全 文 ：素长期作用的结果, 包括基因突变、接触环境毒物
(如鱼藤酮、MPT P、6OHDA 等)、脑内炎症反应和
免疫功能失调等。PD 具有终生性和渐进性。自 20
世纪 60 年代初发现左旋多巴 ( LDopa ) 以来, 使
PD 的病死率和致残率明显下降, 问题在于尚不能
阻止黑质内 DA 能神经元的进行性变性,无法排除
LDopa 使用后的远期不良效应。而且长期替代疗
法将抑制残存和尚未受损的正常 DA 能神经元加
强释放 DA 的代偿能力。因此研制新型的保护神
经元型的 PD 治疗药物有着重要的意义。
小胶质细胞是脑内的免疫细胞, 易被激活。关
于小胶质细胞的激活与 DA 能神经元变性的因果
关系,已有许多报道 [ 9]。并且普遍认为激活的小胶
质细胞主要通过释放各种免疫因子和神经毒因子影
响神经元的存活。在 PD 患者和 PD 动物模型中除
了黑质致密部大量 DA 能神经元坏死外,还有大量
的小胶质细胞的增殖。这些激活的小胶质细胞可以
产生大量的超氧自由基, 超氧自由基被认为是造成
PD 患者脑中 DA 能神经元坏死的氧化应激的主要
原因。PD 患者脑中已发现促进小胶质细胞激活的
C 反应蛋白,表达上调的炎性因子和嗜铬粒蛋白 A
等。因此在 PD 持续激活的小胶质细胞释放的大量
炎性因子可能造成了 DA 能神经元的变性过程 [ 9]。
因此降低小胶质细胞的免疫反应活性是阻止 PD 病
程的关键靶点之一。
本课题组前期研究已发现 NNAP 可降低
MPTP 处理的 PD 小鼠脑内小胶质细胞的免疫反
应,对 DA 能神经元损伤有明显保护作用[ 56] 。本研
究发现 6OHDA 大鼠损毁侧与模型组相比, 实验给
药组旋转次数明显减少, 大鼠中脑 DA 能神经元的
免疫反应活性明显增高。提示 NNAP 可以改善
PD大鼠的异常旋转行为, 对 PD 大鼠中脑 DA 能神
经元具有保护作用。进一步研究发现与模型组相
比,实验给药组大鼠中脑小胶质细胞免疫反应活性
明显降低。提示 NNAP 降低小胶质细胞的免疫反
应活性可能参与其保护机制,未来对小胶质细胞表
达改变相关的定量研究和深入探讨与小胶质细胞激
活相关的机制, 将为新型 PD 治疗药物的研制开发
提供重要的理论依据和线索。
参考文献:
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通络单味药与复方通心络的通络效果比较研究
蓝涛华1, 2 ,谭红梅1, 2 , 吴伟康1, 2* , 吴以岭3* ,孙 娟1, 2 ,韩玉莲1, 2 *
( 1 中山大学中山医学院 病理生理教研室,广东 广州 510080; 2 中山大学中西医结合研究所,
广东 广州 510080; 3 河北以岭医药研究院,河北 石家庄 050035)
摘 要:目的 探讨具有通络作用的单味代表药的通络效果, 并将其与复方通心络的通络作用进行比较。方法
建立内皮损伤、内皮损伤合并微血栓形成 (络脉瘀阻) 及内皮损伤合并急性心肌缺血 (络脉绌急) 大鼠模型,分别
!1842! 中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 41 卷第 11 期 2010 年 11月
收稿日期: 20100315 基金项目:国家∀ 973#项目资助 ( 2005CB23305)作者简介:蓝涛华( 1982 ∃ ) ,女,广东梅州人,中山大学中西医结合研究所博士生,主要从事中西医结合防治心脑血管疾病的研究。
T el : 13760624138 Email: luckyb lue1982@ 126. com
* 通讯作者 吴伟康 T el/ Fax: ( 020) 87332028 Email : w 2004w k@ yahoo. com. cn吴以岭 T el/ Fax: ( 0311) 3852240 Email : w ant ry@ 163. com
检测血管舒张功能、血浆 NO 和血管性假血友病因子 ( vWF) 水平; 凝血功能和血小板计数 ( PLT ) , 镜下观测肠系
膜微循环,监测心电图 T 波改变。结果 内皮损伤模型中, 各用药组最大舒张率、血浆 NO 值均显著高于模型组,
