全 文 :2016
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,Tel:(0518)81152367,Email:kanionlunwen@
163com
Effectofratintestinalflorainvitroonmetabolitesofacteoside
ZHANGWenxiu1,2,YANGBiao1,HUYumei1,MENGZhaoqing1,
HUANGWenzhe1,WANGZhenzhong1,XIAOWei1
(1.JiangsuKanionPharmaceuticalCo.,Ltd.,Lianyungang222001,China;
2.ChinaPharmaceuticalUniversity,Nanjing210009,China)
[Abstract] Acteosidewasusedforanaerobicincubationwithratintestinalflorainvitro.HPLCwasusedtodetectthechangesofac
teosideatdiferentincubationtimepointsandHPLCQTOFMSwasusedtoidentifythemetabolitesofacteoside.Theresultsshowed
thatacteosidecouldbemetabolizedbyratintestinalflorainvitroandthemetaboliteswere3,4dihydroxyphenylacid,cafeicacidand
3(3′hydroxyphenyl)propionicacid.
[Keywords] acteoside;intestinalflora;metabolites;LCMS
doi:10.4268/cjcmm20160829
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(acteoside),
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Fig5 MSspectraandchemicalstructureofthemetaboliteM2
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Fig6 MSspectraandchemicalstructureofthemetaboliteM3
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Fig7 Proposedmetabolicpathwayofacteosidebyratintestinalmicroflorainvitro
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[J]
$Æ,
,2004,35(2):
204
[2]
£|_
,
$B
,
0%¬
,
Ö
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º¨h0kºR¯°Ä
[J]
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,2006,8(5):46
[3]
½8
,
ß.±
,
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,
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G鯰½°mEô|³±ì
®m£,Ä
[J]
!b$A,
,2015,32(6):368
[4]
AB
,
f
,
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,
Ö
°£«1#
þÿé
á$)üøīƹ
[J]
$Ê,
,2013,35
·4451·
!^BÖ
:
ªmo·«¬®¶G鯰PÄ
(9):1888
[5] LiYX,ChenZ,FengZM,etalHepatoprotectiveglycosides
fromLeonurusjaponicasHout[J]CarbohydrRes,2012,48
(3):42
[6]
Od
,
7l
,
(P
,
Ö
)üø0t
D
ø%¸¹%:·kºÜį°
[J]
$Æ,
,2014,45(1):81
[7] WangJ,MaCH,WaSMEfectsofacteosideonlipopolysac
charideinducedinflammationinacutelunginjuryviaregulation
ofNFκBpathwayinvivoandinvitro[J]ToxicolApplPharm,
2015,285(2):128
[8] YoouM,KimHM,JeongHJActeosideatenuatesTSLPin
ducedmastcelproliferationviadownregulatingMDM2[J]Int
Immunopharmacol,2015,26(1):23
[9] NamSY,KimHM,JeongHJAtenuationofIL32induced
caspase1andnuclearfactorkBactivationsbyacteoside[J]Int
Immunopharmacol,2015,29(2):574
[10] CardinaliA,PatiS,MinerviniF,etalVerbascoside,isover
bascoside,and theirderivativesrecovered from olivemil
wastewateraspossiblefoodantioxidants[J]JAgricFoodChem,
2012,60:1822
[11] TundisR,BonesiM,MenichiniF,etalAntioxidantandanti
cholinesteraseactivityofGlobulariameridionalisextractsandiso
latedconstituents[J]NatProdCommun,2012,7:1015
[12] OzaslanM,DidemKaragZI,KalenderMEInvivoantitumor
efectofPlantagomajorLextractonBalb/CmousewithEhrlich
ascitestumor[J]AmJChinMed,2007,35:841
[13] WuWH,ChenTY,LuRW,etalBenzoxazinoidsfromScop
ariadulcis(sweetbroom weed)withantiproliferativeactivity
againsttheDU145humanprostatecancercelline[J]Phyto
chemistry,2012,83:110
[14]
!Ü¢
,
5î
,
:|Þ
,
Ö
G鯰Ë
HIPK2P53
@
N¶wo«õ)·êÈĺR¯°
[J]
¾¿BwÎ_-
.
,2014,22(2):171
[15] WuX,HeW,ZhangH,etalActeoside:alipaseinhibitor
fromtheChineseteaLigustrumpurpurascenskudingcha[J]Food
Chem,2014,142:306
[16]
EW;
ý6å¯Gʵ¦
Caco2
56Îqį°
[D]
.BN
:
¡p$A,o
,2014
[17] TrinhH,JohE,KwakH,etalAntipruriticefectofbaicalin
anditsmetabolites,baicaleinandoroxylinA,inmice[J]Acta
PharmacolSin,2010,31(6):718
[18] LiuL,DengYX,PangXY,etalIncreasedoralAUCofba
icalininstreptozotocininduceddiabeticratsduetotheIncreased
activityofintestinalβglucuronidase[J]PlantaMed,2010,76
(1):70
[19]
§B
,
ð*
$,_ʵÄw«85ËÉâ_Îq»
Y¯Äbc
[J]
$%$,-.
,2011,36(1):19
[20]
Ç.%
,
§$<
,
]
o·Á«àü%w$PÉ
Ä
HPLCMSn
µî
[J]
$%!n,É
,2008,6(5):387
[21]
}
Ï
,
ð:Í
,
_f
,
Ö
O¬PQR¥
STô¥#µ
ªd!k2ç®Q©-ô
[J]
R¥
,2007,25(4):496
[22] RioDD,StalmachA,CalaniL,etalBioavailabilityofcofee
chlorogenicacidsandgreenteaflavan3ols[J]Nutrients,
2010,2(8):820
[23]
ß
,
!?
,
+fq
,
Ö
k2çÄ«¬®P
3
[J]
$Æ,
,2015,46(4):610
[24]
!ì
,
k,¬
,
¥Í
,
Ö
«¬®¶$,øGʵ
ø×PÄ
3
[J]
$%$,-.
,2013,38(10):
1459
[25] LudwigAI,PenaMP,CidC,etalCatabolismofcofeechlo
rogenicacidsbyhumancolonicmicrobiota[J]BioFactors,
2013,39(6):623
[
-0
]
·5451·