全 文 ：清风胶囊的高效液相色谱指纹图谱的研究
张小红1 ,朱卫丰2 ,雷晓林3 ,莫志贤4 ,钱星文3 3 ①
(11 广东省食品药品职业技术学校 ,广东 广州 　510663 ; 21 江西中医学院 ,江西 南昌 　330004 ;
31 东方药林药业有限公司 ,广东 广州 　510515 ;41 南方医科大学 ,广东 广州 　510515)
摘 　要 :目的 　建立清风胶囊高效液相色谱指纹图谱 ,为清风胶囊的质量控制提供依据。方法 　采用高效液相色
谱法建立指纹图谱 ,以乙腈2水2磷酸缓冲盐进行梯度洗脱 ,检测波长为 203 nm ,体积流量为 110 mL/ min ,柱温 25
℃,用中药指纹图谱相似度评价系统计算其相似度。结果 　10 批清风胶囊中共有峰的相对保留时间 RSD 小于
1 %。在选定的色谱条件下确定了 16 个峰为清风胶囊的特征指纹峰 ,10 批样品平均相似度为 01988。结论 　该法
重现性好 ,可为清风胶囊的质量评价提供依据。
关键词 :清风胶囊 ;指纹图谱 ;高效液相色谱
中图分类号 :R286102 　　　文献标识码 :B 　　　文章编号 :025322670 (2010) 0320394203
　　清风胶囊是由青风藤、延胡索和人参等组成 ,主
要用于控制海洛因依赖者脱毒后的稽延性戒断症
状[1 ] 。在前期的质量标准研究中 ,笔者通过高效液
相法建立了青藤碱的测定方法 ,通过薄层色谱法建
立了人参和延胡索的鉴别方法。指纹图谱用于中药
制剂的质量控制的研究报道较多[2 ,3 ] 。为了更好的
保证产品的临床疗效稳定 ,本实验采用 RP2HPL C
法对 10 批清风胶囊进行分析比较 ,寻找各组分关
系 ,建立清风胶囊指纹图谱 ,为清风胶囊的质量控制
提供依据。
1 　仪器与试药
戴安 U3000 高效液相色谱仪 , PDA 检测器 ,色
谱在线真空脱气机、四元梯度泵、柱温箱。
乙腈为色谱纯 (美国 TEDIA 公司) ,水为超纯
水 ,磷酸氢二钠、三乙胺和磷酸二氢钠为分析纯。清
风胶囊 (0145 g/ 粒)由东方药林药业有限公司提供 ;
青藤碱、人参皂苷 Rg1 、Re、Rb1 、延胡索乙素对照品
均购于中国药品生物制品检定所。
2 　方法与结果
211 　色谱条件 :Ultimate TM XB2C18色谱柱(250 mm ×
416 mm , 5 μm) ;流动相 : 乙腈2水2磷酸盐缓冲盐
(01005 mol/ L 的磷酸氢二钠溶液 ,以 01005 mol/ L
的磷酸二氢钠调节 p H 值至 810 ,再以 1 %的三乙胺
调节 p H 值至 910) ,采用梯度洗脱 ,洗脱程序见表
1 ;柱温 :25 ℃;体积流量 :1 mL/ min ;检测波长 :203
nm ;进样量 :10μL ,记录 140 min 图谱。
212 　供试品溶液的制备 : 取清风胶囊 ( 批号
表 1 　流动相梯度洗脱程序
Table 1 　Gradient elution process of flow phase
时间/ min 乙腈/ % 水/ % 磷酸盐/ %
0 　 1 74 25
25 　 11 64 25
40 　 15 60 25
90 　 26 49 25
120 　 42 38 20
140 　 58 27 15
20071201)内容物样品约 013 g ,精密称定 ,置 50 mL
量瓶中 ,加甲醇 25 mL ,超声提取 15 min (250 W ,
40 k Hz) ,滤过 ,取续滤液 10 mL ,水浴蒸干 ,加甲醇
适量 ,多次洗涤 ,定容至 10 mL ,摇匀 ,用 01 45μm
微孔滤膜滤过 ,即得。
213 　方法学考察
21311 　精密度试验 : 取同一供试品溶液 (批号
20071201) , 连续测定 6 次 ,按上述色谱条件测定 ,
结果显示共有峰的相对保留时间 RSD 均小于
018 % ,共有峰的相对峰面积 RSD 均小于 116 %。