其中通心络组升高更为明显;各用药组血浆 vWF 值显著低于模型组,其中通络组降低更为明显。在络脉瘀阻模型
中,各用药组肠系膜微循环血液流态较模型组均有明显改善; 各用药组的纤维蛋白原 ( FG) 水平与模型组比较显
著升高;通心络组和水蛭组血浆 vWF 值显著低于模型组, PLT 显著高于模型组。在络脉绌急模型中, 通心络组在
30 s~ 3 min 各时间点 T 波压低幅度与模型组相比均显著降低; 蜈蚣组在注射精氨酸加压素 ( AVP ) 后 30 s~ 2
min 时 T 波压低幅度较模型组明显减少; 各用药组血浆 NO 值均显著高于模型组, 但通心络组升高更为明显。
结论 通络单味代表药人参、薤白、蜈蚣、水蛭对血管内皮损伤、络脉瘀阻以及络脉绌急有一定的防治作用,但其作
用弱于复方通心络。通心络的通络效应优于各单一的通络药物, 证明组方的科学性。
关键词:通络; 通心络; 内皮损伤; 络脉瘀阻; 络脉绌急; 人参; 薤白; 蜈蚣; 水蛭
中图分类号: R285 5 文献标识码: A 文章编号: 02532670( 2010) 11184206
心血管疾病严重危害人类健康,其防治受到当
今医学界的广泛关注。高同型半胱酸血症 ( HHcy )
是心血管疾病的独立危险因素 [ 1]。近年来许多研究
表明[ 2] , HHcy 能诱导血管内皮损伤和功能障碍, 从
而促进心血管病的发生和发展。而内皮功能障碍能
加速、加重微循环障碍和微血栓形成 [ 3]。目前研究
认为血管内皮功能障碍可能在冠脉痉挛的发病机制
或潜在机制中扮演重要角色[ 4] 。
络气郁滞是∀络脉血管系统病变学说#发生的
始动因素;络脉瘀阻和络脉绌急是络病中主要的病
理变化。近年来,根据∀脉络血管系统病变学说#理
论研制出的治疗心脑血管病的代表方药通心络取得
了良好的临床疗效。通心络全方由人参、土鳖虫、水
蛭、全蝎、蜈蚣、蝉蜕、降香、冰片等药物组成, 集中应
用络虚通补药、虫类化瘀通络药、虫类搜风通络药和
辛味通络药组方, 具有益气活血、搜风通络的作用。
本课题组研究已证实通心络对络脉瘀阻和络脉绌急
有显著的防治效应[ 56] 。本实验通过建立内皮损伤、
内皮损伤合并微血栓形成 (络脉瘀阻) 及内皮损伤
合并急性心肌缺血 (络脉绌急) 大鼠模型, 探讨具
有通络作用的单味代表药的通络效果, 并与复方通
心络进行比较。
1 材料
1 1 实验动物: 雄性 SPF 级 SD 大鼠, 体质量
( 150 % 20) g ,由中山大学动物实验中心提供。
1 2 药品与试剂:通心络超微粉、人参、薤白、蜈蚣、
水蛭均由河北以岭医药集团有限公司提供 (通心络
超微粉、人参、薤白、蜈蚣为粉状提取物,用纯水配成
相应溶液,水蛭为腹腔注射用针剂;实验中以上药品
所用剂量为预实验得到的最佳剂量)。L蛋氨酸、琥
珀酰磺胺噻唑 ( SST)、乙酰胆碱 ( Ach)、角叉菜胶、
脂多糖 ( LPS )、精氨酸加压素 ( AVP) 购于美国
Sigma 公司, N O 测定试剂盒购于南京建成生物医
学工程研究所, 血管性假血友病因子 ( vWF )
ELISA 试剂盒购于上海太阳生物技术有限公司。
2 方法
2 1 大鼠内皮损伤模型
2 1 1 造模、分组与给药: 大鼠随机分为对照组、模
型组、通心络组、人参组、薤白组、蜈蚣组及水蛭组。
除对照组外各组动物均 ig 给予蛋氨酸 1 g / kg, SST
0 5 g / kg 加入饮水, 持续 4 周 [ 4] , 对照组予以等量
纯水处理。通心络组于 ig 蛋氨酸第 4 周开始 ig 给
予通心络 0 4 g/ kg, 持续 7 d, 人参组、薤白组、蜈蚣
组于 ig 蛋氨酸第 2周开始分别 ig 给予人参、薤白、
蜈蚣 1 2 g/ kg ,持续 3 周,水蛭组于 ig 蛋氨酸第 2
周开始 ip 给予水蛭 1 6 U/ kg, 持续 3 周。
2 1 2 检测指标: ( 1) 4 周后各组大鼠以 4% 戊巴
比妥钠 ip 麻醉后心脏采血 0 5 mL, 与 3 8% 枸橼
酸钠按 9 & 1 混合均匀, 4 ∋ 、3 000 r / min 离心 10
m in,取血清,分别采用硝酸还原酶法及酶联免疫吸
