全 文 ：正交试验法优选山茱萸高压酒蒸工艺的研究
左 文, 陆兔林* ,毛春芹,安 晏, 张 琦
(南京中医药大学药学院, 江苏 南京 210046)
摘 要:目的 优选山茱萸的最佳高压酒蒸工艺。方法 以马钱苷、5羟甲基糠醛为指标,采用正交试验法, 考察酒
用量、闷润时间、蒸制温度、蒸制时间 4 个因素(每个因素取 3 个水平) , 对山茱萸最佳炮制工艺进行优选。结果
最佳酒蒸工艺为取山茱萸 100 g , 加入 20%酒, 闷润 1 h, 115 高压蒸 1 h。结论 优选得到的山茱萸炮制工艺稳
定、合理。
关键词:山茱萸; 马钱苷; 5羟甲基糠醛;高压酒蒸工艺; 正交试验
中图分类号: R284 2 文献标识码: B 文章编号: 02532670( 2010) 03040303
山茱萸为山茱萸科植物山茱萸 Cor nus of f ici
nal i s Sieb et Zucc 的干燥成熟果肉, 具有补益肝
肾、涩精固脱之功,炮制后滋补作用增强。山茱萸传
统炮制方法繁多,现代炮制方法有酒蒸、清蒸、醋蒸、
醋拌、盐制、蜜拌、蜜蒸等 [ 1]。!中国药典∀2005年版
收载常压酒蒸(或酒炖)。文献报道,酒蒸山茱萸一
般酒的用量为 20% ~ 30% ,闷润时间 0~ 4 h, 蒸制
时间 4~ 8 h[ 2~ 5] 。目前采用的蒸制工艺较为传统原
始,缺乏客观可控性较强的工艺参数, 生产效率低,
饮片质量难以控制。本实验通过对常压酒蒸和高压
酒蒸工艺的比较,体现了高压蒸制的优势,确定了该
法的科学可行性。!中国药典∀2005年版中山茱萸
以马钱苷为指标, 采用高效液相色谱法测定。山茱
萸酒蒸后, 5羟甲基糠醛( 5HMF)的量较生品中明
显增加。研究表明, 5HMF 具有多种生物活性, 是
酒萸肉补益肝肾作用增强的物质基础之一[ 6] , 对山
茱萸饮片质量标准的建立, 炮制工艺及机制的研究
具有重要意义, 文献报道也多用高效液相色谱法测
定[ 7]。因此,本实验采用高压蒸制的方法制备酒萸
肉,以马钱苷和 5羟甲基糠醛作为指标性成分, 采
用正交试验优选最佳工艺参数。
1 仪器与试药
Agilent 1100型高效液相色谱仪(美国安捷伦
公司 ) ; M LS # 3780 型实 验室 用高压 灭菌 器
( SANYO 公司) ; 电子天平 ( FA1104 ) ; KQ # 500B
型超声清洗器(昆山超声仪器有限公司) ; LXJ # IIB
低速大容量多管离心机。
乙腈、甲醇(色谱纯)、水(重蒸水) , 其他试剂均
为分析纯; 马钱苷对照品 (批号 111640200502)、
5羟甲基糠醛(批号 127860200508)对照品由中国
药品生物制品检定所。山茱萸药材购自河南西峡,
经南京中医药大学陈建伟教授鉴定为山茱萸科植物
山茱萸 Cor nus of f i cinali s Sieb et Zucc 的干燥成
熟果肉。
2 方法与结果
2 1 高压蒸制工艺设计: 取净山茱萸 100 g, 共 9
份,以马钱苷、5羟甲基糠醛为指标,选取酒的用量、
闷润时间、蒸制温度、蒸制时间作为考察因素,每个
因素 3个水平,各因素水平见表 1, 选用 L 9 ( 34 )正交
表,加黄酒闷润, 置高压灭菌柜内蒸制, 进行最佳工
艺考察。结果见表 2。
表 1 因素水平
Table 1 Factors and levels
水平 因 素
A 酒的用量/ % B闷润时间/ h C蒸制温度/ D 蒸制时间/ h
1 10 1 102 0 5
2 20 2 110 1 0
3 30 3 115 1 5
2 2 马钱苷的测定
2 2 1 色谱条件: 依利特C18色谱柱 ( 250 mm ∃
4 6 mm, 5 m) ; 流动相: 乙腈水( 15% 85) ; 体积流
量: 1 0 mL/ min;检测波长: 240 nm[ 7]。
2 2 2 对照品溶液的制备:精密称定马钱苷对照品
