全 文 ：J.SHANXI AGRIC.UNIV.(Natura l S cience Ed i tion)
学报(自然科学版)2007 , 27(4) 002312
收稿日期:2007-05-12　　　修回日期:2007-05-29
作者简介:顾雅静 (1982-), 女 (汉), 天津人 , 在读硕士 , 主要从事植物源农药方面的研究。
基金项目:山西省青年基金资助项目 (20051036 , 2006021033);山西农业大学科技创新资助项目 (2004002)
大戟狼毒提取物对朱砂叶螨生物活性的初步研究
顾雅静1 , 杨立峰2 , 张利军1 , 李向花1 , 刘素琪1 , 曹挥1
(1.山西农业大学 农学院 , 山西 太谷 030801;2.山西省永济市农业局植保站 , 山西 永济 044500)
摘　要:采用玻片浸渍法和叶片残毒法 , 选用大戟狼毒 3 种不同溶剂氯仿 、 甲醇和石油醚的提取物对朱砂叶螨的成
螨进行了生物活性测定。结果表明 , 大戟狼毒石油醚提取物对朱砂叶螨有很强的生物活性 , 而其它两种溶剂的提取
物效果不明显 , 24 h 成螨死亡率仅为 15.61%和 14.64%。石油醚的提取物 1 g/ L 对朱砂叶螨成螨 24 h 死亡率和校
正死亡率分别为 56.78%和 53.73%, LC50为 1.244 2 g/ L 。而三种萃取物的杀螨情况也是石油醚的效果最好 , 1 g/
L 对朱砂叶螨成螨 24 h 死亡率达到 68.15%, LC50为 0.568 1 g/ L , 氯仿的 LC50是 0.673 6 g/ L。
关键词:大戟狼毒;朱砂叶螨;生物活性
中图分类号:S482.1　　文献标识码:A　　文章编号:1671-8151 (2007)04-0394-03
Studies of Acarocidal Activity of Euphorbia f isheriana Against Tetranychus cinnabarinus(Boisduval)
GU Ya-jing et al.
(Col lege of Agriculture , Shanx i Agricultural Univ ersity , Taigu Shan xi 030801 , China)
Abstract:Euphorbia f isheriana w as investig ated fo r its acarocidal activ ity ag ainst Tetranychus cinnabarinus Bo isduva l
with Sheet g lass-so aks method and Leaf-re sidue method.The result indicated that the petro leum ex tracts of Euphorbia
f isheriana appea red a str ong acarocidal activity and the effect o f o the r tw o solvent ex tracts didnt appear effective acaro-
cidal activity.While adjusted mor tality of 24 h are only 15.61% and 14.64%.The mo rtality and adjusted mor tality of
the petr oleum ex tr ac ts with the concentration o f 1 g/ L aginst Tetranychus cinnabarinus Boisduval ar e 56.78% and
53.73%, and LC50 is 1.244 2 g/ L.The pa rtition o f petro leum in three ex trac ts also have the best effect.The mor tality
of 24 h is 68.15% and LC50 is 0.568 1g/ L.While the LC50 of the pa rtition of chlo rofo rm is 0.673 6 g/ L.