附双抗体夹心法检测 NO 及 vWF 值。( 2) 实验结
束后取大鼠主动脉, 置于连续通含 95% O2和 5%
CO 2混合气体的改良 Ker bs 溶液[ 4] ( mmo l/ L : NaCl
118、KCl 4. 7、CaCl2 2. 6、MgSO 4 ! 7H 2O 1 2、
KH 2PO4 1 2、NaH CO 3 25、葡萄糖 5. 5, pH 7. 4)
中,小心分离周围脂肪和结缔组织, 注意勿牵拉, 保
护内皮,将动脉条剪成 3 mm 左右的环。动脉环置
于 37 ∋ 含 4 mL Kerbs液的恒温浴槽中,一端固定
于浴槽底部, 另一端连接于张力换能器 ( JZ101)。
浴槽中持续通含 95% O2和 5% CO2混合气体, 并
每隔 20 min 换液 1 次, 内槽恒温 37 ∋ , 负荷 1 5
g ,平衡 1 5 h。收缩张力信号通过 MP ∃ 285 M i
cr omanipulator sys ( U SA) 的八通道接头传输到与
Pow er lab 系统 ( AD inst ruments, U SA ) 相连的
MacOS M acintosh 计算机上, 直接采用 Pow erlab
系统及其软件 Chart for Window s 进行数据记录和
分析。实验前预先给予 100 mmol/ L KCl 收缩血
管,在随后的实验过程中, 每一步实验完成后,及时
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冲洗,待曲线回至基线并稳定 25 m in后再进行下一
步实验。血管环高钾预收缩稳定冲洗至基线平衡
后, 4 mL Krebs 液定容, 加入 1 ( 10- 4 mol/ L 苯肾
上腺素 40 L (终浓度为 1 ( 10- 6 mol/ L ) , 待收缩
反应达平台后, 以不同累积浓度 ( 1 ( 10- 10~ 1 (
10- 6 mo l/ L ) 的 Ach 作用于血管环,记录各浓度下
血管环的舒张率,观察 Ach 诱导的内皮依赖性血管
舒张反应; ) 以不同累积浓度 ( 1 ( 10- 9 ~ 1 ( 10- 5
mol/ L) 的硝普钠 ( SNP) 作用于血管环记录各浓
度下血管环的舒张率,观察 SNP 诱导的非内皮依赖
性血管舒张反应。
2 2 大鼠内皮损伤合并微血栓形成 (络脉瘀阻)
模型
2 2 1 造模、分组与给药:大鼠随机分为对照组、模
型组、通心络组、人参组、薤白组及水蛭组。除对照
组外, 各组大鼠在内皮损伤模型制备 ( 2 1 1 项方
法) 基础上 ip 角叉菜胶 10 mg/ kg , 16 h 后 ip LPS
0. 2 mg / kg, 对照组 ip 等量生理盐水。给药方法同
2 1 1项。
2 2 2 检测指标: 注射 LPS 后 20 h,心脏采血 1
mL,与 3 8% 枸橼酸钠按 9&1 混合均匀,以 3 000
r/ min、4 ∋ 离心 15 min, 收集血浆, 在 2 h 内记录
凝血酶时间 ( TT )、凝血酶原时间 ( PT)、活化部分
凝血活酶时间 ( APTT ) , 检测纤维蛋白原 ( FG) 水
平。另心脏采血 0 5 mL, 使用 1 8 mg/ mL EDTA
抗凝管收集血液, 4 ∋ 离心 15 min, 收集血浆, 2 h
内检测血小板计数 ( PLT )。以上均由中山大学附
属第一医院检验医学部检测。) 注射 LPS 后 20~
24 h, 观测大鼠肠系膜微循环: 实验前将大鼠禁食
12 h, 用 4% 戊巴比妥钠 ip 麻醉后固定, 于腹腔一
侧做 3 ~ 4 cm 的切口, 轻轻拉出肠系膜, 置于
37 0 ∋ 的恒温水浴槽内,选择适宜观察处并固定,
置于三目显微镜下观察肠系膜微循环血流速度、动
脉口径及流态, 通过 BI2000 医学图像分析系统录
像。并采用微血管流态半定量法,根据血液流动状
态,将流速分为 7 个等级, 配合使用光点跟踪法, 对
微循环改变进行量化,计分越大,表示微循环障碍越
明显。∗ 注射 LPS 24 h 后采血,采用酶联免疫吸附
双抗体夹心法测定血浆 vWF 值。
2 3 大鼠内皮损伤合并急性心肌缺血 (络脉绌急)
