全 文 ：银杏叶提取物对辐射损伤小鼠的保护作用
金
虹1 ,黄
毅2 ,王继生3 ,秦海燕2 , 叶
平2*
( 1
四川中医药高等专科学校, 四川 绵阳
621000; 2
西南科技大学, 四川 绵阳
621010;
3
绵阳市第三医院,四川 绵阳
621000)
摘
要: 目的
研究银杏叶提取物对60Co
射线辐射损伤小鼠的保护作用。方法
采用健康小鼠作为实验对象,
银杏叶提取物 ig 给药,使用60Co
作为辐射源制备辐射损伤模型, 眼眶取血计数外周血白细胞和淋巴细胞数; 取肝
组织测定其蛋白质、MDA 及 SOD、GSH 活性。结果
银杏叶提取物能增加辐射小鼠白细胞、淋巴细胞数量,减轻
辐射对肝脏合成功能的损伤,增加 SOD、GSH 活性, 降低 MDA 量。结论
银杏叶提取物对辐射损伤的小鼠具有
保护作用,其保护机制与其抗氧化作用以及免疫影响有关。
关键词:银杏叶提取物; 辐射; 抗氧化
中图分类号: R286
1


文献标识码: A


文章编号: 02532670( 2010) 08133904


随着人类和平利用原子能的日益广泛, 放射性
辐射技术在工农业、医学、生命科学等方面的应用迅
速发展,人们与放射线接触的机会增多, 遭受辐射损
伤的可能性也随之增加, 同时辐射对机体损伤的作
用机制及其临床表现越来越被人们研究和认识, 辐
射损伤的研究也由重视个体的医学救治向群体的医
学防护转变。中药多成分多靶点对辐射引起的多器
官损害有一定的保护作用, 因此研究抗辐射损伤药
物,特别是天然产物抗辐射损伤的研究日益得到重
视。素有活化石 之称的银杏 Ginkgo bi loba L. 作
为世界上最古老的孑遗植物, 自古以来有很高的药
用和食用价值, 目前银杏叶提取物广泛用于改善心
脑血管功能 [ 13] ,银杏叶提取物中量最高的是黄酮类
物质。本研究在采用酶解萃取法进行银杏叶活性部
位提取研究的基础上, 对银杏叶提取物进行了抗辐
射实验研究,为其临床应用提供依据。
1
材料
1
1
动物:昆明种小鼠, 体质量 ( 20 ! 2) g, 雌雄兼
用,四川大学实验动物中心提供。
1
2
药品及试剂:银杏叶提取物 ( GBE) 由西南科
技大学生命科学与工程学院药物制剂教研室提供
(每 1 mL 相当于银杏叶 1 g)。四物汤合剂 (泰安
药业有限公司, 批号 0811028) , 二甲基亚砜 ( DM
SO) (成都联合化工试剂研究所)。丙二醛 ( MDA)
测定试剂盒、超氧化物歧化酶 ( SOD) 试剂盒、谷胱
甘肽 ( GSH ) (除蛋白) 测定试剂盒和考马斯亮蓝蛋
白测定试剂盒 (南京建成生物工程研究所)。其余
试剂均为分析纯。
1
3
仪器设备: 60 Co
辐照源 (四川科学城中国工
程物理研究院钴源辐照技术有限公司) ; Backman
高速冷冻离心机 (德国) ; Eppendorf 移液器 (芬
兰) ; Sy smex 1000i 全自动血液分析仪 (日本) ,
SZ ∀ 93自动双重纯水蒸馏器 (国产)。
2
方法
2
1
辐照条件:采用 60Co
射线全身一次性照射,
吸收剂量率 192~ 214 cGy/ m in,时间 2
5 min。
2
2
分组及给药方法: 设对照组、模型组、银杏叶提
取物 ( 12
5、25、50 g/ kg 水溶液) 组和阳性对照组
(四物汤合剂 30 g/ kg, 25% DMSO 水溶液 2 g/ kg )。
每组 10只,照射前每天 ig 给药 1次,连续 5 d。
2
3
血液分析:分别于照射后第 4、8天,每组 10只
小鼠眼眶取血,测定白细胞数和淋巴细胞数。
2
4
肝组织中蛋白的测定:取照射后各组活体小鼠
肝脏,在冷藏的生理盐水中漂洗后滤纸拭干水分,称
质量后剪碎, 置于匀浆器中,按 1# 9 加入生理盐水
制备匀浆,离心 10 min, 取上清液备用。照考马斯
亮蓝蛋白测定试剂盒说明书方法测定。
2
5
MDA、SOD、GSH 的测定: 取各组小鼠肝脏,
制备肝组织匀浆液, 按试剂盒说明书方法测定肝组
织中 MDA、SOD、GSH 水平。
2
6
统计学处理: 所有数据结果均以 x ! s 表示,
以 SPSS 13
0 软件系统进行单因素方差分析。
3
结果
3
1
对辐射小鼠白细胞和淋巴细胞数目变化的影
∃1339∃中草药
Chinese Traditional and Herbal Drugs
第 41 卷第 8 期 2010 年 8 月
* 收稿日期: 20091216





















