297.150 0 296.141 2 297 [M＋H]+, 279 [M＋H－H2O]+, 251 [M＋H－H2O－CO] + 3.03
4 次甲丹参醌 C18H14O3 10.710 279.103 4 278.049 3 279 [M＋H]+, 261 [M＋H－H2O]+, 233 [M＋H－H2O－CO]+,
205 [M＋H－H2O－CO－CO]+
4.66
5 丹参酮 IIA C19H18O3 11.405 295.132 4 294.125 6 295 [M＋H]+, 277 [M＋H－H2O]+, 249 [M＋H－H2O－CO]+ −3.39






O
O
O
O
O
O
O
O
O
O
O
O
O
OH
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19
t / min
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19
氢化可的松
1 2
3
4
5
**
**
** **
A
B
C
1-二氢丹参酮 I 2-丹参新醌 B
3-隐丹参酮 4-次甲丹参醌
5-丹参酮 IIA
D
60
40
20
0
−20 增
殖
抑
制
率
/
%

对照
1 2
4
3
5
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图 4 丹参酮类成分抗 HSF 增殖作用可能的靶点及通路
Fig. 4 Possible targets and pathways for antiproliferative effect of tanshinone components on human HSF

图 5 隐丹参酮对 HSF 增殖的影响
Fig. 5 Effect of cryptoanshinone on proliferation of human HSF
形；氢化可的松、丹参石油醚提取部位和隐丹参酮
组 HSF 均不同程度地出现细胞数量减少、细胞突起
变短或者缺失、细胞质及胞核浓缩等现象，且隐丹
参酮对HSF的抑制作用呈现质量浓度相关性（图 6）。
RT-PCR 检测结果显示，隐丹参酮能够显著增
加 HSF 细胞 caspase-3 基因的表达，抑制 MAP2K1、
MAPK1 基因的表达（图 7）。
4 讨论
本实验对筛选出的抗 HSF 增殖活性较强的丹
参石油醚提取部位中的成分进行UPLC-Q/TOF分析，

图 6 隐丹参酮对 HSF 形态的影响
Fig. 6 Effect of cryptotanshinone on cell morphology of human HSF




对照 氢化可的松 丹参石油醚
隐丹参酮 100 μg·mL−1 隐丹参酮 50 μg·mL−1 隐丹参酮 25 μg·mL−1
二氢丹参酮 I 丹参新醌 B 隐丹参酮 丹参酮 IIA
hPDK1
PP-1G
HGF 受体 MAP2K1
MAPK1
MAPK14
caspase-3
黏着斑信号通路
MAPK 信号通路
VEGF 信号通路
细胞增殖