模型
2 3 1 造模、分组与给药:大鼠随机分为对照组、模
型组、通心络组、人参组、薤白组、蜈蚣组及水蛭组。
除对照组外,各组大鼠在内皮损伤模型制备 ( 2 1 1
项方法) 基础上禁食 18 h 后, ip 4% 戊巴比妥钠
( 40 mg/ kg ) 麻醉, 颈静脉 iv AV P 0. 1 mL/ 100 g。
给药方法同 2 1 1 项。
2 3 2 检测指标: 记录 AVP 注射后标准肢体 +
导联心电图 ( 30 min) ,测量注射 AVP 后 0、15、30 s
和 1、2、3、4、5、10、20、30 min 时 T 波压低幅度。)
记录心电图后采血, 采用硝酸还原酶法测定血浆
NO 水平。
2 4 统计学处理: 结果以 x % s 表示, 应用 SPSS
11 0统计软件对资料进行 OneWay ANOVA 统计
分析。
3 结果
3 1 对内皮损伤的防治作用
3 1 1 血浆 NO、vWF 检测结果: 人参组、薤白组、
蜈蚣组及水蛭组血浆 NO 水平均显著高于模型组,
其中通心络组升高更为明显;人参组、薤白组、蜈蚣
组及水蛭组血浆 vWF 水平显著低于模型组, 其中
通心络组降低更为明显。见表 1。
表 1 通络代表药对内皮损伤大鼠血浆 NO和 vWF 水平的
影响 (x % s, n= 8)
Table 1 Effect of dredging collaterials drugs on plasma
NO and vWF in endothelium injuried rats
(x % s, n= 8)
组别 剂量/ ( g! kg - 1) NO/ ( mo l! L- 1 ) vWF
对照 - 33 53% 9 82 0 048 7% 0 026 0
模型 - 10 91% 2 54* 0 166 5% 0 042 1*
通心络 0 4 27 78% 7 048# 0 065 9% 0 016 0#
人参 1 2 25 15% 12 32# 0 062 0% 0 061 5#
薤白 1 2 24 51% 12 31# 0 052 0% 0 053 8#
蜈蚣 1 2 18 05% 2 86# 0 116 1% 0 046 0#
水蛭 1 6 (U ! kg - 1 ) 31 63% 19 19# 0 094 2% 0 046 5#
与对照组比较: * P < 0 05; 与模型组比较: # P < 0 05
* P < 0 05 v s cont rol group; # P < 005 v s model group
3 1 2 血管舒张功能的变化:在 Ach 诱导的内皮
依赖性血管舒张反应中, 人参组、薤白组、蜈蚣组和
水蛭组最大舒张率较模型组均有所升高, 其中通心
络组升高更为明显。在 SNP 诱导的非内皮依赖性
血管舒张反应中, 各组间舒张率未见统计学差异。
见图 1和 2。
3 2 对内皮损伤合并微血栓形成 (络脉瘀阻) 的
防治作用
3 2 1 凝血 4 项及 PLT 结果: 各用药组的 FG 水
平与模型组比较显著升高; 通心络组和水蛭组 PLT
显著高于模型组。见表 2。
3 2 2 血浆 vWF 检测结果: 通心络组和水蛭组血
浆 vWF水平显著低于模型组 ( P< 0 0 5) 。对照
!1844! 中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 41 卷第 11 期 2010 年 11月
与对照组比较: * P < 005; 与模型组比较: # P< 0 05
* P< 0 05 v s con tr ol group; # P< 0 05 v s model group
图 1 Ach 诱导的内皮依赖性舒张反应曲线
Fig. 1 Doseresponse curves of Achinduced
endotheliumdependent relaxation
图 2 SNP 诱导的非内皮依赖性舒张反应曲线
Fig. 2 Doseresponse curves of SNPinduced
endothelium dependent relaxation
表 2 通络代表药对内皮损伤合并微血栓形成大鼠凝血指标的影响 (x % s, n= 8)
