全 文 ：HPLC法测定痛经宝颗粒中阿魏酸、肉桂酸、桂皮醛、木香烃内酯
和去氢木香内酯
王绪颖1, 2 ,贾晓斌1 * 陈 彦1* ,蒋 俊1, 2
( 1 江苏省中医药研究院中药新型给药系统重点实验室, 国家中医药管理局中药口服释药系统重点研究室,
江苏 南京 210028; 2 江苏大学药学院 江苏 镇江 212013)
摘 要:目的 建立 H PLC 法同时测定痛经宝颗粒中阿魏酸、肉桂酸、桂皮醛、木香烃内酯和去氢木香内酯 5 个成
分的方法。方法 采用 Ag ilent H C C18柱( 150 mm 4 6 mm, 5 m) , 以乙腈0 04%磷酸水为流动相,梯度洗脱, 检
测波长 225 nm,体积流量 1 0 mL / min。结果 5 个成分均能达到良好分离, 各成分平均回收率在 98 20% ~
100 01%。结论 本方法简便、准确、重复性好, 可更好地用于痛经宝颗粒的质量控制, 同时为研究痛经宝药效物
质基础奠定了基础。
关键词: H PLC;痛经宝颗粒; 阿魏酸;肉桂酸; 桂皮醛;木香烃内酯; 去氢木香内酯
中图分类号: R286 02 文献标识码: A 文章编号: 02532670( 2010) 10164303
痛经宝颗粒是由当归、肉桂、木香等九味中药组
成,具有温经化瘀、理气止痛的功效,主治妇女!寒湿
凝滞、气滞血瘀∀引起的痛经和月经不调等症, 取得
满意疗效。2005年版#中国药典∃收录了该制剂的
定性鉴别质量控制指标, 包括丹参中原儿茶醛、延胡
索中延胡索乙素及木香药材的薄层色谱法, 未收载
定量测定控制指标 [ 1]。有 HPLC 法测定制剂中阿
魏酸[ 2] 或延胡索乙素的报道[ 34]。
!三个层次多维结构∀的组分结构理论[ 56] 认为
中药复方的物质基础是由多组分构成的整体, 单一
成分测定不能全面控制复方制剂质量。痛经宝方中
当归是妇科要药,有养血活血补虚功效,肉桂温经散
寒,木香理气,其余六味均活血化瘀,方中多成分, 多
组分协同作用, 共同构成了复方的物质基础。其中
当归酚酸、肉桂挥发油、木香挥发油是其物质基础重
要组成部分[ 7] , 阿魏酸是当归酚酸部分的主要成分
之一, 阿魏酸具有抗血小板凝集和血栓[ 8] 作用,缓解
血瘀引起的经痛,肉桂挥发油与木香挥发油均具有
松弛平滑肌和解痉镇痛作用[ 910] , 阿魏酸、肉桂酸、
桂皮醛、木香烃内酯和去氢木香内酯是当归酚酸、肉
桂挥发油、木香挥发油的代表性成分,并是各组分中
起主要药效活性的单体成分。因此建立同时测定阿
魏酸、肉桂酸、桂皮醛、木香烃内酯和去氢木香内酯
5个成分的质控方法和指标, 能有效地控制痛经宝
颗粒的质量。本实验建立的 HPLC 方法可以更加
全面、有效地控制本品的质量,同时为研究痛经宝药
效物质奠定了基础。
1 仪器与材料
Ag ilent 1100高效液相色谱仪; 十万分之一电
子天平( Mm tt ler T oleor 公司) ; KQ3200DE型数控
超声波清洗器 (昆山市超声仪器有限公司)。
实验所用药材购自南京药业股份有限公司中药
饮片厂, 当归为伞形科植物当归 A ngel ica sinensi s
( Oliv ) Diels的干燥根,产地甘肃;肉桂为樟科植物
肉桂 Cinnamomum cassia Presl 的干燥树皮, 产地
广西;木香为菊科植物木香 Aucklandia lappa Decne
的干燥根, 产地云南;延胡索为罂粟科植物延胡索
Corydal is yanhusuo W T Wang 的干燥块茎, 产地
浙江;红花为菊科植物红花Carthamus tinctor ius L.的
干燥花, 产地河南; 三棱为黑三棱科植物黑三棱
Sparganium stolonif erum BuchHam 的干燥块茎,
产地江苏;莪术为姜科植物蓬莪术 Curcuma phaeo
cauli s Val 的干燥根茎,产地四川;丹参为唇形科植物
