全 文 ：钉螺肝脏的作用机制提供了重要线索 ,也为来源于
血水草的生物碱作为植物杀螺剂提供科学依据。
参考文献 :
[ 1 ] 　周天达 , 周雪仙1 血水草中一个抗菌成分的化学结构研究
[J ]1 中草药 , 1981 , 12 (1) : 1231
[ 2 ] 　黄琼瑶 , 彭　飞 , 刘年猛 , 等1 血水草生物碱杀灭钉螺及日
本血吸虫尾蚴的实验研究 [J ]1 实用预防医学 , 2003 , 10
(3) : 28922911
[ 3 ] 　黄琼瑶 , 彭　飞 , 刘年猛 , 等1 血水草生物碱杀灭钉螺的研
究 [J ]1 中国血吸虫病防治杂志 , 2004 , 16 (1) : 552571
[ 4 ] 　彭　飞 , 黄琼瑶 , 刘年猛 , 等1 血水草生物碱对钉螺肝脏超
微结构的影响 [J ]1 实用预防医学 , 2007 , 14 ( 6 ) : 16752
16771
[ 5 ] 　刘年猛 , 黄琼瑶 , 彭　飞 , 等1 血水草生物碱对钉螺肝脏酶
活性的影响 [J ]1 中药材 , 2005 , 28 (1) : 422441
[ 6 ] 　杨华中 , 黄琼瑶 , 刘年猛 , 等 1 血水草杀螺成分———生物碱
的提取 [J ]1 中国血吸虫病防治杂志 , 2003 , 15 ( 6) : 4502
4511
[ 7 ] 　Singh K , Singh A , Singh D K1 Molluscidal activity of Neem
( A z adi rachta indica A. J uss ) [J ]1 J Ethnopharmacol ,
1996 , 52 (1) : 352401
[ 8 ] 　罗　钒 , 李桂玲1 不同产地黄果茄灭螺效果及增效研究 [J ]1
中草药 , 2004 , 35 (增刊) : 15521571
[ 9 ] 　吴向阳 , 仰榴青 , 张联恒 , 等1 灭螺药物的研究进展 [J ]1 中
国血吸虫病防治杂志 , 2006 , 18 (6) : 47424761
[ 10 ] 　杨华中 , 黄琼瑶 , 彭　飞 , 等1 血水草生物碱对鱼类毒性实
验的观察 [J ]1 中国血吸虫病防治杂志 , 2003 , 15 (4) : 2762
2781
[ 11 ] 　Ang H L , Duester G. Stimulation of premature retinoic acid
synt hesis in Xenopus embryos following premature expression
of aldehyde dehydrogenase ALD H1 [J ]1 Eur J B iochem ,
1999 , 260 (1) : 22722341
[ 12 ] 　张延平 , 杜晨宇 , 黄志华 , 等1 醛脱氢酶基因敲除对克氏肺
炎杆菌合成 1 , 3 丙二醇的影响 [J ]1 化工学报 , 2006 , 57
(11) : 2686226921
[ 13 ] 　熊安秀 , 金润铭1 锚蛋白的研究进展 [J ]1 国外医学 :儿科学
分册 , 2003 , 30 (3) : 15921611
[ 14 ] 　Tschopp J , Martinon F , Hof mann K1 Apoptosis : Silencing
t he deat h receptors [J ]1 Curr B iol , 1999 , 9 ( 10) : R3812
R3841
[ 15 ] 　Yang E S , Lee J H , Park J W1 Et hanol induces peroxyni2
t rite2mediated toxicity t hrough inactivation of NADPt2de2
pendent isocit rate dehydrogenase and superoxide dismutase
[J ]1 B iochimie , 2008 , 90 : 1316213241
[ 16 ] 　Yang E S , Park J W1 Antioxidant enzyme inhibitors enhance
nit ric oxide2induced cell deat h in U937 cells [J ]1 B iochimie ,
2006 , 88 (7) : 86928781
[ 17 ] 　Mónica Martínez2Fernández M , Rodríguez2PiÌeiro A M , Ol2
iveira E , et al . Proteomic comparison between two marine
snail ecotypes reveals details about t he biochemist ry of adap2
tation [J ]1 Proteome Res , 2008 , 7 (11) : 4926249341
[ 18 ] 　Bouchut A , Sautiere P E , Coustau C , et al . Compatibility in
t he B iom phalaria glabrata/ Echinostoma cap roni model : Po2
tential involvement of proteins f rom hemocytes revealed by a
proteomic approach [J ]1 A cta T rop , 2006 , 98 (3) : 23422461
[ 19 ] 　Jannotti2Passos L K , Andrade H M , Caldeira R L , et al .
