全 文 ：HPLC法测定复黄片中香蒲新苷
王誉洁1 ,刘胤敏1 ,吴红兵1 ,陆金根2 ,邱明丰1 *
( 1 上海交通大学药学院, 上海 200240; 2 上海中医药大学附属龙华医院,上海 200032)
摘 要:目的 建立复黄片中香蒲新苷的测定方法。方法 复黄片粉中加入甲醇超声提取香蒲新苷, 采用 Wat ers
Symmetry C18色谱柱( 250 mm 4 6 mm, 5 m ) , 以乙腈0 04% 磷酸溶液为流动相进行梯度洗脱, 体积流量为 1
mL/ min,柱温: 30 ! ,检测波长为 254 nm, 用外标法计算复黄片中香蒲新苷。结果 香蒲新苷在 0 525~ 8 40 g
线性关系良好,平均回收率为 100 24% , RSD为 1 12%。结论 本方法简便、快速、准确, 可为评价复黄片质量提
供依据。
关键词:复黄片; 香蒲新苷;高效液相色谱
中图分类号: R286 02 文献标识码: A 文章编号: 02532670( 2010) 11181302
复黄片是在上海中医药大学附属龙华医院的医
院制剂基础上研制的复方中药新药,由蒲黄炭、地榆
炭、槐角、大黄组成, 具有凉血止血、清热通便等功
效,用于治疗血热妄行之便血[ 1]。为确保复黄片的
质量标准的规范, 建立一种针对有效成分简便、快
速、准确的定量方法, 对该产品的质控显得十分必
要。蒲黄为处方中的君药,含有多种黄酮类化合物,
主要包括异鼠李素、槲皮素、异鼠李素3O芸香糖
苷、香蒲新苷、山柰酚3O芸香糖苷等[ 2]。本实验
综合文献报道中 [ 34] 香蒲新苷的测定方法, 采用
HPLC法测定了复黄片中专属性成分香蒲新苷, 为
复黄片质量的评价与控制提供了依据。
1 仪器与试药
Agilent 1100高效液相色谱仪(美国 Agilent 公
司) ; AL204 型电子天平 ( Mettler Toledo ) ; Waters
Symmetry C18色谱柱( 250 mm 4 6 mm, 5 m) ; Saro
torious ARIVM611UF 超纯水器(德国Sartorius公司)。
香蒲新苷对照品(中国药品生物制品检定所, 批
号 111573200402) , 乙腈( M er ck, 色谱纯) , 超纯水
(实验室自制) , 其余试剂均为分析纯。复黄片(上海
交通大学药学院, 批号为 061106、061107、061108,
0 33 g/片) , 缺蒲黄的复黄片阴性样品(上海交通大
学药学院,批号为 0609233, 0 33 g/片)。
2 方法与结果
2 1 对照品溶液的制备:精密称取香蒲新苷对照品
适量, 加甲醇溶解, 制成 0 42 mg/ mL 的溶液, 作为
对照品溶液母液。
2 2 复黄片供试品溶液的制备: 取复黄片粉约
0 80 g ,精密称定,置 25 mL 量瓶中, 加入适量甲醇,
30 ! 水浴超声 30 min, 放冷后补足甲醇至 25 mL,
摇匀,滤过, 取续滤液作为供试品溶液。
2 3 蒲黄阴性供试液的制备:取缺蒲黄的复黄片阴
性样品粉约 0 80 g,同复黄片供试品溶液制备方法
制备,备用。
2 4 色谱条件: Symmetry C18色谱柱( 250 mm 4 6
mm, 5 m) ;检测波长: 254 nm; 流动相: A为乙腈, B
为 0 04%磷酸溶液,梯度洗脱: 0~ 10 min为10% A
20% A, 10~ 30 min为20% A25% A, 30~ 40 min为
25% A;体积流量: 1 mL/ min;柱温: 30 ! 。
2 5 专属性试验:在以上色谱条件下, 香蒲新苷与
相邻峰分离度均大于 1 7, 理论塔板数按香蒲新苷
峰计算不低于8 000,对照品溶液及供试品溶液主峰
的保留时间一致, 为 20 1 min, 蒲黄阴性样品无干
扰,见图 1。
2 6 线性关系考察: 精密量取香蒲新苷对照品溶液
母液 2 5 mL,置 5 mL 量瓶中,加甲醇至刻度, 摇匀,
为对照品溶液(∀)。精密吸取对照品溶液(∀) 25 mL
置 5 mL 量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀, 为对照品溶液
(#)。分别精密吸取对照品溶液(∀)、(#)各5 L,对照
品母液 5、10、20 L 分别注入液相色谱仪, 记录峰面
积积分值。以香蒲新苷对照品的质量浓度为横坐标,
峰面积为纵坐标, 绘制标准曲线, 得回归方程 Y=
448 037X+ 20 276, r= 0 999 9。结果表明,香蒲新苷
在 0 525~ 8 40 g线性良好。
∃1813∃中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 41 卷第 11 期 2010 年 11月
