全 文 ：1紫丁香苷 2长梗冬青苷
1sy ringin 2pedunculoside
图 1 对照品( A)与样品( B) HPLC 色谱图
Fig. 1 HPLC Chromatograms of reference substance ( A)
and sample ( B)
3 2 检测波长的选择: 通过对紫丁香苷、长梗冬青
苷对照品溶液进行紫外波长扫描, 结果表明, 两者在
210 nm 波长处均有较强的吸收, 因此选择 210 nm
紫外检测波长。
3 3 实验中比较了不同提取溶剂 (甲醇、乙醇、水、
20% 甲醇、50% 甲醇和 80% 甲醇) 以及不同提取
方法 (超声提取、加热回流提取和索氏回流提取)
对紫丁香苷和长梗冬青苷的提取效果, 结果显示,
50% 甲醇超声提取的效果最理想; 另外, 对超声提
取时间( 15、30、45、60m in)进行了考察,结果表明
超声提取 30 min 即可将两个成分提取完全。因此,
最终确定供试品溶液的制备方法为 50% 甲醇超声
提取 30 min。
3 4 从样品的测定结果来看,不同产地救必应药材
中紫丁香苷和长梗冬青苷的量差异较大, 这可能与
救必应的生长环境、生长时间、药用部位(枝皮或树
干皮)等因素有关。
致谢:方法研究中使用的具柄冬青苷对照品由原广
州市医药工业研究所刘国樵高级工程师及原广州市
药品检验所朱品业主任药师提供,特此感谢。
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多种药用裸子植物中双黄酮的定量测定
鲁来凤,曹 园,王 强*
(中国药科大学,江苏 南京 210009)
摘 要:目的 用 H PLC 法同时测定多种药用裸子植物中穗花衫双黄酮、扁柏双黄酮及银杏双黄酮的量。方法
采用Hanbon Lichr ospher C18 ( 150 mm 4 6 mm, 5 m)柱, 甲醇0 1%甲酸水梯度洗脱,检测波长 337 nm, 体积流
量 1 0 mL / min, 柱温 30 ! 。结果 所测样品中双黄酮类成分的量差异大, 其中,穗花杉双黄酮的量在 0 08~ 4 61
mg / g; 扁柏双黄酮的量在 0 03~ 4 68 mg / g ;银杏双黄酮的量在 0 10~ 3 03 mg/ g。穗花杉双黄酮在所测样品中存
在比较普遍,而银杏双黄酮则相对较少。此方法加样回收率和线性范围均符合要求。结论 本方法结果准确、灵
敏度高、重现性好, 可作为部分药用裸子植物中双黄酮类成分的质量控制定量方法。
关键词:药用裸子植物; 穗花杉双黄酮;扁柏双黄酮; 银杏双黄酮
中图分类号: R284 2 文献标识码: A 文章编号: 02532670( 2010) 07138803
裸子植物分布在世界各地, 特别是北半球亚热
带高山地区及温带至寒温带地区。药用裸子植物的
化学成分主要有黄酮类、生物碱、有机酸及甾酮等。
其中,黄酮类及双黄酮类成分是裸子植物的特征性
成分[ 1] 。双黄酮具有抗肿瘤、抗病毒、消除自由基等
药理作用[ 2~ 4] ,提示该类化合物在治疗心血管疾病
及抗肿瘤方面具有广阔的前景。因此, 合理开发利
用裸子植物中双黄酮类成分资源具有重要的意义。
虽然裸子植物的分析研究已有报道, 但药用裸子植
物中双黄酮的定量测定未见系统报道, 因此本实验
采用 HPLCDAD方法考察了多种不同药用裸子植
物中双黄酮类成分量差异,为今后利用药用裸子植
物中双黄酮类成分提供科学依据。
1 仪器与试药
∀1388∀ 中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 41 卷第 8 期 2010 年 8 月
* 收稿日期: 20091207 作者简介:鲁来凤( 1981 ) ,女,湖南常德人,硕士研究生,从事中药及其制剂分析。T el: 15850686892 Email : lulaifeng520@ 126 com
* 通讯作者 王 强 T el: ( 025) 83271390 Emai l: qwang49@ sohu com
1 1 仪器: Ag ilent 1100 Series 高效液相色谱仪,
DAD检测器; Sartorius BP211D 型电子分析天平;
KH3200E 型超声波清洗器(昆山禾创超声仪器有限
公司)。
1 2 试药:甲醇为色谱纯, 购于江苏汉邦科技有限
公司;水为乐百氏纯净水;其他试剂均为分析纯。穗
花杉双黄酮、扁柏双黄酮及银杏双黄酮对照品为实