21312 　稳定性试验 : 取同一供试品溶液 (批号
20071201)分别在 0、3、6、9、12、24 h 各进样 1 次 ,按
上述色谱条件测定 ,结果显示共有峰的相对保留时
间 RSD 均小于 113 % ,共有峰的相对峰面积 RSD 均
小于 212 % ,表明供试品溶液在 24 h 内稳定性良好。
21313 　重 现 性 试 验 : 取 同 批 次 样 品 ( 批 号
20071201) 6 份 ,制备供试品溶液 ,按上述色谱条件
测定 ,结果显示共有峰的相对保留时间 RSD 均小于
212 % ,共有峰的相对峰面积 RSD 均小于 218 %。
·493· 中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 41 卷第 3 期 2010 年 3 月
①收稿日期 :2009209211　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
基金项目 :广东省奥港联合关键领域重点突破项目 (2006984202)
作者简介 :张小红 (1979 —) ,女 ,江西新余人 ,助理讲师 ,硕士研究生 ,主要从事中药新剂型研究。E2mail :susanzxh123 @126. com3 通讯作者　钱星文　Tel : (020) 6278928828302 　E2mail :qianxw2003 @126. com
21314 　空白试验 :精密吸取空白溶剂甲醇 10μL ,注
入液相色谱仪 ,记录 180 min 内的色谱峰。结果表
明 ,溶剂对清风胶囊指纹图谱中共有峰检出无干扰。
214 　指纹图谱的建立
21411 　特征峰及参照峰的选择 :《中药注射剂指纹
图谱研究的技术要求 (暂行 2002 年)》对 10 批清风
胶囊样品进行测定 ,对不同供试品所得的指纹图谱
进行分析 ,选择稳定性和重复性好、吸收强、特征明
显的色谱峰为共有峰 ,标定 16 个共有峰 (图 1) 。由
样品指纹图谱可见 8 号峰峰型对称 ,峰面积较大 ,与
左右峰都能达到基线分离 ,故选择该峰为制定指纹
图谱的参照峰。经对照测定 ,该峰为青风藤药材中
青藤碱所产生。统计各共有特征峰相对峰面积 ,其
中共有峰占总峰面积的 81 % ,符合共有峰的要求。
各特征峰的相对保留时间和相对峰面积见表 2。
图 1 　10 批不同清风胶囊样品的指纹图谱
Fig. 1 　Fingerprints of ten batches of Qingfeng Capusla
表 2 　共有指纹峰的平均相对保留时间、相对峰面积
Table 2 　Average relative retention time and average
relative peak area of common peaks
峰
号
相对保
留时间
相对峰
面积
峰
号
相对保
留时间
相对峰
面积
1 01 269 01 699 9 11024 01082
2 01 513 01 149 10 11033 01087
3 01 554 01 250 11 11287 01092
4 01 645 01 325 12 11305 01046
5 01 765 01 098 13 11327 01037
6 01 788 01 108 14 11443 01060
7 01 906 01 058 15 11534 01016
8 11 000 11 000 16 11700 01078
21412 　指纹图谱中特征峰的归属分析 :取清风胶囊
处方中药材 ,按清风胶囊的制备工艺及供试品制备
方法制备药材溶液 ;同时取青藤碱、人参皂苷 Rg1 、
Re、Rb1 及延胡索乙素对照品用甲醇配成适当质量
浓度 ,即得 ;依法进样测定 ,通过比较色谱保留时间
及紫外光谱特征确定制剂中各峰与药材的相关性。
成品中 16 个特征色谱峰在对应的药材具有很
好的明显归属性 ,其中 1～8 与清风藤药材有明显归