Proteome analysis of t he cardiac and pericardial tissue of B i2
om phalaria tenagophila populations susceptible and resistant
to Schistosoma mansoni infection [J ]1 A cta T rop , 2008 , 105
(3) : 22922341
半边旗活性物质 5F 对非小细胞肺癌 NCI2H460 细胞 IκKβ、IκB、p65
及 p50 mRNA 表达的影响
刘 　义1 ,CH EN George G2 ,吕应年1 , HSIN Michael K Y2 ,UND ERWOOD Malcolm J 2 ,梁念慈1 ,3
①
(11 广东医学院 广东天然药物研究与开发重点实验室 ,广东 湛江 　524023 ; 21 韦尔斯亲王医院 香港中文
大学外科系 ,香港 新界 沙田 ;31 广东医学院生物化学与分子生物学研究所 ,广东 湛江 　524023)
摘　要 :目的 　从 N F2κB 信号通路着手探讨半边旗活性物质 5F 诱导非小细胞肺癌 NCI2H460 细胞凋亡发生的机
制。方法 　M TT 法检测 5F 对 NCI2H460 细胞的生长抑制作用 ;用半定量 RT2PCR 方法检测 NCI2H460 细胞
IκKβ、IκB、p65 及 p50 mRNA 表达水平的变化。结果 　5F 抑制 NCI2H460 细胞的生长 ,其效果与 5F 的质量浓度
和作用时间相关 ,24、48、72 h 的 IC50分别为 :21. 40、4152、1102μg/ mL ;100μg/ mL 5F 作用 NCI2H460 细胞 6 h 后
能引起 IκKβ和 IκB mRNA 表达水平显著降低 ( P < 0105) ;p65 和 p50 mRNA 水平在作用 3 h 就发生明显减少
( P < 0105) 。结论 　5F 诱导 NCI2H460 细胞凋亡的机制可能是通过抑制核因子2κB (N F2κB) 信号通路来实现的。
关键词 :半边旗 ; 5F ; NCI2H460 细胞 ; 核因子2κB (NF2κB)
中图分类号 :R286191 　　　文献标识码 :A 　　　文章编号 :025322670 (2010) 0320435205
·534·中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 41 卷第 3 期 2010 年 3 月
①收稿日期 :2009206219　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
基金项目 :国家自然科学基金资助项目 (39870900) ; 粤港合作课题 ( GHP/ 022/ 06) ; 湛江市科技计划项目资助 (2008C01006)
作者简介 :刘　义 (1978 —) ,男 ,贵州人 ,硕士 ,助理研究员 ,主要从事抗肿瘤及抗骨质疏松药物的研究。
Tel : (0759) 2388405 　E2mail : plliu78 @sina. com
Effects of 5F on IκKβ, IκB, p65 , and p50 mRNA expression
of non2small lung cancer NCI2H460 cells
L IU Yi1 , CH EN George G2 , L Β Ying2nian1 , HSIN Michael K Y2 ,
UNDERWOOD Malcolm J 2 , L IAN G Nian2ci1 ,3
(11 Guangdong Key Laboratory for Research and Development of Nature Drugs , Guangdong Medical College ,
Zhanjiang 524023 , China ; 2. Department of Surgery , The Chinese University of Hong Kong , Prince
of Wales Hospital , Hong Kong , China ; 3. Institute of Biochemist ry and Molecular Biology ,
Guangdong Medical College , Zhanjiang 524023 , China)
Abstract : Objective 　To investigate t he inhibitory mechanism of 5F isolated f rom Pteris semi pi nnat a
on t he proliferation and apoptosis induction of NCI2H460 cells. The roles of N F2κB pat hway in t he apopto2
sis were explored in t his study. Methods 　NCI2H460 Cell growt h inhibition mediated by 5F was detected
by M T T assay. R T2PCR was Applied to examing t he mRNA levels of IκKβ, IκB , p65 , and p50. Results
5F Showed t he growt h inhibitory activity against NCI2H460 cells wit h IC50 values of 21. 40 , 4. 52 , and 1.
