全 文 ：猫豆中猫豆胍制备方法的研究
黄增琼1 ,蒋伟哲2 ,许小林1 ,赖 术1 ,黄兴振2
( 1 右江民族医学院 药学系,广西 百色 533000; 2 广西医科大学药学院,广西 南宁 530021)
摘 要: 目的 应用制备色谱系统从猫豆中分离纯化猫豆胍, 建立其纯化工艺技术。方法 采用盐酸渗漉法从猫
豆中提取猫豆胍, 然后采用制备色谱系统从中分离出猫豆胍。结果 猫豆胍产品经 H PLC 检测, 质量分数达 99%
以上。结论 该方法可获得高质量分数猫豆胍单体, 可用于分离制备猫豆胍对照品。
关键词: 猫豆;猫豆胍; 制备液相层析系统;分离纯化
中图分类号: R284 2 文献标识码: B 文章编号: 0253- 2670( 2010) 06- 0904- 03
猫豆又名猫爪豆、狗爪豆、龙爪豆、狗踭豆, 是豆
科藜豆属植物龙爪藜豆 Stiz otobium cochinchinensis
( Lour) T ang et Wang的种子[ 1] , 广西是最主要的
产区。其主要成分为左旋多巴, 质量分数可达6%~
9% ,是国内提取左旋多巴最主要的原料药材[ 2]。猫
豆中除含有左旋多巴外还含有猫豆胍, 其化学名为
[ 3, 4二氢5(羟甲基)4甲基3氧吡嗪]胍 [ 3] , 质
量分数约为 0 35% , 化学结构式见图 1。前期研究
发现,猫豆胍可协同戊巴比妥钠的镇静催眠作用,延
长硝酸士的宁致小鼠惊厥的反应发生时间和死亡时
间[ 4] 。为获得高质量分数的猫豆胍单体,本研究采用
AKTA Explorer100制备色谱层析系统对猫豆中的猫
豆胍进行分离纯化,并运用 HPLC 和 TLC进行质量
分数测定,结果表明, 本法可获得高质量分数的猫豆
胍单体,可作为猫豆胍对照品的分离制备方法。
图 1 猫豆胍结构式
Fig. 1 Structure of mucunaguanide
1 材料
猫豆药材由广西邦尔植物制品有限公司提供,
经右江民族医学院附属医院刘春荣副主任中药师鉴
定。甲醇( T edia公司, 批号 304013) ; 冰醋酸(成都
市科龙化工试剂厂,批号 20060521)。
AKT A Explo rer 100制备色谱系统, 安玛西亚
公司; LC 9000D高效液相色谱仪, 南宁市威玛龙
色谱科技有限公司; Sartorius ME215S 电子天平,
北京赛多丽斯仪器系统有限公司。
2 方法和结果
2 1 样品溶液的制备: 将猫豆粉碎成粗粉, 称取猫
豆粗粉 50 g,用 20倍量 0 1 mol/ L 盐酸浸泡 24 h,
再用 30倍量 0 1 mol/ L 盐酸渗漉提取。渗漉液减
压浓缩至 500 mL, 趁热滤过, 滤液用 0 45 m 微孔
滤膜滤过, 所得溶液用于分离纯化。上样液质量浓
度按生药计为 0 103 g/ mL。
2 2 分离和纯化
2 2 1 色谱条件:色谱柱( 20 cm ! 1. 6 cm, 60 cm !
1 6 cm ,以安玛西亚的 SOURCE 30RPC 为柱填充
料) ;流动相为 0 1 mol/ L 冰醋酸甲醇( 95 ∀ 5) ; 体
积流量为 1 mL/ m in,紫外检测波长为 320、246、280
nm。进样方式:样品泵 P960自动进样, 1 mL 样品
环;收集器: Pr ac900自动收集器;上样量: 1 mL。
2 2 2 收集方式:第一次以短柱分离,运用 Prac900
进行自动峰收集。方式为 000 Base Time, 11 90
Out letValve F3, 15 50 Out letValve Waste F1, 15 50
End Block。将峰收集液浓缩至 500 mL,按以上色
谱条件和进样方式采用长柱进行第二次分离,收集方
式为 0 00 Base Time, 19 00 OutletValve F3, 32 00
Out letValve Waste F1, 32 00 End Block。将第二次
峰收集液减压浓缩, 干燥, 得白色粉末 16 7mg , 即
猫豆胍, 得率为 0 033%。第一次和第二次峰收集
色谱图见图 2。收集液分别经 HPLC 检测, 第一次
收集液仍含有少量左旋多巴, 第二次收集液质量分
数较高,几乎不含左旋多巴。
2 3 TLC 法鉴别:取第二次峰收集液和猫豆提取
液分别点于同一以 0 5%羧甲基纤维素钠为黏合剂
的硅胶G薄层板上 , 点样量约为5L 。以醋酸乙
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收稿日期: 20090913 基金项目:国家自然科学基金资助项目( 30760309) ;广西青年科学基金项目(桂科青 0991094)作者简介:黄增琼( 1979 ) ,男(壮族) ,广西南宁市人,讲师,在读博士,研究方向为新药研究与开发、生物材料。