属性 ;9～13 与人参药材有明显归属性 ;14～16 与延
胡索药材有明显归属性 ;其中 8 号峰为青风藤中的青
藤碱 ,9、10、11 号峰人参中的人参皂苷 Rg1 、Re、Rb1 ,
15 号峰为延胡索中所延胡索乙素 ,结果见图 2。
A2样品　B2青风藤　C2人参　D2延胡索　E2青藤碱
F2人参皂苷 Rg1 、Re、Rb1 　G2延胡索乙素
A2sample 　B2Caulis S inomenii Orimenten 　C2Radi x
Ginseng 　D2Rhizoma Cory dalis 　E2sinomenine
F2ginsenoside Rg1 、Re、Rb1 　G2tet rahydropalmatine
图 1 　清风胶囊指纹图谱特征峰归属
Fig. 1 　Characteristic peak attribution in f ingerprint
of Qingfeng Capsula
21413 　相似度的计算 :采用国家药典委员会开发的
中药色谱指纹图谱相似度评价系统研究版 (2004A) ,
将色谱工作站中的数据导入该软件 ,选定上述 16 个
特征峰进行谱峰匹配 ,通过中位数矢量计算得出清风
藤胶囊 10 批样品指纹图谱的共有模式 ,并以此共有
模式为标准图谱 ,计算各批样品的相似度 ,见表 3。
结果 10 批样品平均相似度为 01988。一般情况下 ,相
似度大于 019 即认为相似度良好[4 ] ,因此 10 批清风
胶囊的 HPLC指纹图谱相似度良好。
表 3 　10 批清风胶囊样品的相似度
Table 3 　Similarities of ten batches of Qingfeng Capsula
样品号 相似度 样品号 相似度
S1 01990 S6 01991
S2 01981 S7 01982
S3 01976 S8 01983
S4 01982 S9 01965
S5 01974 S10 01969
21414 　指纹图谱共有模式的确立 :用国家药典委员
会提供的中药色谱指纹图谱相似度评价系统对 10
批清风胶囊进行模式识别 ,获得了清风胶囊的指纹
图谱的共有模式 ,见图 3。
图 3 　清风胶囊共有模式指纹图谱
Fig. 3 　Common mode f ingerprint of Qingfeng Capusla
·593·中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 41 卷第 3 期 2010 年 3 月
3 　讨论
指纹图谱技术是国际公认的控制中药质量的有
效手段 ,它以其信息量大的特点克服了中药材、中成
药的复杂性。本实验通过高效液相色谱法建立了清
风胶囊的指纹图谱 ,结果表明 10 批不同清风胶囊各
峰的相对保留时间基本一致 ,色谱图形基本一致。
同时该方法可以对处方主要药材进行鉴定 ,同时对
药材中的已知主要有效物质进行鉴定 ,为该制剂的
质量控制提供很好的依据。
通过对图谱的分析 ,在色谱图中 8 号峰面积大、
分离效果好 ;通过归属分析该峰为君药青风藤药材
中的青藤碱峰。青藤碱是青风藤中生物碱成分 ,也
是中国药品生物制品检定所确认的标准物质 , 因此
选定 8 号峰为本指纹图谱技术要求的参照峰。
本制剂为中药复方制剂 ,成分复杂 ,故采用梯度
洗脱。通过分析本品主要含生物碱和皂苷类物质 ,
而生物碱的高效液相法测定时 ,一般采用 p H 值较
高的流动相系统 ,所以色谱柱的选择时选用能耐受
高 p H 的色谱柱。分别考察了依利特柱、戴安柱、
Waters 柱及 Ultimate 柱对指纹图谱的分离情况 ,
结果显示 , Ultimate 柱对色谱峰的峰分离好 ,峰型
对称 ,故选 Ultimate 色谱柱作为检测柱 ;同时比较
甲醇2水2磷酸盐缓冲液及乙腈2水2磷酸盐缓冲液等
系统以及不同的梯度洗脱方法等 ,结果发现本实验
采用的乙腈2水2磷酸盐缓冲液系统可以使样品色谱