02μg/ mL for 24 , 48 , and 72 h , respectively. The mRNA expression levels of IκKβand IκB were signifi2
cantly decreased af ter 5F t reated cells for 6 h ( P < 0105) ; The mRNA expression levels of p65 and p50
were significantly decreased af ter 5F t reated cells for 3 h ( P < 0105) . Conclusion 　The mechanism for 5F
induction of NCI2H460 cells apopto sis could be mediated by the inhibition of N F2κB pat hway.
Key words : Pteris semi pi nnat a L . ; 5F ; NCI2H460 cells ; N F2κB
　　11α2羟基2152氧2162烯2对映贝壳杉烷2192酸
( ent211α2hydroxy2152oxo2kaur2162en2192oic acid ,
5F) 是从生长在我国南方的传统中草药半边旗
Pteris semi pi nnat a L . 中分离得到的一种具有抗肿
瘤活性的化合物[1 ,2 ] ,其为二萜类化合物。前期的
研究证实 5F 在体外能抑制非小细胞肺癌 NCI2
H460 生长且诱导其凋亡[ 3 ] 。5F 在体外可诱导人
的多种癌细胞凋亡 ,包括结肠癌、胃癌、肝癌、肺癌、
鼻咽癌、卵巢癌、早幼粒白血病及甲状腺癌细胞[4 ] ,
并显示其机制是通过线粒体途径诱导的凋亡[5～8 ] 。
许多文献表明 ,线粒体介导的凋亡与核因子2κB
(N F2κB) 活性密切相关[9～11 ] 。通过对已临床应用
的抗癌药的研究 ,目前认为 N F2κB 抑制剂是治疗肿
瘤的药物之一[12 ,13 ] 。因此本研究拟从 N F2κB 信号
通道着手 ,探讨 5F 引发非小细胞肺癌 NCI2H460
凋亡的机制 ,为其临床应用提供理论依据。
1 　材料与方法
111 　材料 :5F 由本课题组从植物半边旗中提取 ,质
量分数为 100 % ,使用前溶于 DMSO。M T T 为
Sigma 公司产品 ;超级无支原体新生牛血清购自杭
州四季青生物材料有限公司 ; RPMI 1640 购自美国
Hyclone 公司 ;胰酶购自美国 Gibco 公司 ; SYBR
Premix Ex Taq 为 Ta Ka Ta 公司产品 ; SuperScrip t
TM ⅢR T、Trizol 为 Invit rogen 公司产品 ;阿霉素
(ADM) 为浙江海正药业有限公司产品 (批号
080102) ,其余试剂均为国产分析纯。非小细胞肺癌
NCI2H460 细胞由本室传代。
112 　方法
11211 　细胞培养 : NCI2H460 细胞培养于含 10 %
小牛血清、100 kU/ L 青霉素和 100 mg/ L 链霉素的
RPMI 1640 培养液中 ,37 ℃、5 % CO2饱和湿度细胞
培养箱培养。取对数生长期细胞用于实验。
11212 　M T T 法检测 5F 对 NCI2H460 细胞的生长
抑制作用 : 取对数生长期的 NCI2H460 细胞 ,用
0125 % 胰蛋白酶消化 ,RPMI 1640 完全培养液调成
210 ×104 / mL 细胞悬液 ,接种于 96 孔板中 ,每孔接
种 100μL (含 210 ×103 个细胞) 。培养过夜后 ,吸
出培养液 ,加入新培养液 90μL 及不同质量浓度的
5F 药液 10μL ,使终质量浓度分别为 5、10、20、40、
80μg/ mL 。同时设置空白及 ADM 阳性对照组 ,对
照组加入相同体积的培养液 ,每一质量浓度设 8 个
平行孔。继续培养 24、48、72 h。每孔加入 M T T
(5 g/ L) 20μL ,继续培养 4～6 h。每孔加入 DMSO
100μL 。在微型振荡器上摇匀 15 min ,结晶溶解
后 ,立即比色 ,用 EL X800 型酶标仪在主波长为 570
