全 文 ：5 讨论
鬼臼毒素与苦鬼臼毒素, 鬼臼毒酮、苦鬼臼毒酮
与异苦鬼臼毒酮,去氧鬼臼毒素与去氧苦鬼臼毒素,
3组化合物互为同分异构体, 硅胶柱色谱不易将它
们有效分离,并且这 3组化合物重结晶时易形成共
结晶, 通过重结晶难于达到有效纯化目的。而通过
制备高效液相色谱制备, 可以得到纯度大于 98%的
产品。所分离的 7个化合物中, 去氧苦鬼臼毒素为
首次从桃儿七中分离得到。
从分离得率来看, 上述 3 组同分异构体均以同
组第一个化合物的得率最高, 表明该化合物在药材
中量最高;从结构式可以推知, 3组同分异构体均以
同组第一个化合物的稳定性最强。
一般认为, 单一化学成分的 IC50小于 10 g / mL
时,可认为该化学成分在体外对该细胞有抑制作用。
本试验中 7个鬼臼毒素类化合物除异苦鬼臼毒酮对
L929(小鼠成纤维)的 IC50大于 10 g / mL 外, 其他
化合物的 IC50均小于 10 g/ mL,可认为均有细胞毒
性作用,说明这些化合物均具有较强的抗癌活性。
其中,去氧鬼臼毒素的 IC50值最小, 表明该化合物的
抑制作用最强,说明其抗癌活性最强。
参考文献:
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三叶蔓荆化学成分研究( )
闫利华1 ,张启伟1 ,王智民1 ,徐丽珍2* ,杨世林3 * !
( 1 中国中医科学院中药研究所,北京 100700; 2 中国医学科学院中国协和医科大学 药用植物研究所, 北京 100094;
3 中药固体制剂制造技术国家工程研究中心,江西 南昌 330006)
摘 要:目的 研究三叶蔓荆 Vitex tr if olia 茎和叶的化学成分。方法 采用硅胶和 Sephadex LH20 柱色谱进行
分离纯化,根据波谱数据结合理化性质解析化合物结构。结果 从三叶蔓荆茎和叶的乙醇提取物中分离得到 9 个
化合物,分别鉴定为牡荆内酯( vitex ilactone, 1)、前牡荆内酯( prev itex ilactone, 2)、乌苏酸( 3)、3乙酰氧基12烯28
乌苏酸( 4)、白桦脂酸( 5)、3, 4二羟基苯甲酸( 6)、对羟基苯甲酸( 7)、谷甾醇( 8)、胡萝卜苷( 9)。结论 化合物 3~
5 为首次从该植物中分离得到,所有化合物均为首次从该植物的茎和叶中分离得到。
关键词:三叶蔓荆; 牡荆属;牡荆内酯; 前牡荆内酯
中图分类号: R284 1 文献标识码: A 文章编号: 02532670( 2010) 10162203
三叶蔓荆 Vi tex t ri f ol ia L 为马鞭草科牡荆属
植物,在我国主要分布于云南、广东、广西、福建、台
湾等省。果实名蔓荆子, 始载于∀神农本草经#,列为
上品,有疏散风热、清利头目之功用,用于外感头痛、
眩晕、目痛、湿痹拘挛。除果实外, 蔓荆的茎和叶亦
供药用,有消肿止痛的功效,内服或外敷可治头风、
刀伤止血、跌打损伤、风湿疼痛等[ 1] ; 临床应用也较
广泛,如傣族验方雅叫哈顿散中,即以蔓荆茎和叶作
主治药[ 2]。然而,目前国内外对该植物的研究多局
限于对果实的研究,对其茎和叶的研究少有报道,为
了寻找活性成分, 进一步开发利用该植物的药用资
源,本实验对三叶蔓荆茎和叶的化学成分进行研究。
前文已报道了从三叶蔓荆茎和叶中分离到的 8个化
合物[ 3]。本实验继续对其化学成分进行研究, 又从
中分离得到 9个化合物, 分别鉴定为牡荆内酯( vi
tex ilactone, 1)、前牡荆内酯( pr evitexilactone, 2)、乌
苏酸( 3)、3乙酰氧基12烯28乌苏酸( 4)、白桦脂
酸( 5)、3, 4二羟基苯甲酸( 6)、对羟基苯甲酸( 7)、
∃1622∃ 中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 41 卷第 10 期 2010 年 10月
!收稿日期: 20100415 作者简介:闫利华( 1980 % ) ,女,博士,助理研究员。 Tel: ( 010) 84047332 Email: yanlh 2829@ hotm ail com
* 通讯作者 杨世林 T el: ( 010) 62899705 Email: yan gshilin 9705hotmail com徐丽珍 Email: xuliz hen 2002@ hotm ail . com
谷甾醇( 8)、胡萝卜苷( 9)。化合物 3~ 5为首次从该
植物中分离得到,所有化合物均为首次从该植物的
茎和叶中分离得到。
1 仪器与材料
熔点用 FisherJohns 熔点测定仪测定, 核磁用
Var ian UNIT Y INOVA % 600型超导核磁共振仪测
定,质谱用 M icromass ZabSpec 磁质谱仪测定。溶
剂均为分析纯, 为北京化工厂产品,色谱硅胶均为青
岛海洋化工厂产品。