基金项目:西南科技大学国防重点学科实验室重点培育项目 ( 07JGZB18)作者简介:金
虹( 1963 ∀ ) ,女,重庆人,学士,副教授,从事中药活性成分及分析的教学和研究。
T el: ( 0816) 2392169
Email: jh1120@ 139. com
响:表 1结果显示,模型组白细胞和淋巴细胞数目与
对照组比较,显著降低, 表明 60 Co
辐射对小鼠白
细胞和淋巴细胞有显著影响, 说明模型成功; 四物汤
组、银杏叶提取物 25、50 mg/ kg 组在 192 h 非常显
著提高白细胞数量 ( P< 0
05) ; 银杏叶提取物 12
5
mg/ kg 组淋巴细胞数目在 96、192 h 显著提高
( P< 0
05)。银杏叶提取物 25、50 mg/ kg 组淋巴细
胞数目在 96、192 h 非常显著提高 ( P< 0
05)。表
明四物汤、银杏叶提取物对辐射引起白细胞下降有
一定保护作用,银杏叶提取物对淋巴细胞的保护作
用较强。
3
2
对肝组织蛋白质的影响:表 2结果显示:模型
表 1
银杏叶提取物对辐射损伤小鼠白细胞和淋巴细胞数目的影响 (x ! s, n= 10)
Table 1
Effect of GBE on WBCs and lymphocytes of radiationinjured mice ( x! s, n= 10)
组别 剂量/ ( g ∃ kg- 1 ) 白细胞/ ( % 109 ∃ L- 1 )
96 h 192 h
淋巴细胞/ ( % 109 ∃ L- 1 )
96 h 192 h
对照 - 5
09 ! 0
23 5
09 ! 0
65 4
45 ! 1
68 4
37 ! 1
53
模型 - 0
28 ! 0
18# # 2
34 ! 0
57# # 0
13 ! 0
25# # * 1
17 ! 0
98# # *
DMSO 2 0
42 ! 0
26# # * 0
99 ! 0
67# # * 0
29 ! 0
53# # * 0
87 ! 0
52# #
四物汤 30 0
32 ! 0
09 1
05 ! 0
13# # * 0
13 ! 0
08# # 0
91 ! 0
38# # *
银杏叶提取物 12
5 0
34 ! 0
03 1
21 ! 0
86# # 0
14 ! 0
27# # * 1
18 ! 1
12# # *
25 0
33 ! 0
25 2
31 ! 0
18# # * 0
16 ! 0
07# # * 0
98 ! 0
59# # *
50 0
32 ! 0
18 2
37 ! 0
32# # * 0
20 ! 0
43# # * 1
05 ! 0
79# # *


