全 文 ：中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 42 卷 第 10 期 2011 年 10 月

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HPLC 法测定活络酊中水杨酸甲酯
徐建白 1，唐 云 2，庞东颖 1，高国鹏 3，吴 怡 1*，韦 超 2
1. 天津市中央药业有限公司，天津 300400
2. 南京生命能科技开发有限公司，江苏 南京 210016
3. 中美天津史克制药有限公司，天津 300163
摘 要：目的 建立 HPLC 法测定活络酊中水杨酸甲酯的方法。方法 色谱柱为 Hypersil ODS2 柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），
流动相为乙腈-0.01%磷酸溶液（40∶60），体积流量 1.0 mL/min，检测波长 302 nm，柱温 30 ℃。结果 水杨酸甲酯在 120.25～
2 405 ng 呈良好线性关系（r＝0.999 8），回收率为 99.96%，RSD 为 0.08%；检出限为 0.481 ng，定量限为 1.443 ng。结论 该
方法简单、可靠、检测限低、重现性好，可用于活络酊中水杨酸甲酯的质量控制。
关键词：水杨酸甲酯；活络酊；HPLC；质量控制；定量测定
中图分类号：R286.02 文献标志码：B 文章编号：0253 - 2670(2011)10 - 2026 - 02
Determination of methyl salicylate in Huoluo Tincture by HPLC
XU Jian-bai1, TANG Yun 2, PANG Dong-ying1, GAO Guo-peng3, WU Yi1, WEI Chao2
1. The Central Pharmaceutical Co., Ltd., Tianjin 300400, China
2. Nanjing Lifenergy R&D Co., Ltd., Nanjing 210016, China
3. Tianjin Smith Kline & French Laboratories Ltd., Tianjin 300163, China
Key words: methyl salicylate; Huoluo Tincture; HPLC; quality control; quantitation determination

活络酊处方中含有生川乌、防已、山柰、连钱
草、延胡索、干姜、樟脑、薄荷脑、冰片、辣椒、
蟾酥 11 味中药及水杨酸甲酯，具有舒筋祛寒、活血
止痛等功效。用于筋骨痛、急性扭伤、肌肉疼痛及
风湿痛、肝区疼痛等症。制剂处方中的水杨酸甲酯
可促进局部血液循环，具有消炎止痛作用。本实验
采用 HPLC 法对活络酊中水杨酸甲酯进行测定。
1 仪器与材料
Agilent 1100 高效液相色谱仪、四元泵、VWD
检测器、Agilent 1100 化学工作站（美国 Agilent 公
司），Mettler AE240 电子分析天平（梅特勒-托利多
公司），SYZ—A 石英亚沸高纯水蒸馏器（江苏信达
仪器厂）。
水杨酸甲酯对照品（批号 110707-200107，中
国药品生物制品检定所）；乙腈为色谱纯，其余试剂
均为分析纯。活络酊样品（批号 070429、070501、
070503，浙江天一堂药业有限公司）。不含水杨酸
甲酯的空白样品由南京生命能科技开发有限公司
制备。
2 方法与结果
2.1 溶液的制备
2.1.1 对照品溶液的制备 精密称取水杨酸甲酯对
照品适量，加甲醇制成 8 mg/mL 的溶液，作为对照
品溶液。
2.1.2 供试品溶液的制备 精密吸取活络酊样品 2
mL 至 100 mL 量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，过
0.45 μm 滤膜，即得。
2.1.3 空白对照溶液的制备 取空白样品，按供试
品溶液制备方法制备，即得。
2.2 色谱条件[1]
色谱柱为 Hypersil ODS2 柱（250 mm×4.6 mm，
5 μm），流动相为乙腈-0.01%磷酸溶液（40∶60），
体积流量 1 mL/min，测定波长 302 nm，柱温 30 ℃
进样量 10 μL。

收稿日期：2011-03-27
作者简介：徐建白（1978—），女，天津市人，本科，工程师，研究方向为药品制剂技术及生产管理。
Tel: (022)26825595 E-mail: shchddsh@163.com
*通讯作者 吴 怡 Tel: (022)86866383 E-mail: wuyi76@163.com
中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 42 卷 第 10 期 2011 年 10 月

