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大戟狼毒提取物对朱砂叶螨生物活性的研究



全 文 :《天津农林科技》2011年 4月第 2期(总第 220期)
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文章编号:1002-0659(2011)02-0001-03
大戟狼毒提取物对朱砂叶螨生物活性的研究
摘要:采用玻片浸渍法和叶片残毒法,选用大戟狼毒 3 种不同溶剂氯仿、甲醇和石油醚的提取物对朱
砂叶螨的不同虫态进行生物活性测定。 结果表明,大戟狼毒石油醚提取物对朱砂叶螨各虫态有很强的
生物活性,而其它两种溶剂的提取物效果不明显,24 h成螨死亡率仅为 15.61%和 14.64%。石油醚提取
物 1 mg/ml对朱砂叶螨成螨 24 h死亡率和校正死亡率分别为 56.78%和 53.73%,LC50达到了 1.244 2 mg/
ml,而石油醚萃取物的 LC50为 0.673 6 mg/ml。 石油醚提取物的杀卵效果最好,明显高于石油醚提取物
和萃取物的杀成螨作用,LC50达到了 0.170 9 mg/ml。
关键词:大戟狼毒;朱砂叶螨;生物活性
中图分类号:S433.7;S43 文献标识码:A
顾雅静 1,高宝岩 2,周广录 1,许厚博 3,云泽顺 3
(1.宝坻区王卜庄镇政府,天津 宝坻 301805;2.天津市农业环境与资源研究所,天津 300192;
3.宝坻区农业局,天津 宝坻 301800)
收稿日期:2010-12-24
主要作者简介:顾雅静(1982-),女,农艺师,主要从事农业技术推广工作。
近 30 年来,由于大量重复使用非专一性化学
杀螨剂,加之螨类世代周期短,年发生代数多,许
多螨类已迅速产生抗药性,对作物造成的损失有
增无减。 因此,使用选择性新型杀螨剂成为防治
植食性螨类的主要措施。 而植物源杀虫剂具有对
害虫作用谱广,对天敌干扰少,无明显脊椎动物
毒性和环境中降解迅速、资源丰富、可再生等优
点。 在对川楝素等多种植物源杀虫物质的研究中
发现, 它们对害虫的作用不同于常规化学农药,
其作用靶标和作用机理较为特殊,全方位进行作
用,既抑制神经电位的正常传达,又干扰体内激
素平衡,抑制解毒酶系,特别是对消化系统作用
明显,对肌肉系统也有毒害作用。 植物源杀虫剂
以其独特的作用方式使害虫不易产生抗药性。 并
且杀螨活性物质广泛存在于自然界的多种植物
中,完全可以利用植物次生物质所表现出来的综
合优势, 来弥补目前现有杀螨剂存在的众多缺
陷。 因此,从植物源天然产物出发来寻找结构物
质,成为新型杀螨剂研发的热点之一。 使用植物
提取物的粗制品直接防治螨类,或者明确其活性
物质结构,化学模拟合成,对于杀螨剂的研究开
发和植物的综合利用具有重要的意义。
大 戟 狼 毒 Euphorbia fisherianasteud var.
komarovina(prokh) Chu 是大戟科(Ruphorbiaceae)
大戟属的一种有毒植物。 其杀虫活性成分对植物
害虫有拒食、 抑制作用, 制成的杀虫剂对人毒性
低,易于自然分解,施用后无残留,是一种理想的
植物杀虫剂,此种资源丰富且采集时不会破坏环
境。 为此,用大戟狼毒石油醚提取物和萃取物对
朱砂叶螨卵和成螨的生物活性进行了测定。
1 材料与方法
1.1 试验材料
供试植物大戟狼毒,将其洗净后在室内阴干
(约 25 ℃),放入恒温箱内(40~45 ℃)鼓风机吹干
至材料发脆。 然后磨碎过 60目筛,以供备用。
供 试 朱 砂 叶 螨 (Tetranychus cinnabarinus
Boisduval)为室内饲养的敏感品系:养虫室的温
度(25±1)℃,相对湿度(50±10)%,光照 (L ∶D 为
18∶6 h)。
化学药品:吐温 80(聚山梨酯),广东汕头市
西陇工厂生产;石油醚、三氯甲烷和甲醇等均为
分析纯,北京北化精细化学品有限公司生产。
试验仪器:微型植物试样粉碎机,黄骅市中
兴仪器有限公司制造;RE52-98 旋转蒸发仪,上
海亚荣生化仪器厂制造;SHB-ⅢA循环式多用真
