全 文 ：中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 42 卷 第 12 期 2011 年 12 月

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含与不含朱砂的万氏牛黄清心丸对高热惊厥大鼠模型的影响
陈 斌 1，李飞艳 1，李福元 1，陈北阳 2
1. 湖南中医药高等专科学校，湖南 株洲 412012
2. 湖南中医药大学，湖南 长沙 410007
摘 要：目的 比较含与不含朱砂的万氏牛黄清心丸的抗惊厥作用。方法 制备大鼠高热惊厥模型，记录模型大鼠给予万氏
牛黄清心丸（1 号方）、去除朱砂的万氏牛黄清心丸（2 号方）、酸枣仁替代朱砂的万氏牛黄清心丸（3 号方）后的惊厥潜伏
期；取大鼠海马切片，HE 染色和尼氏染色，观察海马 CA1、CA2、CA3 区神经元形态并海马神经元计数；以安宫牛黄丸作
为阳性对照。结果 随着惊厥诱导次数的增加，各组动物惊厥潜伏期均延长，与模型组比较，各给药组不同程度地延长惊厥
潜伏期；与 1 号方比较，2 号方及 3 号方各剂量组大鼠惊厥潜伏期均无明显差异；模型大鼠海马各区神经元形态发生明显的
病理改变，1 号方能明显增加模型大鼠海马神经元数目，与模型组比较差异非常显著；2 号方和 3 号方对海马神经元的影响
与 1 号方无明显差异。结论 1 号方、2 号方和 3 号方均有明显的抗惊厥作用，三者作用无明显差异。
关键词：万氏牛黄清心丸；朱砂；酸枣仁；抗惊厥；神经元
中图分类号：R282.5；R971.6 文献标志码：A 文章编号：0253 - 2670(2011)12 - 2502 - 05
Effects of Wanshi Niuhuang Qingxin Pill containing cinnabar or not on convulsive
of rats with hyperpyrexia
CHEN Bin1, LI Fei-yan1, LI Fu-yuan1, CHEN bei-yang2
1. Hunan Traditional Chinese Medical College, Zhuzhou 412012, China
2. Hunan University of Chinese Medicine, Changsha 410007, China
Key words: Wanshi Niuhuang Qingxin Pill; cinnabar; semen; anticonvulsion; neurons

万氏牛黄清心丸为经典中药复方，由牛黄、朱
砂、黄连、栀子、郁金、黄芩 6 味中药组成，具
有清热解毒、镇惊安神之功效，主要用于热入心
包、热盛动风证，症见邪热内闭、烦躁不安、神
昏谵语、小儿高热惊厥[1]。方中朱砂主要成分为
HgS，对人体毒性较大，有关朱砂或含朱砂的中成
药的不良反应日益引起人们的重视，相关研究已
有报道[2-7]。此外，由于国内外对中药中重金属限
量的要求[8]，使万氏牛黄清心丸的临床应用及出口
受到一定限制。抗惊厥是中药镇惊安神的现代药
理基础，本实验比较研究了万氏牛黄清心丸及用
酸枣仁替代朱砂的万氏牛黄清心丸和去除朱砂的
万氏牛黄清心丸对高热惊厥模型大鼠惊厥潜伏
期、脑海马 CA1、CA2、CA3 区神经元的影响，
为万氏牛黄清心丸中的朱砂是否可以舍弃或用酸
枣仁替代提供科学依据。
1 材料
1.1 药品与试剂
万氏牛黄清心丸（1 号方）按《中国药典》方
法[1]自制：牛黄（体外培育牛黄）10 g、朱砂 60 g、
黄连 200 g、黄芩 120 g、栀子 120 g、郁金 80 g，朱
砂水飞成极细粉，牛黄研细，余下的黄连等 4 味中
药粉碎成细粉，与上述粉末配研过筛，混匀，每 100
g 粉末加炼蜜 70 g，得到每 1.70 g 相当于生药 1 g
的 1 号方。自制去除朱砂的万氏牛黄清心丸（2 号
方）：药粉与蜂蜜比例为 100∶90，除不加朱砂外，
其余组分与制法同 1 号方，得到每 1.90 g 相当于生
药 1 g 的 2 号方。自制酸枣仁替代朱砂的万氏牛黄
清心丸（3 号方）：将方中朱砂以酸枣仁 200 g 替代，