三叶蔓荆 Vi tex t ri f ol ia L 茎和叶采自云南西
双版纳,由中国医学科学院药用植物研究所郭宝林
教授鉴定。
2 提取与分离
三叶蔓荆干燥茎和叶 10 kg ,粉碎, 用 95%乙醇
回流提取 3 次,每次 2 h。回收乙醇, 将浓缩的提取
物分散于水中, 依次用石油醚、氯仿、醋酸乙酯、正丁
醇萃取。氯仿萃取部分经硅胶柱色谱分离, 以石油
醚醋酸乙酯甲醇( PEM )系统梯度洗脱, 收集各
流分合并后得到 27 个组分 ( F r 1~ Fr 27)。Fr 5
( PE 85& 15洗脱得到)经 Sephadex LH20柱色谱
分离,再经中压硅胶柱色谱, 以石油醚丙酮( 100 &
1 6)等度洗脱, 得到化合物 4 ( 10 mg ) ; Fr 7( PE
85& 15洗脱得到)经 Sephadex LH20 柱色谱分离
纯化得到化合物 8( 10 mg)。Fr 8[ PE ( 85 & 15)洗
脱得到]先经 Sephadex LH20柱色谱分离,再经中
压硅胶柱色谱, 以石油醚丙酮( 100 & 0 5)等度洗
脱,得到化合物 2( 20 mg )。Fr 10[ PE( 8 & 2)洗脱
得到]和 Fr 12[ PE( 8 &2)洗脱得到]分别经 Sepha
dex LH20柱色谱纯化得到化合物 5( 50 mg )和 3
( 20 mg)。Fr 16[ PE( 6&4)洗脱得到]经 Sephadex
LH20柱色谱纯化得到化合物 1( 200 mg)和 6( 20
mg)。Fr 19[ PEM ( 6& 4&0 2)洗脱物]经 Sepha
dex LH20柱色谱分离纯化得到化合物 7( 10 mg )。
Fr 24( PEM 6&4 &2洗脱得到)经 Sephadex LH
20柱色谱纯化得到化合物 9( 100 mg )。
3 结构鉴定
化合物 1: 白色针晶, mp 144~ 146 ∋ ; EIMS
m/ z : 318 ( M + - CH 3COOH, 100 ) , 303 ( M+ -
CH 3 COOH - CH 3 , 23 )。 1HNMR ( CDCl3 , 600
MHz) : 5 84( 1H , t , J= 1 8 H z, H14) , 5 39( 1H ,
d, J= 2 4 Hz, H6) , 4 76 ( 2H , brs, H16 ) , 2 51
( 2H , m, H12) , 2 14 ( 1H , m , H8) , 2 05( 3H , s,
CH 3 CO) , 1 98( 1H , m, Ha11) , 1 75 ( 1H , m , Hb
11) , 1 64( 1H , m, H a2) , 1 59( 2H , m, H7) , 1 58
( 1H , d, J= 3 0 Hz, H5) , 1 52 ( 1H , m, Hb2) ,
1 50( 1H , m, Ha1) , 1 43 ( 1H , m, Hb1 ) , 1 35
( 1H , br d, J= 12 0 Hz, Ha3) , 1 26( 3H , s, CH 3
20) , 1 16 ( 1H , td, J = 12 0, 3 0 Hz, Hb3) , 1 01
( 3H , s, CH 319) , 0 97( 3H , s, CH 318) , 0 90( 3H ,
d, J= 6 6 Hz, CH 317)。13CNMR ( CDCl3 , 150
MHz ) : 174 0 ( C15 ) , 171 1 ( C13 ) , 170 4
( CH 3 CO) , 114 9( C14) , 76 4( C9) , 73 1( C16) ,
69 7( C6) , 47 6( C5) , 43 7 ( C10) , 43 5 ( C3) ,
36 0( C7) , 34 0( C4) , 33 5( C1, 18) , 32 0( C8) ,
31 6 ( C11 ) , 25 4 ( C12 ) , 23 6 ( C19 ) , 21 9
( CH 3CO) , 18 9 ( C20) , 18 5 ( C2) , 16 0 ( C17)。
以上数据与文献报道[ 4] 一致, 故鉴定化合物 1为牡
荆内酯( vitex ilactone)。
化合物 2: 白色针晶, mp 214~ 215 ∋ ; EIMS
m/ z : 318 ( M+ - CH 3COOH, 100 ) , 303 ( M + -
CH 3COOH - CH 3 , 4 )。 1HNMR ( CDCl3 , 600
MHz) : 5 38( 1H , dd, J= 3 0, 5 4 H z, H6) , 4 37
( 1H , d, J = 9 0 Hz, H a16) , 4 18 ( 1H , d, J=
9 0 Hz, H b16) , 2 91 ( 1H , d, J= 16 8 Hz,