Email : huangzen gqion g@ 163 com
* 通讯作者 蒋伟哲 Tel: 13607713097 Em ail: j iangw eizhe6812@yahoo com cn
图 2 第 1次( A)和第 2次( B)分离图谱
Fig. 2 Chromatograms of primary ( A)
and second (B) separating
酯甲酸水( 10∀ 2 ∀3)为展开剂,展开,取出, 晾干,
置紫外灯( 365 nm)下检视, 得薄层色谱图。结果在
第二次峰收集液和猫豆盐酸提取液相应位置上, 显
相同的蓝紫色荧光斑点, 且第二次峰收集液为单一
斑点,说明所收集峰的样品质量分数较高。
2 4 质量分数的 HPLC法测定
2 4 1 色谱条件: 色谱柱为 Phenomenex TM C18柱
( 250 mm ! 4 6 mm , 5 m) ;流动相为0 1 mol/ L 冰
醋酸甲醇( 95 ∀ 5) ; 体积流量 1 mL/ m in; 紫外检测
波长 246、280、320 nm; 进样量 20 L; 柱温为室温。
理论塔板数按猫豆胍峰计算, 应不低于 5 000。
2 4 2 测定结果:取猫豆提取液、第一次峰收集液、
第二次峰收集液,分别在 0 45 m 微孔过滤器中滤
过,作为待测液。按峰面积归一化法测定收集液在
3个不同波长下的质量分数。它们在 280nm 波长
下的 HPLC 色谱图见图 3。结果见表 1。
图 3 猫豆提取液( A)、第 1 次收集液(B)和第 2 次收集液( C)的高效液相色谱图
Fig. 3 HPLCChromatograms of extract solution from seed of S. cochinchinensis (A) , primary elution sample ( B) ,
and second elution sample (C)
表 1 猫豆胍中质量分数测定结果
Table 1 Determination of mucunagunide content
样品 波长/ nm 理论塔板数 质量分数/ % 平均值/ %
第一次收集液 246 8 811 93 45
280 7 778 93 12 95 28
320 5 850 99 26
第二次收集液 246 5 684 98 93
280 5 282 99 27 99 32
320 11 323 99 76
结果表明,运用 AKTA Explor er 100制备色谱
层析系统从猫豆中分离猫豆胍, 质量分数达到了
99 0%以上, 该法适用于分离纯化猫豆胍单体。
3 讨论
洗脱时, 当体积流量为 3 mL/ min的时候,猫豆
胍的保留时间缩短,但分离度也随之降低; 体积流量
为 0 5 mL/ min 时, 分离度虽然较好, 但是峰形变
宽,保留时间变长。经反复探索,以 1 mL/ min的流
速较佳,既缩短了保留时间, 又达到良好的分离度。
随着上样体积的增加, 分离度会逐渐降低; 当上样体
积大于 2 mL 后,猫豆胍峰与左旋多巴峰很难分开。
上样体积为 0 5 mL 时,分离度好,但一次分离得到
的样品少, 耗时长。所以, 确定上样体积为 1 mL。
采用猫豆中左旋多巴测定的流动相条件 0 1 mol/ L
冰醋酸甲醇( 90∀ 10) [ 5] 进行洗脱,样品出峰时间过
早,分离度小,无法进行峰收集。改为0 1 mol/ L 冰
醋酸甲醇( 98 ∀2)时,出峰时间过长,耗时大。经反
复实验,以 0 1 mo l/ L 冰醋酸 甲醇( 95∀5)进行洗
脱效果较好。
实验中采用 246、280 、320 nm 波长同时监测,
有利于确定峰收集时间。猫豆胍的最大吸收波长在
320 nm 左右,次大吸收波长在 246 nm 附近。而左
旋多巴在 280 nm 波长有较大吸收, 246 nm 波长也
有一定吸收,但 320 nm 处无吸收。如单纯采用 320
nm 进行监测,左旋多巴在该波长条件下无吸收, 很
难确定猫豆胍的峰收集时间。采用 246 nm 或 280
nm 监测,猫豆胍在这两个波长条件下吸收度较小,
不利于确定峰收集时间。因此,采用 3个波长同时
监测,可确保峰收集完全。
采用 T LC法进行鉴别和质量分数测定时,对不
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同的展开系统进行了考察。以氯仿醋酸乙酯甲酸