Table 2 Effect of dredging collaterals drugs on coagulation index of endothelium injuried rats with microthrombosis (x% s, n= 8)
组别 剂量/ ( g ! kg - 1 ) PT / s APTT / s T T / s FG/ ( g! L - 1) P LT
对照 - 8 56% 0 298 21 300% 1 576 54 413% 5 859 2 373% 0 265 804 0% 41 0
模型 - 9 23% 0 73* 24 129% 1 775* 51 943% 6 245 1 869% 0 243* 442 0% 67 2*
通心络 0 4 8 50% 1 91 22 800% 2 164 55 400% 5 815 3 008% 0 556# 648 0% 75 1#
人参 1 2 8 62% 0 85 24 700% 4 522 37 600% 8 135 3 204% 0 959# 195 0% 227 0#
薤白 1 2 8 08% 0 48# 24 800% 3 546 46 400% 5 416# 3 878% 1 090# 251 0% 231 0#
水蛭 1 6 (U ! kg - 1) 8 68% 0 89 18 400% 2 008# 44 900% 5 098# 4 530% 0 503# 531 0% 140 3#
与对照组比较: * P< 0 05; 与模型组比较: # P< 0 05
* P< 0 05 v s cont rol group; # P < 0 05 v s model gr ou p
组、模型组、通心络组、人参组、薤白组、水蛭组血浆
vWF 水平 ( n = 8) 分别为 0051 4 % 0026 7、
0175 0 % 0 076 0、0 101 3 % 0025 3、0 113 1 %
0077 5、0 125 4 % 0 062 3、0 081 4 % 0 075 2。
3 2 3 肠系膜微循环观测:镜下可见模型组毛细血
管甚至小血管阻塞, 血管边缘模糊, 血管周围弥漫
性、片状渗血或大片瘀血, 血液流变异常, 颗粒感明
显, 呈粒缓流或粒摆流, 红细胞呈中、重度聚集。各
用药组肠系膜微循环血流速度明显加快,偶见瘀血,
无渗血,基本无红细胞聚集现象。见表 3。
表 3 肠系膜微循环等级和评分
Table 3 Microcirculation scale and score of mesentery
组别
剂量/
( g! kg- 1)
动物数/
只
不同等级
1~ 3 级 3~ 5级 5~ 7 级
评分
( x % s)
对照 - 10 10 0 0 1 540 % 0 398
模型 - 10 0 3 7 5 290 % 0 709*
通心络 0 4 10 6 4 0 3 020 % 0 503* #
人参 1 2 6 4 1 1 3 833 % 1 602* #
薤白 1 2 6 4 1 1 3 833 % 0 726* #
水蛭 1 6 ( U! kg- 1) 8 6 2 0 3 250 % 1 430* #
与对照组比较: * P< 005; 与模型组比较: # P< 0 05
* P< 0 05 v s con tr ol group; # P< 0 05 v s model g rou p
3 3 对内皮损伤合并急性心肌缺血 (络脉瘀阻)
的防治作用
3 3 1 T 波压低的变化:通心络组在注射 AVP 后
30 s~ 3 min 各时间点 T 波压低幅度与模型组相比
均显著降低; 蜈蚣组注射 AVP 后 30 s 及 2 m in T
波压低幅度较模型组明显降低, 见表 4。
3 3 2 血浆 NO 检测结果: 各用药组血浆 NO 值
均显著高于内皮损伤合并急性心肌缺血组 ( P<
0 05) , 其中通心络组升高更为明显。对照组、模型
组、通心络组、人参组、薤白组、蜈蚣组、水蛭组血浆
NO 水平 ( n = 8 ) 分别为 ( 33 53 % 9 819 )、