收稿日期: 20100222 基金项目:上海市重点学科建设项目资助( T 0304)作者简介:王誉洁( 1981 % ) ,女,重庆市铜梁县人,硕士研究生,从事中药新制剂研究。
T el / Fax: ( 021) 34204052 Email : w angyujiexiang@ sina com
* 通讯作者 邱明丰 T el/ Fax: ( 021) 34204052 Em ail: mfqiu@ sjtu edu cn
* 香蒲新苷
* t yphaneoside
图 1 香蒲新苷对照品(A)、复黄片( B)和阴性样品(C)HPLC图谱
Fig. 1 HPLC Chromatograms of typhaneoside reference substance (A) , Fuhuang Tablets ( B) , and negative sample (C)
2 7 稳定性试验: 同一供试品溶液 (批号 061106)
于室温条件放置,于 0、1、2、4、6、12 h分别精密吸取
10 L 进样, 测定, 香蒲新苷质量分数得 RSD 为
0 91%,表明供试品溶液在 12 h内基本稳定。
2 8 精密度试验: 精密吸取同一供试品溶液(批号
061106) , 进样 5 L, 重复进样 6 次, 香蒲新苷峰面
积 RSD为 0 64%。
2 9 重现性试验:取同一批样品(批号 061106) , 制
备供试品溶液, 平行制备 6份溶液, 分别进行测定,
香蒲新苷质量分数 RSD为 0 72%。
2 10 回收率试验: 取批号为 061106的复黄片样品
9份, 精密称定, 按样品中香蒲新苷质量的 80%、
100%、120%分别精密加入香蒲新苷对照品, 制备供
试品溶液,进样测定, 计算加样回收率, 结果回收率
为 100 24% , RSD为 1 12%。
2 11 样品测定: 取 3 批中试样品(批号 061106、
061107、061108) ,制备供试液, 进样测定, 用外标法
计算样品中香蒲新苷,结果见表 1。
表 1 复黄片中香蒲新苷的测定
Table 1 Determination of typhaneoside in Fuhuang Tablets
批号 香蒲新苷/ ( mg ∃ 片- 1 )
061106 121
061107 125
061108 123
3 讨论
预实验时, 对甲醇水、甲醇0 04% 磷酸、乙腈
水、乙腈0 04%磷酸等流动相系统及其配比的等度
和梯度洗脱方式进行了色谱条件优化, 结果表明乙
腈0 04%磷酸溶液系统最佳, 各个色谱峰的峰形和
分离度都较好,因此选定该系统为复黄片中香蒲新
苷色谱分析条件的流动相。
提取溶剂选择: 选用了甲醇、乙醇、90% 甲醇、
80%甲醇、70%甲醇为提取溶剂,分别对样品进行超
声提取 30 m in, 取等量续滤液进样测定, 得香蒲新
苷的质量分数分别为 1 20、1 15、1 18、1 15、1 13
mg/片。以甲醇的提取率为最高, 提取分离效果较
好,最终选择甲醇为提取溶剂。
提取方法选择: 比较了甲醇超声提取和加热回
流处理两种方法的效果, 结果香蒲新苷的质量分数
分别为 1 20、1 17 mg /片,提取率基本相同, 但因超
声法比较方便,提取液中的杂质也比回流处理法的
少,故样品选用超声处理。
提取时间选择:采用甲醇超声提取,考察了超声
10、15、30、45 min 等处理时间对提取率的影响, 结
果测得香蒲新苷的质量分数分别为 1 13、1 16、
1 21、1 20 mg /片。可见香蒲新苷的提取率随超声
时间增多而增加, 至 30、45 m in时基本不再增加,故
选定超声时间为 30 m in。
参考文献:
[ 1] 潘一滨, 曹永清, 陆金根 复黄片治疗痔出血 144例的随机双
中心单盲临床试验[ J] 中国新药与临床杂志, 2005, 64 ( 8 ) :
243246
[ 2] 苑可武,徐文豪 蒲黄的化学及药理研究概况 [ J ] 中草药,
1996, 27( 11) : 693696
[ 3] 傅大煦,程小卫,王 玮,等 蒲黄总黄酮提取物中香蒲新苷及
异鼠李素3O新橙皮糖苷的HPLC测定[ J] 中国医药工业杂
志, 2004, 35( 6) : 360361
[ 4] 马红飞,刘 斌,周军挺 蒲黄的 HPL C指纹图谱研究[ J] 中
草药, 2006, 37( 3) : 433435
∃1814∃ 中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 41 卷第 11 期 2010 年 11月