药粉与所加蜂蜜比例为 100∶88，其他组分与制法
同 1 号方，得到每 1.88 g 相当于生药 1 g 的 3 号方。
安宫牛黄丸，哈药集团世一堂制药厂，批号 0902131，

收稿日期：2011-07-18
基金项目：湖南省卫生厅中医药科研基金项目（06301）
作者简介：陈 斌，男，副教授，主要从事中药药理和中药化学成分研究和教学。Tel: (0731)28519074 E-mail: cb-6311@163.com
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每丸 3 g。多聚甲醛，天津市化学试剂研究所；苏木
素-伊红（HE）染色液、尼氏染色液均由湖南中医
药大学显微形态实验室提供。
1.2 动物
雄性 SD 大鼠，体质量 60～90 g，SPF 级，湖
南斯莱克景达实验动物有限公司提供，合格证号
004476。
1.3 仪器
SJH—8S 数显恒温水浴锅，宁波天恒仪器厂；
江南双目光学显微镜，江南光学仪器厂；LKB—VI
型超薄切片机，瑞典 LKB 公司；DM—LB2 莱卡生
物摄影显微镜，德国。
2 方法
2.1 大鼠惊厥模型的制备
采用热水浴诱导幼年SD大鼠高热惊厥模型[9-11]：
将大鼠置于 44.5～45 ℃水浴缸中，水深以大鼠沿缸
壁站立时仅露出头部为度，5 min 内发生惊厥即取
出，惊厥判断标准以前肢阵挛抽搐为准，隔日诱导
惊厥 1 次，共诱导 10 次。
2.2 对大鼠惊厥潜伏期的影响
造模后，选出在 5 min 内惊厥反应较明显的大
鼠 70 只，随机分为 7 组（每组 10 只），分别为安宫
牛黄丸（0.14 g/kg）组、1 号方（0.69 g/kg）组、2
号方低和高剂量（0.77、2.31 g/kg）组、3 号方低和
高剂量（0.76、2.28 g/kg）组、模型组。其余动物
为对照组。对照组及模型组 ig 给予蒸馏水，各药物
组于每次诱导高热惊厥模型前 1 h，ig 给予相应药
物。2、3 号方低剂量的确定以所含生药量与 1 号方
相同为依据，高剂量为低剂量的 3 倍，ig 体积均为
0.01 mL/g。分别记录每次动物置于热水浴以及发
现前肢阵挛的时刻，以两时刻的差值为大鼠惊厥
潜伏期。
2.3 对大鼠海马神经元的影响
动物分组及给药同“2.2”项。将高热诱导惊厥
10 次后的大鼠与对照组大鼠脱颈处死，剪下头部，
快速分离大脑并放入备有 10%多聚甲醛的容器中固
定，修整后经梯度乙醇脱水，二甲苯透明，浸蜡，
石蜡包埋，矢状切片，厚度 5 μm，烤片后用 HE 染
色。进行尼氏体染色，脱蜡，蒸馏水洗，预热，1%
甲苯胺蓝染色，得到大脑海马神经元的切片，分别
对海马神经元 CA1 区、CA2 区及 CA3 区摄像，观
察神经元形态、尼氏体的变化，对相同区域同样大
小视野中正常神经元（形态正常、尼氏体无丢失）
及总神经元计数，计算正常神经元百分率。
2.4 数据处理
数据采用 sx ± 表示，组间数据的比较采用 t检验。
3 结果
3.1 对大鼠惊厥潜伏期的影响
10 次高热诱导惊厥后，各组动物的惊厥潜伏期
逐渐延长。2 号方低剂量组的惊厥潜伏期比其高剂
量组短，3 号方低剂量组潜伏期在第 4 次诱导惊厥
后长于其高剂量组。安宫牛黄丸在第 6 次与第 7 次
诱导惊厥后潜伏期明显延长，与模型组比较有显著
差异（P＜0.05、0.01），在前 8 次诱导惊厥后的潜
伏期明显长于其他各给药组。1 号方在第 6 次诱导
惊厥后潜伏期明显延长，与模型组比较有显著差异
（P＜0.05）。3 号方低剂量组在第 9 次诱导惊厥后潜
伏期明显延长，与模型组比较有显著差异（P＜
0.05）。与 1 号方组比较，各药物组大鼠惊厥潜伏期
均无显著差异。结果见表 1。
表 1 万氏牛黄清心丸对高热惊厥模型大鼠惊厥潜伏期的影响 ( ± = 10x s, n )
Table 1 Effects of Wanshi Niuhuang Qingxin Pill on convulsive latent time of rats with hyperpyexia convulsion ( ± = 10x s, n )
惊厥潜伏期/s
组 别
剂量/