适量,用甲醇定容,配制成质量浓度为 40 48 g/ mL
的对照品溶液。
2 2 3 线性关系考察:精密吸取上述对照品溶液适
量稀释成 4 048、8 096、16 192、24 288、32 384、
&403&中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 41 卷第 3 期 2010 年 3 月
收稿日期: 20090527 基金项目:国家∋ 十一五(支撑项目( 2006BAI09B0606)作者简介:左 文( 1982 # ) ,女,江苏南京人,南京中医药大学 07级中药学硕士研究生,主要从事中药炮制、中药质量标准及中药 6类新药的开发研究。T el: 13776691399 Em ail : zuow en2009@ yahoo cn
* 通讯作者 陆兔林 Email: lutuling2005@ 126 com
40 48 g / mL 的溶液。分别各精密吸取 10 L, 注
入高效液相色谱仪, 测定峰面积。以峰面积为纵坐
标,质量浓度为横坐标, 绘制标准曲线, 得回归方程
Y = 17 7175 X - 0 5663, r = 0 999 8, 线性范围
0 040 5~ 0 404 8 g。
2 2 4 供试品溶液制备:取酒萸肉粉末(过 3号筛)
约 0 1 g , 精密称定, 置具塞离心管中, 精密加入
80%甲醇 25 mL,超声处理 45 m in,离心,取上清液
定容至 25 mL,作为供试品溶液。
2 2 5 样品测定:精密吸取上述供试品溶液 10 L
分别注入色谱仪进行测定, 带入回归方程计算马钱
苷的量。结果见表 2。
2 3 5羟甲基糠醛的测定
2 3 1 色谱条件: 依利特C18色谱柱( 250 mm ∃
4 6mm, 5m) ;流动相:乙腈水( 5 % 95) ;体积流量:
1 0 mL/ min; 检测波长: 284 nm[ 8]。
2 3 2 对照品溶液的制备: 精密称取 5羟甲基糠
醛对照品适量, 以甲醇定容配成 52 2 g/ mL 的对
照品溶液。
2 3 3 线性关系考察:精密吸取上述对照品溶液适量
稀释成 388、5 22、10 44、2088、31 32 g/ mL 的溶液。
分别各精密吸取 10 L,注入高效液相色谱仪,测定峰
面积。以峰面积为纵坐标,质量浓度为横坐标,绘制标
准曲线,得回归方程 Y= 80 485 1 X+ 22241 1, r=
0 999 5,线性范围 0038 8~ 0 313 2 g。
2 3 4 供试品溶液制备:同 2 2 4项下方法。
2 3 5 样品测定:精密吸取上述供试品溶液 10 L
注入色谱仪进行测定, 带入回归方程计算 5羟甲基
糠醛的质量。结果见表 2。
表 2 酒制山茱萸工艺 L9 ( 34 )正交试验结果
Table 2 L9( 34 ) Orthogonal test of processing technology for
wineprepared Fructus Corni
试验号 A B C D 马钱苷
/ %
5羟甲基
糠醛/ %
综合
加权
1 1 1 1 1 0 674 9 0 106 0 0 780 8
2 1 2 2 2 0 656 2 0 622 7 1 278 8
3 1 3 3 3 0 659 4 0 547 8 1 207 2
4 2 1 2 3 0 667 3 0 604 5 1 271 7
5 2 2 3 1 0 705 4 0 399 9 1 105 4
6 2 3 1 2 0 681 8 0 163 1 0 844 9
7 3 1 3 2 0 728 7 0 619 0 1 347 7
8 3 2 1 3 0 678 8 0 225 2 0 904 0
9 3 3 2 1 0 703 1 0 122 8 0 825 9
) j 3 266 9 3 400 3 2 529 7 2 712 1