验室自制, 经光谱确定结构, HPLC峰面积归一化法
计算质量分数均大于 98%。各批次药材经中国药
科大学中药分析教研室王强教授鉴定。药材种类及
来源见表 1。
2 方法与结果
2 1 色谱条件:色谱柱为 Hanbon Lichr ospher C18
( 150 mm 4 6 mm, 5 m) ;检测波长 337 nm ;柱温
30 ! ;流动相为 A 和 B 两相梯度洗脱, A: 0 1%甲
酸水, B: 甲醇; 洗脱程序: 0 ~ 15 m in, B 为 60% ~
70% ; 15~ 25 min, B 为 70% ~ 72% ; 25~ 35 m in, B
为 72% ~ 75% ; 35~ 40 m in, B 为 75~ 80%。体积
流量 1 mL/ m in;进样量 15 L, 理论塔板数以穗花
杉双黄酮峰计大于 5 000。
22 对照品溶液的制备:分别精密称取穗花杉双黄
酮、扁柏双黄酮、银杏双黄酮对照品适量,置量瓶中,
以甲醇溶解并定容,即得混合对照品溶液的浓度分别
为: 0 2026 mg/ mL; 0 0117 mg/ mL; 00990 mg/ mL。
2 3 供试品溶液的制备:称取样品细粉约0 5 g(过
40目筛) ,精密称定,置锥形瓶中, 加甲醇 50 mL, 超
声提取 30 min后滤过。滤渣再用甲醇重复提取两
次,合并 3次滤液。减压回收溶剂,残渣用甲醇溶解
并定容至 10 mL 量瓶中, 摇匀。进样前用微孔滤膜
( 0 45 m)滤过,取续滤液,即得供试品溶液。
2 4 线性关系的考察:精密吸取上述对照品溶液适
量,稀释成不同质量浓度的混合对照品溶液。取各
溶液 15 L,按上述色谱条件重复进样两次,以进样
质量浓度( X , g/ mL)为横坐标, 测得的峰面积平均
值( Y )为纵坐标绘制标准曲线, 并计算回归方程, 结
果穗花杉双黄酮在 2 70 ~ 334 33 g / mL 线性良
好, 回归方程为 Y = 52 237 X - 187 72, r =
0 999 7; 扁柏双黄酮在 3 90~ 312 00 g/ mL 线性
良好, 回归方程为 Y = 20 488 X + 58 01, r =
0 9997;银杏双黄酮在 3 30~ 198 00 g / mL 线性
良好, 回归方程为 Y = 51 819 X - 212 75, r =
0 999 7。
2 5 精密度试验: 吸取混合对照品溶液, 按上述色
谱条件连续测定 6次,进样量 15 L,测得各对照品
峰面积, 结果显示穗花杉双黄酮峰面积的 RSD 为
0 94% ,扁柏双黄酮的 RSD为 1 79%, 银杏双黄酮
的 RSD为 1 24% ,表明仪器精密度良好。
2 6 稳定性试验:精密吸取供试品溶液,分别于 0、
2、4、6、8 h 测定,进样量 15 L,测得峰面积并计算,
结果显示穗花杉双黄酮峰面积的 RSD 为 0 89%,
扁柏双黄酮的 RSD 为 0 73% , 银杏双黄酮的 RSD
为 1 18% ,表明供试品溶液在 8 h内稳定。
2 7 重现性试验:取同一样品 6份,按 2 3 项下方
法平行制备, 依上述色谱条件进样 15 L, 测定并计
算,穗花杉双黄酮、扁柏双黄酮及银杏双黄酮质量分
数的 RSD值分别为 0 56%、0 69%、0 46%。
2 8 加样回收率试验:同一样品,称取 6份,每份约
0 25 g,精密称定,分别加入相当于样品量 100%的
对照品,穗花杉双黄酮 0 43 mg、扁柏双黄酮 0 90
mg、银杏双黄酮 0 50 mg, 按 2 3 项下方法制备供
试品溶液,依上述色谱条件测定, 并计算回收率, 结
果平均回收率分别为穗花杉双黄酮 103 06, RSD
2 98% ;扁柏双黄酮 101 40%, RSD 0 82% ;银杏双
黄酮 99 60%, RSD 2 97%。
2 9 样品测定: 取所收集的样品, 按 2 3项下方法
制备供试品溶液, 以 15 L 的进样量注入色谱仪
( n= 3) ,测定结果见表 1,色谱图见图 1。另外,在草
麻黄 Ep hedra sinica Stapf、湿地松 P inus el liott ii
Engelm、黑松 P inus thunber gi i Parl、金钱松 P seu
dolar ix amabil i s ( Nelson) rehd及雪松 Ced rus d e