( 9 127 % 5 449 )、( 27 78 % 7 048 )、( 25 38 %
6 997 )、( 17 31 % 5 038 )、( 18 05 % 2 863 )、
( 26 42 % 6 76) mol/ L。
4 讨论
根据络病学说, 脉与络是以运行血液为主要功
能的组织结构部分, 脉络与中小血管及微循环概念
有高度的一致性, 在此基础上把传统中医络病理论
与现代医学中小血管及微循环病变结合起来提出了
∀脉络 ∃ 血管系统病变学说#。病理上络气郁滞引起
的络脉自稳状态功能异常与血管内皮功能障碍具有
!1845!中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 41 卷第 11 期 2010 年 11月
表 4 注射 AVP 后 T波压低改变
Table 4 Change of T wave depression of ECG induced by injection of AVP
组别
剂量/
( g ! kg- 1)
注射 AVP 后 T 波压低改变/ mV
0 s 15 s 30 s 1 min 2 min 3 min
对照 - - 0 001 8 % 0 004 0 - 0 063 8 % 0 042 0 - 0 075 9 % 0 032 0 - 0 048 9 % 0 016 0 - 0 042 6 % 0 018 8 - 0 054 4 % 0 038 0
模型 - - 0 003 5 % 0 006 1 - 0 046 0 % 0 036 0 - 0 766 0 % 0 038 1 - 0 070 4 % 0 033 0 - 0 072 0 % 0 032 0 - 0 071 8 % 0 028 0
人参 1 2 0 038 2 % 0 148 0 0 045 0 % 0 145 0 - 0 011 0 % 0 123 0 0 019 2 % 0 190 0 0 044 1 % 0 233 0 0 020 1 % 0 191 0
薤白 1 2 0 072 1 % 0 156 0 0 066 3 % 0 016 7 0 040 7 % 0 154 0 0 034 0 % 0 183 0 0 088 5 % 0 126 0* # 0 088 0 % 0 107 0
蜈蚣 1 2 0 012 8 % 0 039 0 - 0 080 5 % 0 058 0 - 0 002 0 % 0 140 0# - 0 065 9 % 0 187 0 - 0 021 7 % 0 130 0# - 0 034 0 % 0 141 0
水蛭 1 6 U! kg- 1 0 006 8 % 0 039 0 0 014 2 % 0 058 0 - 0 115 3 % 0 143 0 - 0 080 0 % 0 187 0 - 0 027 7 % 0 137 0 - 0 050 9 % 0 141 0
通心络 0 4 0 001 0 % 0 012 5 - 0 011 0 % 0 011 4 - 0 012 9 % 0 017 0# - 0 015 5 % 0 023 0# - 0 020 0 % 0 022 0# - 0 028 8 % 0 021 0#
组别 剂量/
( g ! kg- 1)
注射 AVP 后 T 波压低改变/ mV
4 min 5 min 10 min 20 min 30 min
对照 - - 0 039 0 % 0 013 0 - 0 035 4 % 0 020 0 0 025 5 % 0 182 0 0 016 0 % 0 135 0 0 011 9 % 0 022 0
模型 - - 0 048 1 % 0 026 0 - 0 021 9 % 0 162 0 0 009 1 % 0 009 0 0 006 1 % 0 143 0 0 007 6 % 0 009 0
人参 1 2 0 058 1 % 0 182 0 0 080 8 % 0 202 0 0 005 4 % 0 189 0 - 0 038 0 % 0 019 0 0 065 3 % 0 123 0