nm、参比波长为 630 nm 处测量吸光度 ( A ) 值 ,以
空白孔调零。计算抑制率 ,Bliss 方法计算半数抑制
浓度 ( IC50 ) 。实验重复 3 次。
抑制率 = (1 - 实验组 A 值/ 对照组 A 值) ×100 %
11213 　细胞 RNA 的提取 :取对数生长期的 NCI2
H460 细胞 , RPMI 1640 完全培养液调制成 510 ×
105 / mL 细胞悬液 ,接种于培养瓶中。培养过夜后 ,
吸出培养液 ,加入新培养液及 5F 药液 ,使 5F 终质
量浓度为 100μg/ mL 。药物作用细胞 0、3、6、12、24
·634· 中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 41 卷第 3 期 2010 年 3 月
h 后倒掉培养液 ,用 PBS 清洗 2 次 ,加入 1 mL Tr2
izol ,充分震荡混匀。室温放置 10 min 后 ,加入 200
μL 氯仿 ,剧烈振荡 1 min ,静置 2～5 min ,12 000 ×
g 冷冻离心 15 min。吸出最上层 RNA 样品到 600
μL 冷冻异丙醇中 ,20 ℃放置 10 min ,12 000 ×g 冷
冻离心 10 min ,去上清。加入 500μL 冷冻的 75 %
乙醇 ,吹散沉淀后于 12 000 ×g 冷冻离心 5 min ,去
上清 , 风 干 沉 淀 , 加 入 DEPC 水 30 μL 。用
A 260 / A 280 检测 RNA 浓度。
11214 　cDNA 的合成 :反应体系总体积 25μL 。取
Oligo2d T 1μL ,每一 RNA 样品取 1μg ,Rnase 抑制
剂 1μL ,dN TP 终浓度 1 mmol/ L ,5 ×R T 反应缓冲
液 5 μL , M —MLV R Tase 终浓度为 1 U/μL ,加
DEPC 水至 215μL 。50 ℃、60 min ,70 ℃、15 min ,
进行逆转录。
11215 　SYBR Green Ⅰ定量 PCR 实验 :反应体系
中加入 2 ×SYBR Premix Ex Taq TM 10μL , PCR
正向引物 014μL ,PCR 反向引物 014μL ,cDNA 10
μL ,dd H2 O 8. 2μL ,反应条件见表 1。
表 1 　PCR 反应条件
Table 1 　Reaction conditions of PCR
循环数 步骤 温度/ ℃ 时间/ s
1 预变性 95 300
变性 95 10
40 退火 57 20
延伸 72 15
11216 　引物设计与合成 :基因的引物合成使用引物
设计软件 primer3 ,上海 Invit rogen 公司合成。引
物序列见表 2。
11217 　统计分析 :采用 EXCEL 数据库录入数据。
SPSS 1115 统计软件进行统计分析。采用单因素方
差分析进行组间比较。
表 2 　引物序列
Table 2 　Sequence of primers
基 　因 引物序列 片段长度/ bp
IκKβ 5′2CGCTGGAACTGTT GCCC23′(正向引物) 146
5′2ACT GACA GGACCACGGACC23′(反向引物)
IκB 5′2ACGGGA GCCTA TCTCA GTG23′(正向引物) 174
5′2T TCCGTTCA TCA T GA GTCA GC23′(反向引物)
p65 5′2GTCCT TCCTCA TCCCA TCT T23′(正向引物) 139
5′2T GTCCTCTT TCT GCACCT TG23′(反向引物)
p50 5′2ACCGCTT GGGTAACTCT G23′(正向引物) 154
5′2CTA TT GCTCA TCA TGGCTA G23′(反向引物)
2 　结果
211 　5F 对 NCI2H460 细胞生长的抑制作用 :结果
见图 1。可以看出 ,5F 能明显抑制 NCI2H460 细胞
的生长 ,其效果与时间和质量浓度相关。5、10、20、
40、80μg/ mL 5F 在作用细胞 48 h 后效果与阳性对
照药 ADM 相近。5F 作用 NCI2H460 细胞 24、48、
72 h 的 IC50分别为 :21140、4152、1102μg/ mL 。