试验研究
1
DOI:10.16013/j.cnki.1002-0659.2011.02.007
处 理
成螨触杀作用
表 1 大戟狼毒提取物对朱砂叶螨成螨的生物活性
溶 剂
石油醚提取物
氯仿提取物
甲醇提取物
死亡率 *
0.567 8±0.029 7
0.156 1±0.006 7
0.146 4±0.009 9
校正死亡率
0.537 3±0.032 5
0.077 0±0.007 3
0.066 4±0.010 8
注: * 每种试剂测试浓度均为 50 mg 干物质/ml,3 次重复,对照为 1%吐温 80 溶液
处 理
成螨触杀作用 ***
杀卵作用 ***
成螨触杀作用 ****
表 2 大戟狼毒石油醚提取物对朱砂叶螨的生物活性
注: * 每种试剂为 5 个浓度,3 次重复;** LC50单位为 mg 提取物/ml,每个处理重复 3 次,对照为 1%吐温 80 溶液;*** 大戟狼毒石
油醚提取物 **** 大戟狼毒石油醚萃取物
毒力方程 Y=*
4.870 0+1.369 7x
5.944 1+1.230 5x
5.539 4+3.143 6x
LC50**
1.244 2
0.170 9
0.673 6
相关系数 r
0.936 4
0.961 4
0.883 9
95%置信限
0.794 1~2.819 1
0.138 2~0.205 0
0.533 4~0.979 5
空泵,郑州长城科工贸有限公司;OLYMPUS S251
双目立体显微镜。
1.2 试验方法
1.2.1 冷浸提取法
准确称取 3 份植物干粉,每份 50 g,分别装
入 500 ml三角瓶内,加入干粉 5倍量的有机溶剂
石油醚,室温下(30±2)℃分别浸提 3 次,每次 3~5
d,过滤,合并 3次的提取物,称重。
1.2.2 萃取分离
称取大戟狼毒石油醚提取物 5 g,用 10 倍量
的石油醚溶解,装入分液漏斗中,采用液—液分
配法萃取。依次用氯仿、甲醇两种溶剂以 1∶1为配
比各萃取 3 次,分别合并萃取液,将这些萃取液
减压浓缩至稠膏状,称重。
1.2.3 成螨触杀测定
玻片浸渍法:用双面胶带将健康活泼、大小
一致的雌成螨背部向下粘于载玻片的一端,在温
度为 (25±1)℃,RH85%左右的生化培养箱中放置
4 h 后,镜检剔除死亡或受伤个体,保证每玻片叶
螨数为 30 头,在药液中浸 5 s 取出,用吸水纸吸
掉多余的药液,处理后置于生化培养箱中,于 24 h
后观察其死亡情况,接触动者为活,不动者为死,
按 abbott公式计算校正死亡率。
1.2.4 卵毒力测定
参考 FAO 推荐的叶片残毒法 (Leaf-residue
method)并加以改进,采集新鲜的苹果叶片,叶柄
截去 0.5 cm,并在叶柄上包上湿棉球,放在水培
养台上,每片叶片接雌成螨 20 头,置于(25±1)℃
下任其产卵 24 h,去除雌成螨,检查记录卵粒数
后,置于 25℃恒温培养箱中,当卵龄达到 36~48 h
进行测定, 将带卵的叶片浸入各处理药液5 s,然
后放在吸水纸上阴干,放回水培养台上,待对照
组卵孵化并发育至若螨阶段, 检查统计各处理
死亡率。
1.3 统计分析方法
将所得数据用 Finney 机率分析法求出毒力
回归式,并对该方程式进行卡方适合性检验。 当
回归式符合实际情况后,求出 LC50,以及 LC50 的
95%置信限。
2 结果与分析
2.1 最佳提取物的确定
由表 1 结果显示,大戟狼毒石油醚提取物对
朱砂叶螨成螨的活性最高,24 h 后死亡率和校正
死亡率分别为 56.78%和 53.73%。 氯仿和甲醇提
取物对朱砂叶螨成螨的生物活性相对较低,死亡
率仅达到 15.61%和 14.64%。
2.2 最佳萃取物的确定
将大戟狼毒石油醚提取物和萃取物分别稀
释成 5 个不同的浓度 (1,0.5,0.25,0.125,0.062 5
mg/ml),对朱砂叶螨进行生测,分别求出毒力回归
方程及致死中量(LC50)。 从表 2 结果我们可以看
出, 大戟狼毒石油醚提取物对卵的生物活性较
好,LC50达到 0.170 9 mg/ml, 而成螨对大戟狼毒