(g·kg−1) 第 1 次 第 2 次 第 3 次 第 4 次 第 5 次 第 6 次 第 7 次 第 8 次 第 9 次 第 10 次
模型 － 200±41 206±32 212±41 223±23 227±41 217±34 218±43 229±32 238±22 248±45
1 号方 0.69 195±37 197±30 216±49 218±33 237±39 249±31* 235±38 241±44 245±38 259±31
2 号方 0.77 194±47 201±46 206±46 220±48 229±30 231±41 232±45 234±46 239±42 251±43
2.31 203±47 209±36 222±39 225±40 238±21 240±38 246±37 247±42 254±39 264±46
3 号方 0.76 196±46 202±29 217±46 227±40 236±37 242±49 246±46 256±30 276±35* 274±38
2.28 203±46 211±48 218±35 229±30 231±35 238±42 243±44 248±45 260±33 273±42
安宫牛黄丸 0.14 225±43 229±48 223±44 234±37 241±40 261±20** 266±39* 256±38 261±47 267±46
与模型组比较：*P＜0.05 **P＜0.01
*P<0.05 **P<0.01 vs model group
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3.2 对海马神经元的影响
3.2.1 尼氏染色海马神经元计数 对照组海马各区
神经元 80%以上形态正常，尼氏体无丢失。模型组
大鼠神经元出现明显病变，尼氏体严重丢失，与对
照组比较差异非常显著（P＜0.01）。与模型组比较，
安宫牛黄丸与 1 号方组大鼠海马各区受损神经元明
显减少，CA1 区神经元明显减少，其余各区无明显
差异；2、3 号方各组 CA1、CA2 区各区海马神经
元损伤不同程度地降低，除 2 号方低剂量组 CA2
区、3 号方高剂量组大鼠 CA1 区无明显差异外，其
余与模型组比较差异显著（P＜0.05、0.01），CA3
区神经元无明显变化。结果见表 2。
3.2.2 HE 染色结果 对照组 CA1 区细胞排列紧密、
整齐、极向好、染色均匀，细胞核位于中央、大小
一致，细胞长椭圆形；CA2 区细胞较大，排列较疏
松，细胞核位于中央、大小一致；CA3 区细胞大，
大多为锥体状，排列较疏松。模型组 CA1 区细胞排
列紊乱，部分细胞可见细胞核，部分细胞溶解而只
见细胞轮廓；CA2 区细胞大部分溶解，细胞核固缩；
CA3 区细胞大部分溶解。与对照组比较，模型组大
鼠海马各区神经元形态发生明显改变。1、2、3 号
方各给药组大鼠 CA1 区细胞排列紧密、染色较均
匀，细胞椭圆形；CA2 区细胞较大，细胞核位于中
央；CA3 区细胞相对较大，多为锥体状，排列疏松，
表明这 3 个复方可抗神经元损伤，进而起到抗惊厥
作用。结果见图 1。
3.2.3 尼氏染色结果 对照组 CA1 区神经元排列
紧密、极向好，细胞大小一致、长椭圆形，大部分
神经元中尼氏体完好；CA2 区神经元较大、排列较
紧密、略呈锥体状，核仁位于中央，大部分尼氏体
完好；CA3 区神经元排列较疏松、较大，明显锥体
状，尼氏体完好。模型组 CA1 区细胞排列紧密、极
向不清，尼氏体溶解消失；CA2 区细胞排列紧密、
极向不清，细胞核固缩，部分细胞溶解；CA3 区细
胞核固缩，大部分溶解消失，可见鬼影细胞。与对
照组比较，模型组神经元尼氏体丢失，形态明显改
变甚至发生细胞溶解。1、2、3 号方各给药组大鼠
海马各区神经元数显著增加，表明其可抗神经元损
伤，进而起到抗惊厥作用。结果见图 1。
与 1 号方比较，除 2 号方和 3 号方低剂量组大
鼠海马 CA2 区神经元损伤明显增加外，其余均无明
显影响。
表 2 万氏牛黄清心丸对高热惊厥模型大鼠海马 CA1、CA2、CA3 区神经元的影响 ( ± = 10x s, n )