Key words:E uphorbia f isheriana ;Tetranychus cinnabarinus(Boisduval);Acarocidal activ ity
　　植食性螨类具有体积小 、 繁殖快 、 种群密度高 、 为害
重等特点 , 是公认的难以防治的有害生物群落。近 30 年
来 , 由于大量重复使用非专一性化学杀螨剂 , 加之螨类世
代周期短 , 年发生代数多 , 许多螨类已迅速产生抗药性 ,
对作物造成的损失有增无减[1] 。因此 , 寻找选择性新型杀
螨剂成为防治植食性螨类的关键。而植物源农药具有对害
虫作用谱广 , 作用机理独特 , 对天敌干扰少 , 无明显脊椎
动物毒性和环境中降解迅速 、 资源丰富 、 可再生等优
点[ 2] , 是防治害螨的理想选择。并且杀螨活性物质广泛存
在于自然界的多种植物中 , 完全可以利用植物次生物质所
表现出来的综合优势 , 来弥补目前现有杀螨剂存在的众多
缺陷。因此从植物源天然产物出发来寻找结构物质 , 成为
新型杀螨剂研发的热点之一[3] 。
大戟狼毒 Euphorbia f isheriana 是大戟科 (Rupho rbi-
aceae)大戟属的一种有毒植物 , 含有杀虫 、 杀菌等多种生
物活性物质。其杀虫活性成分对植物害虫有拒食 、 抑制作
用 , 制成的杀虫剂对人毒性低 , 易于自然分解 , 施用后无
残留 , 是一种理想的植物杀虫剂[ 4] 。此种资源丰富且采集
时不会破坏环境。为此 , 本文研究了大戟狼毒提取物和萃
取物对朱砂叶螨 (Tetranychus cinnabarinus (Boisduval))
的生物活性 , 旨在为新型植物源杀螨剂的开发提供依据。
1　材料与方法
1.1　试验材料
供试植物大戟狼毒采自山西历山自然保护区 , 将其洗
净后在室内阴干 (约 25 ℃), 放入恒温箱内 (40 ～ 45 ℃)
鼓风吹干至材料发脆。然后磨碎过 60 目筛 , 以供备用。
供试朱砂叶螨 (Tetr anychus cinnabarinus (Boisdu-
va l))为室内饲养的敏感品系:养虫室的温度 (25±1)℃,
相对湿度 (50±10)%, 光照 (L∶D 为 18 h∶6 h)。
DOI :10.13842/j.cnki.issn1671-8151.2007.04.009
化学药品:吐温 80 (聚山梨酯)、 石油醚 、 三氯甲烷
和甲醇等均为分析纯 ,
试验仪器:微型植物试样粉碎机 , RE52-98 旋转蒸
发仪 , S HB-Ⅲ A 循环式多用真空泵 , OLYMPUS S251
双目立体显微镜
1.2　试验方法
1.2.1　提取法:冷浸法
准确称取一定量的植物干粉 , 装入广口瓶内 , 加入干
粉 5 倍量的有机溶剂 (石油醚 、 氯仿 、 甲醇), 室温下分
别浸提 3 次 , 每次 3 ～ 5 d , 减压浓缩 , 合并 3 次的提取
物 , 称重。
1.2.2　萃取分离
称取大戟狼毒石油醚提取物 5 g , 用 10倍量的石油醚
溶解 , 装入分液漏斗中 , 采用液-液分配法萃取。依次用
氯仿 、 甲醇两种溶剂以 1∶1 为配比各萃取 3 次 , 分别合
并萃取液 , 将这些萃取液减压浓缩至稠膏状 , 称重。
1.2.3　成螨触杀测定
玻片浸渍法[ 5] :用双面胶带将健康活泼 、 大小一致的
雌成螨背部向下粘于载玻片的一端 , 在温度 (25±1)℃,
RH85%左右的生化培养箱中放置 4 h 后 , 镜检剔除死亡
或受伤个体 , 保证每玻片叶螨数为 30 头 , 在药液中浸 5 s
取出 , 用吸水纸吸掉多余的药液 , 处理后置于生化培养箱
中 , 于 24 h 后观察其死亡情况 , 接触动者为活 , 不动者
为死 , 按 abbo tt公式计算校正死亡率。
1.3　统计分析方法
将所得数据用 F inney 机率分析法求出毒力回归式 ,
并对该方程式进行卡方适合性检验。当回归式符合实际情
况后 , 求出 LC50 , 以及 LC50的 95%置信限。
2　结果与分析
2.1　最佳提取物的确定
将三种不同溶剂提取物配成实验所需浓度对朱砂叶螨
进行生物活性测定 , 结果见表 1。
表 1　大戟狼毒提取物对朱砂叶螨成螨的生物活性
Table 1　The mor tality of Tetranychus cinnabarinus(Bo isduva l).contacting w ith the ex tracts of Euphorbia f isheriana
处理
T reatment
溶剂
Solvent
死亡率 (%)＊
Mortality
校正死亡率 (%)
Adjusted mortalit y
成螨触杀作用
Act ion to adu lt
石油醚提取物 Ex tract s of pet roleum ether 56.78±0.029 7 Aa 52.73±0.032 5 Aa
氯仿提取物 Ext ract s of chloroform 15.61±0.006 7 Bb 7.70±0.007 3 Bb
甲醇提取物 E xt racts of m ethanol 14.64±0.009 9 Bb 6.64±0.010 8 Bb
注:＊每种试剂测试浓度均为 1 mg 提取物/mL , 3次重复 , 对照为 1%吐温 80溶液。
Note:Each solvents concent ration s w as 1 mg original material per mL , every t reatment has replicated three tim es , and CK was 1% tw een
80 solu tion.