与对照组比较: # # P < 0
01;
与模型组比较: * P < 0
05
表 2同


# # P< 0
01 v s cont rol gr ou p;
* P < 0
05 v s model grou p
Table 2 is same
组肝组织总蛋白与对照组比较,非常显著降低,表明
60
Co
辐射对实验小鼠肝组织总蛋白有非常显著影
响 ( P< 0
01) ;与模型组比较,银杏叶提取物 25、50
mg/ kg 组肝组织总蛋白量在 96、192、336 h 非常显
著提高 ( P< 0
05)。表明银杏叶提取物对辐射引起
肝组织总蛋白降低有较强保护作用。
3
3
对肝组织 MDA 的影响:表 3结果显示模型组
肝组织 MDA 与对照组比较非常显著升高,与模型
组比较, 银杏叶提取物 25、50 mg / kg 组肝组织
MDA 量在 24、48 h 有非常显著影响 ( P < 0
01)。
银杏叶提取物各剂量组在 192、336 h 有显著影响
( P< 0
05)。表明银杏叶提取物对辐射引起肝组织
MDA 升高有较强保护作用。
3
4
对肝组织 SOD活性的影响: 表4结果显示,模
表 2
银杏叶提取物对辐射损伤小鼠肝组织蛋白量的影响 ( x ! s, n= 10)
Table 2
Effect of GBE on protein contents in liver of radiationinjured mice ( x ! s, n= 10)
组
别 剂量/
( g ∃ kg- 1)
蛋白/ ( g ∃ L- 1 )
24 h 48 h 96 h 192 h 336 h
对照 - 8
09 ! 1
26 8
10 ! 1
28 8
43 ! 1
02 8
52 ! 1
76 8
21 ! 2
54
模型 - 8
46 ! 0
96 8
49 ! 3
75 2
02 ! 2
35# # 2
05 ! 0
85# # 2
08 ! 0
63# #
DMSO 2 8
62 ! 0
85 8
93 ! 2
94 3
43 ! 2
63# # * 2
68 ! 1
98# # 0
43 ! 0
25# #
四物汤 30 8
08 ! 0
76 8
07 ! 1
78 2
68 ! 1
69# # 3
20 ! 2
17# # * 2
02 ! 1
28# #
银杏叶提取物 12
5 6
93 ! 1
53 7
58 ! 1
45 2
36 ! 4
32# # * 2
21 ! 2
54# # * 2
02 ! 1
27# #
25 7
36 ! 1
26 8
32 ! 2
65 2
73 ! 2
01# # * 2
61 ! 1
68# # * 2
44 ! 1
53# #
50 7
52 ! 1
41 8
17 ! 1
76 2
97 ! 1
84# # * 2
73 ! 1
49# # * 2
65 ! 1
28# #
表 3
银杏叶提取物对辐射损伤小鼠肝组织 MDA 水平的影响 ( x! s, n= 10)
Table 3
Effect of GBE on MDA in liver of radiationinjured mice ( x! s, n= 10)
组
别 剂量/
( g ∃ kg- 1)
MDA/ ( nmol∃ mg- 1)
24 h 48 h 192 h 336 h
对照 - 0
82 ! 0
17 0
61 ! 0
32 0
76 ! 0
28 0
91 ! 1
21
模型 - 1
25 ! 0
38# # 2
06 ! 1
06# # 1
39 ! 0
15# 1
22 ! 2
31#
DMSO 2 6
09 ! 2
05# # * * 1
54 ! 0
45# # 0
57 ! 0
83# * 0
03 ! 2
16# *
四物汤 30 2
30 ! 1
81# # * 2
12 ! 1
65# # * 0
55 ! 0
26# * 2
37 ! 1
94# *
银杏叶提取物 12
5 2
17 ! 1
34# # * 3
42 ! 2
08# # * * 0
97 ! 0
99# * 0
09 ! 0
24#
25 1
90 ! 0
97# # * 2
98 ! 1
24# # * * 0
71 ! 0
69# * 0
07 ! 0
09# *
50 1
86 ! 1
22# # * 2
05 ! 1
37# # * * 0
62 ! 0
75# * 0
08 ! 0
15# *