odara ( Roxb. ) G Don中未检测到以上 3种双黄酮
成分。
3 讨论
3 1 本实验首次对裸子植物中不同科属的药用植
物进行了测定,其中同科同属植物有:云南红豆杉和
南方红豆杉属于红豆杉科红豆杉属; 黑松和湿地松
属于松科松属。同科不同属植物有: 侧柏和柏木分
别属于柏科侧柏属和柏木属; 墨西哥落羽杉和北美
红杉分别属于杉科落羽杉属和北美红杉属;金钱松
属和雪松分别属于松科金钱松和雪松属。其他科属
的植物有:香榧属于红豆杉科榧树属;苏铁属于苏铁
科苏铁属;银杏属于银杏科银杏属;罗汉松属于罗汉
松科罗汉松属; 草麻黄属于麻黄科麻黄属[ 5]。实验
结果进一步证明亲缘关系近的植物具有相同或者相
似的成分,这在植物分类学上也有一定的意义。
3 2 分析条件的选择:本实验对药用裸子植物中的
穗花杉双黄酮、扁柏双黄酮和银杏双黄酮的最佳提
取方法和检测波长进行了优选。从实验结果来看,
∀1389∀中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 41 卷第 8 期 2010 年 8 月
表 1 样品的定量测定结果
Table 1 Quantitative determination of samples tested
编号 名 称 来 源 质量分数/ ( mg ∀ g- 1 )穗花杉双黄酮 扁柏双黄酮 银杏双黄酮
S1 侧柏 Platyclad us or iental is 南京 0 98 2 26
侧柏 P ori ental i s 昆明 1 18 2 29
侧柏 P ori ental i s 南京同仁堂 1 61 3 56
S2 银杏 Ginkgo bi loba 昆明 0 22 1 04
银杏 G bi loba 南京 1 90
S3 苏铁 Cycas r ev oluta 昆明 4 58 1 10
苏铁 C r ev olu ta 南京 4 61 1 55
S4 罗汉松 Pod ocar pu s mac roph yl lu s 昆明 0 46 4 68 0 56
罗汉松 P macr op hyl lus 南京 0 20 4 10 1 21
S5 北美红杉 Sequ ola semp erv i rens 南京 1 33 0 98
S6 墨西哥落羽杉 Tax odium mucr onatum 昆明 0 26 2 03
墨西哥落羽杉 T mucr onatum 南京 0 11 0 25
S7 云南红豆杉 Tax us yu nnanensis 昆明 0 09 0 03 0 10
S8 南方红豆杉 Tax us chinenw si s 南京 0 08 0 34
S9 香榧 T orr eya g rand i s 南京 0 13 0 27 3 03
S10 柏木 Cup ressus f unebri s 南京 0 64 2 13
1穗花杉双黄酮 2扁柏双黄酮 3银杏双黄酮 S0对照品
1amentoflavone 2hin okiflavone
3ginkget in S0 refer ence substances
图 1 对照品和样品对照图谱
Fig 1 HPLC Chromatograms of reference
substances and samples
在 337 nm 处各成分吸收较好; 用甲醇超声振荡提
取 3次,提取的比较完全且简便易行,重现性好。
3 3 实验结果表明所测得的多种药用裸子植物中
都含有双黄酮类化合物(除松科) , 但其量差异较大,
其中, 穗花杉双黄酮在苏铁中的量最高为 4 61 mg/
g;扁柏双黄酮在罗汉松中的量最高为 4 68 mg/ g;
银杏双黄酮在香榧中的量最高为 3 03 mg/ g, 这可
为将来该类成分的开发利用提供一定的理论依据。
同种药用植物由于批次不同,成分的量差异较大,这
可能与其采收季节及产地有关。文献报道 [ 6]麻黄中
含有穗花杉双黄酮,但本实验中并未检测到,可能是
其量太低,也可能是与产地及采收季节有关。在本
实验所测定的几种松科植物中未检测到双黄酮类化
合物,证实了双黄酮化合物在松科中少见[ 7] 。
3 4 本实验首次用 H PLCDAD 法同时对药用裸
子植物中 3种双黄酮成分进行了定量测定,方法简
便、准确、重现性好, 为今后开发利用此类药用植物
提供依据,也为药用裸子植物的质量控制奠定基础。
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