∗j 3 222 1 3 288 2 3 376 5 3 471 5
+j 3 077 6 2 878 1 3 660 3 3 383 0
R 0 006 5 0 050 4 0 230 6 0 114 9
2 4 实验结果分析: 以马钱苷和 5羟甲基糠醛的
总量为指标进行综合加权评价, 对上述实验结果进
行方差分析,结果见表 3。
表 3 方差分析
Table 3 Analysis of variance
方差来源 离均差平方和 自由度 均方 F 值 显著性
B 0 050 4 2 0 025 2 7 725 3
C 0 230 6 2 0 115 3 35 360 4 P< 0 05
D 0 114 9 2 0 057 5 17 623 6
A 0 006 5 2 0 003 3 1
F0 05 ( 2, 2) = 19 F 0 01( 2, 2) = 99
结果显示: C 因素有显著性差异, 故C 因素确定
为 3水平; B因素影响较小, 考虑到今后大生产过程
中提高效率、节约能耗的原则,确定为 1 h; A、D因
素遵循润透、蒸透即可的原则, 分别确定为 2水平。
因此,最终确定最佳高压蒸制工艺为 A 2B1C3D2 , 即
取生山茱萸 100 g ,加 20%酒闷润 1 h, 115 蒸1h。
2 5 最佳高压蒸制工艺条件的验证试验:取山茱萸
100 g , 共 3份,按正交试验得到的最佳工艺条件炮
制,即加 20%酒,闷润 1 h, 115 蒸 1 h。干燥后打
粉,取样测定高压蒸制品中马钱苷和 5羟甲基糠醛
的量。结果见表 4。
表 4 高压蒸制验证工艺中马钱苷和 5羟甲基糠醛的测定
Table 4 Determination of loganin and 5HMF in samples
by highpressured steamed processing technology
试验号 马钱苷/ % RSD/ % 5羟甲基糠醛/ % RSD/ %
1 0 726 1 0 478 9
2 0 719 5 0 48 0 467 7 1 21
3 0 723 6 0 471 4
可见3次试验所测得的马钱苷和 5羟甲基糠醛
的量与最佳工艺所测得的平均量均相近, 说明该工
艺稳定、可行。
2 6 生品、常压蒸、高压蒸马钱苷、5羟甲基糠醛的
比较
2 6 1 生品:取山茱萸药材 100 g,除去杂质和残留
果核。
2 6 2 常压蒸制:参考∋十五(课题 # # # 山茱萸炮制
机制研究确定的最佳炮制工艺, 即取山茱萸 100 g,
加 20%黄酒,密闭, 闷润 1 h,置蒸锅中蒸制 8 h。
2 6 3 高压蒸制:取生山茱萸 100 g, 加 20%酒,密
闭,闷润 1 h,置高压灭菌柜 115 蒸 1 h。
2 6 4 不同炮制方法所得样品中马钱苷、5羟甲基
糠醛的测定和比较:方法同前, 结果见表 5。山茱萸
经蒸制后马钱苷降低, 并产生新成分 5羟甲基糠
醛。高压蒸制品各成分与常压蒸制品差别不大或高
于常压蒸制品。
&404& 中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 41 卷第 3 期 2010 年 3 月
表 5 生品、常压蒸、高压蒸样品中马钱苷、5羟甲基糠醛的
测定
Table 5 Determination of loganin and 5HMF in processed
products of Fructus Corni steamed at pressure
and high pressure
样 品 马钱苷量/% 5羟甲基糠醛/ %
生品 0 80 #
常压蒸制品 0 63 0 37
高压蒸制品 0 72 0 47
3 讨论
笔者另外进行了山茱萸不同炮制品对小鼠补益
作用的实验研究。结果表明, 常压蒸酒萸肉、高压蒸
酒萸肉均能增强补益作用, 两者的补益效果无显著
性差异,但与同剂量的生品比较,两者补益作用均增