薤白 1 2 0 018 9 % 0 176 0 0 103 7 % 0 095 0 0 038 2 % 0 158 0 0 014 6 % 0 110 0# * 0 048 8 % 0 157 0
蜈蚣 1 2 - 0 062 3 % 0 145 0 - 0 026 8 % 0 161 0 - 0 115 7 % 0 138 0 - 0 024 9 % 0 138 0 0 018 5 % 0 124 0
水蛭 1 6 U! kg- 1 - 0 035 9 % 0 145 0 - 0 060 6 % 0 161 0 - 0 036 0 % 0 138 0 - 0 062 7 % 0 138 0 - 0 063 7 % 0 124 0
通心络 0 4 - 0 030 0 % 0 026 0 - 0 012 8 % 0 014 0 0 012 6 % 0 019 0 0 008 4 % 0 157 0 0 002 1 % 0 012 0
与对照组比较: * P< 0 05; 与模型组比较: # P< 0 05
* P< 0 05 v s cont rol group; # P < 0 05 v s model gr ou p
内在一致性, 均为∀脉络血管系统#病变的始动因
素。络脉瘀阻和络脉绌急是络病中主要的病理变
化。∀络以通为用#是中医治疗络病的原则, 益气通
络 (人参) , 辛温通络 (薤白、降香) , 活血通络 (水
蛭) 为主要通络治法。各通络药物有不同的通络特
异性,人参补气容络,生津固脱;薤白辛温通阳,畅通
络气;降香辛香通络,理气化瘀;水蛭化瘀通络,破血
逐瘀[ 7] 。通络复方通心络是近年应用络病学说与通
络药物治疗心血管病的代表性方药,各通络药物按
君、臣、佐、使原则组合, 益心气扶正以固本虚, 使气
旺血行、脉络畅通。
血管内皮损伤或(和)功能障碍是血管病变始动
及发展加重的首要因素, 内皮功能障碍能加速、加重
微循环障碍和微血栓形成。目前研究认为血管内皮
功能障碍可能在冠脉痉挛的发病机制或潜在机制中
扮演重要角色。内皮依赖性舒张反应的降低或消失
是国际公认的评价血管内皮功能障碍的金标准 [ 3] ,
NO 是血管内皮所合成分泌的最重要的血管活性物
质。NO 具有扩张血管、抗血小板黏附聚集、抗血管
平滑肌细胞增生等作用[ 8] , 血浆 NO 水平可作为血
管内皮损伤程度的评价标准。vWF 可促进血小板
的黏附与聚集[ 9] , 如血浆 vWF 水平也间接表明血
管内皮损伤程度。
本实验通过建立内皮损伤、内皮损伤合并微血
栓形成 (络脉瘀阻) 及内皮损伤合并急性心肌缺血
(络脉绌急) 大鼠模型, 探讨通络代表药的通络效
果,并将其与复方通心络进行比较。实验结果显示
通络代表药对饮食诱导的 HHcy 所致的内皮损伤
有防治作用,可以改善内皮依赖性血管舒张功能,升
高血浆 NO 水平, 降低血浆 vWF 水平,起到保护血
管内皮的作用,而通心络的作用更为明显;通络代表
药干预内皮损伤合并微血栓形成模型, 可以显著降
低血浆 vWF 值、改善血液流变,还可显著升高 PLT
和 FG 水平,而通心络的作用更为明显;通络代表药
干预内皮损伤合并急性心肌缺血模型, 可以显著升
高血浆 NO 水平, 改善络脉绌急大鼠 T 波压低幅
度,减轻心肌缺血程度,而通心络的作用更为明显。
以上实验结果表明通络代表药人参、薤白、蜈蚣、水
蛭对血管内皮损伤、络脉瘀阻以及络脉绌急有一定
的防治作用, 但其作用弱于复方通心络。通心络的
通络效应优于单一的通络药,通心络可能同时针对
络病多种病机起效, 在治疗络病方面有更广的适应
症范围,同时也反映出中药复方君、臣、佐、使组方原
则的科学性。
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江浙蝮蛇毒对体外培养人滑膜细胞凋亡的影响
胡 珏1, 2 ,许东航1, 3 * ,吕庆华3
( 1 浙江大学药学院,浙江 杭州 310031; 2 浙江医学高等专科学校 药理教研室, 浙江 杭州 310053;
3 浙江大学医学院附属第二医院,浙江 杭州 310009)
摘 要:目的 探讨江浙腹蛇毒 ( AH V ) 诱导类风湿性关节炎 ( RA ) 患者滑膜细胞凋亡的作用及对相关蛋白