与对照组比较: # # P < 0
01;
与模型组比较: * P < 0
05
* * P< 0
01


# # P< 0
01 v s cont rol gr ou p;
* P < 0
05
* * P < 0
01 v s model group
∃1340∃ 中草药
Chinese Traditional and Herbal Drugs
第 41 卷第 8 期 2010 年 8 月
型组肝组织 SOD 活性与对照组比较非常显著降低
( P< 0
01) ; 与模型组比较, 银杏叶提取物 25、50
mg/ kg 组肝组织 SOD 在各时间点有显著影响
( P< 0
01) ,表明银杏叶提取物对辐射引起肝组织
SOD 活性降低有较强保护作用。
3
5
对肝组织 GSH 活性的影响: 表 5结果显示,
模型组肝组织 GSH 活性与对照组比较有非常显著
差异 ( P< 0
01) ;与模型组比较,银杏叶提取物组肝
组织 GSH 在各时间点有显著影响 ( P< 0
01)。说
明银杏叶提取物对辐射引起肝组织 GSH 活性降低
有较强保护作用。
4
讨论


机体免疫细胞作为机体免疫调节和免疫效应细
胞,对辐射有极高的敏感性,极易受到辐射的影响而
发生 DNA 的断裂、细胞数量和功能改变,从而导致
免疫功能紊乱; 淋巴细胞是机体特异性免疫细胞。
在外周血细胞中, 淋巴细胞对辐射最敏感, 极易发生
形态和功能的变化。淋巴细胞染色体畸变是机体受
表 4
银杏叶提取物对辐射损伤小鼠肝组织 SOD 水平的影响 ( x! s, n= 10)
Table 4
Effect of GBE on SOD in liver of radiation injured mice ( x! s, n= 10)
组
别 剂量/
( g ∃ kg- 1)
SOD/ ( U ∃ m g- 1)
24 h 48 h 192 h 336 h
对照 - 72
60 ! 12
38 65
40 ! 9
66 70
26 ! 13
92 68
72 ! 10
29
模型 - 34
29 ! 2
17# # 24
76 ! 8
95# # 36
77 ! 12
76# # 52
98 ! 11
68# #
DMSO 2 29
71 ! 3
68 42
12 ! 6
86* 46
03 ! 4
68* 20
71 ! 13
57*
四物汤 30 33
04 ! 7
26 49
12 ! 9
78* 44
89 ! 11
78* 56
07 ! 10
86
银杏叶提取物 12
5 32
32 ! 4
27 47
47 ! 7
43* 42
13 ! 6
39* 52
85 ! 6
80
25 38
80 ! 6
58* # 41
30 ! 12
38* # 49
19 ! 13
28* # 33
67 ! 9
68* * #
50 37
56 ! 3
98* # 45
30 ! 9
40* # 50
39 ! 8
27* # 34
21 ! 7
40* * #