图 1 　5F 对 NCI2H460 细胞的生长抑制作用 ( x±s , n = 24)
Fig. 1 　Inhibition of 5F on NCI2H460 cell growth ( x±s , n = 24)
212 　5F 对 NCI2H460 细胞 IκKβ、IκB、p65 及 p50
mRNA 表达水平的影响 :100μg/ mL 5F 作用 NCI2
H460 细胞后能明显引起 IκKβ、IκB、p65 及 p50
mRNA 表达水平发生变化 ,结果见图 2、3。IκKβ和
IκB mRNA 表达水平在 5F 作用 6、12 h 后与对照
组相比显著降低 ( P < 0105) ,但在作用 3、24 h 时其
表达无显著差异 ; 5 F以p 65 mRNA的影响在作用
与对照组比较 : 3 P < 01053 P < 0105 vs cont rol group
图 2 　5F 对 NCI2H460 细胞 IκKβ ( A) 和 IκB ( B) mRNA 表达的影响 ( x ±s , n = 3)
Fig. 2 　Effects of 5F on mRNA expression of IκKβ ( A) and IκB ( B) in NCI2H460 cells ( x ±s , n = 3)
·734·中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 41 卷第 3 期 2010 年 3 月
与对照组比较 : 3 P < 01053 P < 0105 vs cont rol group
图 3 　5F 对 NCI2H460 细胞 p65 ( A) 和 p50 ( B) mRNA 表达的影响 ( x ±s , n = 3)
Fig. 3 　Effects of 5F on mRNA expression of p65 ( A) and p50 ( B) in NCI2H460 cells ( x ±s , n = 3)
3 h就发生明显改变 ,其表达随着作用时间的逐渐
延长而增加 ,但与对照组相比仍显著降低 ( P <
0105) ,当作用时间延长到 24 h 时 ,p65 的表达又降
低 ;p50 在 5F 作用 12 h 内表达呈下降趋势 ,且从 6
h 开始与对照组相比有显著差异 ( P < 0105) ,作用
24 h 其表达出现增加 ,但仍具有统计学意义。
3 　讨论
　　肺癌是全球范围内最常见和最致命的恶性肿瘤
之一。其中非小细胞肺癌 (NSCL C) 占肺癌患者总
数的 80 % ,手术是传统的根治手段之一 ,但多年来
手术本身疗效提高并不明显 ,近年来寻找有效的靶
向药物已经成为 NSCL C 研究的热点。
　　在前期研究中发现 ,从我国岭南民间中草药半
边旗中提取分离得到的二萜类化合物 5F 在体外能
显著抑制非小细胞肺癌 NCI2H460 细胞的生长 ,通
过形态学和 TUN EL 检测发现其抑制癌细胞生长
的原因是诱导了 NCI2H460 细胞发生凋亡[3 ] ,但对
其作用机制还未做进一步的研究。
5F 在体外可通过线粒体途径诱导人的多种癌
细胞凋亡[5～8 ] ,线粒体介导的凋亡与 N F2κB 活性密
切相关[9～11 ] ,且由于 N F2κB 在肺癌、肝细胞癌中持
续激活[14～16 ] ,因此 ,本研究从 N F2κB 信号传导通路
着手 ,探讨 5F 诱导 NCI2H460 细胞凋亡的机制。
N F2κB 是一种具有多种功能的转录因子 ,在哺
乳动物细胞中 N F2κB 家族由 RelA (p65) 、c2Rel、
RelB、N F2κB1 (p50 和其前体 p105) 和 N F2κB2
(p52 和其前体 p100) 组成。N F2κB 在多种肿瘤的
发生发展中发挥了重要作用 ,N F2κB 的组成性活性
存在于多种实体瘤中 ,如肝癌、非小细胞肺癌、卵巢
癌、胰腺癌等[17 ] 。有活性的 N F2κB 以二聚体形式
存在 ,以 p50/ p65 二聚体多见且研究最多。在非激
活条件下 ,N F2κB 与κB 抑制因子 ( IκB) 形成三聚
体 p50/ p65/ IκB 以无活性的形式存在于胞浆中。
IκB 家族包括 IκBα、IκBβ、IκBγ和 IκBσ,能抑制 N F2
