全 文 ：牛黄降压丸的高效液相指纹图谱研究
王文燕1 ,赵 强2 ,张铁军1
①
,朱宏吉2 ,黎 阳3
(11 天津药物研究院 ,天津 300193 ; 21 天津大学化工学院 ,天津 300072 ;31 天津中医药大学 ,天津 300193)
摘 要 :目的 研究牛黄降压丸的质量控制方法。方法 采用高效液相色谱建立牛黄降压丸的 HPLC 指纹图谱 ,
收集了不同批次的 10 批产品进行测定。结果 建立了牛黄降压丸的指纹图谱 ,确立 10 个共有峰 ,指认了包括大
黄素在内的 4 个共有峰。结论 此方法可用于牛黄降压丸的质量控制。
关键词 :牛黄降压丸 ;指纹图谱 ;共有峰归属分析
中图分类号 :R286102 文献标识码 :B 文章编号 :0253 - 2670 (2010) 01 - 0056 - 02
牛黄降压丸具有清心化痰、镇静降压之效 ,用于
肝火旺盛 ,头晕目眩 ,烦躁不安 ,痰火壅盛 ,高血压
症[ 1 ,2 ] 。牛黄降压丸收录于《中国药典》2005 年版一
部 ,药典中规定了冰片、人工牛黄、川芎、黄芪的鉴别
方法和白芍、黄芩提取物的测定方法。显然 ,这种检
测方法对于牛黄降压丸这样一个由 14 味中药组成
的复方过于简单 ,相对于目前中药产品质量控制的
要求有较大的差距。指纹图谱是顺应中药多组分、
多靶点的整体综合作用的特点 ,从“全成分”的角度出
发的一种现代中药质量控制方法 ,现已成为国内外广
泛接受的中药质量控制评价模型[3～6 ] 。为全面控制
其质量 ,本实验对牛黄降压丸指纹图谱进行研究。
1 仪器与材料
Waters 2695 高效液相色谱仪 , Waters 996 型
PDA 检测器 ,电热恒温水浴锅 (江苏省医疗器械
厂) , HS3120 超声波 (海卓康生物科技有限公司) ,
PB303 —N 电子天平 (瑞士 Mettler Toledo 公司) 。
甲醇、乙腈为色谱纯 , 乙醇、磷酸为分析纯。阿
魏酸、大黄酚、黄芩苷、芍药苷对照品均由中国药品
生物制品检定所提供 ,牛黄降压丸样品由天津市达
仁堂制药厂提供 ,见表 1。
2 方法与结果
211 色谱条件 : Suntik C18 色谱柱 (250 mm ×416
mm ,5μm) ;流动相 :乙腈2011 %磷酸 ;洗脱方式 :梯
度洗脱 ;检测波长 :230 nm ; 柱温 :35 ℃;体积流量 :
110 mL/ min ;进样量 :10μL 。
212 对照品溶液的制备 :取阿魏酸对照品适量 ,置
10 mL 量瓶中 ,用甲醇稀释至刻度 ,超声 20 min ,冷
却后补足体积 ,经01 45μm微孔滤膜滤过 ,取续滤
表 1 样品来源
Table 1 Sources of samples
样品 批号 生产时间
N1 5450065 2007 —09 —06
N2 5450055 2007 —04 —20
N3 5450030 2006 —06 —08
N4 5450064 2007 —09 —04
N5 5450047 2006 —11 —27
N6 5450068 2007 —09 —14
N7 5450034 2006 —06 —20
N8 5450039 2006 —09 —07
N9 5450020 2006 —05 —10
N10 5450024 2006 —05 —16
液 ,即得。同法制得黄芩苷、芍药苷、阿魏酸、大黄酚
对照品溶液。
213 供试品溶液的制备 :称取牛黄降压丸 3 g ,剪
碎 ,加硅藻土 2 g 研匀 ,加入 50 %乙醇 40 mL 置圆
底烧瓶中 ,回流提取 2 h ,滤过 ,旋转蒸发回收溶剂 ,
残渣用甲醇溶解置 10 mL 量瓶中 ,稀释至刻度 ,摇
匀。经 0145μm 微孔滤膜滤过 ,取续滤液备用。
214 方法学考察
21411 精密度试验 :取 N1 供试品溶液 ,连续进样 5
次 ,考察各共有峰的相对保留时间、相对峰面积比值
的一致性 ,结果显示各色谱峰的相对保留时间及峰面
积的比值基本没有明显变化 ,各色谱峰的相对保留时
间和单峰面积大于或等于 5 %的色谱峰的比值基本
一致 (RSD 在 310 %以下) ,符合指纹图谱的要求。
21412 稳定性试验 :取 N1 供试品溶液 ,分别在 0、