与对照组比较: # P< 0
05
# # P< 0
01;
与模型组比较: * P< 0
05
* * P < 0
01
表 5同


# P< 0
05
# # P < 0
01 vs cont rol group;
* P< 0
05
* * P< 0
01 v s m odel group
Table 5 is same
表 5
银杏叶提取物对辐射损伤小鼠肝组织 GSH水平的影响 ( x ! s, n= 10)
Table 5
Ef fect of GBE on GSH in liver of radiationinjured mice ( x ! s, n= 10)
组
别 剂量/
( g ∃ kg- 1)
GSH / ( mg ∃ g- 1 )
24 h 48 h 192 h 336 h
对照 - 28
09 ! 5
87 28
40 ! 6
82 26
70 ! 6
98 28
50 ! 4
35
模型 - 35
36 ! 12
85# # 2
41 ! 1
09# # 7
19 ! 5
61# # 4
08 ! 2
67# #
DMSO 2 8
19 ! 7
63 4
55 ! 2
37* 11
32 ! 7
29* 4
08 ! 3
71*
四物汤 30 3
53 ! 12
32 1
59 ! 3
36* 3
78 ! 2
16* 5
02 ! 2
47
银杏叶提取物 12
5 6
71 ! 8
30 6
85 ! 3
26* 8
60 ! 7
45* 1
09 ! 2
06* * #
25 21
30 ! 11
78* # 9
18 ! 10
26* # 9
47 ! 7
82* # 2
45 ! 1
35* * #
50 20
79 ! 7
92* # 9
68 ! 6
49* # 10
43 ! 6
49* # 2
98 ! 1
19* * #
到核辐射后淋巴细胞染色体出现的形态学异常, 已
被用来作为辐射损伤的生物剂量评估指标。


血液系统中有核细胞白细胞、淋巴细胞细胞核
的 DNA 被60Co
射线损伤导致 DNA 合成受损,
表现在辐射后数量的下降 [ 4]。实验中银杏叶提取物
组与模型组比较, 白细胞、淋巴细胞有不同程度提
高,表明银杏叶提取物组的 DNA 受损程度低于模
型组, 说明银杏叶提取物对 DNA 有保护作用;同时
银杏叶提取物对实验小鼠肝脏总蛋白质降低有明显
保护作用。
当机体处于低剂量的电离辐射胁迫时, 体内的
抗氧化机制被激活, 产生了大量相关的酶类保护组
织免受自由基攻击,所以 MDA 会维持在一个相对
较低的水平。随辐射剂量增大, 机体抗氧化机制遭
到破坏,抗氧化酶活性降低,细胞被无法清除的自由
基攻击,大量脂质过氧化物降解, M DA 量增加[ 5]。
实验表明银杏叶提取物能不同程度降低小鼠肝组织
的 MDA 水平, 降低辐射对实验小鼠的损害。
研究表明,电离辐射可引起机体内产生大量超
氧阴离子自由基, 从而造成机体组织中细胞的过氧
化损伤。当机体遭受电离辐射后, 各种免疫细胞的
功能被激活, 特别是 T 细胞的激活与分化, 导致有
氧代谢旺盛, 产生超氧阴离子自由基较静止状态要
多。但随着照射剂量的升高, 机体遭受电离辐射后
产生了大量的超氧阴离子自由基, 过量的自由基攻
击细胞,使 SOD 防御系统被破坏, 细胞免疫能力下
降,导致实验小鼠肝组织 SOD 活性降低 [ 6]。实验
结果显示银杏叶提取物能不同程度提高实验小鼠的
SOD活性, 降低辐射对实验小鼠的损害。
谷胱甘肽 ( GSH ) 既是细胞自我保护系统的重
∃1341∃中草药
Chinese Traditional and Herbal Drugs
第 41 卷第 8 期 2010 年 8 月
要物质之一,也是 DNA 合成中不可缺少的小分子
巯基化合物,具有消除氧自由基、维持细胞内正常的
氧化还原环境和蛋白质的结构与功能等多方面的作
用,广泛存在于真核细胞中, 影响 GSH 合成的因素
主要包括半胱氨酸 ( Cy steine, Cys) 的供给和合成
限速酶谷氨酰半胱氨酸合成酶 ( glutamylcysteine
synthetase, GCS) 的活性。辐射的直接效应是引起
细胞中氧自由基的增加, 损伤细胞核及膜成分。
GCS 转录增加, GSH 水平升高修复氧化损伤是辐
射应激反应的一个组成部分[ 7]。实验结果显示银杏
叶提取物能不同程度提高实验小鼠的 GSH 活性,
降低辐射对实验小鼠的损害。
以上几个方面实验结果均表明银杏叶提取物对
辐射损伤的实验小鼠具有较强保护作用, 其作用机
制可能与银杏叶提取物抗氧化作用以及免疫影响有
关,但其他作用机制以及银杏叶提取物中银杏内酯
的相关作用正在进一步深入研究。
参考文献:
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洪森荣, 尹明华
银杏叶提取物对缺血再灌注小鼠脑细胞凋
亡的保护作用 [ J]
中草药, 2007, 38( 12) : 18641867