κB 发生核易位发挥转录活性而滞留在胞浆中[18 ] 。
N F2κB 活化通常需要 IκB 解离。IκB 受 IκB 激酶
( IκK) 的调节 , IκK 由两个激酶亚基 IκKα、IκKβ和
一个调节亚基 IκKγ组成。目前研究表明 , N F2κB
主要通过 3 种途径活化 ,其中两种途径是 IκK 依赖
性的。较为经典的途径为通过转化生长因子β2激活
性激酶 1 活化 IκKα/ IκKβ/ IκKγ三聚体 ,使 IκB 磷
酸化和降解 ,p50/ p65 发生核易位 ,实现快速、强烈
的 N F2κB 信号通路激活。在这个过程中 IκKβ发挥
主要作用。
抗肿瘤药物诱导细胞凋亡呈现出一定的特点 :
药物作用启动细胞凋亡过程后 ,在一定的时间范围
内 ,细胞凋亡指数随药物作用时间的延长而增加 ,呈
现一定的时间效应关系 ;药物作用时间继续延长 ,细
胞凋亡指数会下降。因此本实验选择用高质量浓度
的 5F 短时间作用细胞来检测其基因表达的变化。
结果显示 ,100μg/ mL 5F 作用 NCI2H460 细胞后
能明显地引起 IκKβ、IκB、p65 及 p50 mRNA 表达水
平发生变化。结果说明 5F 作用细胞后抑制了 IκKβ
活化 ,而 IκKβ的抑制又导致 IκB 磷酸化和降解的
减少 ;5F 对 p65 mRNA 的影响在作用 3 h 就明显
降低 ,其表达随着作用时间的逐渐延长而增加 ,但与
对照相比仍显著减少 ( P < 0105) ;p50 在 5F 作用
12 h 内的表达呈下降趋势 ,且从 6 h 开始与对照组
相比有明显改变 ( P < 0105) ,作用 24 h 其表达出现
增加 ,但仍具有统计学意义。5F 作用 24 h 后出现
不同趋势的结果可能与细胞的不同生长时相有关。
由于 IκB 磷酸化和降解的减少使 p50/ p65/ IκB 仍
然以三聚体的状态存在于胞浆中而未发生核易位来
实现活化。大量的研究结果显示 ,抑制 N F2κB 活性
可以诱导多种肿瘤细胞凋亡或使细胞恢复凋亡[19 ] 。
在肿瘤的早期形成阶段 ,N F2κB 在抗凋亡方面发挥
·834· 中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 41 卷第 3 期 2010 年 3 月
了主要作用并参与肿瘤的形成和转移。应用化学致
癌剂对小鼠结肠诱导建立损伤和炎症模型 ,当除去
结肠上皮细胞中特异的 IκKβ后 ,由于 IκB 不能降
解而导致 N F2κB 活化受限 ,最终引起肿瘤发生率下
降。因此 ,半边旗提取物 5F 在体外引起非小细胞
肺癌细胞凋亡可能是与抑制 N F2κB 活性有关。
参考文献 :
[ 1 ] 　邓亦峰 , 梁念慈1 半边旗中二萜类化合物的超临界 CO2萃取
及 HPLC2MS 分析 [J ]1 中草药 , 2004 , 35 (2) : 14521481
[ 2 ] 　张　晓 , 崔　燎 , 田中信寿 , 等1 半边旗有效成分及抗肿瘤
活性研究 [J ]1 中国药学杂志 , 1997 , 32 (1) : 372381
[ 3 ] 　刘　义 , 吴科锋 , 李　立 , 等1 半边旗提取物 5F 对非小细胞
肺癌 NCI2H460 细胞生长的抑制作用 [J ]1 肿瘤防治研究 ,
2009 , 36 (1) : 92121
[ 4 ] 　李　立 , 吕应年 , 刘 　义 , 等 1 半边旗提取物 5F 诱导
Hep G2 细胞凋亡与 p53 活化及血管内皮生长因子抑制有关
[J ]1 中草药 , 2010 , 41 (2) : 24122451
[ 5 ] 　Li J H , He C W , Liang N C , et al . Effect s of antitumor
compounds isolated f rom Pteris semi pinnata L . on DNA to2
poisomerases and cell cycle of HL260 cells [J ]1 A cta Pharm2
col S in , 1999 , 20 : 54125451
[ 6 ] 　Chen G G , Liang N C , Lee J F , et al . Over2expression of