石油醚萃取物较敏感,LC50为 0.673 6 mg/ml。
3 讨论
目前,大戟狼毒在医药方面研究比较多。 狼
毒大戟为大戟科狼毒大戟的干燥根, 为中药狼毒
顾雅静等:大戟狼毒提取物对朱砂叶螨生物活性的研究2
《天津农林科技》2011年 4月第 2期(总第 220期)
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的来源之一,临床用于治疗肿瘤、结核病和皮肤病
等。 并且大戟狼毒在《神农本草经》中记载有杀虫
功能。因此,本文对它的杀螨活性进行了研究。结
果发现,用大戟狼毒石油醚提取物和萃取物对成
螨处理后,整个身体肿胀,体表光滑;卵壳被破
坏,呈胶状。 而且不同虫态对药剂的敏感程度不
同,这可能与螨不同虫态身体内分泌或诱导不同
的物质有关,需进一步研究螨不同虫态的生物学
特性以及药剂对它的作用方式和生化机理。
狼毒大戟内含乙酰基苯丙氨醇、皂甙、强心
甙等生物碱、酚类、甾醇、树脂硬性橡胶等物质,
具有很强的杀虫灭鼠功效。 其中狼毒大戟内的狼
毒素、狼毒碱等具有杀虫活性。 徐德昌等人用大
戟狼毒根乙醇提取物, 制成 0.3%大戟狼毒水剂。
用 0.3%大戟狼毒水剂原液和 100 倍液对甘蓝夜
盗 (Barathrabrassicae L.)进行室内杀虫试验 ,杀虫
率分别为 100% 、80% 。 用 0.3%大戟狼毒水剂
500~650 倍液防治蔬菜桃蚜 (Myruspersicae S.),效
果为 90%~97%。 利用大戟狼毒浸提残渣对蛴螬
[东 北 大 黑 鳃 金 龟 幼 虫 (Holotrichiadiomphalia
Bates)]进行室内喂养杀虫试验 ,杀虫率为 100%。
到目前为止,大戟狼毒的化学成分分离还处于研
究阶段,药剂对朱砂叶螨活性物质是否与以上昆
虫的相同,还需进一步的分离纯化和结构鉴定。
大戟狼毒是多年生草本植物,生长在向阳山
坡,主产地为东北、华北。 此植物有广大的生长面
积,资源充足,而且开发不会破坏环境。 因此,在
植物性杀螨剂的研究开发方面有巨大的潜力。
参考文献
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大蒜返青后的水肥管理, 是大蒜丰产的关
键。 天气转暖,大蒜返青以后水肥吸收量逐渐增
大,特别是在孕薹期和蒜头膨大期,是大蒜的需
水肥高峰期,所以在大蒜的整个生育期要根据土
壤墒情及地力苗情,及时浇水追肥,特别要重点
浇好“二水”、施好“三肥”。
浇好返青水 施好返青肥 到春分时节,蒜
苗开始返青发棵,由于早春地温低,最好在中午
浇好返青水,达到促苗早发的目的。 结合浇水每
667 m2冲施氮磷钾复合肥 15~25 kg;或追施硫酸
钾 15 kg,之后适当控水,促进根系发育和蒜薹、
蒜头分化。
浇足催薹水 重施催薹肥 3 月底~4 月初是
花芽、鳞芽迅速分化时期,并逐步进入蒜薹、蒜头
生长并进期,叶面积达到最大值,蒜薹迅速生长,
此期的肥水管理直接影响到蒜薹、 蒜头的产量,
因而需水较多,必须及时浇水以满足其生长的需
要。 因此,结合浇水每 667 m2冲施复合肥 25 kg,
15 d 后每 667 m2 再冲施氮磷钾复合肥 25 kg 或
尿素、 硝酸钾复合肥各 15 kg。 一般 7~10 d 浇一
水,大蒜抽薹期,每 5~7 d 浇一次,每两水冲施一
次速效氮肥,并结合喷施叶面肥补喷些硫,大蒜
对硫的需求量也比较多。
浇足膨大水 巧施膨大肥 采薹后是蒜头膨
大盛期,采薹时保护好叶片和根系。 这时以蒜头
膨大增重为主,采薹后要及时浇水,要防止大蒜
叶片早衰,延长叶片绿色时间,并促进养分向鳞
茎转移,以增加物质积累为主。 因此,此次追肥以
速效氮肥为主、磷钾肥为辅,每 667 m2 冲施尿素
或硫酸钾复合肥 15~20 kg。保持土壤湿润,以满足
大蒜后期对水的需要,收前一周左右停止浇水。
(274600 山东省鄄城县农业局 贾友江)
春季大蒜返青后水肥管理要点
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