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中草药, 2007, 38( 7) : 10461050

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杲海霞, 李军霞, 王永利
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脑线粒体的保护作用 [ J]
中草药, 2006, 37 ( 9 ) : 1380
1383

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王
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路晓钦, 高
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218

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肖
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第四军医大学学报, 2006, 27( 14 ) :
13311333

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邓海平, 愈诗源, 陈玉琴, 等
X射线辐射对仔鼠体重、皮毛
生长及肝、肾脏组织 SOD、CAT 活力及 MDA 含量的影响
[ J]
动物学报, 2008, 54( 6) : 10291037

注射用夏天无总碱对沙鼠全脑缺血再灌注损伤的影响
姚丽梅, 段
启*
(广东食品药品职业学院,广东 广州
510520)
摘
要: 目的
观察注射用夏天无总碱对沙鼠全脑缺血再灌注损伤的影响。方法
建立沙鼠全脑缺血再灌注损伤
模型,观察注射用夏天无总碱对沙鼠脑卒中指数、脑指数、脑组织含水量及脑组织病理变化的影响。结果
注射用
夏天无总碱高、中剂量均能显著降低沙鼠全脑缺血再灌注损伤脑卒中指数、脑组织含水量, 减轻脑组织病变程度,
但对脑指数无明显影响。结论
注射用夏天无总碱对沙鼠全脑缺血再灌注损伤具有治疗作用。
关键词:注射用夏天无总碱; 脑缺血; 再灌注; 沙鼠
中图分类号: R285
5


文献标识码: A


文章编号: 02532670( 2010) 08134203


夏天无为罂粟科植物伏生紫堇 Cor ydal i s de
cumbens ( T hunb. ) Per s. 的干燥块茎,味苦、微辛,
性温,归肝经,具有活血通络、行气止痛的功效,用于
中风偏瘫、跌打损伤、风湿性关节炎、坐骨神经痛。
夏天无的主要活性成分为生物碱 [ 1] , 已有研究表
明[ 26] ,夏天无总碱对大鼠实验性脑缺血具有保护作
用;可抑制大鼠实验性脑血栓形成,减轻脑栓塞引起
的伊文思蓝染和脑水肿; 对小鼠脑缺血损伤有保护
作用,可降低脑组织内乙酰胆碱酯酶活性,保护神经
元、抗神经元凋亡。注射用夏天无总碱是由从夏天
无中提取的总生物碱制成的冻干粉针剂, 可显著降
低家兔全血黏度、红细胞压积和红细胞聚集指数,抑
制二磷酸腺苷、花生四烯酸和胶原诱导的血小板聚
集, 具有改善家兔血液流变性、活血化瘀的作用[ 7]。
本实验采用沙鼠全脑缺血再灌注损伤模型,进一步观
察注射用夏天无总碱对脑缺血的治疗作用。
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材料与方法
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试验药物: 注射用夏天无总碱 (冻干粉针, 含
总生物碱> 90% ) ( T ACDI) , 2 mg/瓶, 由石家庄华
康制药有限公司提供, 批号 050508, 试验前用
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9% 氯化钠注射液配制; 灯盏细辛注射液,云南生
物谷灯盏花药业有限公司生产, 10 mL/支 (含总黄
∃1342∃ 中草药
Chinese Traditional and Herbal Drugs
第 41 卷第 8 期 2010 年 8 月
* 收稿日期: 20100104





















作者简介:姚丽梅( 1975 ∀ ) ,女,河南漯河人,讲师,硕士,主要从事中药教学科研工作。
T el: ( 020) 28854936
13711409229
Email: yaolm@ gdyzy. edu. cn
* 通讯作者
段启