丹参 Salvia miltiorrhiz a Bunge的干燥根及根茎,产地
安徽; 五灵脂为鼯鼠科动物复齿鼯鼠 Trogop terus
xanthip es Milne Edwards的干燥粪便。以上药材均由
江苏大学药学院欧阳臻教授鉴定。
阿魏酸 ( 批号 07739809 )、肉桂 酸 ( 批号
110786200503)、桂皮醛(批号 110710200212)、木
香烃内酯 (批号 111524200503) 和去氢木香内酯
%1643%中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 41 卷第 10 期 2010 年 10月
收稿日期: 20100412 基金项目:江苏省公益专项( BM2007701)作者简介:王绪颖( 1986 & ) ,在读硕士研究生,研究方向:中药物质基础研究。T el: ( 025) 85637809 Email: qin19861217@ 163 com
* 通讯作者 贾晓斌陈 彦
(批号 111525200505)均购自中国药品生物制品检
定所。月月舒牌痛经宝颗粒(河南省宛西制药股份
有限公司,批号 061003, 060708, 070604) ,乙腈为色
谱纯(美国 T edia 公司) , 水为乐百氏纯净水。
2 方法与结果
2 1 色谱条件与系统适用性实验: 色谱柱 Agilent
HCC18 ( 150 mm 4 6 mm, 5 m) ; 流动相乙腈
( A)0 04% H 3PO4 ( B) 0 ~ 25 m in, 12% A; 26~ 50
m in, 22%A; 51~ 70 m in, 56%A; 检测波长 225 nm;
流量 1 mL/ min;进样量 20 L。理论板数以肉桂酸
计不低于 3 000, 5个成分色谱峰与相邻未知色谱峰
的分离度> 1 5,色谱图见图 1。
1阿魏酸 2肉桂酸 3桂皮醛 4木香烃内酯 5去氢木香内酯
1 ferulic acid 2 cinnamic acid 3 cinnamal dehyde 4cos tu nolide 5dehydro curcumen e
图 1 混合对照品( A)、痛经宝颗粒( B)、缺木香阴性对照( C)、缺当归阴性对照(D)、缺肉桂阴性对照( E)的 HPLC色谱图
Fig 1 HPLCChromatograms of mixed reference substances ( A) , Tongjingbao Granula ( B) , negative sample
without A lappa ( C) , negative sample without A sinensis ( D) , and negative sample without C cassia ( E)
2 2 对照品溶液的制备: 精密称取阿魏酸对照品
6 74 mg , 肉桂酸对照品 5 03 mg, 桂皮醛对照品
10 61 mg,木香烃内酯对照品 3 43 mg 和去氢木香
内酯对照品 3 48 mg置于 10 mL 量瓶中, 甲醇溶解
并稀释至刻度, 摇匀, 即得混合对照品储备液, 精密
吸取对照品储备液 2 0 mL 置 50 mL 量瓶中, 甲醇
稀释至刻度,配制成混合对照品溶液。
2 3 供试品溶液的制备:精密称取痛经宝颗粒3 g,
置具塞锥形瓶中,精密加入 50%甲醇 20 mL, 密塞,
称定质量, 超声处理 30 min, 取出, 放冷,再称定质
量,用 50%甲醇补足减失的重量, 摇匀, 经 0 45 m
微孔滤膜滤过, 取续滤液,即得供试品溶液。
2 4 阴性样品溶液的制备:按痛经宝颗粒的生产工
艺制备缺当归、肉桂、木香的阴性制剂, 并按供试品
溶液制备方法制备各阴性供试品溶液。
2 5 方法学考察
2 5 1 空白干扰试验:取阴性供试品溶液进样 20
L, 测定,结果阴性制剂对所测组分无干扰, 色谱图
见图 1。