表中同列数据后字母相同者表示经 DM RT 法检测差异不显著 , 其中大写字母为 1%水平 , 小写字母为 5%水平。
M ean values in each column wi th the s ame let ter are not signifi cant ly dif f erent at the = 0.05 level and = 0.01 level.
　　大戟狼毒石油醚提取物对朱砂叶螨的活性最高 , 24
小时死亡率和校正死亡率分别为 56.78%和 53.73%。氯
仿和甲醇提取物对朱砂叶螨成螨的生物活性相对较低 , 死
亡率仅为 15.61%和 14.64%。石油醚提取物的死亡率与
氯仿和甲醇提取物的死亡率在 0.01 水平上差异显著。
2.2　最佳萃取物的确定
大戟狼毒石油醚粗提物依次用氯仿和甲醇两种溶剂萃
取 , 将各萃取物配制成实验所需浓度进行生物活性测定 ,
结果见表 2。
表 2　大戟狼毒萃取物对朱砂叶螨的生物活性
Table 2　The mor tality of Tetranychus cinnabarinus(Bo isduva l).contacting w ith the ex tracts of Euphorbia f isheriana
处理
T reatment
溶剂
Solvent
死亡率 (%)＊
Mortality
校正死亡率 (%)
Adjusted mortalit y
成螨触杀作用
Act ion to adu lt
石油醚萃取物 Ex tract s of pet roleum ether 68.15±0.032 7 Aa 64.80±0.036 1 Aa
氯仿萃取物 Ext ract s of chloroform 56.78±0.029 7 Aa 52.23±0.032 9 Aa
甲醇萃取物 Ext ract s of m ethano 20.64±0.011 1 Ab 18.37±0.111 4 Ab
　　石油醚萃取物杀螨效果最好 , 朱砂叶螨 24 h 死亡率
和校正死亡率分别达到 68.15%和 64.80%。而氯仿和甲
醇萃取物敏感性差 , 死亡率为 56.78%和 35.56%。 三种
粗提物的显著性差异不明显。
39527 (4) 顾雅静等:大戟狼毒提取物对朱砂叶螨生物活性的初步研究
表 3　大戟狼毒石油醚萃取物对朱砂叶螨的生物活性
Table 3　The mo rtality o f T.Tetranychus cinnabarinus contac ting with the extr acts o f Euphorbia f isheriana
处理
T reatment
溶剂
S olvent
毒力方程 Y=＊
Regressive equation
LC50 ＊＊ 相关系数 r 95%置信限
成螨触杀作用
Act ion to adu lt
石油醚萃取物 5.294 4+1.198 8x 0.568 1 0.980 4 0.420 8-0.884 0
氯仿萃取物 5.539 4+3.143 6x 0.673 6 0.883 9 0.533 4-0.979 5
注:＊每种试剂为 5个浓度 , 3次重复;＊＊ LC50单位为 1 mg 提取物/mL , 每个处理重复 3次, 对照为 1%吐温 80溶液。
Note:Each solven ts has 5 concent rat ions , every t reatment has replicated th ree tim es;The unit of LC50 w as 1mg ext raction m aterial per
mL , every t reatment has replicated three tim es , and CK w as 1% tween 80 solu tion.