60
40
20
0
增
殖
抑
制
率
/
%

100 50 25
隐丹参酮 / (μg·mL−1)
对照 氢化可 丹参
的松 石油醚
**
**
**
**
**
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图 7 隐丹参酮对信号通路相关基因表达的影响
Fig. 7 Effects of cryptotanshinone on expression of target genes in signal pathway
鉴定出二氢丹参酮 I、丹参新醌 B、隐丹参酮、次甲
丹参醌和丹参酮 IIA 5 个主要的活性成分，因其均属
丹参酮类物质，故选择隐丹参酮进行细胞增殖抑制
实验，证实这些化合物确有抑制 HSF 增殖的作用。
反向对接技术预测了上述 5 个活性成分潜在的结合
蛋白靶点，减少了中药作用机制研究的盲目性[21，结
果显示，隐丹参酮具有与 MAP2K1、caspase-3、
MAPK14、HGF 受体、PP-1G 等蛋白结合的能力，
提示其可能通过与相应蛋白结合，调节 VEGF、
MAPK、黏着斑等信号通路，进而发挥抗细胞增殖
的作用。
MAPK 可以调节细胞的生长、分化和凋亡，胞
外信号调节激酶（ERK）、p38 MAPK、JNK 是 MAPK
家族的 3 个成员[22]。ERK1、ERK2 能促进细胞增殖，
决定细胞向终末期分化或发生凋亡，ERK 的持续活
化促进细胞增殖和向恶性化转化，而 ERK 的下调则
可抑制细胞生长和生长刺激基因的转录。隐丹参酮
和丹参酮 IIA 通过 ERK/MAPK 通路抑制 3T3-L1 脂
细胞的增殖[23]。本研究结果显示，隐丹参酮能通过
抑制 ERK/MAPK 通路，有效下调 MAP2K1 及其下
游 MAPK1 基因的表达，抑制 HSF 增殖。VEGF 信
号通路与细胞的增殖、迁移和存活有关，丹参酮 IIA
抑制乳腺癌细胞株 MDA-MA-231 增殖可能与
VEGF 通路有关[24-26]。黏着斑由信号、细胞膜上的
整联蛋白（integrins）和细胞内的细胞骨架蛋白等相
互连接集聚而成，能够调控复杂的细胞行为，如细
胞增殖、存活、迁移和侵袭[27]。本实验结果表明，
丹参酮类物质能通过MEK-ERK激活MAPK信号通
路，进一步激活 VEGF 信号通路，影响细胞 DNA
合成，从而影响 HSF 增殖；还可能通过 MAP2K1、
HGF 受体、PP-1G、hPDK1 等靶点作用于黏着斑信
号通路，抑制 HSF 增殖。
本研究初步阐明丹参抗 HSF 增殖的物质基础
和分子机制，为其应用于病理性瘢痕和抗器官纤维
化治疗提供了实验依据。
参考文献
[1] 孙淑君, 向 阳, 黄世林. 单味中药及其有效成分抗纤
维化机制的研究进展 [J]. 中国中药杂志, 2008, 33(24):
2882-2886.
[2] Wynn T A. Cellular and molecular mechanisms of fibrosis
[J]. J Pathol, 2008, 214(2): 199-210.
[3] Profyris C, Tziotzios C, Do Vale I. Cutaneous scarring:
Pathophysiology, molecular mechanisms, and scar
reduction therapeutics mechanisms, and scar reduction
therapeutics Part I. The molecular basis of scar formation
[J]. J Am Acad, 2012, 66(1): 1-10.
[4] Lotersztajn S, Julien B, Teixeira-Clerc F, et al. Hepatic
fibrosis: molecular mechanisms and drug targets [J]. Annu
Rev Pharmacol, 2005, 45: 605-628.
[5] Chor S Y, Hui A Y, To K F, et al. Anti-proliferative and
proapoptotic effects of herbal medicine on hepatic stellate
cell [J]. J Ethnopharmacol, 2005, 100(1/2): 180-186.
[6] 倪春艳, 郑仕中, 陆 茵, 等. 以瘦素为靶点中药单体
成分防治肝纤维化研究策略及进展 [J]. 中草药, 2011,
42(9): 1837-1841.
[7] 中国药典 [S]. 一部. 2010.
[8] 张诚玥, 李根林. 丹参干预成纤维细胞增生及其机制
[J]. 眼科新进展, 2011, 31(9): 833-845.
[9] Wang Y H, Xu F, Chen J, et al. Matrix metallopro-
teinase-9 induces cardiac fibroblast migration, collagen
and cytokine secretion: Inhibition by salvianolic acid B
from Salvia miltiorrhiza [J]. Phytomedicine, 2011, 19(1):
13-19.
[10] 林 军, 冯一中, 顾振纶, 等. 丹参总酚酸对博莱霉素
致肺纤维化小鼠的治疗作用 [J]. 中草药, 2008, 39(3):
400-403.
[11] Wu J G, Ma L, Zhang S Y, et al. Essential oil from
100 50 25
隐丹参酮 / (μg·mL−1)
对照 氢化可 丹参
的松 石油醚
ca
sp
as
e-
3
相
对
表
达
量
3
2
1
0
1.5
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隐丹参酮 / (μg·mL−1)
100 50 25
隐丹参酮 / (μg·mL−1)
对照 氢化可 丹参
的松 石油醚
对照 氢化可 丹参
的松 石油醚
M
A
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1
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对
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达
量