Table 2 Effect of Wanshi Niuhuang Qingxin Pill on normal hippocampus neurons CA1, CA2, and CA3 regions
of rats with hyperpyrexia convulsion ( ± = 10x s, n )
组 别 剂量/ (g·kg−1) CA1 区/% CA2 区/% CA3 区/%
对照 － 85.8±2.3 80.4±4.5 80.6±7.8
模型 － 69.3±7.9** 65.2±8.7** 66.2±6.0★
1 号方 0.69 78.0±6.7**▲▲ 79.2±5.2▲▲ 76.7±5.7▲▲
2 号方 0.77 77.6±8.6**▲ 72.6±7.4*△ 75.9±4.1▲▲
2.31 75.8±4.7**▲ 74.7±4.9*▲▲ 74.0±5.9▲
3 号方 0.76 77.6±5.4**▲ 73.7±3.5**▲△ 73.9±6.3*▲
2.28 74.5±4.8** 74.9±4.9*▲▲ 75.4±3.2▲▲
安宫牛黄丸 0.14 81.2±5.9*▲▲ 81.8±5.6▲▲ 77.7±7.9▲▲
与对照组比较：*P＜0.05 **P＜0.01；与模型组比较：▲P＜0.05 ▲▲P＜0.01；与 1 号方组比较：△P＜0.05
*P<0.05 **P<0.01 vs control group; ▲P<0.05 ▲▲P<0.01 vs model group; △P＜0.05 vs No.1 formula group
4 讨论
惊厥发作是由于中枢神经系统某些神经细胞群
发生的突然的、过度的、同步的异常放电而引起的
神经功能异常的表现，是某种脑部损伤或代谢障碍
的症状，具有多种诱因，包括儿童期急性感染、高
热、佝偻病等。本实验参考文献方法[9-10]制备幼年
大鼠高热惊厥模型，HE 染色结果显示，模型组大
鼠海马各区神经元细胞排列紊乱、核固缩，细胞溶
解；尼氏染色结果显示，模型组大鼠海马大部分细
胞尼氏体溶解消失、核固缩，甚至溶解消失，结果
与文献报道[9]基本吻合。由此推断，高热惊厥大鼠
模型制备成功。
高热诱导惊厥过程中，各组大鼠惊厥潜伏期逐
渐延长，分析原因可能与大鼠机体对外界刺激有一
定的适应性，因模型制备周期较长，随着动物的生
长发育神经系统发育日趋完善有关。具体原因还有
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图 1 大鼠海马神经元病理学观察
Fig. 1 Hippocampus neurons pathologic image in rats










对照
模型
尼氏染色
CA1 区 CA2 区 CA3 区
1 号方
低剂量
2 号方
低剂量
2 号方
高剂量
3 号方
低剂量
3 号方
高剂量
安宫牛黄丸
HE 染色
CA1 区 CA2 区 CA3 区
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待进一步研究，在已有研究及文献中尚未发现相关
报道。
由尼氏染色结果可知，与对照组比较，高热惊
厥模型大鼠海马 CA3 区神经元尼氏体丢失非常严
重，CA2 区其次，而 CA1 区神经元基本未受影响。
安宫牛黄丸作为清热解毒、镇惊开窍之经典方药，
对高热惊厥具有显著疗效。万氏牛黄清心丸亦为经
典方药，具有清热解毒、镇惊安神之功效，用于邪
热内闭、烦躁不安、神昏谵语、小儿高热惊厥的治
疗[1]。给药后海马各区神经元数显著增加，表明该
药可抗神经元损伤，从而起到抗惊厥作用，与其传
统功效相一致。万氏牛黄清心丸去除朱砂或用酸枣
仁替代朱砂的制剂也具有不同程度的抗神经元损伤
作用，尤其是去朱砂的 2 号方高剂量组与酸枣仁代
朱砂 3 号方的低剂量组对模型大鼠海马 CA1、CA2、
CA3 区神经元损伤均有明显的对抗作用，表明其同
样具有抗惊厥作用，且与万氏牛黄清心丸比较无明
显差异。因此根据本实验结果并综合文献报道[12]，
可初步推断朱砂并非为万氏牛黄清心丸抗惊厥作用
的主要药效物质，可以从方中去除或用酸枣仁替代，
但其具体关系及机制尚需深入研究。
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