2 5 2 线性关系考察:分别精密吸取混合对照品溶
液 2 0、4 0、6 0、8 0、10 0 mL 各置 10 mL 量瓶中,
加甲醇稀释至刻度,摇匀。分别精密吸取 20 L 进
样,测定峰面积积分值。以对照品溶液的进样浓度
为横坐标,峰面积积分值为纵坐标, 绘制标准曲线,
得 5个成分的回归方程和线性范围。阿魏酸: Y=
63 609 X - 9 64, r = 0 999 8, 线性范围 5 39 ~
26 96 g / mL; 肉桂酸: Y = 100 5 X - 2 08, r =
0 999 8, 线性范围 4 02~ 20 12 g/ mL; 桂皮醛:
Y= 105 68 X- 8 61, r= 0 999 6, 线性范围8 49~
42 44 g/ mL;木香烃内酯: Y= 64 519 X- 13 62,
r= 0 999 9,线性范围 2 74~ 13 72 g / mL; 去氢木
香内酯: Y= 59 03 X - 3 76, r= 0 999 8, 线性范围
2 78~ 13 92 g / mL。
2 5 3 精密度试验: 精密吸取混合对照品溶液 20
L,重复进样 6次,阿魏酸、肉桂酸、桂皮醛、木香烃
内酯和去氢木香内酯的峰面积值的 RSD 分别为
1 01% , 0 87%, 0 91% , 0 58% , 1 36%。
2 5 4 重现性试验:取批号为 061003样品 6份,平
行制备供试品溶液, 各取 20 L 进样, 测得峰面积
值,根据峰面积值计算阿魏酸、肉桂酸、桂皮醛、木香
烃内酯和去氢木香内酯的质量分数, 质量分数的
RSD 分 别 为 2 18%、 1 81%、 1 39%、
1 75%、1 67%。
2 5 5 稳定性试验:取批号为 061003的供试品溶
%1644% 中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 41 卷第 10 期 2010 年 10月
液,在 0、2、4、6、8 h 点进样分析, 测得峰面积值, 阿
魏酸、肉桂酸、桂皮醛、木香烃内酯和去氢木香内酯
质量分数的 RSD 分别为 2 91%、1 31%、1 24%、
0 91%、1 06% ,表明供试品溶液在 8 h内稳定。
2 5 6 加样回收率试验: 精密称取批号为 061003
的供试品 1 5 g 共 6 份, 分别精密加入 10 mL 混合
对照品溶液,按!供试品溶液的制备∀项下方法制备
供试品溶液, 按上述测定方法进行测定, 计算回收
率。结果阿魏酸、肉桂酸、桂皮醛、木香烃内酯和去
氢木香内酯的回收率分别为 98 54%、99 21%、
100 01%、99 12%、98 20% , RSD 分别为 1 08%、
1 03%、1 17%、1 24%、1 36%。
2 5 7 样品的测定: 取 3个批号的痛经宝颗粒, 制
备供试品溶液, 每批平行 3份, 每份进样 2 次, 以回
归方程计算各成分的质量分数,结果见表 1。
表 1 样品测定结果
Table 1 Determination results
批号 阿魏酸/
( mg% g - 1)
肉桂酸/
( mg% g- 1)
桂皮醛/
( mg% g- 1 )
木香烃内酯/
( mg % g- 1 )
去氢木香内酯/
( mg% g- 1)
061003 0 181 2 0 098 8 0 895 3 0 144 8 0 169 5
060708 0 174 3 0 101 4 0 903 6 0 150 3 0 184 2
070604 0 197 2 0 112 9 0 912 7 0 167 8 0 191 5
3 讨论
3 1 本实验建立了高效液相色谱法同时测定痛经
宝颗粒中阿魏酸、肉桂酸、桂皮醛、木香烃内酯和去
氢木香内酯 5个成分的方法, 为全面控制痛经宝制
剂中与药效相关物质基础的质量提供了方法, 为解
析痛经宝药效物质基础创造了条件,丰富了组分结
构理论。