M
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PK
1
相
对
表
达
量

中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 43 卷 第 12 期 2012 年 12 月

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rhizomes of Ligusticum chuanxiong induces apoptosis in
hypertrophic scar fibroblasts [J]. Pharm Biol, 2011, 49(1):
86-93.
[12] Liu X, Ouyang S, Yu B, et al. PharmMapper server: A
web server for potential drug target identification using
pharmacophore mapping approach [J]. Nucleic Acids Res,
2010, 38: W609-W614.
[13] Song J Z, Li S L, Zhou Y, et al. A novel approach to
rapidly explore analytical markers for quality control of
Radix Salviae Miltiorrhizae extract granules by robust
principal component analysis with ultra-high perfor-
mance liquid chromatography-ultraviolet-quadrupole
time-of-flight mass spectrometry [J]. J Pharmaceut
Biomed Lysis, 2010, 53: 279-286.
[14] Cao J, Wei Y J, Qi L W, et al. Determination of fifteen
bioactive components in Radix et Rhizoma Salviae
Miltiorrhizae by high-performance liquid chromato- graphy
with ultraviolet and mass spectrometric detection [J].
Biomed Chromatogr, 2008, 22(2): 164-172.
[15] ]Xia L, Liu H L, Li P, et al. Rapid and sensitive analysis
of multiple bioactive constituents in compound Danshen
preparations using LC-ESI-TOF- MS [J]. J Sep Sci, 2008,
31(18): 3156-3169.
[16] Liu M, Li Y G, Zhang F, et al. Chromatographic
fingerprinting analysis of Danshen root (Salvia
miltiorrhiza Radix et Rhizoma) and its preparations using
high performance liquid chromatography with diode array
detection and electrospray mass spectrometry (HPLC-
DAD-ESI/MS) [J]. J Sep Sci, 2007, 30(14): 2256-2267.
[17] Liu A H, Lin Y H, Yang M, et al. Development of the
fingerprints for the quality of the roots of Salvia
miltiorrhiza and its related preparations by HPLC-DAD
and LC-MSn [J]. J Chromatogr B, 2007, 846(1/2): 32-41.
[18] He Q, Hu X J, Cheng Y H. Analysis of ‘SHUANGDAN’
granules by high-performance liquid chromatography-
diode array detection-electrospray ionization tandem
mass spectrometry [J]. J Pharm Biomed Anal, 2006,
41(2): 485-492.
[19] 董 晰, 徐 立, 娄子洋. 丹参药材中水溶性及脂溶性
成分的电喷雾离子阱质谱研究 [J]. 中国药学杂志 ,
2010, 45(14): 1048-1054.
[20] 续洁琨, 栗原博, 郑洁静, 等. 丹参酮类化合物对小鼠
应激性肝损伤的保护作用 [J]. 药学学报, 2006, 41(7):
631-635.
[21] Hopkins A L. Network pharmacology: The next paradigm
in drug discovery [J]. Nat Chem Biol, 2008, 4(11): 682-690.
[22] 滕建英, 徐少骏, 谢 菁, 等. 异搏定对增殖瘢痕成纤
维细胞凋亡及细胞信号传导作用 [J]. 健康研究, 2011,
31(2): 86-90.
[23] Wu S J, Lee S J, Su C H, et al. Bioactive constituents and
anti-proliferative properties of supercritical carbon
dioxide Salvia miltiorrhiza extract in 3T3-L1 adipocytes
[J]. Process Biochem, 2012, 47(2): 216-224.
[24] 杨 彦, 陈庆伟, 曹广煜, 等. 丹参酮 IIA 增效大鼠骨
髓源性内皮祖细胞 VEGF、SDF-1 表达 [J]. 激光杂志,
2012, 33(2): 83-86.
[25] Kowanetz M, Ferrara N. Vascular endothelial growth
factor signaling pathways: Therapeutic perspective [J].
Clin Cancer Res, 2006, 12(17): 5018-5022.
[26] Matsumoto T, Claesson-Welsh L. VEGF receptor signal
transduction [J]. Sci STKE, 2001(112): re21.
[27] Wozniak M A, Modzelewska K, Kwong L, et al. Focal
adhesion regulation of cell behavior [J]. BBA-Mol Cell
Res, 2004, 1692(2/3): 103-119.