Ha14) , 2 51 ( 1H , d, J= 16 8 H z, Hb14) , 2 13
( 1H , m, H8) , 2 04( 3H , s, CH 3CO) , 1 58( 1H , d,
J= 3 0 Hz, H5) , 1 24( 3H , s, CH 320) , 0 99( 3H ,
s, CH319) , 0 95( 3H , s, CH 318) , 0 80( 3H , d, J=
6 6 Hz, CH 317)。13 CNMR ( CDCl3 , 150 MHz) :
174 8( C15) , 170 4( CH 3 CO) , 93 9( C9) , 85 8( C
13) , 78 4( C16) , 70 3( C6) , 48 9( C5) , 43 9( C3,
14) , 42 9( C10) , 37 8( C12) , 36 5( C7) , 34 2( C
1) , 34 1 ( C4) , 33 1( C18) , 31 2( C8) , 29 3( C
11) , 23 7( C19) , 21 9( CH 3CO) , 19 8( C20) , 18 7
( C2) , 17 2( C17)。以上数据与文献报道[ 5] 一致,
故鉴定化合物 2为前牡荆内酯( previtexilactone)。
化合物 3: 白色无定形粉末, mp 259~ 261 ∋ ;
EIMS m/ z : 456 ( M + , 5 ) , 438 ( 4) , 423 ( 2) , 248
( 100 ) , 203 ( 35) , 189 ( 12) , 133 ( 20 )。 1HNMR
( CDCl3 , 600 MH z) : 5 25 ( 1H , m , H12) , 3 21
( 1H , m , H3) , 2 19 ( 1H , d, J= 11 4 Hz, H18) ,
1 26, 1 08, 0 99, 0 93, 0 86, 0 79, 0 77 (各 3H ,
CH 3 ( 7)。 13CNMR ( CDCl3 , 150 MHz) : 182 2
( C28) , 137 9 ( C13) , 125 9 ( C12 ) , 79 1 ( C3) ,
55 2( C5) , 52 7 ( C18) , 47 9( C17) , 47 6( C9) ,
42 0( C14) , 39 5 ( C19) , 39 1 ( C20) , 38 8 ( C1,
8) , 38 6( C4) , 37 0 ( C10) , 36 7( C22) , 33 0 ( C
7) , 30 6( C21) , 28 1( C15) , 28 0( C23) , 27 2( C
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2) , 24 2( C16) , 23 6( C11) , 23 3( C27) , 21 2( C
30) , 18 3( C6) , 17 0( C26, 29) , 15 6( C25) , 15 5
( C24)。以上数据与文献报道 [ 6] 一致, 故鉴定化合
物 3为乌苏酸( ur solic acid)。
化合物 4: 白色无定形粉末, mp 252~ 254 ∋ ;
EIMS m/ z : 498( M + , 3) , 483( 1) , 452( 10) , 423( 5) ,
392( 10) , 248( 100) , 203( 45) , 190( 30) , 133( 25) , 95
( 10) , 81( 10)。1HNMR( CDCl3 , 600 MH z) : 5 25
( 1H , s, H12) , 4 50 ( 1H , m, H3) , 2 05 ( 3H , s,
CH 3 CO) , 2 19( 1H , d, J= 11 4 Hz, H18) , 1 26,
1 08, 0 97, 0 95, 0 87, 0 85, 0 79(各 3H , CH 3 (
7)。13 CNMR( CDCl3 , 150 MHz) : 182 0( C28) ,
171 0( CH 3 CO) , 138 0( C13) , 125 8( C12) , 80 9
( C3) , 55 3( C5) , 52 7( C18) , 47 9( C17) , 47 5
( C9) , 42 0( C14) , 39 5( C8) , 39 1( C20) , 38 8
( C19) , 38 3( C1) , 37 7( C4) , 36 9( C10) , 36 7
( C22) , 32 9( C7) , 30 6( C21) , 28 1( C23) , 28 0
( C15) , 24 2( C16) , 23 6 ( C2, 27) , 23 3( C11) ,