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2.3 系统适用性试验
分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液、空白
对照溶液，进样，记录色谱图（图 1）。该色谱条件
下的分离效果较好；空白对照在与对照品相应的保
留时间处未出现杂质峰，表明样品中水杨酸甲酯的
测定无干扰。



*水杨酸甲酯
*methyl salicylate

图 1 对照品（A）、活络酊（B）、空白对照（C）
的 HPLC 色谱图
Fig. 1 HPLC chromatograms of reference substance (A),
Huoluo Tincture (B), and blank control (C)

2.4 水杨酸甲酯的检测限和定量限
取水杨酸甲酯对照品溶液，过 0.45 μm 滤膜，
取续滤液，不断以甲醇稀释，并取适量注入色谱仪，
最终确定在信噪比为 3∶1 时，水杨酸甲酯的检出限
为 0.481 ng；在信噪比为 10∶1 时，得出其定量限
为 1.443 ng。
2.5 线性关系考察
取水杨酸甲酯对照品适量，精密称定，加甲醇
制成 2.405 mg/mL 的溶液，摇匀，即得对照品储备
液。分别精密吸取对照品储备液 0.05、0.1、0.2、0.4、
0.6、0.8、1.0 mL 置 10 mL 量瓶中，加甲醇稀释至
刻度，分别进样，记录色谱图，以进样量为横坐标，
峰面积为纵坐标进行线性回归，得回归方程 Y＝
1 486.9 X－30.66，r＝0.999 8，可见水杨酸甲酯在
120.25～2 405 ng 线性关系良好。
2.6 精密度试验
取同一样品（批号 070429），制备供试品溶液，
连续进样 5 次，测得水杨酸甲酯峰面积的 RSD 为
0.23%。
2.7 稳定性试验
取同一样品（批号 070429），制备供试品溶液，
分别于 0、0.5、1、2、4、6、8、12 h 进样，记录色
谱图，测得水杨酸甲酯峰面积的 RSD 为 0.24%，表
明供试品溶液在 12 h 内稳定。
2.8 重现性试验
精密吸取样品（批号 070429）溶液制备供试品
溶液，平行 6 份，分别进样，记录色谱图，测得水
杨酸甲酯峰面积的 RSD 为 0.66%。
2.9 加样回收率试验
精密吸取活络酊样品（批号 070429）1 mL 置
100 mL 量瓶中，平行 9 份，按其所含水杨酸甲酯量
的 0.8、1.0、1.2 倍精密加入一定量的水杨酸甲酯对
照品，每个质量浓度平行 3 份，加甲醇至刻度，摇
匀，过 0.45 μm 滤膜，分别进样，记录色谱图，测
得水杨酸甲酯平均回收率为99.96%，RSD为0.08%。
2.10 样品测定
取 3 批活络酊样品制备供试品溶液，每样平行
3 份，进样，外标法测定样品中水杨酸甲酯的量，
结果见表 1。

表 1 活络酊中水杨酸甲酯的测定 (n＝3)
Table 1 Determination of methyl salicylate
in Huoluo Tincture (n = 3)
批 号 水杨酸甲酯/(mg·mL−1)
070429 6.91
070501 6.97
070503 7.02

3 讨论
目前，关于水杨酸甲酯的定量测定以 GC 法为
主，HPLC 流动相则以酸碱调节 pH，操作较繁琐，
本实验采用乙腈-0.01%磷酸溶液（40∶60）为流动
相的 HPLC 法测定水杨酸甲酯的量，并考察了其检
测限和定量限。该方法能有效控制活络酊成品中水
杨酸甲酯的量，同时也为水杨酸甲酯的定量测定方
法提供了参考。
参考文献
[1] 李玮玲, 邱 娟. HPLC 法测定复方水杨酸甲酯搽剂的
含量 [J]. 广东药学院学报, 2007, 23(5): 533-535.

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B
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