　　为了进一步了解三种萃取物的杀螨活性 , 将大戟狼毒
石油醚 、 氯仿和甲醇萃取物分别稀释成 5 个不同的浓度
(1 , 0.5 , 0.25 , 0.125 , 0.062 5 g/ L)对朱砂叶螨进行生
测 , 分别求出毒力回归方程及致死中量 (LC50)。从表 3
可以看出 , 大戟狼毒石油醚萃取物生物活性最好 , LC50为
0.568 1 g/ L , 其次为氯仿萃取物 , LC50为 0.673 6 g/ L。
3　讨论
大戟狼毒在医药方面研究比较多 , 临床用于治疗肿
瘤 、 结核病和皮肤病等[ 6] 。并且大戟狼毒在 《神农本草
经》 中记载有杀虫功能[7] , 徐德昌等人也做过杀虫实
验[ 8] , 但对于杀螨方面未见报道。因此 , 本文对它的杀螨
活性进行了研究。结果发现 , 用大戟狼毒石油醚提取物和
萃取物对成螨处理后 , 整个身体肿胀 , 体表光滑。这可能
是影响了螨的呼吸系统 , 需进一步研究其作用方式和生化
机理。
对于大戟狼毒化学成分的研究 , 国外报道其中含有甾
醇 、 氨基酸[ 9 ,10] , 近年国内又发现了一些成分 , 辽宁中医
学院刘桂芳等从大戟狼毒中分离出 8 种化合物[ 11] ;黑龙
江大学邢有权等又从中分离出邻苯二甲酸二酯[ 12] 。 张彦
龙等人首次从大戟狼毒中分离出极微量化学成分 3 , 7 ,
11-十三烯酸-4 , 8 , 12-三甲基甲酯[13] 。马晴高等人
对大戟狼毒羽扇豆醇乙酯和没食子酸进行分离鉴定[ 14] 。
其中大戟狼毒内的狼毒素 , 狼毒碱等具有杀虫活性。到目
前为止 , 大戟狼毒的杀螨活性成分分离还处于初级阶段 ,
药剂对朱砂叶螨作用的活性物质是否是以上分离出的化合
物或狼毒素 , 还需进一步的分离纯化和结构鉴定。
大戟狼毒是多年生草本植物 , 长于甘草原 、 向阳山
坡 , 主产东北 、 华北。此植物有广大的生长面积 , 资源充
足 , 而且开发不会破坏环境 。因此 , 在植物性杀螨剂的研
究开发方面有巨大的潜力。
参　考　文　献
[ 1] 唐除痴 , 李煜昶 , 陈彬 , 等.农药化学 [ M] .天津:南开大学出版社 , 1998:225.
[ 2] 江建云.植物性农药研究进展 [ J] .湖南农业科学 , 1991 , 6 (2):43-46.
[ 3] 罗万春.植物源生物碱的杀虫作用 [ J] .农药 , 1997 , 36 (7):11-15.
[ 4] 徐德昌 , 骆成高 , 张中男 , 等.大戟狼毒化学成分的定性分析 [ J] .中国林副特产 , 2005 (3):7-9.
[ 5] FAO Plan t production and p rotection 21 , recommended methods for measu rement of resis tance to pes ticides [ S] FAO , 1980:49-54.
[ 6] 刘文粢 , 何风雷 , 阮子镛 , 等.狼毒大戟的化学成分研究 [ J] .中国中药杂志 , 2001 , 26 (3):180-182.
[ 7] 江苏新医学院.中药大词典 (下册)[ M] .上海科学技术出版社 , 1986:1898-1900.
[ 8] 徐德昌 , 骆成高 , 陈凤芝.大戟狼毒杀虫剂药效试验 [ J] .中国甜菜糖业 , 2004 (2):5-7.
[ 9] 熊莹.东北大戟化学成分的研究 [ M] .中草药 , 1990 (2):6-10.
[ 10] 邢有权.大戟狼毒中黄酮类成分的提取与分离 [ J] .黑龙江大学自然科学学报 , 1990 (2):15-17.
[ 11] 中国科学院上海药物研究所.中草药成分提取与分离 [ M ] .北京:中国医药科技出版社 , 1999 (2):443-448.
[ 12] 阚毓铭.中草药化学实验操作技术 [ M] .北京:中国医药科技出版社 , 1988:8-36.
[ 13] 张彦龙 , 黄宇红 , 杜文双.大戟狼毒中 3 , 7 , 11-十三烯酸-4 , 8 , 12-三甲基甲酯的提取 [ J] .哈尔滨商业大学学报 , 2002 ,
18 (4):462-463.
[ 14] 刘文粢 , 马晴高 , 顾熊飞 , 等.狼毒大戟三萜类和酸类化合物的分离鉴定 [ J] .天然产物研究与开发 , 2003 , 15 (5):396-397.
396 山 西 农 业 大 学 学 报 (自然科学版) 2007