峰得到较好地分离 ,且色谱峰峰形较好 ,故选用该系
统为流动相。
参考文献 :
[ 1 ] 　莫志贤 ,王彩云 ,罗晓云 ,等1 清风胶囊用于海洛因依赖者脱毒
治疗的临床观察[J ]1 中药材 ,2003 ,7 (26) :53125331
[ 2 ] 　高秀丽 ,蒋　倩 ,张 　敏 ,等 1 龙血竭胶囊的 HPLC 指纹图谱
研究[J ]1 中草药 ,2009 ,39 (6) : 85528571
[ 3 ] 　孙　宁 ,秦培勇 ,谭天伟 1 乳快消片 HPL C 指纹图谱的研究
[J ]1 中草药 ,2009 ,39 (11) : 1659216611
[ 4 ] 　中药注射剂指纹图谱研究的技术要求 (暂行) [ S]1 20021
HPLC2DAD 法测定炮制辅料吴茱萸汁中绿原酸、吴茱萸内酯、
吴茱萸碱和吴茱萸次碱
蒋 　俊1 ,2 ,贾晓斌1 ,2 3 ① ,陈 　彦1 ,蔡宝昌3 ,吴 　皓3
(11 江苏省中医药研究院中药新型给药系统重点实验室 ,国家中医药管理局中药释药系统重点研究室 ,江苏 南京 　210028 ;
21 江苏大学药学院 ,江苏 镇江 　212013 ; 31 南京中医药大学 江苏省中药炮制重点实验室 ,江苏 南京 　210029)
摘 　要 :目的 　测定萸黄连的炮制辅料吴茱萸汁中 3 类组分的 4 个代表性成分吴茱萸碱、吴茱萸次碱、吴茱萸内
酯、绿原酸 ,为萸黄连炮制辅料吴茱萸汁的质量控制提供重要依据。方法 　采用 HPLC2DAD 法 ,色谱柱为 Zorbax
SB2C18 (250 mm ×416 mm ,5μm) ;流动相 :乙腈2011 %磷酸 ,梯度洗脱程序 ;体积流量 :1 mL/ min ;检测波长 :205、
225、324 nm ;柱温 :25 ℃。结果 　绿原酸、吴茱萸内酯均为水溶性成分 ,在吴茱萸汁中的质量分数分别为 61638、
81234 mg/ g ,吴茱萸碱和吴茱萸次碱均为脂溶性成分 ,在吴茱萸汁中的质量分数分别为 01406、01380 mg/ g。结论
萸黄连的炮制辅料吴茱萸汁中主要含有绿原酸、吴茱萸内酯、吴茱萸碱、吴茱萸次碱等成分 ,对这些成分进行测定 ,
可为萸黄连炮制辅料吴茱萸汁的质量控制提供重要依据。
关键词 :萸黄连 ;炮制辅料 ;吴茱萸汁 ;高效液相色谱
中图分类号 :R286102 　　　文献标识码 :B 　　　文章编号 :025322670 (2010) 0320396203
　　萸黄连的炮制是取吴茱萸汁制黄连 ,炮制目的
是用药性辛热的吴茱萸来抑制黄连的苦寒之性 ,使
黄连寒而不滞的同时又增强黄连清气分湿热 ,散肝
胆郁火的功效 ,主要用于积滞内阻、胸膈痞闷、胁肋
胀满、下痢脓血等症[1 ] 。吴茱萸具有散寒止痛、助阳
止泻等功能[2 ] ,主要含有生物碱、苦味素、挥发油、萜
类、有机酸类等成分 ,其中吴茱萸碱、吴茱萸次碱等
生物碱类成分和吴茱萸内酯等苦味素类成分是主要
活性成分[3 ] 。因此吴茱萸汁的制备及其质量将直接
影响到萸黄连的临床疗效。目前 ,对吴茱萸药材或
·693· 中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 41 卷第 3 期 2010 年 3 月
①收稿日期 :2009208210　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
基金项目 :江苏省中医药领军人才专项 (2006) ;江苏省中药炮制重点实验室开放课题 ( ZYPZ002)
作者简介 :蒋　俊 (1986 —) ,男 ,江苏镇江人 ,主要从事中药新剂型、新技术和中药炮制、制剂分析等方面研究。
Tel : (025) 85637809 　E2mail : xuyan9323 @1261com3 通讯作者　贾晓斌　Tel : (025) 85637809 　E2mail : jxiaobin2005 @hot mail1com