3、6、12、24 h 进样 ,考察各共有峰的相对保留时间
及相对峰面积比值的一致性 ,结果显示各色谱峰的
相对保留时间、峰面积的比值基本没有明显变化 ,各
色谱峰的相对保留时间和相对峰面积的 RSD 值均
·65· 中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 41 卷第 1 期 2010 年 1 月
① 收稿日期 :2009205222
基金项目 :国家科技支撑计划资助项目 (2006BAI06A01202)
3 通讯作者 张铁军 Tel : (022) 23006848 E2mail :tiezheng4 @sina1com
不大于 2198 % ,符合指纹图谱的要求 (不大于 3 %) 。
建议供试品溶液在 24 h 内测定为好。
21413 重现性试验 :取 N1 批号的供试品溶液 5
份 ,进行测定 ,考察各共有峰的相对保留时间、相对
峰面积比值的一致性 ,结果显示各色谱峰的相对保
留时间及峰面积的比值基本没有明显变化 ,各共有
峰的相对保留时间和单峰面积占总峰面积大于或等
于 5 %的色谱峰面积比值基本一致 ( RSD 在 310 %
以下) ,符合指纹图谱要求。
215 指纹图谱的建立 :对 10 批样品进行测定 ,色谱
图见图 1。经比较样品的色谱图和计算相对保留时
间 ,其中有 10 个峰确定为共有指纹峰 ,见图 2。试
验发现 ,其中大黄素在 51 min 出峰 (10 号峰) ,黄芩
苷在 25 min 出峰 (5 号峰) ,芍药苷在 13min 出峰 (3
号峰) ,阿魏酸在 17min 出峰 (4 号峰) 。
以 25 min 处的黄芩苷色谱峰为内参照峰 ,计算
各共有指纹峰保留时间、峰面积的相对比值。按照
《中药注射剂指纹图谱研究的技术要求》要求 ,对单
峰面积超过总峰面积 10 %以上的峰进行面积标定 ,
超过总峰面积 10 %的是 S 峰。将数据导入《中药色
谱指纹图谱相似度评价系统》(2004A 版) ,经选峰 ,
设定匹配模板 ,将谱峰自动匹配 ;然后设定标准模
板 ,进行谱峰差异性评价和整体相似性评价 ,得出牛
黄降压丸指纹图谱的共有模式见图 2 ,相似度计算
结果见表 2。
表 2 10 批样品相似度评价结果
Table 2 Similarities for ten batches of samples
样品 相似度 样品 相似度
N1 01 995 N6 01996
N2 01 991 N7 01999
N3 01 997 N8 01998
N4 01 997 N9 01995
N5 01 998 N10 01999
结果表明 ,10 批样品相似度均在 0195 以上 ,符
合国家药典委员会的要求。本实验对牛黄降压丸
H PL C 指纹图谱的构建进行了探讨 ,可为牛黄降压
丸的品质评价、质量标准的制定提供科学依据。
3 讨论
311 流动相的选定 :由于样品成分复杂 ,采用等度
洗脱时各组分峰分离不理想 ,不能有效检测样品中
各成分峰 ,故采用梯度洗脱的方式 ,先后尝试了甲
醇2水、甲醇2磷酸、甲醇2醋酸、乙腈2水和乙腈2磷酸
等不同流动相系统 ,并且尝试了多种不同梯度条件 ,
最后确定梯度洗脱方式。经比较 ,乙腈和 011 %磷
酸水溶液组成流动相进行梯度洗脱分离效果较好 ,
能较好地使样品中各色谱峰分离且出峰最多。样品
160 min 图谱显示 80 min 后无特征峰出现 ,故确定
分析时间为 80 min。
312 检测波长的选择 :取供试品溶液 ,进样 5μL ,
进行 210～400 nm 的全波长全梯度扫描 ,并对各波
长下的色谱图进行分析比较。结果表明 ,在 230 nm
下 ,各峰分离良好 ,特征峰明显且峰型较好 ,因此选
定 230 nm 为指纹图谱测定波长。
313 提取方式的选定 :试验对样品用甲醇、水、50 %
乙醇、95 %乙醇分别进行了超声和回流提取方法比
较。对不同提取溶剂、提取方法的结果比较 ,拟定采
用 50 %乙醇回流 2 h 提取方式作为供试品的制备方
法 ,所得指纹图谱出峰数较多。
参考文献 :
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