21 3( C30) , 21 2( CH 3 CO ) , 18 2 ( C6) , 17 1 ( C
29) , 17 0( C26) , 16 7( C25) , 15 5( C24)。以上数
据与文献报道[ 7] 一致,故鉴定化合物 4为 3乙酰氧
基12烯28乌苏酸 ( 3acety lox y12en28ursolic
acid)。
化合物 5: 白色针晶, mp 282~ 284 ∋ ; EIMS
m/ z : 456( M + , 50) , 438( 30) , 423( 20) , 395( 15) , 248
( 40) , 207 ( 60) , 203 ( 30) , 189 ( 100 ) , 135 ( 45 ) , 95
( 40) , 81( 40)。1HNMR( CDCl3 , 600 MH z) : 4 74
( 1H , br s, Hb29) , 4 61 ( 1H , br s, Ha29) , 3 19
( 1H , dd, J = 11 4, 4 8 Hz, H3) , 1 69, 0 98, 0 97,
0 94, 0 82, 0 76 (各 3H , s, CH 3 ( 6)。 13CNMR
( CDCl3 , 150 MHz) : 180 2 ( C28) , 150 4( C20) ,
109 7( C29) , 79 0( C3) , 56 3( C17) , 55 4( C5) ,
50 5( C9) , 49 3( C19) , 46 9( C18) , 42 4( C14) ,
40 7( C8) , 38 9 ( C4) , 38 7 ( C1) , 38 4 ( C13) ,
37 2( C10) , 37 0( C22) , 34 3( C7) , 32 1( C16) ,
30 5( C15) , 29 7( C21) , 28 0( C23) , 27 4( C2) ,
25 5( C12) , 20 9( C11) , 19 4( C30) , 18 3( C6) ,
16 1( C26) , 16 0( C25) , 15 3( C24) , 14 7( C27)。
以上数据与文献报道 [ 8]一致,故鉴定化合物 5为白
桦脂酸( betulinic acid)。
化合物 6: 无色针晶, mp 204~ 206 ∋ ; EIMS
m/ z : 154( M + , 100) , 137( 95) , 109( 25) , 81( 12) , 63
( 10) , 53 ( 10 )。 1HNMR ( CD3OD, 600 MHz) :
7 43( 1H , d, J = 1 8 Hz, H2) , 7 42 ( 1H , dd, J=
8 4, 1 8 Hz, H6) , 6 79( 1H , d, J= 8 4 Hz, H5)。
13
CNMR( CD3OD, 150 MHz) : 170 3( C7) , 151 5
( C4) , 146 0( C3) , 123 9( C1) , 123 1( C6) , 117 7
( C2) , 115 8( C5)。以上数据与文献报道[ 9] 一致,
故鉴定化合物 6 为 3, 4二羟基苯甲酸 ( 3, 4di
hydroxybenzoic acid)。
化合物 7: 无色针晶, mp 210~ 211 ∋ ; EIMS
m/ z : 138 ( M
+
, 90) , 121 ( 100) , 93 ( 25 ) , 65 ( 18)。
1
HNMR( CD3OD, 600 MHz) : 7 86 ( 2H , d, J=
8 4 Hz, H2, 6) , 6 80 ( 2H , d, J= 8 4 Hz, H3, 5) ,
4 84 ( 1H , br s, 4OH )。13 CNMR ( CD3OD, 150
MHz) : 170 1( C7) , 163 4( C4) , 133 0( C2, 6) ,
122 8( C1) , 116 0( C3, 5)。以上数据与文献报
道[ 1 0]一致, 故鉴定化合物 7 为对羟基苯甲酸 ( 4
hydroxybenzo ic acid)。
化合物 8: 无色针晶, mp 141~ 142 ∋ ; EIMS
m/ z : 414[ M] + 。与 谷甾醇对照品混合熔点不下
降,用 TLC鉴别, 其Rf值和对照品完全一致。故鉴
定化合物 8为谷甾醇( sitostero l)。
化合物 9: 白色无定形粉末, mp 295~ 297 ∋ ;
EIMS m/ z : 414[ M- 162] + 。与胡萝卜苷对照品混
合熔点不下降,用 T LC 鉴别,其 Rf值和对照品完全
一致。故鉴定化合物 9为胡萝卜苷( daucostero l)。
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