Bcl22 against Pteris semi pinnata L .2induced apoptosis of hu2
man colon cancer cells via a NF2kappa B2related pat hway [J ]1
A poptosis , 2004 , 9 : 61926271
[ 7 ] 　Liu Z , Ng E K , Liang N , et al . Cell deat h induced by Pteris
semi pinnata L . is associated wit h p53 and oxidant st ress in
gast ric cancer cells [J ]1 F EB S L ett , 2005 , 579 : 1477214871
[ 8 ] 　何太平 , 陈　杰 , 莫丽儿 , 等1 半边旗二萜类化合物 5F 对人
高转移卵巢癌细胞系 HO28910 PM NF2κB (p65) 、Smad3 蛋
白和 NF2κB (p65) 、ETS21 mRNA 表达的影响 [J ]1 中草药 ,
2005 , 36 (4) : 54525481
[ 9 ] 　Guseva N V , Taghiyev A F , Sturm M T , et al . Tumor nec2
rosis factor2related apoptosis2inducing ligand2mediated activa2
tion of mitochondria2associated nuclear factor2kappaB in pros2
tatic carcinoma cell lines [J ]1 Mole Cancer Res , 2004 , 2 :
57425841
[ 10 ] 　Yang J , Amiri K I , Burke J R , et al . BMS2345541 target s
inhibitor of kappaB kinase and induces apoptosis in melano2
ma : involvement of nuclear factor kappaB and mitochondria
pat hways [J ]1 Clin Cancer Res , 2006 , 12 : 95029601
[ 11 ] 　Kim J S , Lee J M , Chwae YJ , et al . Cisplatin2induced apop2
tosis in Hep3B cells : mitochondria2dependent and2indepen2
dent pat hways [J ]1 B iochem Pharm , 2004 , 67 : 1459214681
[ 12 ] 　Olivier S , Robe P , Bours V1 Can NF2kappaB be a target for
novel and efficient anti2cancer agent s ? [J ]1 B iochem Pharma2
col , 2006 , 72 : 1054210681
[ 13 ] 　Sharma V , Hupp C D , Tepe J J1 Enhancement of chemo2
t herapeutic efficacy by small molecule inhibition of NF2kap2
paB and checkpoint kinases [J ]1 Curr Med Chem , 2007 , 14 :
1061210741
[ 14 ] 　Kawakami S M , Ito M , Kawakami S1 Induced apogamous
sporophytes in Pteris dis par and P. semi pinnata , and t he
meiotic behavior in t heir sporocytes [J ]1 J Plant Res , 1996 ,
109 : 36923731
[ 15 ] 　Kim H J , Hawke N , Baldwin A S1 NF2kappaB and IκK as