3 2 为了尽可能全面反映痛经宝颗粒的化学信息,
实验对供试品溶液的制备方法进行考察。选择甲
醇、50%甲醇、水进行提取,结果 50%甲醇提取的样
品信息量较多,峰面积较大; 选择回流、超声提取方
法进行了比较,结果超声法所得峰面积为回流法的
95%以上, 考虑到操作的方便性,确定选择超声法;
选择不同超声提取次数,结果 1次超声 30 min 即能
提取完全。
3 3 通过分别对 5 个对照品溶液的紫外波长扫描
显示,阿魏酸、肉桂酸、桂皮醛、木香烃内酯和去氢木
香内酯的最大吸收波长分别为 320、274、290、225、
225 nm, 实验过程中发现在 225 nm 处, 所需检测的
各峰分离度及峰形均佳,灵敏度也较高,所以检测波
长选择 225 nm。
3 4 试验中选用多种流动相进行分析, 如甲醇水,
甲醇0 04%磷酸水, 甲醇0 1%磷酸水,乙腈水,乙
腈0 04%磷酸水。经多次试验, 选择乙腈0 04%
磷酸水,并反复调整洗脱程序,最终以本研究中的梯
度洗脱程序来分离样品,所检测的 5 个成分的分离
效果,保留时间及理论塔板数都较为理想。
参考文献:
[ 1] 中国药典[ S] 一部 2005
[ 2] 王富丽,袁振营,陈洪英 高效液相色谱法测定痛经宝颗粒中
阿魏酸的含量[ J] 中国实验方剂学杂志, 2001, 7( 2) : 1516
[ 3] 杨晓秋,张明林 RPHPLC法测定痛经宝颗粒中延胡索乙
素的含量[ J] 医药产业资讯, 2006, 3( 20) : 138139
[ 4] 施亚芳,贾晓斌, 范晨怡, 等 痛经宝胶囊的质量标准研究
[ J] 中成药, 2008, 30( 3) : 451452
[ 5] 贾晓斌,陈 彦,李 霞,等 中药复方物质基础研究新思路
和方法[ J] 中华中医药杂志, 2008, 23( 5) : 420425
[ 6] 施 峰,贾晓斌,陈 彦,等 中医方药物质基础名词术语标
准化探讨[ J] 中国中药杂志, 2009, 34( 9) : 11791181
[ 7] 王丽静 痛经宝处方优化及其微丸制剂学研究[ D] 镇江:江
苏大学, 2009
[ 8] Ogiwara T , Satoh K, Kadoma Y, e t al Radical scavengin g
act ivity and eytotoxicity of feru lic acid [ J ] A nti cance r R es ,
2002, 22 ( 5) : 27112717
[ 9] 董万超 肉桂的利用及药理作用[ J] 特种经济动植物, 2001
( 6) : 431
[ 10] 王 峻,肖洪彬 木香抗实验性胃溃疡的药效学研究[ D] 哈
尔滨:黑龙江中医药大学, 2008
鼻渊舒软胶囊的质量标准研究
解学星1, 2 ,胡雅萍3 , 刘 毅2 , 刘素香2 ,高文远1 * , 陈常青2
( 1 天津大学药物科学与技术学院,天津 300072; 2 天津药物研究院,天津 300193;
3 天津药物研究院药业有限责任公司, 天津 300193)
摘 要:目的 建立鼻渊舒软胶囊的质量标准, 控制制剂的质量。方法 采用薄层色谱法对制剂中组成药味白芷、
栀子、川芎进行鉴别, 并建立方法学考察,采用 HPLC 法测定制剂中的栀子苷。结果 白芷、栀子、川芎的薄层色谱
中阴性对照无干扰。栀子苷在 0 086 9~ 1 737 6 g与峰面积呈良好的线性关系,平均回收率为 99 78% , RSD 为
0 81%。结论 建立的薄层色谱和高效液相色谱定性、定量方法可以用来控制鼻渊舒软胶囊的质量,方法简便可行。
%1645%中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 41 卷第 10 期 2010 年 10月
收稿日期: 20091212
* 通讯作者 高文远 Email: pharmgao@ t ju edu cn