强(另文发表)。采用高压蒸制法炮制山茱萸, 操作
简便,压力、时间、温度等便于控制,既提高了工作效
率,又减少了药汁的损失。与常压蒸制方法相比, 高
压酒蒸山茱萸的成分及药效均未发生明显变化, 而
高压蒸制明显降低了能耗, 节约了时间。故此方法
既不违背传统的炮制原理,又符合药材炮制的现代
要求,可推广用于大规模生产。
参考文献:
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酒制品中没食子酸、5羟甲基糠醛、莫诺苷和马钱素 [ J] 中草
药, 2008, 39( 12) : 18131815
HPLC法测定六味地黄片中马钱苷和丹皮酚
魏惠珍1 ,邱伟华2 , 饶 毅1, 2 * ,陈银芳2 ,陈燕军2 , 杜艳龙1
( 1 中药固体制剂制造技术国家工程研究中心,江西 南昌 330006; 2 江西中医学院,江西 南昌 330006)
摘 要:目的 建立六味地黄片中马钱苷、丹皮酚的测定方法。方法 采用高效液相色谱法同时测定六味地黄片
中马钱苷、丹皮酚。色谱条件: Hyper sil ODS2 C18色谱柱 ( 250 mm ∃ 4 6mm, 5 m) ; 流动相: 甲醇水梯度洗脱; 检
测波长: 238 nm。结果 马钱苷和丹皮酚的线性范围分别为 2 47~ 988 80 g ( r= 0 999 7)、1 58~ 633 60 g ( r=
0 999 9) ,平均回收率分别为 100 2% ( RSD为 2 40% , n= 6)、99 80% ( RSD 为 1 56% , n= 6)。结论 该方法操作
简便、准确, 重现性好,有利于提高六味地黄片制剂的质量控制水平。
关键词:六味地黄片; 马钱苷;丹皮酚; 高效液相色谱
中图分类号: R286 02 文献标识码: B 文章编号: 02532670( 2010) 03040503
在六味地黄方的所有剂型中,各剂型制备工艺
差异较大,如蜜丸为六味药材粉末加炼蜜制丸而成,
而片剂为山茱萸、茯苓、牡丹皮粉碎成细粉, 熟地黄
等其余 3味药材水煎煮、浓缩成膏, 与上述细粉混
匀、制粒、压片成型。组成相同而剂型不同的六味地
黄方其化学成分的种类和量必定存在差别[ 1] , 而化
学成分是其发挥疗效的物质基础,其中马钱苷具有
增强机体免疫能力等生理活性,丹皮酚具有抗炎、镇
痛、解痉等药理作用[ 2] 。六味地黄片为其剂型之一,
中华人民共和国卫生部药品标准中药成方制剂第八
册六味地黄片项下采用紫外分光光度法测定丹皮
酚,该法专属性不强。故本实验采用 HPLC 法进行
六味地黄片中马钱苷和丹皮酚的同时测定,在现有
质量标准的基础上增加了主要活性成分马钱苷的检
测,实现了多个成分同时控制,进而完善六味地黄方
产品的质量控制体系, 确保其疗效。
1 仪器与试药
Water s 2695高效液相色谱仪(美国Waters公
司) ; Waters 2996二极管阵列检测器(美国 Waters
公司) ; Empow er 色谱工作站; M illipo re 超纯水仪
( M illipo re公司) ; A R5120型电子分析天平(奥豪斯
国际贸易(上海)有限公司) ; AB104 # N型电子分析
&405&中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 41 卷第 3 期 2010 年 3 月
收稿日期: 20090723 基金项目:江西省自然科学基金资助项目( 0640168)作者简介:魏惠珍( 1965 # ) ,女,江西南昌人,副主任药师,硕士生导师,长期从事中药质量控制研究。
T el : ( 0791)7119651 Fax: ( 0791) 7119609 Em ail: w eihuizhen_101@ 126 com
* 通讯作者 饶 毅 T el: ( 0791) 7119609 Email: raoyi99@ 126 com