Caspase3 表达的影响。方法 AHV 处理培养的滑膜细胞后, 采用 MTT 比色法检测 AHV 对滑膜细胞增殖的抑
制作用,并采用流式细胞仪 ( FCM ) 检测细胞凋亡率, 以免疫组织化学法检测 Caspase3 蛋白的表达。结果 MTT
的检测结果显示 5g / mL AHV 处理组滑膜细胞增殖抑制率达 67 2% , 且与时间、剂量具有正相关关系 ( P <
0 05) , AH V 体外作用滑膜细胞 24 h 的 IC50为 3 508 g/ mL。流式细胞仪结果显示,与对照组相比, AH V 各剂量
组凋亡率明显增加 (P< 0 05) ,并与剂量呈正相关。AHV 体外作用滑膜细胞 24 h 时出现了明显的 Caspase3 蛋
白表达,其蛋白表达率明显高于对照组。结论 AHV 对滑膜细胞具有较强的增殖抑制作用, 细胞凋亡率明显增加
可能与 AHV 诱导滑膜细胞 Caspase3 活化相关。
关键词:江浙蝮蛇毒; 类风湿性关节炎; 滑膜细胞; 细胞凋亡; Caspase3
中图分类号: R285 5 文献标识码: A 文章编号: 02532670( 2010) 11184704
类风湿性关节炎 ( r heumato id arthritis , RA )
是一种常见的严重危害人类身心健康的多因素导致
的系统性自身免疫性疾病,表现为关节反复的炎症、
滑膜细胞∀肿瘤样#增生以及由此引起的软骨和骨的
破坏,其发病机制主要与滑膜细胞凋亡减少所导致
的滑膜组织内细胞的增殖和死亡之间的平衡失调有
关[ 1]。因而,促进滑膜细胞的凋亡可能是未来治疗
RA 的重要方向。蛇毒是毒蛇分泌出来的一种毒
液,其中含有多种具有不同生理与药理活性的酶与
肽类物质。近年来国内外从蛇毒中分离出多种抗肿
瘤成分, 它们对肿瘤细胞有杀伤和抑制生长的作
用[ 23]。江浙蝮蛇毒 ( Agk ist rodon haly s Pallas
venom , AH V) 的主要活性成分蛇毒蛋白有诱导凋
亡和抗肿瘤作用,临床上已被用于治疗 RA 等慢性
疾病所致的炎症和疼痛。然而, AHV 对 RA 患者
的治疗作用机制仍不是很清楚。本实验以此为出发
点,初步研究了 AHV 对 RA 患者成纤维样滑膜细
胞增殖与凋亡的影响,并分析其可能的作用机制。
1 材料与方法
1 1 病例来源: 2007年 2~ 7月浙江大学附属第二
医院骨科行膝关节置换术的 RA 患者 6 例。其中
女性 3例, 男性 3 例,年龄 34~ 62 岁,平均 ( 50 %
10) 岁;病程 6~ 30 年,平均 ( 14 % 10) 年。所有患
者皆符合 1987年美国风湿病学会 ( ACR) 修订的
RA 诊断标准。
1 2 主要试剂与仪器: DMEM 培养基、+型胶原
酶、胎牛血清、胰蛋白酶,美国 Gibco 公司; MT T 和
DMSO,美国 Sigma 公司;兔抗人 Caspase3 抗体,
美国 Santa Cruz 公司; PI 储存液, 美国 Sigma 公
司, RNase 试剂用时现配。AHV 由浙江龙图蛇业
集团有限公司提供, - 20 ∋ 保存。酶标检测仪
( BioRAD Model 550型) ; FACS Calibur 型流式细
胞仪,美国 BectonDickinson 公司。
1 3 滑膜细胞的分离和培养[ 4] : 无菌条件下,将关
节置换术获得的滑膜组织切成 3~ 5 mm 的碎片,用
+型胶原酶和等体积的 DMEM 培养基, 在 37 ∋ 、
!1847!中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 41 卷第 11 期 2010 年 11月
收稿日期: 20100328 基金项目:浙江省中医药科研基金项目 ( 2006C024)作者简介:胡 珏( 1972 ∃ ) ,女,浙江金华人,硕士,副教授,研究方向为类风湿性关节炎的基础与临床研究。
T el : ( 0571) 87692678 Email: hjm ice@ z jmc. net . cn
* 通讯作者 许东航 T el: ( 0571) 87784529 Email: xudonghang@ zju . edu. cn