t herapeutic target s in cancer [J ]1 Cell Death Di f f er , 2006 ,
13 : 73827471
[ 16 ] 　Karin M1 Nuclear factor2kappaB in cancer development and
progression [J ]1 N ature , 2006 , 441 : 43124361
[ 17 ] 　Radhakrishnan S K , Kamalakaran S. Pro2apoptotic role of
NF2kappaB : implications for cancer t herapy [J ]1 B iochim
B iophys A cta , 2006 , 1766 : 532621
[ 18 ] 　Chen L F , Greene W C1 Shaping t he nuclear action of NF2
kappaB [J ]1 N at Rev Mol Cel l B iol , 2004 , 17 (5) : 39224011
[ 19 ] 　Nakanishi C , Toi M1 Nuclear factor2kappaB inhibitors as
sensitizers to anticancer drugs [J ]1 N at Rev Canc , 2005 , 5 :
29723091
附子生物碱与甘草活性物质组合抗大鼠佐剂性关节炎的实验研究
杨洁红 ,张宇燕 ,万海同 3 ① ,朱振洪 ,李金辉
(浙江中医药大学 , 浙江 杭州 　310053)
摘 　要 :目的 　观察附子生物碱与甘草活性物质 (三萜皂苷和黄酮等) 组合对大鼠佐剂性关节炎 (AA) 模型的抗
炎效应 ,研究两者配伍的抗炎作用机制 ,探讨两者配伍的意义。方法 　设对照组、模型组、附子组 (即附子生物碱
组) 、附子甘草配伍组 (即附子生物碱与甘草活性物质配伍组) 、雷公藤组 ,观察各组大鼠足肿胀程度和关节炎指数
(A I) 变化 ;检测大鼠血清和关节浸液内细胞因子如白细胞介素21β ( IL21β) 、肿瘤坏死因子2α ( TN F2α) 及前列腺素
E2 ( P GE2 ) 水平 ;用 RT2PCR 检测踝关节组织 IL21β基因表达 ;观察踝关节组织病理改变。结果 　与对照组比较 ,
AA 模型组大鼠关节肿胀严重 ,AI 明显升高 ,血清和关节浸液内 IL2β、TN F2α、P GE2水平显著升高 ,踝关节组织 IL2
1 基因表达明显增加 ,并发生明显病理改变 ;与模型组相比 ,附子组、附子甘草配伍组大鼠关节肿胀得到改善 ,AI 降
低 ,血清和关节浸液内 IL21β、TN F2α、P GE2水平降低 ,踝关节组织 IL21β基因表达减弱 ,病理组织改善 ,且附子甘草
配伍组优于附子组。结论 　附子生物碱与甘草活性物质配伍组合能有效抗炎 ,缓解 AA 症状 ,改善 AA 大鼠免疫
功能和组织结构 ,两者配伍作用优于单用附子生物碱 ,体现了附子生物碱、甘草活性物质是附子甘草两者配伍抗炎
效应的重要物质基础。
关键词 :附子生物碱 ; 甘草活性物质 ; 佐剂性关节炎 ; 抗炎 ; 细胞因子
中图分类号 :R28515 　　　文献标识码 :A 　　　文章编号 :025322670 (2010) 0320439206
·934·中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 41 卷第 3 期 2010 年 3 月
①收稿日期 :2009206212　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
基金项目 :国家自然科学基金资助项目 (30873430 ,30973933) ; 浙江省自然科学基金资助项目 ( Y207759) ; 教育部高校博士点基金资助项
目 (20093322110001)
作者简介 :杨洁红 (1969 —) ,女 ,广东揭西人 ,副教授 ,医学博士 ,主要从事方剂配伍研究。
Tel : (0571) 86613711 　E2mail : yannoo7376 @sina. com3 通讯作者　万海同