( 5 ∀4∀ 1)为展开剂进行实验, 样品无法展开;以正
丁醇冰醋酸水( 4 ∀ 1 ∀ 5)展开时, 展开速度慢, 分
离效果差,脱尾较严重。以本实验所采用的展开系
统进行鉴别和测定质量分数,效果较好。
结果表明,运用安玛西亚的 AKTA Explorer 100
制备色谱系统分离猫豆胍对照品, 具有自动化程度
高,收集全面等优点,而且样品质量分数高。该法可
作为猫豆胍对照品的分离制备方法。
参考文献:
[ 1] 江苏新医学院 中药大辞典[ M ] 上册 上海:上海科学技术
出版社, 1977
[ 2] 蒋伟哲,周燕文,吴 闯,等 不同产地猫豆中左旋多巴的含量
比较[ J ] 中草药, 2000, 31( 11) : 861
[ 3] 广西医科大学 一种生物碱类化合物及其制备方法和用途
[ P] 中国: 200810073635 9, 20080620
[ 4] 黄增琼,蒋伟哲,黄兴振,等 猫豆胍镇静催眠和抗震颤麻痹作
用研究[ J ] 中草药, 2009, 40( 2) : 276278
[ 5] 黄海滨,许学健, 奉建芳 高效液相色谱法测定猫豆中左旋多
巴的含量[ J] 广西植物, 1994, 14( 3) : 293294
驴胶补血颗粒的壳聚糖纯化工艺研究
谢 安, 周文龙,杨顺龙,廖志雄
(九芝堂股份有限公司,湖南 长沙 410008)
摘 要:目的 对驴胶补血颗粒提取液的纯化工艺进行研究。方法 采用壳聚糖为絮凝剂的絮凝澄清法纯化提取
药液, 并以干膏得率、多糖量为考察指标对絮凝澄清工艺参数进行优选。结果 以絮凝前药液浓缩至密度为 1 06
( 60 ∃ 测定) ,絮凝时药液温度为 45~ 85 ∃ ,加入 5%的壳聚糖溶液进行絮凝为最佳工艺。结论 采用此方法能有
效去除提取药液中的鞣质等亲水性杂质, 同时具有生产周期短、工艺简单、成本低廉及环保等特点。
关键词: 驴胶补血颗粒;壳聚糖; 絮凝澄清;纯化
中图分类号: R284 2 文献标识码: B 文章编号: 0253- 2670( 2010) 06- 0906- 03
驴胶补血颗粒由黄芪、党参、熟地、白术、当归、
阿胶 6味中药组成, 具有滋阴补血,健脾益气,调经
活血的功能, 主要用于久病体虚,气虚血亏型月经不
调等妇女疾患。本品提取工艺中采用传统的水提醇
沉法,经醇沉回收乙醇的药液往往黏性较大,较难浓
缩、干燥,制粒亦困难且易吸潮霉变, 且醇沉处理生
产周期长,成本高。采用壳聚糖为絮凝剂的絮凝澄
清法优于醇沉法, 提取液经处理后有效成分损失少,
易于浓缩、干燥,其干膏不易吸湿,且工艺简单、成本
低廉[ 1~ 6]。本实验采用壳聚糖为絮凝剂的絮凝澄清
法纯化提取药液, 并以固形物保留率、多糖为考察指
标对絮凝澄清工艺参数进行优选。
1 仪器与材料
T U 1901双光束紫外可见分光光度计(北京
普析通用)。药材均为道地药材,由九芝堂商南植物
药有限公司提供, 由九芝堂股份有限公司质量中心
检测合格;壳聚糖(南通兴城生物制品厂) , D无水葡
萄糖对照品(批号: 110833200302)由中国药品生物
制品检定所提供, 甲醇为色谱纯, 水为重蒸水,其他
试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2 1 驴胶补血颗粒提取药液的制备:按处方比例称
取药材,加水煎煮 3 次, 第 1次 1 5h, 第 2、3 次各 1
h, 合并煎液, 滤过,滤液浓缩,即得。
2 2 固形物保留率的测定:取絮凝前后的样品溶液
各 25 0 mL, 分别置于干燥至恒重的蒸发皿中,水浴
蒸干,于 105 ∃ 干燥至恒重, 称定质量, 计算絮凝前
后固形物保留率。
2 3 干膏得率的测定: 精密吸取 10 mL 絮凝后的
浸膏, 置已干燥至恒重的蒸发皿中, 水浴蒸干, 于
105 ∃ 干燥 3 h, 取出,立即置干燥器中冷却 0 5 h,
称定质量,计算干膏得率。
2 4 多糖的测定
2 4 1 对照品溶液的制备:取 105 ∃ 下干燥至恒重
的 D无水葡萄糖约 51 6 mg, 精密测定, 置 50 mL
量瓶中,加水溶解并稀释至刻度,摇匀, 即得。
2 4 2 供试品溶液的制备: 分别精密吸取絮凝液
10 mL,加 5倍量无水乙醇至含醇量达 83 33% , 离
#906# 中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 41 卷第 6 期 2010年 6月
收稿日期: 20091018 作者简介:谢 安( 1966 ) ,女,湖南长沙人,硕士,高级工程师,从事新药研究与开发多年, T el : ( 0731) 84499775